RP-HPLC法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量

目的建立RP-HPLC法测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量的方法。方法采用反相高效液相色谱,色谱柱：Zirchrom C18（4.6mm×250mm,5μm）,检测波长403nm;柱温30℃;流速1mL/min。结果羟基红花黄色素A在0.0408~0.3264μg内线性良好,y=644726.0154×-2058.0714,r=0.9999,回收率为101.73%,RSD为1.65%。结论采用该方法进行含量测定准确可靠,重现性好,对谷红注射液的质量控制有重要意义。     

羟基红花黄色素A的提取及含量测定

目的:对羟基红花黄色素A进行提取工艺改进。方法:采用ZTC-Ⅱ型澄清剂甲、D-4020型大孔吸附树脂和Sephadex LH-20柱层析法,从红花中提取分离羟基红花黄色素A单体,采用高效液相色谱法(HPLC)测定羟基红花黄色素A的含量。结果:采用HPLC法测定羟基红花黄色素A的平均含量为97.3%。结论:此工艺具有成本低、纯度较高的优点,可以作为羟基红花黄色素A的提取工艺使用。     

红花中羟基红花黄色素A含量测定方法的改进

目的改进现有红花质量标准中羟基红花黄色素A含量测定色谱系统中色谱峰易变形的缺陷,并建立一个新的高效液相色谱方法。方法采用HPLC法,Diamonsil（钻石）C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,甲醇-乙腈-0.4%的磷酸溶液（30：2：68）为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为403 nm。结果羟基红花黄色素A在0.03264～0.1984 mg/ml范围内呈良好的线性关系（R2=1）,回收率为100.37%（n=5）,RSD为0.9%。结论本法准确,专属性好,可用作控制红花的质量。     

尿液中羟基红花黄色素A的含量测定

目的:建立高效液相色谱法用于测定人尿液中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用乙腈∶0.2%磷酸水溶液(20∶80 v/v)为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为400 nm。结果:羟基红花黄色素A的线性范围为0.58～57.69μg/mL,羟基红花黄色素A在尿中3个浓度的绝对回收率分别平均为100.3%、100.8%、100.9%。结论:本方法简单快速,准确灵敏,重现性好,适用于羟基红花黄色素A的尿中药物浓度测定。     

HPLC法测定七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立HPLC法测定七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用Inertsil OPS-SP(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26:2:72),流速1mL·min-1,柱温25℃;进样量:10μL,检测波长为403nm。结果:羟基红花黄色素A在进样量范围为(0.0265～0.132)μg时,与峰面积线性关系良好;回收率为99.7%,RSD为0.7%。在选定的条件下,羟基红花黄色素A获得较好分离。结论:该方法简便可行、灵敏准确、能用于七味红花殊胜丸中羟基红花黄色素A的测定。     

HPLC测定三十五昧沉香丸中羟基红花黄色素A的含量

目的：建立高效液相色谱法测定三十五味沉香丸中羟基红花黄色素A的含量。方法：色谱柱为Elite—ODS C18（250mm×4．6mm,5μm）;流动相：甲醇-水-磷酸（27：73：0．05）;流速：1．0mL／min;检测波长：403nm;柱温：室温。结果：羟基红花黄色素A选样量在0．15～0．35μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0．9999）,平均回收率为99．20％,RSD为0．43％（n=9）。结论：采用HPLC法测定三十五味沉香丸中羟基红花黄色素A的含量,样品处理方法简便,测定结果准确,方法专属性强,精密度高,重复性好。     

HPLC测定二十六味通经散中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立高效液相色谱法测定二十六味通经散中羟基红花黄色素A含量的方法。方法:色谱柱为Elite-ODS(5μm,4.6mm×250mm),流动相:甲醇-水-磷酸(27∶73∶0.05),流速:1.0mL/min,检测波长为403nm,柱温:室温。结果:羟基红花黄色素A线性浓度范围在0.0464μg～0.1392μg,r=0.9995,平均回收率为99.87%,RSD=0.10%(n=9)。结论:本方法简单准确,重复性好,可作为二十六味通经散的质量控制方法。     

HPLC测定三十五味沉香丸中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立高效液相色谱法测定三十五味沉香丸中羟基红花黄色素A的含量。方法:色谱柱为Elite-ODS C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水-磷酸(27∶73∶0.05);流速:1.0mL/min;检测波长:403nm;柱温:室温。结果:羟基红花黄色素A进样量在0.15～0.35μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为99.20%,RSD为0.43%(n=9)。结论:采用HPLC法测定三十五味沉香丸中羟基红花黄色素A的含量,样品处理方法简便,测定结果准确,方法专属性强,精密度高,重复性好。     

