阴道毛滴虫在两种培养基中的生长与形态观察

目的通过对改良肝浸汤培养液及RPM11640培养基内阴道毛滴虫生长情况的观察，选择适合教学和科研的培养基。方法用临床分离的阴道毛滴虫标本，分别接种至改良肝浸液及RPM11640两种培养基内进行培养，pH值为5．6～5．8，通过计数了解生长情况并观察阴道毛滴虫的形态。结果肝浸汤培养液中培养48h，阴道毛滴虫达到生长高峰，虫体呈现出多分裂相，虫体变大、呈圆形，内含4～12个细胞核，细胞膜外缘可见数丛鞭毛。RPM11640培养基中阴道毛滴虫72h达到生长高峰，虫体密度约为肝浸液高峰期的2／3，未见多分裂现象，虫体与生理盐水涂片中阴道毛滴虫形态、大小相近。结论改良的肝浸液培养基适于阴道毛滴虫的药物试验及其他实验项目的研究，RPM11640培养基更适用于教学、标本的制作及实验室保种工作。     

MTT染色法计数阴道毛滴虫体外增殖密度的试验

目的评价四氮唑蓝(5-’diphenyl tetrazolium bromide,MTT)染色法计数阴道毛滴虫增殖密度的可行性。方法在已接种了阴道毛滴虫的肝浸汤(含小牛血清)、RPMI-1640(含小牛血清)、RPMI-1640(无血清)培养基中加入MTT,与血球计数板法进行比较。结果加入MTT后4、244、8 h,上述3种培养基中大部分阴道毛滴虫虫体内部未见蓝色结晶体形成,有血清的培养液镜下观察视野不清晰。结论MTT法不宜用于计数体外培养阴道毛滴虫的增殖密度。     

阴道毛滴虫经扁桃酰胺作用后的扫描电镜观察

扁桃酰胺是桃叶浸液中杀灭阴道毛滴虫的有效成分,作者对其杀虫机制进行过透射电镜观察,现将扫描电镜观察结果作一简报。 方法 自滴虫性阴道炎病人取材,接种于肝浸汤培养基中,37℃下稳定培养4代后实验。所用滴虫已培养48h,虫体生长旺盛、无死亡者进行实验。实验分两管,一为药物管(含0.8％扁桃酰胺);另一为     

人芽囊原虫在不同培养基中生长状况的观察

目的筛选培养人芽囊原虫的最适培养基。方法将同一株人芽囊原虫阳性粪便标本以2×105细胞/管接种至RPMI1640、199和LES培养基中,加入20%小牛血清及青、链霉素,pH值为7.5,放置厌氧罐中于37℃恒温培养,每24h计数,每6d转种1次。观察人芽囊原虫在3种培养基中的存活时间、虫体密度和虫体形态。结果人芽囊原虫在RPMI1640培养基中存活时间最长、虫体密度最高,虫体以空泡型多见;在LES培养基中存活时间最短、虫体密度最低,但虫体形态清晰、规则;在199培养基中存活时间和虫体密度均介于前两者之间。结论RPMI1640培养基适宜人芽囊原虫的生长繁殖,为人芽囊原虫体外培养的首选培养基;LES培养基中虫体形态清晰、规则,可用于人芽囊原虫的形态学研究;199培养基也可用于人芽囊原虫的体外培养,但不作为首选。     

不同pH肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫的观察

目的 观察不同pH值对阴道毛滴虫生长发育的影响，为实验室培养或临床诊断培养阴道毛滴虫提供参考。方法 配制pH值分别为2、2．5、3、3．5、4、4．5、5、5．5、6、6．5、7、7．5、8、8．5的肝浸汤培养基，分别接种相同数量的阴道毛滴虫，37℃恒温培养48h，用血球计数板计数滴虫数量。以pH值为横坐标，滴虫密度为纵坐标作曲线图，找出培养滴虫的最适pH值范围。同时，连续观察各pH值管滴虫生长情况，直至滴虫死亡，记录各pH值培养基中滴虫的最长存活时间。结果 阴道毛滴虫能在pH3～8的肝浸汤培养基中生长繁殖，最适pH范围为5～7．5，最适pH值是6。在pH4和pH8的培养基中连续不转代培养时，滴虫存活时间最长，分别达180h和189h。结论 肝浸汤培养基pH值为6时，滴虫生长良好，运动活泼，繁殖速度快，适用于快速繁殖滴虫，提高滴虫收获量；在pH4和pH8时，滴虫生长缓慢，但存活时间显著延长，适合保种培养。     

