乙型肝炎基因分型同耐药位点突变的关系研究

目的：探讨耐药位点突变与乙型肝炎病毒(HBV)基因分型及其他临床信息的相关性。方法以358例慢性乙型肝炎(CHB)患者为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法检测耐药位点及基因分型。收集患者血清 HBV DNA 载量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,以及乙型肝炎病毒 e 抗原(HBeAg)、性别、年龄、核苷(酸)类似物用药时间等临床资料。结果所有标本均成功扩增阳性条带。HBV 基因型以 B 型(267例)为主,其次为 C 型(81例)、D 型(10例)。使用核苷(酸)类似物的311患者中完全野生型269例,未用药的47例患者均未见耐药突变。耐药位点突变以204及180/204位点突变为主。耐药突变与患者性别、年龄、血清 HBV DNA 载量、病毒基因型、ALT 水平及 HBeAg 无明显相关性(P >0.05);用药时间越长,耐药突变率越大(P <0.05);180位点突变与204位点突变有一定相关性(P <0.05)。结论PCR-反向点杂交技术可有效检测 HBV 基因型及突变位点,可有效指导临床用药。     

乙型肝炎病毒耐药基因变异位点与基因型及病毒载量的关系

目的：研究81例慢乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（HBV）耐药基因位点变异状况及其基因型分布特征,并探讨其与HBV-DNA、乙型肝炎 E 抗原（HBeAg）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的关系。方法采用荧光定量PCR 和基因芯片反向斑点杂交技术检测81例慢乙型肝炎患者血清 HBV-DNA 载量、基因型和6种常见耐药位点;用电化学发光法检测 HBeAg 的含量,用酶法检测患者血清中 ALT、AST 的浓度。结果81例慢乙型肝炎患者中,HBV 基因型 B 型38例占46．9％;C 型38例占46．9％;B、C 混合型5例占6．2％;未发现其他基因型。检测出的43例耐药基因位点发生变异：B 基因型26例突变率为60．5％,C 基因型17例突变率为39．5％;其中 rt204V 变异率为9．3％;rt204I 变异率为34．9％;rt180M＋rt204I／rt204V 变异率为41．9％;rt181V 变异率为9．3％;rt236T 变异率为4．7％。在43例出现基因位点变异的患者中,发生 rt204I 变异的 B 基因型占60％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为5．73±1．77;C 基因型占40％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为6．93±2．12;发生 rt204V 变异的 B 基因型占75％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为6．85±2．06;C 基因型占25％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为4．17±1．15;发生 rt180M＋rt204I／rt204V 变异的 B 基因型占22．2％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为5．89±1．95;C 基因型占77．8％,HBV-DNA（U／mL）的对数值为5．58±1．56;发生 rt181V 变异的全部为 C 基因型。结论HBV 发生变异的位点以rt204I 位点变异和 rt180M＋rt204I／rt204V 混合位点变异为主;在 HBV 发生变异的不同位点中 C 基因型更易发生 rt181V 位点和 rt180M＋rt204I／rt204V 混合位点变异,B 基因型可能更易发生 rt204V 位点和 rt204I 位点变异;在发生 rt204V 位点和 rt236T位点的突变中,HBV-DNA 的载量 B 基因型组明显高于 C 基因型组,在发生 rt204I 位点的突变中 HBV-DNA 的载量 C 基因型组则明显高于 B 基因型组,C 基因型较 B 基因型更易发生耐药位点变异。     