红花中羟基红花黄色素A的提取工艺及其热稳定性研究

目的:优化红花中羟基红花黄色素A的提取工艺条件及其的热稳定性.方法:以羟基红花黄色素A的含量为指标,采用单因素和正交实验方法,对提取温度、浸取时间、溶剂用量进行考察;通过测量于不同温度下保温不同时间的该成分的吸光度,考察其的热稳定性.结果:最佳提取工艺为:分别加20倍量的水提取2次,在40℃下,2次浸取时间分别为12 h和4 h,过滤,合并滤液;且羟基红花黄色素A不易在高温条件下提取或保存,在低温下具有一定的稳定性.结论:该研究方法合理方便,并可为羟基红花黄色素A提取及保存提供实验依据.     

骨风宁片中羟基红花黄色素A的含量测定

目的:建立骨风宁片中羟基红花黄色素A的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法(HPLC),Shim-packC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸溶液(32:68)为流动相,检测波长为403nm,流速1.0ml/min.结果:羟基红花黄色素A在0.1032-0.516μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率98.517%,RSD为1.730%.结论:本方法简便、准确,可作为骨风宁片中羟基红花黄色素A的定量分析方法.     

红花与掺伪红花的鉴别

目的寻求红花与掺伪红花的鉴别方法,为掺伪红花的鉴别提供科学依据。方法与结果通过经验鉴别、显微组织、理化反应、薄层色谱、灰分、吸光度及杂质等检测方法,观察了红花与掺伪红花的性状和组织特征,理化反应中掺伪红花检出钙盐和硫酸盐,薄层色谱中掺伪红花检出三个不同颜色的斑点。结论该方法操作简便、可行,可供鉴别掺伪红花时参考。     

羟基红花黄色素A在大鼠体内的药代动力学

目的:研究羟基红花黄色素A在大鼠体内的药代动力学。方法:羟基红花黄色素A大鼠尾静脉注射给药和灌胃给药,HPLC测定血浆中药物的含量,3P97计算药代动力学参数;大鼠胆管插管收集给药后24 h胆汁;代谢笼收集大鼠给药后24 h尿样和粪便。结果:静脉注射给药符合二室开放模型,胆汁累积排泄量为1.32%,尿中24 h累积排泄率为88.6%,粪便中没有检测到药物。灌胃给药绝对生物利用度是1.2%;胆汁累积排泄量为0.062%;尿中24 h累积排泄率为2.9%;粪便24 h累积排泄率为48%。结论:羟基红花黄色素A大鼠口服吸收较差,有胆汁外排效应;血中药物以肾排泄为主。     

苏木对羟基红花黄色素A在寒凝血瘀大鼠体内药代动力学的影响

目的建立寒凝血瘀大鼠体内羟基红花黄色素A(HSYA)的反相高效液相色谱分析方法,研究苏木对HSYA在寒凝血瘀模型大鼠体内药代动力学(药动学)的影响。方法寒凝血瘀模型大鼠12只,随机分为2组,分别灌服红花单煎液和红花-苏木合煎液,于给药后5、10、20、30、45、60、90、120、150、210、270min眼底静脉丛取血,20%三氯乙酸水溶液沉淀蛋白,采用RP-HPLC法检测给药不同时间后大鼠血浆中HSYA的浓度,DAS 2.0药动学软件计算药动学参数。结果与红花单用组相比,红花与苏木配伍后,大鼠血浆中HSYA的药时曲线下面积AUC(0-t)和峰浓度Cmax及分布半衰期t1/2α增大(P<0.01),表观分布容积V1/F和清除率CL/F减小(P<0.01)。结论苏木可促进寒凝血瘀模型大鼠对红花中HSYA的吸收,降低HSYA在体内的分布,从而发挥增效作用。     

羟基红花黄色素A的吸收机制研究

目的:研究羟基红花黄色素A(羟A)在大鼠体内的吸收机制。方法:大鼠灌胃给药和大鼠胃肠道不同部位分别给药后,用HPLC测定羟A的血药浓度和胃肠道中羟A残留量;大鼠小肠推进实验。结果:橄榄油、维拉帕米和环孢素显著性促进羟A的吸收(P<0.01);橄榄油和川芎挥发油延缓了药物在肠道内的推进速度(P<0.01);羟A在胃内不吸收;羟A在肠道内的吸收程度从高到低依次为:空肠、十二指肠、回肠;羟A在胃肠道内的稳定性从大到小依次为:回肠、胃、空肠、十二指肠。结论:大鼠口服羟A时生物利用度受胃肠道蠕动速度、P-糖蛋白、吸收部位及其在胃肠道内稳定性的影响。     

