颞下颌关节骨关节病髁状突软骨细胞体外培养及细胞生物学特性研究

目的:从兔的颞下颌关节骨关节病模型动物获得髁状突软骨细胞并行体外培养.方法:采用部分关节盘手术切除的方法制造颞下颌关节骨关节病模型,组织大体观察、超微结构观察和组化检测方法确定骨关节病的存在.在此基础上,通过机械分离、胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法从骨关节病髁状突软骨组织中获得软骨细胞,进行体外环境下的贴壁培养;通过软骨细胞特异性蛋白的免疫组化方法进行细胞鉴定.四甲基偶氮唑盐法比较病理模型细胞与正常细胞的增殖能力差异.结果:上述颞下颌关节骨关节病模型全面地模拟了骨关节病变关节软骨组织的特征;利用机械分离、胰蛋白酶胶原酶联合消化的方法成功地从骨关节病髁状突软骨组织中分离出软骨细胞并在体外贴壁条件下培养成活;应用特异性的Ⅱ型胶原多克隆抗体和聚合性糖胺多糖单克隆抗体对培养细胞进行免疫组化检测鉴定,均显示阳性.骨关节病髁状突软骨细胞的增殖能力高于正常细胞.结论:成功地建立了骨关节病髁状突软骨细胞的体外模型;骨关节病早期的髁状突软骨细胞表现出增殖活跃的特性.     

Caspase-9在髁突软骨及长骨生长板软骨中表达变化的对比

目的 观察Caspase-9在大鼠髁突软骨与长骨生长板软骨发育中的表达变化, 探讨Caspase-9在软骨细胞发育中的意义.方法 建立SD大鼠不同发育阶段 (E15dP30d) 髁突软骨与长骨生长板软骨发育的动物模型, 采用免疫组化检测Casepase-9在2种软骨中的表达变化.结果 大鼠髁突软骨Caspase-9阳性表达强于生长板软骨 (P<0.05) , 且生长板软骨阳性细胞的分布规律与髁突基本一致.胎鼠Caspase-9阳性主要表达于增殖层;出生后主要表达于成软骨层及肥大层.结论 Caspase-9参与了髁突软骨及生长板软骨的生长发育, 由其所介导的细胞凋亡可能在软骨发育中发挥重要作用.且Caspase-9对于髁突软骨和生长板软骨的发育可能存在某些相同或相似的分子机制.     

大鼠生长早期改变食物负荷对颞下颌关节软骨可聚蛋白聚糖酶-1和金属蛋白酶组织抑制因子-3表达的影响

目的观察大鼠生长早期改变食物硬度造成颞下颌关节负荷改变后颞下颌关节软骨内可聚蛋白聚糖酶-1和金属蛋白酶组织抑制因子-3（TIMP-3）的表达变化,并探讨其变化机制。方法 100只15 d龄雌性大鼠,21 d龄断奶后随机分为两组,实验组50只改喂极硬块状食物,对照组50只喂粉末样食物,改变食物后6 h、12 h、24 h、48 h及9 d每组分别各处死10只大鼠,采用免疫组化法及蛋白免疫印迹法半定量分别检测可聚蛋白聚糖酶-1和TIMP-3在髁突软骨细胞的表达情况。结果免疫组化发现,在所有时间段,可聚蛋白聚糖酶-1和TIMP-3主要表达在两组髁突软骨增殖层和上层肥大层的软骨细胞,可聚蛋白聚糖酶-1在两组髁突软骨下肥大层以及基质中亦有弱表达;蛋白免疫印迹结果显示,在12 h、24 h实验组可聚蛋白聚糖酶-1相对灰度值明显高于对照组（P〈0.05）;在6 h时间点上,实验组TIMP-3相对灰度值明显低于对照组（P〈0.01）;其他时间段两组表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论改变食物硬度造成大鼠颞下颌关节负荷改变,可聚蛋白聚糖酶-1和TIMP-3参与髁状突软骨代谢,其表达变化属生理范围内,是改变食物负荷极早期的一种敏感、暂时、适应性改变。     