3种不同培养基体外培养阴道毛滴虫效果的比较

目的　探索阴道毛滴虫体外培养的适宜条件。　方法　用临床分离的阴道毛滴虫 ,按 9.0× 10 4 / ml的接种量转种至 3种不同培养基进行培养 ,p H值为 5 .6。　结果　经 3种培养基培养 ,96 h后阴道毛滴虫数量存在差异 ,其中以半胱氨酸 -肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )虫数较多 ,肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )次之 ,大豆 -肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )较少。培养基 与培养基 及培养基 相比较 ,滴虫存活率差异具有显著性意义 P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,滴虫生长密度差异也具有显著性意义 P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,生长密度高峰持续时间分别为 192 h、14 4 h和 96h,最长存活时间分别为 2 88h、2 16 h和 192 h。　结论　半胱氨酸 -肝 -胨 -麦芽糖培养基较适于阴道毛滴虫体外增殖     

低温保存阴道毛滴虫的实验观察

利用5%、10%、15%、20%、25%、30%浓度的二甲基亚砜和甘油肝浸汤培养液对临床分离的阴道毛滴虫进行4℃保存观察。二甲基亚砜和甘油两实验组最适保种浓度分别为15%和10%,50%虫体存活率天数分别为29和27 d,最长保存天数分别为31和29 d;而空白对照组仅为5和7 d。结果表明,15%二甲基亚砜或10%甘油肝浸汤培养液4℃冷藏保存阴道毛滴虫可显著延长其保存期。     

应用RPMI 1640制作阴道滴虫培养基

阴道滴虫培养基种类较多,目前认为比较好的是肝浸汤培养基,而肝浸液是其主要成分。本文应用RP-MI 1640培养液替代肝浸液,并对原培养基的成分进行了调整,简称为1640胨培养基,现将结果报告如下。一、材料和方法 (一)培养基的成分及制作 1.1640胨培养基:将半胱胺酸盐0.2g,蛋白胨0.4g,麦芽糖0.4g加入90ml蒸馏水中溶解后,过滤。以1mol/LNaOH调pH5.6～5.8,分装,每管4.5ml,54.89kPa,20min灭菌。再以RPM11640(日本制药株式会社出品)1.02g,加入10ml无菌蒸馏水中,待溶,以10％HCl调pH5.6～5.8,置普通冰箱冷冻室(-15℃)     

双氢青蒿素对阴道毛滴虫微丝作用的观察

目的　探讨双氢青蒿素对阴道毛滴虫的杀伤效果及作用机制。　方法　用含双氢青蒿素的肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫 ,观察药物对滴虫的杀灭效果 ;用激光共聚焦显微镜观察双氢青蒿素作用前后滴虫微丝的变化。　结果　随药物作用时间延长和药物浓度增加 ,阴道毛滴虫死亡率增高。同一时间随着药物浓度的增高 ,虫体死亡率升高 (P <0 .0 1)。作用 6h ,双氢青蒿素 0 .6mg ml虫体死亡率是 2 0 % ,而 1.0mg ml时高达 85 % ;同一药物浓度随着作用时间延长 ,滴虫死亡率也升高 (P <0 .0 5 ) ,药物 0 .8mg ml时 ,6h、8h、10h、12h和 14h死亡率分别是 43 %、68%、86%、97%和 10 0 %。药物作用后滴虫微丝排列疏松 ,有空隙生成。排列杂乱无序。　结论　双氢青蒿素可作用于滴虫微丝结构 ,破坏微丝 ,具有较强的杀滴虫作用。     