南通地区乙型肝炎病毒P区耐药突变与基因型及其临床意义

目的 探讨南通地区乙型肝炎病毒P区耐药基因突变特征与基因型,为临床合理用药提供科学依据。方法 选择158例经核苷(酸)类似物治疗至少2年以上慢性乙型肝炎(CHB)患者和30例未接受过核苷(酸)类似物治疗的CHB患者作为研究对象,采用PCR产物直接测序法检测HBV P区耐药基因和基因型,同时观察三种主要突变模式与ALT和HBV DNA水平的关系。结果 158例CHB患者检出B基因型42例(26.58%),C基因型116例(73.42%)。131例发生P区不同位点突变,突变率为82.91%。共检出11个HBV突变位点,主要突变位点是M204I,L180M,M204V,A181V和A181T,耐药频率依次为41.14%,37.34%,22.15%,11.39%和10.13%,11个突变位点有21种突变模式。拉米夫定(LAM)耐药相关突变中以L180M和M204V合并出现为主,其次以M204I单独出现; 阿德福韦酯(ADV)耐药相关突变中以A181V为主; 恩替卡韦(ETV)耐药率较低。结论 南通地区HBV基因型以B和C型为主,C型为优势基因型; 耐药突变主要集中在拉米夫定和阿德福韦酯耐药相关的突变位点,而恩替卡韦耐药率较低。多位点耐药突变检测有助于及时发现病毒耐药,更好地指导临床治疗。     

石家庄地区L-核苷类抗病毒药物耐药突变情况分析

目的 分析石家庄地区L-核苷类抗病毒药物耐药突变情况.方法 对石家庄市第五医院就诊的慢性乙型肝炎患者119例进行乙型肝炎病毒逆转录酶区(HBV P区)基因序列测定.结果 119例患者HBV基因分型中B型5例(4.2％),C型114例(95.8％).在B型中4例rtM204I突变;C型中73例rtM204I突变,40例rtM204V突变,1例rtM204I/V突变.119例存在204位点变异的慢性乙型肝炎患者中,共有9种突变模式,其中rtM204I单位点突变占总突变比例的23.5％(28/119),rtM204V单点突变占总突变比例的6％(7/119),rtL180M+rtM204I联合突变占总突变比例的22.7％(27/119),rtL180M+ rtM204V联合突变占总突变比例的27.8％(33/119).结论 慢性乙型肝炎核苷类药物抗病毒治疗过程中,及时监测HBV P区基因耐药情况,尤其是出现rtM204I/V突变后,很容易联合其他位点突变.     

核苷类似物抗病毒治疗失败的慢性乙型肝炎患者基因型耐药分析

目的了解慢性乙型肝炎患者服用核苷类似物抗病毒治疗失败后,病毒基因型耐药变异情况,为选择新抗病毒治疗方案提供参考依据。方法分别选取服用拉米夫定和阿德福韦酯抗病毒治疗失败的患者作为研究对象,用巢式聚合酶链反应（ntPCR）方法扩增目的基因片段,并对其进行序列测定及分析,检测与病毒耐药相关的突变点位。结果 20例患者出现与耐药相关的突变位点。11例拉米夫定治疗患者,发生rtM204V/I突变10例（90.9%）,出现rtL180M/I/L位点突变5例（45.5%）,出现rtA181V位点突变1例（9.0%）,出现M204I单位点耐药突变5例（45.5%）,出现包含180和204位点的多个位点联合突变6例（54.5%）。9例阿德福韦酯治疗患者出现rtA181T或rtN236T单位点突变各4例（44.4%）,出现rtA181T＋rtN236T联合突变1例（11.1%）。结论乙型肝炎病毒（HBV）耐药变异株的出现是抗病毒失败的主要原因,目前临床上服用拉米夫定和阿德福韦酯抗病毒治疗的患者较多,拉米夫定治疗的患者也可以出现rtA181V位点突变,该位点突变出现可以发生二者的交叉耐药。防止多药耐药的发生具有重要的意义,建议抗病毒治疗失败后参考基因型耐药检测结果更换药物。     