程序化细胞死亡在颞颌关节发育中的作用

为了探讨程序化细胞死亡（ＰＣＤ）在颞颌关节的发育中的作用,利用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）,对胚胎及生后１周ＳＤ大鼠颞颌关节发育不同时期的ＰＣＤ进行了观察。结果：各时期髁状突软骨细胞中均有ＰＣＤ出现,阳性ＰＣＤ细胞主要分布于软骨增殖带及浅层肥厚与深层肥厚层交界的区域,关节腔开 形成时髁状软骨表面ＰＣＤ明显,出生后ＰＣＤ阳性细胞于关节的功能部位（髁状突前斜面）较其他部位更明显。结果表明ＰＣＤ在颞颌关     

基质金属蛋白酶在颞下颌关节骨关节病的表达

目的建立颞下颌关节骨关节病的大鼠动物模型,观察特定基质金属蛋白酶（MMP-13）在颞下颌关节骨关节病中表达的变化,探讨MMP-13在颞下颌关节骨关节病的作用。方法通过部分切除大鼠右侧颞下颌关节盘,建立颞下颌关节骨关节病的大鼠动物模型,免疫组织化学染色检测关节组织中MMP-13的表达。结果实验组髁状突软骨中的MMP-13表达增强。结论 MMP-13可能在颞下颌关节骨关节病的疾病破坏过程中起着重要的作用。     

缺牙对颞下颌关节软骨形态的实验研究

对鼠后牙缺失的髁状突软骨和关节盘组织的形态学变化进行观察。旨在从软骨的组织学变化探讨牙合异常与颞下颌关节紊乱综合征的关系。结果发现：实验组双侧髁状突软骨各细胞层均有不同的改变，增殖区变薄，细胞数量减少，细胞形态异常。过渡层变薄。关节盘内胶原纤维呈多向性走行，表明多数后牙缺失对颞下颌关节髁状突和关节盘的组织结构均有影响。     

心理应激对大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞MMP-3和 TIMP-3表达的影响

目的：探讨心理应激对大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和金属蛋白酶组织抑制剂-3（TIMP-3）表达的影响及其机制。方法将48只成年 Wistar 雄性大鼠随机分为实验3 w 组、实验6 w组、实验去除刺激6 w 组（恢复组）和空白对照组,每组12只。对3个实验组大鼠施加电击、制动、气候箱、食物诱惑等刺激,使大鼠处于心理应激状态。将各实验组大鼠分别于3 w、6 w 和刺激去除后6 w 处死;对照组同恢复组大鼠一起处死。取颞下颌关节标本制作切片,免疫组织化学染色,光镜下观察髁突软骨细胞 MMP-3和 TIMP-3的表达情况。结果4组大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞中 MMP-3表达强度不同,差异有统计学意义（P ＜0．05）;实验3 w 组和实验6 w 组 MMP-3的表达强度均高于对照组（P ＜0．05）。4组大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞中TIMP-3表达强度不同,差异有统计学意义（P ＜0．05）;恢复组 TIMP-3的表达明显高于对照组（P ＜0．05）。结论MMP-3和 TIMP-3分别在实验3 w、6 w 组和恢复组高表达,MMP-3和 TIMP-3表达平衡可能是应激影响髁突软骨的途径之一,合理调控该平衡可能会阻断应激对软骨的破坏。     

