周期性应变对血管平滑肌细胞生长的影响

为研究周期性应变对VSMCs生长的确切作用,我们利用脉动膜式张应力系统,给VSMCs施加8%,1 Hz和14%,1 Hz两种不同条件的周期性应变.用细胞计数的方法观察VSMCs的生长曲线,用3HTdR掺入率测定法检测VSMCs的DNA合成变化.结果发现8%,1Hz的周期性应变抑制VSMCs生长和DNA合成;14%,1 Hz的周期性应变VSMCs生长和DNA的合成明显增加,24 h和48 h其DNA合成分别是对照组的1.4和1.8倍.结果表明近生理条件下的周期性应变抑制VSMCs的生长,超生理范围的应变促进VSMCs的生长.     

L—精氨酸,牛磺酸对大鼠血管损伤后血管平滑肌细胞增生的影响

在大鼠血管内皮剥脱模型上，观察了Ｌ－精氨酸，牛磺酸及Ｌ－精氨酸＋牛磺酸对血管损伤诱导的血管平滑肌细胞增生的影响。结果发现，内皮剥脱可致ＶＳＭＣ增生，同膜增厚；应用Ｌ－精氨酸，牛磺酸及Ｌ－精氨酸＋牛磺酸治疗后，剥脱组ＶＳＭＣ增生明显受抑制，且Ｌ－精氨酸＋牛磺酸对ＶＳＭＣ的抑制效应强于单纯应用Ｌ－精氨酸或牛磺酸组；Ｌ－精氨酸及Ｌ－精氨酸＿＋牛磺酸治疗后，血管对乙酰胆碱的内皮依赖性舒张，血ｃＧＭＰ含量明     

雌二醇对培养的兔血管平滑肌细胞表现型转变及增生的直接影响

实验应用民镜形态定量，细胞增生试验及＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入试验，观察了１７－β雌二醇对体外培养的家兔主动脉平滑肌细胞表现型转变及对不同表现型ＳＭＣ增生的影响。结果显示，Ｅ２在体外可显著抑制收缩型ＳＭＥ向合成型ＳＭＣ转化，导致这些细胞推迟进入增殖高峰期。     

肺炎衣原体感染对血管平滑肌细胞黏附和迁移的影响

目的:观察肺炎衣原体(C.pn)感染对血管平滑肌细胞(VSMCs)黏附和迁移的影响。方法:C.pn在人喉癌细胞系HEp-2细胞中增殖培养后感染大鼠VSMCs,吖啶橙(AO)荧光染色观察细胞内C.pn包涵体的形态特点;聚合酶链反应(PCR)检测C.pn特异性DNA片段;细胞黏附实验观察C.pn感染对VSMCs黏附能力的影响;wound-healing assay和Transwell assay检测C.pn感染VSMCs后细胞迁移能力的改变。结果:C.pn感染VSMCs后,少数细胞内出现空泡状结构即包涵体,但在多数细胞内以点状感染灶形式存在,包涵体较大,但数量较少。利用PCR可在感染的VSMCs内检测到437 bp的C.pn特异性DNA片段。细胞黏附实验结果显示,C.pn感染VSMCs 2 h后,细胞黏附能力明显增强,其吸光度值明显高于正常对照组(P0.01),细胞黏附率为134.38%。Wound-healing assay结果显示,C.pn感染VSMCs 24 h后,细胞向划痕中央迁移的距离明显大于正常对照组(P0.05)。Transwell assay结果显示,C.pn感染VSMCs 24 h后,C.pn感染组的细胞迁移数明显多于正常对照组(P0.01)。结论:C.pn感染能够显著增强VSMCs的黏附和迁移能力。     

血管内皮细胞的活化或损伤诱导平滑肌细胞的增生和凋亡

一、材料与方法1.细胞培养 :采用改进的Ｊａｆｆｅ氏培养法 ,培养人脐带静脉内皮细胞。采用贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞并传代。培养液均为含 2 0 %胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液。2 .内皮细胞的脂质过氧化引发实验 :将培养达融合状态的内皮细胞分组 ,分别加入含不同浓度氢过氧化枯烯的培养液孵育后 ,测定脂质过氧化物的代谢终产物丙二醛 (ＭＤＡ)的含量。3.培养液中乳酸脱氢酶 (ＬＤＨ)活性的测定 :ＬＤＨ是细胞内的可溶性酶 ,当细胞膜被破坏时可漏出细胞外 ,可作为细胞损伤的早期检测指标。采取内皮细胞培养液 ,以Ｓｉｇｍａ公司的ＬＤＨ测…     

