5-氮-2''''-脱氧胞苷诱导E-cadherin基因去甲基化及转录和表达

背景与目的：用去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对细胞株MDA—MB-435抑癌基因E—cadherin（上皮钙粘附素，简称E—cad）表达的影响。观察DNA甲基化的可逆性，为肿瘤治疗提供新的靶点。方法：在用5-Aza—CdR处理MDA．MB-435细胞株前、后分别应用甲基化特异性PCR（MSP）检测E—cad基因5’-CpG岛甲基化改变；用免疫组化（LsAB法）检测E—cad蛋白表达；用半定量RT—PCR观察E—cad mRNA的变化。结果：①MDA—MB-435细胞在用药前E—cad基因甲基化PCR扩增阳性（116bp），而非甲基化PCR扩增阴性。用0．5μmol／L的5-Aza—CdR处理后发现该细胞E—cad基因甲基化PCR扩增阴性，而非甲基化PCR扩增出阳性条带（97bp）。②免疫细胞化学法检测E—cad蛋白：用药前细胞未见E—cad蛋白表达。用5-Aza—CdR处理后在细胞膜可见E—cad染色阳性。③RT—PCR发现用5-Aza—CdR处理前细胞不能扩增出630bp的E—cadmRNA特异性条带；用0．5、1．0、2．0、5．0μmol／L的5-Aza处理细胞后都可检测到E—cadmRNA转录，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关。结论：去甲基化药物5-Aza—CdR能有效地逆转MDA—MB-435细胞株的E—cad基因异常甲基化，诱导mRNA转录和蛋白的表达。     

5-氮杂脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响

背景与目的：肝癌细胞中由于FHIT基因过度甲基化而导致其表达降低。本实验应用甲基化酶抑制剂5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza—dc）作用肝癌细胞株HepG2。观察用药后肝癌细胞中FHITmRNA和蛋白表达的变化,并观察5-Aza-dC对细胞增殖的影响。方法：以5-Aza—dC作用HepG2细胞．采用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation—specific polymerase chain reaction,MSP）检测HepG2细胞中FHIT甲基化变化;采用RT-PCR检测FHITmRNA的表达：采用细胞免疫组织化学染色和Western blot方法检测FHIT蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞增殖情况。结果：5-Aza—dC处理前,HepG2细胞FHIT基因呈甲基化状态,mRNA及蛋白表达缺失;经5-Aza—dC作用后,MSP显示HepG2细胞FHIT基因甲基化逆转：经1．0μmol／L、2．0μmol／L及4．0μmol／L的5-Aza—dC作用48h后,FHIT基因mRNA扩增出产物的吸光度值分别为0．80±0．32、1.41±0．54和1．51±0．61。Western blot检测产物积分灰度值分别为0．33±0．20、1．00±0．26和1．12±0．38：当药物浓度达到1．0μmol／L时出现了对HepG2细胞增殖的抑制作用。结论：5-Aza—dC能明显逆转HepG2细胞的FHIT基因异常甲基化,激活因高甲基化所致基因沉默的再转录,诱导该基因的表达;同时抑制细胞增殖。     

DNA甲基化抑制剂诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用

目的：探讨DNA甲基化抑制剂5—氮—2′—脱氧胞苷(5—Aza—CdR)体外诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用。方法：应用MTT比色法观察5—Aza—CdR对细胞的生长抑制作用，普通光学显微镜观察细胞形态和结构改变，流式细胞术检测髓系分化抗原的表达，DNA凝胶电泳分析细胞凋亡。结果：5—Aza—CdR明显抑制Kasumi-1细胞的生长，半数抑制浓度(IC50)约为0.65μmol/L。5—Aza—CdR可诱导Kasumi-1细胞髓系分化抗原CDllb和CDl3表达增加。5—Aza—CdR诱导Kasumi-1细胞凋亡。用5—Aza—CdR处理后的细胞出现单核细胞样分化和凋亡细胞形态改变。结论：5--氮—2′—脱氧胞苷抑制Kasumi-1细胞生长，并能诱导细胞部分分化与凋亡。     