拉米夫定耐药的HBV反转录酶区基因突变模式分析

目的分析慢性乙型肝炎（cHB）患者在拉米夫定（LAM）治疗过程中出现耐药的HBV反转录酶区基因的突变模式及临床特征,指导临床用药。方法采用巢式聚合酶链反应（PCR）方法对2009年1月至2011年12月广州市第八人民医院肝病门诊或住院治疗的LAM初治发生耐药的105例CHB患者血清HBV聚合酶基因反转录酶区进行扩增,对PCR产物进行测序,分析LAM耐药时HBV聚合酶基因的不同突变模式及患者临床特征。结果105例患者诊断为LAM耐药,98例患者检测到LAM相关的HBV聚合酶基因突变,总体突变模式共8种,其中95例患者存在YMDD基因突变,占96．9％。rtM204I单点突变患者42例,占43．9％;rtM204V单点突变患者3例,占3．1％,二者比较差异有统计学意义（χ2=21．899,P〈0．05）,提示rtM204位点（YMDD）点突变模式以rtM204I点突变为主。rtM204V以联合rtL180M组合突变的模式为主。LAM耐药时,3种主要突变模式rtM204I、rtL180M＋rtM2041、rtL180M＋rtM204V患者的年龄、性别比例、血清HBVDNA栽量、ALT水平、肝硬化发生率及HBeAg阳性率比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。HBV聚合酶区基因突变患者与伴生化学突破患者的HBVDNA载量明显高于HBV—P-RT区基因未突变和未发生生化学突破的患者,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论YMDD基因突变是LAM耐药后HBV聚合酶基因突变的主要模式,且突变患者的HBVDNA载量明显增高,检查耐药患者基因序列,可指导临床合理用药。     

太仓市慢性乙型肝炎患者耐药突变和基因型分布研究

目的：研究太仓地区慢性乙肝患者耐药突变和基因型分布情况,及 HBV 基因型与耐药突变的相关性。方法选择太仓地区350例慢性乙型肝炎患者,在使用核苷（酸）类药物抗病毒前,检测患者耐药突变及基因型情况,分析患者耐药突变与基因型的相关性。结果350例慢性乙肝患者,HBV 基因型分布：B 基因型172例,占49.14％;C 基因型164例,占46.85％;其中 D基因型9例,占2.57％;B、C 混合型基因型有5例,占1.42％;未发现其他基因型。本研究共检出58例耐药突变患者,其中 B 基因型22例,C 基因型35例,D 基因型1例,B、C 混合基因型患者未发现耐药突变。耐药突变位点：与拉米夫定相关的耐药突变36例（10.28％）,与阿德福韦相关的耐药突变16例（4.57％）,与恩替卡韦相关的耐药突变6例（1.71％）。结论太仓地区慢性乙肝患者 HBV 基因型以 B、C 型为主,2种基因型占90％以上,两种基因型比例相似。C 基因型患者发生耐药突变的比例较 B 基因型高,拉米夫定相关的耐药突变比例最高。建议对用药史不明确、复发再治疗的慢性乙肝患者,在接受核苷（酸）类药物治疗前进行耐药检测,选择针对性治疗方案。     

乙型肝炎病毒逆转录酶区多位点预存耐药变异研究

目的研究宁德地区乙型肝炎病毒(HBV)预存耐药变异情况及相关影响因素,为临床制订个体化抗病毒治疗方案提供理论依据。方法采用基因芯片法,对未经核苷(酸)类似物治疗的慢性乙型肝炎患者及慢性HBV携带者进行多位点耐药突变检测,分析预存耐药变异与年龄、性别、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、HBV-DNA载量之间的关系。结果 401例患者共检出预存耐药变异79例,检出率为19.70%。突变位点主要集中在rtN236T、rtM204I、rtL180M。突变模式以rtN236T、rtN236T+rtM204I+rtM204V、rtN236T+rtM204为主。相关药物前3位为阿德福韦(15.96%)、拉米夫定(7.48%)、恩曲他滨(7.48%)。年龄20岁及60岁,肝酶10ULN,病毒载量10~7 IU/mL,HBeAg阳性的患者,其预存耐药变异检出率较高。结论宁德地区慢性乙型肝炎患者及慢性HBV携带者的预存耐药变异率较高,以rtN236T突变最为常见,相关药物阿德福韦应慎用。替诺福韦、恩替卡韦的预存耐药变异检出率低,抗病毒治疗时可首选。抗病毒治疗前进行多位点耐药突变检测,对指导个体化用药具有重要的临床意义。     