纤维粘连蛋白和层粘蛋白对培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响

我们用不同剂量的纤维粘连蛋白（Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌｎ）作用于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）观察ＶＳＭＣｓ的生长和分裂情况，发现Ｆｎ和Ｌｎ均能促进ＶＳＭＣＳ的生长的分裂，Ｆｎ的这种作用在４０μｇ以上呈剂量依赖性，Ｌｎ则在２４μｇ以下呈剂量依赖性，当细胞数达到最大后，Ｆｎ和Ｌｎ的促进作用均逐步减弱。     

脑脉通对家兔体外主动脉血管平滑肌细胞的影响

对家兔主动脉血管平滑肌细胞进行体外培养，观察中药复方脑脉通对其传代细胞的影响。结果显示：脑脉通能降低平滑肌细胞的分裂指数，抑制其生长；而且随药物浓度的增高，其作用增加。提示脑脉通能减轻动脉粥样硬化的病变，并可预防其粥样硬化斑块的形成     

雌激素对血管平滑肌细胞中c-fos和增殖细胞核抗原表达的影响

目的：研究并比较雌激素和／或血清对血管平滑肌细胞(VSMC)中c-fos和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法：分别在有或无他莫昔芬(TAM)(雌激素受体ER拮抗剂)预处理的情况下,采用免疫细胞化学和图像分析方法,研究雌二醇(E2)和/或新生小牛血清(NCS)对传代大鼠VSMC中的c-fos和PCNA蛋白表达的影响。结果：E2以及NCS均能上调细胞中c-fos和PCNA蛋白的表达,TAM能阻断其效应。结论：雌激素能促进传代VSMC增生,ER介导其作用。     

含辛伐他汀药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖的直接作用及意义

目的 :探讨辛伐他汀对体外培养兔血管平滑肌细胞增殖的影响及意义。方法 :16只雄性新西兰兔随机分为血清对照组和三个不同剂量的辛伐他汀亚组 (每日分别给予辛伐他汀 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg) ,7天后采血并混合每组 4只兔血 ,无菌分离制备三亚组的辛伐他汀含药血清。采用内皮素 1(ET 1)刺激正常喂饲原代培养兔主动脉血管平滑肌细胞的方法 ,建立血管平滑肌细胞增殖模型。采用MTT及3H TdR法检测各组辛伐他汀含药血清对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果 :与不含药的正常对照组相比 ,不同亚组辛伐他汀含药血清呈剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖 (P <0 .0 1～0 .0 5 )。结论 :兔口服辛伐他汀后的血清具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用     

11,12-EET对缺氧血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨11,12-环-二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺氧大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法:采用贴块法体外培养大鼠主动脉VSMC,将细胞分为常氧对照组(Con组),缺氧模型组(H组),EET组(EET组)和EET-缺氧组(EET-H组),以MTT法测定VSMC的增殖率,以流式细胞术观察VSMC细胞周期及凋亡率,Western blot方法检测Bax的表达。结果:与Con组比较,H组VSMC增殖率升高(P<0.01),EET组VSMC存活率降低(P<0.01);EET-H组细胞增殖率低于H组(P<0.01)。与Con组相比,H组G0/G1期VSMC细胞比例减少(P<0.05),S期细胞比例增加(P<0.05);EET组较Con组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05);与H组相比,EET-H组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞比例减少(P<0.05)。EET-H组VSMC凋亡率高于H组(P<0.05)、Con组(P<0.05)及EET组(P<0.05)。EET组Bax的表达高于Con组(P<0.05);与H组比较,EET组及EET-H组Bax的表达均升高(P<0.01)。结论:外源性给予11,12-EET有抑制缺氧VSMC增殖和促进缺氧VSMC凋亡双重作用。11,12-EET可能通过对VSMC增殖和凋亡的调控,影响血管损伤后血管重构。     