二苯乙烯苷抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及对P13K／Akt信号通路的影响

目的：研究二苯乙烯苷（2,3,5,4’tetrahhydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG）对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用及对P13K／Akt信号通路的影响。方法：M。rr法检测细胞增殖活性,AnnexinV／PI双标法检测细胞凋亡,Western印迹法检测PTEN、p-PKB、cvclinD1、Bcl-2、caspase3和NF-κB蛋白的表达,RT—PCR检坝4P13K上游抑制物PTENmRNA的表达。结果：1、10和100μmol／L的THSG处理细胞24、48和72h后,明显抑制MCF-7细胞增殖,100μmol／L作用48h的增殖抑制率为41．8％（P〈0．05）,但低浓度（0．1、0．01μmol／L）THSG出现弱的促增殖作用。1、10和100μmol／LTHSG作用48h后,MCF-7细胞凋亡率分别为（6．25±0．65）％、（5．04±0．83）％和（7．98±0．67）％。1、10和100μmol／LTHSG上调PTEN的蛋白表达量,下调p-PKB和cyclinDI的蛋白表达,均呈剂量依赖性;而对NF-κB、Bcl-2和caspase-3表达却无明显影响。THSG能轻徽上调PTENmRNA水平。结论：THSG可抑制MCF-7细胞增殖,该作用可能是通过抑制P13K／Akt信号通路实现的。     

紫花牡荆素抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭能力的研究

目的观察紫花牡荆素对乳腺癌MCF-7细胞株增殖与侵袭能力的影响并探讨其分子机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法与侵袭实验检测紫花牡荆素对MCF-7细胞增殖与侵袭能力的影响,应用反转录PCR、Western blot法、Tunel法检测紫花牡荆素对基因表达、蛋白表达、细胞凋亡的影响。结果不同浓度紫花牡荆素均抑制MCF-7细胞增殖水平,同未加药对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,5、10、20μmol／L紫花牡荆素作用后,MCF-7细胞迁移数与未处理组相比分别降低20.3％、44．4％和50．3％（P〈0．05）。以10μmol／L紫花牡荆素处理后,凋亡细胞数增多,可以上调Bax与Caspase-3蛋白的表达水平,下调基质金属蛋白酶（MMP）-2与MMP-9的mRNA和蛋白表达水平。结论紫花牡荆素对于乳腺癌细胞恶性增殖与侵袭能力具有显著抑制作用。     

乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系

目的研究乳腺癌细胞耐药过程中p38MAPK活性与细胞凋亡的关系,探讨p38MAPK信号转导途径在其中的作用。方法 以p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADM,采用流式细胞技术分析对细胞凋亡的影响;MTT检测MCF-7／ADM细胞对阿霉素的半数药物抑制浓度（IC50）;Western blot检测SB203580处理MCF-7／ADM和MCF-7两株细胞后p38MAPK蛋白表达水平;RT—PCR检测细胞内MDR-1 mRNA水平。结果SB203580（10μmol／L）干预24h后MCF-7／ADM细胞的凋亡率为（26．73±4．90）％,与未干预组和对照组凋亡率相比差异有显著统计学意义（F=143．80,P〈0．001）;MCF-7／ADM细胞对阿霉素的敏感性明显提高（F=148927．10,P〈0．001）,相对逆转率达68．45％;与对照组和未干预组相比,干预组的MDR1 mRNA（F=9139．24,P〈0．001）及p38MAPK（F=685．42,P〈0．001）蛋白表达水平明显降低。结论p38MAPK信号转导途径与乳腺癌耐药密切相关,其可能机制为p38MAPK保护人乳腺癌耐药细胞（MCF-7／ADM）逃避凋亡,阻断该通路可增强乳腺癌耐药细胞发生凋亡。     