山西地区61例乙型肝炎病毒耐药变异与基因型检测研究分析

目的通过对山西省乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）P区基因测序的研究,探讨HBV基因变异位点及基因分型的分布规律。方法采集61例HBV患者血清标本,采用双脱氧末端终止法对待检标本P区进行基因序列检测,用Chromas 2．23软件对测序结果进行分析,通过在NCBI网站进行序列比对,并进行基因分型。结果53例受检患者均检测出P区的碱基以及氨基酸序列图,其中,有28例（52．8％）发生突变,突变位点分别有rt204、rt180、rt236、rt173、rt181、n214、rt250、rt213、rt184、rt237;各突变的位点中,以rt204和rt180位点的突变比例最高,分别占67．9％和53．5％。2例为B基因型,阳性率为3．8％,其余51例均为C基因型,阳性率为96.2％。结论山西省地区HBV分布以C基因型多见;发生变异的HBV病毒株中,10个变异位点均有涉及,但是仍以rt204位点突变为主,伴随其他位点突变,提示rt204位点可能存在顺式作用元件,在HBVDNA基因转录、翻译中起到调控作用。     

拉米夫定耐药感染者HBV基因与YMDD变异的相关性探讨

目的探讨拉米夫定耐药感染者HBV基因型与YMDD变异的相关性。方法采用PCR扩增后测序的方法,对162例拉米夫定耐药感染者进HBV基因型的分析。实时荧光定量PCR法检测HBVYMDD变异及HBVDNA载量。率的比较采用Y2检验法,两组均数间的比较采用t检验法。结果162例拉米夫定耐药感染者中,B基因型102例（63．0％）,C基因型60例（37．0％）。YMDD变异111例（68．5％）,其中YIDD变异30例（18．5％）,YVDD变异32例（19．7％）,YIDD／YVDD混合型变异49例（30．3％）。统计结果显示,不同性别之间HBV基因型分布没有显著性差别（P〉0．05）。B型患者的年龄（29．7岁±10．2岁）显著低于C型患者的年龄（35．3岁±11．3岁）,差异有统计学意义（P〈0．05）。YMDD变异的发生率在B、C基因型之间差异无统计学意义（P〉0．05）。C基因型患者血清的HBVDNA含量（6．08±0．71）显著高于B基因型组（5．73±0．90）（P〈0．05）,而血清ALT水平没有显著性差别（P〉O．05）。结论拉米夫定耐药感染者YMDD变异与基因型无关。但C基因型患者平均年龄、病毒载量显著高于B基因型,可能是导致CHB患者对拉米夫定耐药的重要因素。     

HBV基因分型和耐药突变基因检测

目的探讨东营地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布,乙型肝炎患者耐药情况,HBV基因型别与耐药以及突变位点关系。方法收集乙型肝炎患者血清300例,采用离心柱法提取HBV-DNA,聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法检测HBV分型和耐药突变。结果 300例HBV-DNA阳性患者中,检出B型、C型、B/C型及其他未检测出的基因型,未检出D型分型,检出结果中以C型为主,占81.8%;HBV患者耐药药物以拉米夫定和替比夫定的联合耐药为主,占43.6%;HBV耐药突变基因型主要为rt204I(24.35%)、rt204V(17.39%)及rt180M(17.39%);B型和C型的耐药突变率分别为30.77%和42.42%,差异有统计学意义(P0.05)。结论东营地区HBV基因C型多于B型,C型容易产生耐药,以rt204I,rt204V及rt180M基因突变型多见,拉米夫定和替比夫定的联合耐药多见,应根据基因分型和耐药突变结果对乙型肝炎患者选择适合的治疗方案。     