刺芒柄花素对凝血酶诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制

目的:探讨刺芒柄花素(7-羟-4'-甲氧异黄酮,FN)对凝血酶诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法:通过不同浓度FN(5、25、50μmol/L)预处理后凝血酶(1U/ml)刺激培养3～5代大鼠胸主动脉SMCs;用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖能力;用Transwell小室法检测其迁移能力;用流式细胞仪检测其细胞周期变化;用Western blotting法检测其细胞磷酸化-细胞外信号调节激酶蛋白1/2(p-ERK1/2)的表达。结果:50μmol/LFN可明显抑制凝血酶诱导的胸主动脉SMCs增殖、迁移,促进细胞停滞于G0-G1期;下调p-ERK1/2蛋白的表达。结论:FN能有效抑制凝血酶诱导的VSMCs增殖、迁移及由G1期进入S期,其分子机制与FN抑制ERK1/2通路的活化有关。     

血红素加氧酶系统对ox-LDL介导的血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨血红素加氧酶(HO)系统对ox-LDL介导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其机制.方法采用倒置显微镜和MTT法观察VSMC生长状况;检测VSMC中cAMP/cGMP的水平、c-fos和c-myc mRNA及其蛋白质和HO-1蛋白质的表达.结果HO特异性抑制剂锌原卟啉-9(ZnPP-9)组在6、12 h的VSMCs生长曲线与ox-LDL组(C组)间无明显差异(P＞0.05);然而,48 h明显高于C组(P＜0.01);24、72 h与ox-LDL组重合,在终点(96h)略高于ox-LDL组(P＞0.05);ZnPP9组与ox-LDL组c-myc、c-fosmRNA及其蛋白和HO-1蛋白的表达均较强.尽管HO分解的代谢产物三价铁(Fe )螯合剂(去铁胺)组生长曲线高于ZnPP-9组(48h时与ZnPP-9组重合)和ox-LDL组(P＜0.01),但VSMCs体积明显增大,数量减少.结论锌原卟啉-9抑制血红素加氧酶活性而促进ox-LDL介导的血管平滑肌细胞增殖效应,去铁胺螯合Fe 能抑制VSMCs数量增加.其机制可能与HO-1活性和c-myc、c-fosmRNA及其蛋白表达有关,而与HO-1蛋白表达和cAMP/cGMP水平无明显关系.     

PACAP保护血管SMC抗LDL损伤的形态学研究

的 :阐明垂体腺苷酸环化酶激活肽 (PACAP)是否对血管平滑肌细胞 (SMC)具有抗损伤保护作用。方法 :以培养的猪肺动脉 SMC为实验对象 ,提取正常人血浆低密度脂蛋白 (L DL )造成细胞的高脂培养环境 ,光镜及电镜下观察 SMC在正常及高脂环境中受 PACAP作用所产生的形态改变。生化方法测定条件培养基中丙二醛 (MDA)的含量。结果 :1L DL 使 SMC的贴壁能力降低 ,细胞外形亦发生极大改变 ;电镜下可见 ,SMC由正常的收缩型变为合成型 ,且细胞膜破坏 ;2 L DL 使 SMC的 MDA产生显著增高 ;3 PACAP可明显减轻 L DL的上述损伤作用。结论 :PACAP可对抗 L DL对 SMC形态和功能的损伤 ,具有 SMC细胞保护作用     

淫羊藿苷对大鼠血管平滑肌细胞钙化的抑制作用

目的:研究淫羊藿苷(Icariin)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的抑制作用。方法:组织贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMCs,取5-8代细胞分为对照组、钙化模型组和淫羊藿苷干预A、B、C组。对照组用DMEM培养基培养;钙化模型组用含10mmol/Lβ-甘油磷酸盐(β-GP)的DMEM培养基培养;干预A、B、C组均以钙化模型组为基础分别与10-6 mol/L、10-5 mol/L和10-4 mol/L Icariin的DMEM培养基共培养,茜素红-S染色法鉴定各组细胞钙化情况,硝基苯酚法测定各组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR检测各组细胞内骨保护素(OPG)和核因子κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)的mRNA水平,用Western blotting检测各组细胞OPG和RANKL的蛋白表达。结果:与对照组比较,钙化模型组VSMCs发生细胞钙化,并形成红色结节,ALP活性显著升高(P0.01),OPG、RANKL mRNA和蛋白表达均增加(P0.01);与钙化模型组比较,干预A、B、C组细胞钙化减少,ALP活性减低(P0.01),OPG、RANKL mRNA和蛋白表达均下调(P0.01),尤以干预B组效果最显著。结论:淫羊藿苷可能通过降低ALP活性及OPG、RANKL表达来抑制动脉钙化。     