中性粒细胞杀灭阴道毛滴虫作用的研究

目的 研究中性粒细胞对阴道毛滴虫的杀灭作用。 方法 将滴虫性阴道炎患者的阴道分泌物接种于肝浸汤培养基，获阴道毛滴虫。取患者静脉血分离血清，取其1 ml 于56 ℃ 30 min获补体失活血清。另取1 ml患者血清于0 ℃以阴道毛滴虫吸附3次，获去除抗体血清。用密度梯度离心法及聚合物加速沉降法分离、纯化患者静脉血中性粒细胞。用氮蓝四唑（NBT）和沙黄O（safranin O）染色，显微镜观察中性粒细胞与阴道毛滴虫相互作用及甲臢（NBT还原产物)颗粒（formazan）沉积。取300个阴道毛滴虫和3×104个中性粒细胞，分别在有氧或厌氧、有或无超氧化物岐化酶（SOD）及过氧化氢酶（CAT）、有或无补体等不同条件下，培养10、20、30、40、50及60 min，再接种于固态琼脂培养基，在37 ℃厌氧条件下继续培养5 d。观察计数阴道毛滴虫存活率。 结果 显微镜下可见几个中性粒细胞同时围攻杀灭1个阴道毛滴虫。含有中性粒细胞时培养的虫体存活率，厌氧条件下为85%，有氧条件为3%（P﹤0.01）。SOD及CAT可明显降低其杀虫作用，培养60 min虫体存活率分别为98%及94%，而无SOD及CAT时虫体存活率为2%（P值均<0.05）。加入去除抗体血清，可将虫体全部杀灭。加入补体失活血清则无杀虫作用。 结论 中性粒细胞杀灭阴道毛滴虫作用依赖于氧及患者血清中补体的存在。     

Isolated mouse pancreatic islets in culture: Effects of serum and different culture media on the insulin production of the islets

Summary Various conditions for tissue culture of collagenase-isolated mouse pancreatic islets were studied in an attempt to optimize the maintenance of glucose stimulated insulin biosynthesis and release in the cultured specimens. Islets which had been cultured at a physiological glucose concentration (5.5 mmol/l) in the absence of serum had an impaired glucose-stimulated insulin biosynthesis and release as well as a reduced insulin content. Thus, insulin biosynthesis was three times higher after culture in a serum supplemented medium. Further, the insulin secretion of islets cultured in the presence of serum was markedly enhanced in acute incubations with high concentrations of glucose. This response was most pronounced in islets which had been cultured free-floating. A comparison between different culture media showed that islets cultured in RPMI 1640 had the highest insulin production. The present data suggest that the most favourable conditions for long-term storage of isolated islets in culture may be obtained when the islets are maintained as free-floating explants in a culture medium consisting of RPMI 1640 supplemented with serum.     

过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡的实验观察

目的 探讨过氧化氢（H₂O₂）体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡。 方法 体外培养细粒棘球蚴原头节,实验分为2组,即RPMI 1640组及RPMI 1640添加谷氨酰胺组。分别用不同浓度的H₂O₂诱导,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术（TUNEL 法）检测凋亡细胞;用过氧化物酶标记链酶卵白素（SP）染色-免疫组化法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-1（caspase-1）、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）以及FAS基因蛋白(跨膜蛋白Fas)表达情况。表达产物用二氨基联苯胺（DAB）显色,苏木素复染。TUNEL反应以细胞核黄染者为阳性细胞,caspase-1和caspase-3以细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,Fas以细胞膜和细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,无黄染者为阴性细胞。根据每个原头节中阳性细胞数所占百分比,对原头节阳性表达程度分为4个级别,即原头节中阳性细胞数＜5% 为“-”,5%～25% 为“+”,26%～50%为“++”,＞50%为“+++”。实验重复2次。各组均设空白对照组。 结果 RPMI 1640组,1 mmol/L H₂O₂诱导12 h,查见典型的TUNEL反应阳性细胞;诱导4 h,caspase-1表达86.6%为 “+ ～ ++”,caspase-3 表达77.8%为 “+ ～ ++”;诱导8 h,caspase-1表达 86.6%为 “+ ～ ++”,caspase-3表达 80.0%为 “+ ～ ++”。均比对照组明显增加（P＜0.05）。而5 mmol/L H₂O₂ 诱导4 h,caspase-1表达93.0%为 “++ ～ +++”,caspase-3表达 89.5%为 “+ ～ ++”;诱导8 h,caspase-1表达“++ ～ +++”降为53.2%,caspase-3 表达“+ ～ ++”降为48.4% 且阴性表达为46.8%,降低显著(P＜0.01)。添加谷氨酰胺（终浓度为2 mmol/L）组,5 mmol/L H₂O₂ 诱导8 h,caspase-3 100%为 “++ ～ +++” 高度阳性表达。与平行的RPMI 1640组（caspase-3 表达“++ ～ +++”为32.2%, 且阴性表达为46.8%）相比,变化明显。原头节在对照组和诱导组均可见Fas阳性表达细胞,RPMI 1640组5 mmol/L H₂O₂诱导4 h,“+ ～ ++”表达为53.0%,对照组为20.0%;RPMI 1640添加谷氨酰胺组5 mmol/L H₂O₂诱导8 h,“+ ～ ++”表达为88.7%,对照组为71.4%,诱导后均有所增加（P＜0.05）。 结论 H₂O₂可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡。     