异常咬合对成年大鼠颞颌关节影响的初步研究

目的：探讨异常咬合关系对成年大鼠颞下颌关节的影响。方法：选用19周龄雄性Wistar大鼠50只作为研究对象,按实验目的将大鼠随机分为实验组（30只）、操作对照组（10只）和空白对照组（10只）。应用螺旋拉簧以60g力作用于实验组大鼠的上颌第一磨牙,使其近中移动,形成异常咬合关系。加力后2周、3周、4周、5周、6周分别处死6只实验组大鼠,2只操作对照组大鼠和2只空白对照组大鼠。取其颞下颌关节做HE染色、Masson染色,观测髁状突的变化。结果：1.实验组髁状突纤维层表层的胶原纤维间水肿,组织松解,形成细小的裂隙;胶原纤维从表面剥离;肥大层变薄;初期骨小梁出现轻度的排列紊乱,其后骨小梁排列趋于恢复;2.髁状突软骨厚度变化：实验组可见髁状突软骨厚度下降,由后向前依次变薄。前带厚度随时间变化不明显,后带的变化程度最大;3.Masson染色结果：在实验组中髁状突软骨和软骨下骨出现红染增加。结论：异常咬合将导致大鼠颞下颌关节出现退行性变,主要表现为髁状突软骨变薄和纤维层的轻度破坏。     

功能矫形后退大鼠下颌后髁突软骨改建的分子机制

目的：探讨功能矫形后退大鼠下颌后髁突软骨改建的分子调控机制.方法：SD大鼠40只,实验组配戴模拟临床功能矫治器,强制大鼠下颌后退,对照组不戴模拟矫治器,实验后3天、1、2、3周处死大鼠取髁突,HE染色观察组织学变化,免疫组织化学方法结合图像分析检测TGF-β1、TGF-β R1、IGF-1在髁突中的表达及分布.结果：实验组大鼠下颌后退1～2 mm,镜下见颞下颌关节髁突软骨厚度增加,以生发层和过渡层增加明显,细胞数增多,细胞体积增大,核肥大深染.髁突各层软骨细胞均有TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达,免疫组织化学阳性染色相对面积和积分灰度的比较显示：在功能矫形后退下颌后,实验组TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达较对照组明显增强,其差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：功能矫形后髁突软骨表现为增生改建、分化功能增强,其发生与TGF-β1、TGF-β R1和IGF-1的表达密切相关.     

间接创伤对幼年鼠颞下颌关节早期影响的光镜观察

目的：探讨间接创伤对幼年鼠颞颌关节早期影响的组织学变化。方法：实验用１月龄Ｗｉｓｔａｒ大白鼠３２只,通过下颌角造成颞下颌关节间接创伤,然后在创伤后２４ｈ、１周、２周应用光镜方法对其颞下颌关节进行观察。结果：Ｇ发比较铫镜下可见创伤后２４ｈ髁状突表面纤维软骨松解,碎后后１－２周髁状突、关节有层成纤维细胞增生,纤维软骨层增厚。伤后４周可见盘突粘连。结论：间接创伤可幼年鼠颞下颌关节组织的损伤及引起关节主髁     

SOX9在SD大鼠胚胎发育髁突软骨与胫骨生长板软骨中的时间表达研究

目的 通过建立SD大鼠的发育模型,观察髁突软骨与胫骨生长板软骨在胚胎发育过程中的不同生长特性,探讨比较SOX9在2种不同性质软骨生长发育过程中的表达变化及其意义.方法 30只成年SD大鼠按2雌1雄的比例合笼,观察雌鼠于合笼后是否发现阴栓作为怀孕的标志,计为妊娠0d,隔离常规饲养.分别于孕鼠妊娠13d、14 d、15d、...     

失重对大鼠髁突软骨细胞中TNF—α mRNA表达的影响

目的观察尾部悬吊模拟失重大鼠细胞因子TNF-α表达水平,探讨失重对颞下颌关节的影响机制。方法选用SD大鼠60只,在模拟应激条件下建立颞下颌关节的失重应激反应动物模型,提取连续刺激1、3、5周。运用ELISA法和RT—PCR测量髁突软骨细胞中TNF-α的含量和TNF-αmRNA的表达量。结果TNF-α mRNA在失重后1周表达最强,以后逐渐达到正常水平。结论失重能使髁突软骨TNF-α改变,可能促使颞下颌关节发生病变。     