辛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及机制研究

目的 探讨辛伐他汀（SVA）体外对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及其可能的机制。 方法 选用人乳腺癌MCF-7细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度SVA（0、3.25、6.25、12.5、25、50和100 μmol／L）处理MCF-7细胞24、48、72 h后的增殖抑制作用,荧光染色法观察SVA（0、2和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的凋亡形态学变化,流式细胞仪测定SVA（0和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的细胞周期变化,免疫印迹法分析SVA（0、2、4和8 μmol／L）处理MCF-7细胞72 h后细胞内Bcl-2和Bax蛋白水平的表达。结果 不同浓度SVA处理不同时间后,MCF-7细胞的增殖明显受到抑制,且增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性;荧光显微镜观察发现SVA能够诱导MCF-7细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期显示,SVA阻滞MCF-7细胞于G0／G1期。免疫印迹 结果 显示,SVA处理组的Bcl-2蛋白表达水平低于对照组,Bax蛋白表达水平明显高于对照组,且随SVA浓度的增高,Bcl-2蛋白水平逐渐降低,Bax蛋白水平逐渐升高。结论 SVA对人乳腺癌MCF-7细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,其抗肿瘤机制可能与诱导细胞周期阻滞、下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白表达有关。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对MCF-7乳腺癌细胞生物学行为影响的研究

目的:研究5-氮杂2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响,探讨其临床治疗乳腺癌的可能性.方法:分别使用浓度为0.4、1.6、6.4、25.6和102.4 μmol/L的甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理MCF-7乳腺癌细胞株.通过MTT检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株存活率的影响.应用流式细胞仪检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响.RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1A mRNA在MCF-7乳腺癌细胞株表达的变化.结果:5-Aza-CdR 6.4 μmol/L作用1 d或0.4 μmol/L作用3 d就可以显著抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖,P<0.05.作用3 d后,在6.4 μmol/L时细胞周期中处于G0/G1期的细胞的显著增加(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期;在0.4 μmol/L时细胞的凋亡率为(11.80±0.30)%,与对照组比较有显著升高,P<0.01.以上作用呈时间-剂量依赖性关系.5-Aza-CdR处理后,无RASSF1A表达的MCF-7乳腺癌细胞株可检测出基因RASSF1A的重新表达.结论:5-Aza-CdR可消除RASSF1A启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制MCF-7乳腺癌细胞株的生长,使细胞周期阻滞于G0/G1期,并促进其凋亡.     

Tautomycetin诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡及其机制

目的:研究tautomycetin对乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR增殖及凋亡的影响及其机制.方法:MTr法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞增殖的影响,流式细胞术检测MCF-7/ADR细胞的凋亡,Western blotting法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞caspase相关蛋白、Bcl-2、Cyto-C、P53蛋白表达和Akt磷酸化的影响.结果:Tautomycetin可剂量(0.01～100μmol/L)依赖性地抑制MCF-7/ADR细胞的增殖(P＜0.05),IC50值为(1.26±0.12)μmol/L;与对照组相比,tautomycetin (1 μmol/L)可诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,早期凋亡比例由(0.67±0.18)％升高至(17.2±3.8)％,晚期凋亡比例由(0.96±0.23)％升高至(28.4±5.7)％(P＜0.05).Tautomycetin可活化MCF-7/ADR细胞中caspase-7和caspase-9,降低Bcl-2蛋白的表达,促进线粒体释放Cyto-C,降低p-Akt的水平,但对caspase-8和P53的表达没有影响.结论:Tautomycetin可阻断Akt活化,以P53非依赖的方式通过Cyto-C介导的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡.     