不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态的影响

目的：通过探讨不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态的影响，了解它们对成纤维细胞体外生存和生长的情况。方法：采用体外细胞培养技术进行小鼠成纤维细胞L929细胞，并采用磺基罗丹明B（sulforhodamineB，SRB）酶标仪法（A490nm波长下）测量各孔的吸光值（A值）并转换为小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线；同时，分别采用HE（苏木精-伊红）染色法、、吖啶橙荧光染色和Hoechst33342荧光染色法进行小鼠成纤维细胞L929细胞系形态学观察。结果：小鼠成纤维细胞L929细胞系不同浓度的血清分别在3种不同的介质（RPMI1640培养基、0．9％生理盐水和5％葡萄糖生理盐水）中表现出不同的生长和生存情况及细胞形态学改变。其中，在不同血清浓度（0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％）的同一介质中，血清浓度为0％和100％浓度组的小鼠成纤维细胞L929细胞生长明显抑制及吸光度（A）值呈逐步减少的趋势，而除此之外的其它血清浓度组对小鼠成纤维细胞L929细胞的影响，基本表现为随着血清浓度的升高，吸光度（A）值呈逐步增加及促进细胞生长的趋势。而某些相同血清浓度在不同介质中对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及形态学的有利影响，则基本表现为RP—M11640培养基作为介质的细胞培养效果优于0．9％生理盐水，而0．9％生理盐水作为介质的细胞培养效果又优于5％葡萄糖生理盐水。结论：不同血清浓度及介质对体外培养小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及细胞学形态均有明显影响。提示在进行体外细胞培养时应充分考虑细胞培养介质及所添加血清的浓度。     

血清饥饿法用于细胞周期同步化的方法学研究

目的探讨血清饥饿法进行细胞周期同步化实验的影响因素。方法用无血清和低血清浓度培养基饥饿Anip973和AGZY83-a两种人肺腺癌细胞系，分别在培养48h、72h和5d时收集各组细胞，用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分数。结果Anip973细胞系在含O．2％FBS的RPMI1640培养基中培养5d得到理想结果，G0-G1期细胞百分比高达84．19％。AGZY83-a在含O．2％FBS的RPMI1640培养基中培养48h也获得较满意的结果，G0-G1期细胞百分比达61．30％。结论细胞类型、血清浓度和饥饿时间是血清饥饿法进行细胞周期同步化实验成功与否的影响因素。可应用血清饥饿法使不同细胞系同步于G0-G1期。     

In vitro development of Haplorchis taichui (Trematoda: Heterophyidae)

Newly excysted metacercariae of Haplorchis taichui were cultured in a candle jar set at 37 degrees C. Both monophasic culture media [0.85% NaCl, RPMI 1640, RPMI 1640+10% fetal calf serum (FCS)] and diphasic culture media [RPMI 1640 + egg yolk agar, RPMI 1640 + 5%, 10% or 15% blood in blood agar (BA), RMPI 1640 + 5%, 10% and 15% FCS with 5% blood in BA] were used in vitro. Parasites survived for only 1 day in 0.85% NaCl without any development. In RPMI 1640 with egg yolk agar and RMPI 1640 + 5%, 10% FCS, the parasite survived for 3-5 days. In contrast, worms survived for 12-14 days in RPMI 1640 with blood agar without any change in result in a different concentration of blood in BA. The ovary and testes were observed after 3 days incubation in this media. Nevertheless, only 1 parasite in RPMI 1640 with 15% blood in BA had vitellaria and eggs at day 6. RPMI 1640 with blood agar can be used as short-term maintenance for the in vitro culture of H. taichui. However, further studies are needed.     