某地区乙型肝炎病毒基因型分布和P区耐药突变模式分析

目的探讨十堰地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布和P区耐药突变模式及两者的相关性。方法将在该院进行治疗的224例慢性乙型肝炎患者纳入本研究,提取患者血液标本中的HBV DNA,利用ABI 3730型遗传分析仪对DNA进行测序,通过SeqMan软件实施序列比对,分析HBV DNA的基因型和P区耐药突变的情况。结果检出HBV基因型为B型者136例,占60.71%;为C型者62例,占27.68%。二者比例均高于D型、B+C型及未分型者,差异有统计学意义(P0.05)。78例明确出现耐药突变,其中B基因型对于拉米夫定以及阿德福韦的耐药率分别为18.38%与9.56%,与C基因型对于二者的耐药率16.13%与9.68%相比,差异均无统计学意义(P0.05)。B基因型患者M204V、M204I耐药突变的发生率分别为38.60%、17.54%,C基因型患者则分别为28.57%与38.10%,两种基因型患者比较差异无统计学意义(P0.05)。B、C型基因突变患者间YMDD突变(M204V、M204I)及非YMDD突变所占比例比较,差异均无统计学意义(P0.05)。B基因型及C基因型分别与M204V及M204I两种突变均呈正相关。结论十堰地区HBV的基因型主要是B型及C型,发生的HBV耐药突变则以M204I和M204V为主,在临床治疗时应按照基因分型以及耐药突变情况合理选择药物进行慢性乙型肝炎的治疗。     

湘潭地区乙型肝炎病毒基因型与YMDD基因区序列突变及BCP区突变关系探讨

【目的】对湘潭地区HBV感染者的基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变情况及关系进行探讨。【方法】对952例不同类型的HBV感染者的样本同时进行基因型、YMDD基因区序列突变及BCP区突变检测和分析。【结果】湘潭地区HBV各种基因型分布比例为：B型占73．32％,C型占12．08％,B、C型混合感染14．60％。YMDD基因区序列突变结果显示：YMDD野生型,占88．66％,其余为YMDD突变型。BCP区突变结果显示：1762A／1764G（野生型）占70．59％,1762T／1764A（突变型）占19．75％,其余为混合型。基因型、相关性分析显示：HBVB型和C型YMDD基因区序列突变率无显著性差异（P〉0．05）,序列突变类别存在显著性差异（P〈0．05）,HBVC型YVDD突变率要高于B型。C型BCP区突变率要高于B型（P〈0．01）。HBV YMDD野生型和突变型的BCP区突变率存在显著性差异（P〈0．01）,HBV YMDD突变型标本BCP区突变率与YMDD野生型相比无差异,但YVDDBCP区突变率要高于其他类别。【结论】①湘潭地区流行的HBV基因型主要为B型和C型,其中B型为优势基因型,具有南方地区的特点。②拉米夫定治疗前通过HBV基因型检测来预测抗病毒应答可能并无实际意义。③HBV基因分型、YMDD基因区序列突变、BCP区突变检测的应用,将有助于临床上对乙肝患者的预后和转归进行正确评价。     

深圳地区乙型肝炎病毒基因型分布与核苷类药物治疗后相应突变位点筛查的研究

目的了解深圳地区乙肝病毒基因型分布特点以及拉米夫定（LMV）和阿德福韦（ADV）两种药物治疗后相关指标变化情况。方法276例HBeAg阳性患者采用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA的含姑,免疫化学发光法检测HBeAg的相对含量．DNA反向斑点杂交芯片技术检测HBV DNA基因型与LMV常见耐药位点、ADV常见耐药位点,全自动生化测定谷丙转氦酶。随机选取未发牛以上突变位点慢性病例各96例,分别以LMV和ADV两种药物进行治疗,于治疗前和治疗3、12个月检测HBV DNA、HBeAg及ALT的含量,并在治疗12个月时筛查2组耐药突变位点。结果276例HBeAg阳性标本有270例可以进行分型,其中B型138例（50．0％）、C型96例（34．8％）、D型10例（3．6％）、B＋C混合型26例（9．4％）、末分碰6例（2．2％）。在治疗3个月时LMV组HBV DNA与HBeAg含量下降速度和阴转率以及ALT下降明显高于ADV组（P〈0．05）;但在治疗第12个月时LMV组HBV DNA含节下降速度和阴转率反而低于ADV组。LMV组有20例发生耐药他点,而ADV组无一例发生位点突变。结论深圳地区乙肝分型主要以B、C两型为主．B型略占优势,B＋C混合型也占有一定比例,核苷类药物LAM及ADV单药治疗慢性乙肝患者均有较好的疗效,但两种药物比较,短期效果LAM优于ADV,随着用药时间延长,耐药突变基因的逐渐出现,ADV长期治疗效果反而要优于LAM。     