Expression of GDF-5 during Limb Skeletal Development of Mice and the effect of GDF-5 on bone marrow mesenchymal stem cells in vitro

Objective： To investigate the expression of growth differentiation factor 5（GDF-5） during limb skeletal development of mice and the effect of GDF-5 on bone marrow mesenchymal stem cells in vitro. Methods ： The expression of GDF- 5 mRNA and protein in mouse fetal limb buds were detected in embryonic day 11.5-15.5 （E11.5-15.5） by RT-PCR and Western blotting respectively. Type Ⅱ collagen protein was examined with immunocytochemistry and the sulfate glycosaminoglycan was measured by Alcian blue. Results： During early stage of developmental skeletogenesis, the expression of GDF-5mRNA was constant and began with embryos E11.5, highlighted at embryos E12.5 and E13.5, subsequently dropped at embryos E14.5 and E15.5. There was very significant difference （P 〈 0.01） in average light density ratio of GDF-5/β-actin between E12.5-13.5 and the other three days. The expression of GDF-5 protein had a similar change with mRNA during limb skeletogenesis. Immunocytochemistry showed that GDF-5 could promote expression of Type Ⅱ collagen protein and histological staining of proteoglycan with Alcian blue revealed the deposition of typical cartilage extracellular matrix components. Conclusion： GDF-5 can enhance chondrogenic differentiation of mouse bone marrow mesenchymal stem cells in vitro, which plays an important role in limb skeletal development and joint formation.     

数字医学技术在颞下颌关节下颌运动中的研究

目的：探讨正常人颞下颌关节下颌运动数字医学技术的磁共振特点和意义。方法：对30名健康志愿者用1．5T磁共振运动扫描技术和口腔支撑器获得颞下颌关节斜矢状位的磁共振运动图像。结果：颞下颌关节下颌运动磁共振成像显示,髁突横嵴自下颌窝内的12点逐渐向前下转动至9点并向前滑出下颌窝位于关节结节下方,关节盘为双凹形,随着张口运动,关节盘的形态和厚度也发生着一定的变化,以关节盘中带较明显。结论：斜矢状位颞下颌关节磁共振扫描可清楚地显示颞下颌关节的结构和运动。     

Jagged1 peptide appearing in mandibular condylar cartilage development

We investigated the expression pattern of Jagged1 peptide in mandibular condylar cartilage, as a type of secondary cartilage. Mandibular condyle of ddY mice were fixed from embryonic day 15 (E15) through just after birth (equivalent to E19). Serial sections were examined using histological immunohistochemical (IHC) techniques. At E15, the proliferating cells had positive products of Jagged1 in their cytoplasms and cell membrane of almost all coagulating cells. At E17, cytoplasmic and membranuous reactions of Jagged1 factors appeared strongly in the cells just inside the condylar cartilage sheath. At E18, Jagged1 positive products were observed in almost all cells of the layers, and they were mostly distinct in the sheath of the condyle. At just after birth, Jagged1 was observed in a portion of almost all layer cells in their cytoplasm and membrane. These results suggest that Jagged1 plays an essential role for mandibular condylar cartilage morphogenesis and development.     