高压氧对大鼠血管平滑肌Ca~(2 )-ATP酶活力的影响

探讨Ｃａ２＋ＡＴＰ酶在高压氧条件下对微血管作用的机理。方法：实验用Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠,雌雄均用,实验动物随机被分为：正常对照组、常压纯氧组、０．２５ ＭＰａ高压氧组和０．４ ＭＰａ高压氧组。用定磷法测定大鼠血管平滑肌Ｃａ~２＋－ＡＴＰ酶活力。结果：０．１ＭＰａ纯氧和０．２５ ＭＰａ高压氧作用后,Ｃａ~２＋ＡＴＰ酶活力增加,与正常对照组相比,０．１ＭＰａ纯氧组无显著性改变（Ｐ＞０．０５）,而０．２５ＭＰａ高压氧组有非常显著的上升（Ｐ＜０．０１）;但０．４ ＭＰａ高压氧组血管平滑肌Ｃａ~２＋－ＡＴＰ酶活力下降,与正常对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：血管平滑肌细胞Ｃａ~２＋－ＡＴＰ酶活力受高压氧作用的影响,在０．１ＭＰａ纯氧和０．２５ＭＰａ高压氧下可使酶活力增加,但过高压力的高压氧则降低其活力。     

计算机图像处理系统用于血管平滑肌细胞形态定量分析

采用计算机图像分析法，定量测定家兔培养主动脉血管平滑肌细胞的形态学参数及其与ＤＮＡ合成指标的相关关系，并在此基础上，从细胞形态学角度探讨了中药制剂川芎嗪对ＶＳＭＣ增殖的影响，以评价计算机图像分析技术在细胞学研究中的作用，建立一种研究ＶＳＭＣ增殖水平的新方法。     

生长抑素抑制内皮素刺激的家兔血管平滑肌细胞增殖

为探讨生长抑素（ＳＳＴ）对内皮素（ＥＴ）刺激细胞增殖的作用其机理，本工作在培养的兔主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）上发现，１０＾－８ｍｏｌ／ＬＥＴ刺激细胞增殖（＾３Ｈ＝ＴｄＲ参入增多）和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）激活，１０＾－８ｍｏｌ／ＬＳＳＴ单独作用可抑制细胞增玩具增殖但不曩ＭＡＰＫ活性。ＳＳＴ不仅呈浓度依赖性地抑制ＥＴ刺激的ＶＳＭＣ增殖（Ｐ〈０．０１），而且亦抑制ＥＴ刺激的细胞ＭＡＰＫ激     

细胞外信号调节激酶在缓激肽引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的 :本研究主要从细胞外信号调节激酶 (ERKs)的角度 ,研究丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径在缓激肽 (BK)介导的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制。方法 :通过3H 胸苷 ( 3H TdR)掺入率与SMC3H 亮氨酸掺入率分别反映SMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率 ;并通过给予MAPK激酶 (MEK )特异性抑制剂PD0 980 5 9及ERKS抑制剂UO12 6预处理 ,观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响。结果 :①BK( 10 - 8mmol/L)处理 3 0minVSMC3H 胸苷掺入率和3H 亮氨酸掺入率均明显增高 ;②BK增高3H 胸苷掺入的作用可明显被PD0 980 5 9所抑制和部分被UO12 6所抑制 ;③BK增高3H 亮氨酸掺入的作用可部分被PD0 980 5 9和UO12 6所抑制。结论 :ERKs激活在缓激肽导致VSMC增殖反应中具有重要作用 ,并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应 ,影响血管平滑肌细胞的增殖效应