用PCR-反向点杂交法检测九江地区乙型肝炎病毒基因型

目的调查九江地区乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus,HBV）基因型的分布情况。方法采用PCR-反向点杂交法,对203例HBV DNA阳性患者HBV进行基因型分析。结果共检测了203例患者,成功分型199例,占98.03%。其中B型160例,占78.82%;C型24例,占11.82%;B、C混合型14例,占6.90%;D型1例,占0.49%。结论利用PCR-反向点杂交法技术可以较简便地对HBV进行基因型分析,分型成功率高,适用于临床检测;在九江地区人群中感染的HBV以B型为主,C型次之,其它型别极少见。     

阿德福韦酯联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎病毒耐药分析

目的 通过研究乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布特点及耐药位点的分布,了解拉米夫定联合阿德福韦酯治疗慢性HBV耐药情况的发生,以探讨其临床意义.方法 选取在我院门诊和住院部就诊的曾经单用过拉米夫定或阿德福韦酯治疗失败的患者,再次使用拉米夫定联合阿德福韦酯治疗2年以上的慢性乙型肝炎患者73例,应用实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法检测HBV DNA分型情况,用连接酶检测反应(LDR)方法检测位点变异情况.结果 73例中14例未能检测出基因型,基因型检出率80.8％(59/73);其余59例标本检测到了基因型,其中B型11例(18.6％)、C型43例(72.9％)、非B非C型5例(8.5％).治疗1年的59例标本中有9例患者检测到了耐药位点,耐药发生率为15.3％,其中B基因型中检出2例(18.2％),C基因型中检出7例(16.3％),非B非C型基因型中未检出;各基因型中变异位点的检出率差异无统计学意义(x2=1.286,P＞0.05).治疗2年的59例患者中有24例患者检测到了耐药位点,耐药发生率40.7％,其中B基因型中检出4例(36.4％),C基因型中检出18例(41.9％),非B非C型基因型中检出2例(3.3％);各基因型中变异位点的检出率差异亦无统计学意义(x2=6.578,P＞0.05).治疗2年后在24例耐药患者中发生相关阿德福韦酯耐药率33.3％(8/24),发生相关拉米夫定耐药率58.3％(14/24),发生联合耐药率8.3％(2/24).结论 兰州地区HBV基因型主要以C基因型分布为主,其次是B型,还有其他基因型存在;不同基因型耐药发生概率相近,突变概率与基因型无关.对单用拉米夫定或阿德福韦酯治疗失败后的患者再次使用两者联合治疗,亦有较高的耐药风险.     

嘉兴地区乙肝病毒基因分型与病理及耐药的关系

目的：了解嘉兴地区慢性乙型肝炎（CHB）患者乙型肝炎病毒（HBV）基因型分布的特点,探讨基因型与病理及核苷类药物耐药之间的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应方法检测85例CHB患者的HBV基因型,同时检测血清HBV DNA、乙肝三系、核苷类药物耐药,并进行肝组织病理检查。结果85例CHB患者B基因型32例（37.65％）、C基因型53例（62.35％）,C基因型患者的HBV DNA水平、HBeAg阳性率均明显高于B基因型,差异均有统计学意义（t=2.78,χ2=8.03,P均＜0.05）。肝组织炎症坏死及肝纤维化的进展程度,C基因型较B基因型明显加重,差异均有统计学意义（χ2分别=8.82、10.67,P均＜0.05）,C基因型较B基因型发生拉米夫定、替比夫定耐药更多,差异均有统计学意义（χ2分别=4.03、4.03, P均＜0.05）。结论嘉兴地区CHB患者HBV基因型以C型为主,C型HBV复制能力强,拉米夫定、替比夫定耐药更多,更易导致严重肝脏病变。HBV基因分型对判断肝脏病变的严重程度和指导临床抗病毒治疗具有重要意义。