横向不调伴TMD患者髁突位置及对称性

  目的  研究横向不调伴TMD（Temporomandibular Disorders，颞下颌关节紊乱病）患者髁突形态、位置及下颌骨对称性与正常者的区别。  方法  纳入18名不调伴颞下颌关节病患者及18名正常者，治疗前拍摄CBCT（Cone Beam CT，锥形束CT），对比分析2组髁突形态、位置与下颌对称性的特点。  结果  （1）双侧升支高度，试验组与对照组，差异无统计学意义（P > 0.05）；试验组与对照组下颌骨对称性指数，差异有统计学意义（P < 0.05）；下颌骨对称性对照组优于试验组。（2）试验组与对照组相比，关节前间隙、上间隙、后间隙，差异无统计学意义（P > 0.05）；对照组双侧髁突位置有相关性（P < 0.05），试验组双侧髁突位置无相关性（P > 0.05）。（3）试验组双侧髁突轴向角左侧（25.56±8.69）°，右侧（25.88±10.19）°显著大于对照组，左侧（19.77±8.18）°，右侧（19.69±7.53）°，差异有统计学意义（P < 0.05）；试验组与对照组双侧髁突轴向角均有相关性（P < 0.05）。（4）髁突前后径试验组，左侧（16.47±2.03） mm，右侧（16.62±2.16） mm 与对照组的左侧（17.76±1.93） mm，右侧（17.84±2.09） mm，差异无统计学意义（P > 0.05）；髁突中侧径试验组的左侧（7.12±1.3） mm，右侧（6.78±1.47） mm，与对照组的左侧（8±0.88） mm，右侧（7.76±0.92） mm，差异有统计学意义（P < 0.05）。（5）试验组双侧髁突中心与正中矢状面距，差异无统计学意义（P > 0.05）；对照组双侧髁突中心与正中矢状面距，差异无统计学意义（P > 0.05）；双侧髁突中心前后向，试验组与对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05），试验组两侧髁突与正中矢状面距无相关性（P > 0.05），对照组两侧髁突与正中矢状面距有相关性（P < 0.05）。  结论  横向不调伴TMD患者下颌骨对称性、盘突关系、双侧髁突位置相关性较差，髁突小于正常者。对于横向不调患者，临床应积极评估颞下颌关节，以降低正畸治疗风险。     

Effects of estradiol on proliferation and metabolism of rabbit mandibular condylar cartilage cells in vitro

Objective To investigate the effects in vitro of 17β-estradiol ( E2 ) on the proliferation and metabolism of rabbit mandibular condylar cartilage cells.Methods Chondrocytes were derived from neonatal rabbit mandibular condylar cartilage using a modified enzyme method. 17β-estradiol was added to the culture medium in a variety of concentrations. Cell growth and DNA, collagen, and proteoglycan synthesis were used as indicators of proliferation and differentiation of condylar chondrocytes. These were measured by cell number, ^3 H-proline and ^35S-incorporation, respectively.Results E2 increased cell number and ^3H-thymidine incorporation at 10^-8 to 10^-10mol/L, and 10^-8 to 10^-11 mol/L in a dose-dependent manner, peaking at 10^-8 mol/L and 10^-9mol/L, respectively.However, further increase in the concentration of estradiol caused inhibition of both cell number and ^3H-thymidine incorporation, and this was significant at 10^-6mol/L. The effect of E2 on proteglycan synthesis was similar; the maximum stimulating effect was at 10^-8mol/L, and inhibition was significant at 10^-6mol/L. There was no obvious stimulatory effect of E2 on ^3H-thymidine incorporation observed.Conclusions Estradiol affects condylar chondrocyte cell growth, DNA, and proteoglycan synthesis in a biphasic manner depending on its concentration. This indicates that estrogen may be important in the proliferation and differentiation of mandibular condylar chondrocytes, and could be relevant to some aspects of certain tempormandibular joint diseases by modulating the function of the chondrocytes.     

髁突高位骨折的手术治疗

目的观察颌下切口下颌升支垂直截骨术治疗髁突高位骨折的效果。方法对16例（19侧）下颌骨髁突高位骨折患者采用颌下切口下颌骨升支后缘垂直截骨,取出升支后缘骨块,将骨折的髁突游离后取出,体外直视下将骨折片与升支后缘骨块复位固定后再回植,行颞下颌关节重建。结果 6个月、12个月、24个月随访,检查开口度为30～48 mm,平均为34.9 mm。16例患者术后咬合关系良好,无关节疼痛症状。部分病人有轻度的开口偏斜,均〈3 mm,有关节弹响1例。结论颌下切口下颌升支垂直截骨术治疗髁突高位骨折有操作简便、复位准确、近期疗效。