羟基红花黄色素A人工抗原的制备

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的偶联方法,获得具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。方法通过偶联物透析液的颜色变化、紫外图谱、红外扫描图谱及动物免疫试验来鉴定制备的人工抗原。结果HSYA-BSA人工抗原在紫外扫描中表现出HSYA和BSA的特征吸收峰;在红外扫描中HSYA-BSA具有HSYA特征官能团的吸收峰和氨基酸的特征吸收峰;间接ELISA检测结果显示产生抗HSYA的特异性抗体,血清效价可达1∶3 200;标准曲线方程计算得BSA和HSYA的结合率是1∶50。结论通过直接偶联法成功制备出具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。     

红花及番红花色素的荧光特性分析

目的探索荧光法测定红花及番红花色素的最佳方法,方法用岛津RF-5000荧光分光光度计测定,扫描波长λex=230～440nm,λem=240～600nm。结果最佳检测波长λex340nm,λem=440nm。红花及番红花的甲醇浸泡液浓度在16.7～330μg.mL-1范围内与荧光强度呈线性关系,相关系数r(红花)=0.9997、r(番红花)=0.9996,红花色素在pH=12的碱性环境中所发出的荧光强度达到最大。结论该方法简便、快速,可直接用于红花及番红花色素的含量测定,亦可作为药材红花和番红花之间的一种鉴别手段。     

羟基红花黄色素A促内皮细胞增殖的机制研究

目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对低氧条件下犬血管内皮细胞(VEC)血管内皮生长因子(VEGF)相关信号传导通路的影响.方法 在低氧条件下以ELISA法观察VEGF抗体及其两种酪氨酸受体(Flt-1和KDR)的抗体对HSYA促VEC增殖作用及分泌VEGF水平的影响;生物分子相互作用分析法检测HSYA与VEGF、Flt-1和KDR的相互作用;硝酸还原酶法测定VEC培养液中NO、NOS的量.结果 10μg/mL VEGF、Flt-1和KDR的抗体均能明显抑制HSYA的促EC分泌VEGF作用;生物分子相互作用分析结果证实,HSYA与VEGF、Fit-1及KDR均无明显结合;HSYA在1mmol/L浓度下能够明显促进低氧条件下VEC培养中的NO水平,而对NOS水平没有明显影响.结论 在低氧条件下,HSYA促VEC增殖的作用与VEGF及其相关信号传导通路有关,但HSYA与VEGF及其受体无明显结合,提示可能存在与VEGF及其相关信号传导通路相关的HSYA作用靶点.     

大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A

目的 建立简便有效的制备红花有效部位红花黄色素(safflor yellow，SY)及有效成分羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)的方法。方法 室温水提减压浓缩所得红花水提液上D-4020型非极性大孔树脂柱，水洗脱糖类等杂质，以30％和10％乙醇洗脱分别得SY和HSYA；采用分光光度法和HPLC法分析水洗脱除糖过程中SY和HSYA的损失率及醇洗脱SY和HSYA的回收率。结果 聚酰胺薄膜色谱结果显示SY和HSYA洗脱液分别可见4～5个和1个黄色荧光斑点。HPLC分析结果表明，两洗脱液中所含SY和HSYA纯度分别为92．4％和83．0％。在水洗除杂质和稀醇洗脱过程中，损失率和回收率分别为SY：7．5％和80．6％，HSYA：1．64％和77．3％。结论 本法适于大规模制备SY和HSYA。     

羟基红花黄色素A对四氯化碳急性肝损伤的保护作用

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对四氯化碳(CCl4)急性肝损伤的保护作用。方法将60只昆明种小鼠随机分为正常对照组和CCl4损伤组、HSYA保护组(2、4、8、16?mg/kg组),每组各10只。CCl4腹腔注射建立小鼠急性肝损伤模型。观察肝组织病理学改变;测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,肝组织匀浆谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)的含量及肝细胞色素P450 2E1(Cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白的表达。结果与CCl4损伤组比较,HSYA保护组肝组织病理改变明显减轻;血清ALT、AST活性明显降低(P<0.05); 肝组织匀浆中GSH、SOD含量明显升高(P<0.05);MDA、TNF α含量明显降低(P<0.05);CYP2E1蛋白表达量增加。综合各指标表明,以8?mg/kg保护组效果最佳。结论HSYA对CCl4急性肝损伤有明显保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化,清除自由基,降低TNF α水平有关。