EGF与miRNA-21联合构建雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP亚细胞模型

目的构建雄激素非依赖性的人前列腺癌细胞株LNCaP亚型。方法前期常规RPMI 1640培养基培养LNCaP细胞,然后给予无酚红的RPMI 1640培养基,其中加入10%活性碳/葡聚糖处理的胎牛血清,细胞传代后将10μg/L表皮生长因子（EGF）加入培养基,50 nmol/L miRNA-21类似物转染细胞,长期培养。镜下观察细胞形态变化,MTT检测细胞增殖活性,RT-PCR检测雄激素受体基因扩增情况。结果细胞培养约2.5个月后,LNCaP细胞成功转变为非雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP亚细胞,细胞增殖能力升高,雄激素受体表达上调。结论体内雄激素依赖性前列腺癌可向雄激素非依赖性前列腺癌转变,而且miRNA-21和EGF对该转变起促进作用。     

软脂酸对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞的作用及机制

目的:探讨不同浓度的软脂酸对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞的作用及机制.方法:体外培养人正常肝细胞株L-02,设立空白对照组、酒精诱导组及软脂酸干预组.软脂酸干预组设6个浓度梯度(2.5、5、10、20、30、40μmol/L),空白对照组用正常培基培养96h,酒精诱导组和软脂酸干预组在细胞培养24h后加入终浓度为60mL/L的无水乙醇,继续培养24h后,软脂酸干预组加入各浓度软脂酸.采用MTT法测细胞增殖,油红O染色观察细胞内脂滴形成情况,试剂盒检测细胞内三酰甘油的含量,Westernblot法测定细胞核内成熟的固醇调节元件结合蛋白-1c(nSREBP-1c)的含量.结果:60mL/L的无水乙醇培养L-02细胞72h成功建立了脂肪变性模型,软脂酸干预后,软脂酸浓度≤10μmol/L时,软脂酸明显地促进酒精诱导的脂肪变性肝细胞的增殖(P<0.05),并且明显地减轻细胞内脂滴的形成,减少细胞内三酰甘油的含量和细胞核内nSREBP-1c的含量,并呈现出剂量效应关系;而软脂酸浓度≥20μmol/L时,明显地抑制酒精诱导的脂肪变性肝细胞的增殖(P<0.05),并且加重细胞内脂滴的形成,增加细胞内三酰甘油和细胞核内nSR...     

Molecular epidemiology of malaria in Cameroon. XXIII. Experimental studies on serum substitutes and alternative culture media for in vitro drug sensitivity assays using clinical isolates of Plasmodium falciparum

Correlation studies on the in vitro drug response of field isolates of Plasmodium falciparum and molecular markers for drug resistance are becoming important as many malaria control programs abandon monotherapies and resort to combination therapies. The standardization and optimization of the in vitro drug sensitivity assay are one of the prerequisites for validating molecular markers in the field. The present study was designed to assess and compare the growth of freshly obtained isolates for at least the first erythrocytic cycle in various culture media and determine the in vitro response to chloroquine in alternative media. Parasite growth was consistently higher in Dulbecco's modified Eagle's medium (DME)-human serum, Iscove's modified Dulbecco's medium (IMDM)-human serum, RPMI 1640 medium-goat serum, and a serum-free medium containing 1:1 (v/v) mixture of IMDM and F-12 supplemented with an ammonium sulfate fraction of adult bovine serum than in RPMI 1640 medium-human serum mixture. The level of chloroquine response determined in human serum-supplemented DME, IMDM, and RPMI 1640 media did not differ significantly (P > 0.05) from the control (RPMI 1640-human serum). This study suggests that alternative media may be used to optimize parasite growth during the critical initial phase of transition from in vivo to in vitro conditions. The capacity of these media to support long-term cultivation of P. falciparum requires further investigation.     

HepG2.2.15细胞诱导MT2淋巴细胞凋亡及其意义

观测表达Ｆａｓ抗原（Ｆａｓ）的Ｔ淋巴细胞一感染乙型肝炎病毒的ＭＴｓ细胞对表达Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的实质细胞一ＨｅｐＧ２２．１５细胞的敏感性,了解乙型肝炎病毒感染对淋巴细胞和肝实质细胞交互作用的影响。方法体外培养ＭＴ２细胞,用乙型肝炎病毒诱导表达ＦａｓＬ。将表达ＦａｓＬ的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞与其共孵育后,以Ｔｕｎｅｌ法观测ＭＴ２细胞凋亡情况。结果ＭＴ２细胞感染乙型肝炎病毒后可测到Ｆａｓ表达信号。与表达ＦａｓＬ的ＨｅＰＧ２．２．１５细胞共孵育４８～７２小时以后,出现凋亡信号。结论乙型肝炎病毒诱导表达Ｆａｓ的ＭＴｓ细胞与表达ＦａｓＬ的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞交互作用后发生凋亡,表明通常在乙型肝炎发病中作为效应细胞的淋巴细胞,亦可成为凋亡靶细胞。