MLN2238对宫颈癌HeLa细胞生长抑制和放射增敏及其机制探讨

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MLN2238对宫颈癌HeLa细胞生长抑制和放射增敏作用及其机制。方法：采用CCK-8法检测MLN2238对HeLa细胞生长的抑制效应,克隆形成实验检测MLN2238辐射敏感性的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,线粒体荧光探针显像检测线粒体活性变化,蛋白质印迹法测定细胞中蛋白表达情况。结果：MLN2238对HeLa细胞有明显的抑制作用,0．05μmol／L抑制率为3．95％,0．1μmol／L为14．89％,0．5μmol／L为29．37％,1μmol／L为38．95％,5μmol／L为54．44％,10μmol／L为70．52％,30／μmol／L为81．76％,其效应呈剂量依赖性,F=1172．02,P〈0．001。0．1μmol／L的MLN2238对HeLa细胞有放射增敏作用,其放射增敏比（sensitizingen—hancementratio,SER）为1．40。MLN2238联合X射线对HeLa细胞存在交互作用,对照组细胞凋亡分数为（2．64±0．07）％,单药组为（2．76±0．38）％,单照4Gy组为（9．50±0．14）％,单照8Gy组为（21．04±0．04）％,联合4Gy组为（11．12土0．19）％,联合8Gy组为（26．18±0．35）％,细胞凋亡率逐渐增加,差异有统计学意义,F兰20．23,P=0．0022。0．1μmol／L的MLN2238可影响细胞线粒体活性,导致线粒体膜损伤加重,增加细胞凋亡。MLN2238与X射线联合作用能增加凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2的表达。结论：MLN2238对宫颈癌HeLa细胞有生长抑制和放射增敏作用,MLN2238对宫颈癌HeLa细胞可能通过线粒体途径介导的凋亡而增强其辐射敏感性。     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞株RASSF1A基因表达的影响

目的 观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的人卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO） RASSF1A mRNA及蛋白表达的影响.方法 卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO）经不同浓度（0.5、5、50 μmol/L）的5-Aza-CdR处理,未经处理的作为对照组,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫印记（Western Blot）检测RASSF1A在mRNA和蛋白质水平表达的变化.结果 对照组细胞株SKOV3、3AO均可见RASSF1A mRNA及蛋白的表达,但表达较弱,经药物处理后的细胞RASSF1A mRNA及蛋白的表达较前明显增强.经不同浓度5-Aza-cdR处理的SKOV3细胞株中,随浓度增加,RASSF1A mRNA及蛋白的表达依次递增.经不同浓度5-Aza-cdR处理的3AO细胞株中,经0.5μmol/L 5-Aza-cdR处理后,RASSF1A mRNA的表达明显低于经5和50 μmol/L 5-Aza-cdR处理后的表达（t=-8.866,P=0.01;t=-12.256,P=0.000）;但经5、50 μmol/L 5-Aza-cdR分别处理的3AO细胞株RASSF1A mRNA的表达差异无统计学意义（t=0.431,P=0.689）.在3AO细胞株中,0.5 μmol/L组与5μmol/L组RASSF1A蛋白表达差异无统计学意义（t=-1.586,P=0.188）.结论 经过5-Aza-CdR处理后,卵巢癌细胞株（SKOV3、3AO） RASSF1A mRNA及蛋白的表达均明显增强,细胞增殖能力受到明显抑制,从而起到抑制肿瘤细胞生长,甚至促进肿瘤细胞凋亡的作用.     

5-Aza-CdR诱导抑癌基因PTEN重新表达对乳腺癌细胞的影响及机制

目的观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡及体外侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法体外培养MCF-7细胞,采用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-6、2×10-6、5×10-6和1×10-5mol/L)分别作用24h、48h和72h,分别采用MTT法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell法检测细胞侵袭能力、Western-blot检测PTEN和VEGF-C蛋白表达的变化。结果经不同浓度的5-Aza-CdR作用后,MCF-7细胞的增殖受到不同程度的抑制并发生凋亡,细胞侵袭能力也发生不同程度的降低,且其作用随浓度增加和时间延长而增强(P<0.05)。在5-Aza-CdR作用后,MCF-7细胞PTEN的表达逐渐增强,而VEGF-C的表达逐渐减弱。结论 5-Aza-CdR可抑制乳腺癌细胞增殖、诱导其发生凋亡、降低其体外侵袭能力,其可能是通过去甲基化作用使抑癌基因PTEN重新表达并下调VEGF-C的表达而发挥作用的。     

槲皮素对宫颈癌HeLa细胞增殖影响机制探讨

目的：研究植物化学药物槲皮素对宫颈癌细胞的生长抑制作用和凋亡诱导效应,并探讨槲皮素对抗宫颈癌的可能作用机制。方法：采用浓度为10、20、40、80和160μmol/L槲皮素处理HeLa细胞,四唑盐比色法（MTT法）检测不同浓度在作用24、48和72h对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪分析槲皮素对HeLa细胞凋亡的影响;逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测细胞内的MK和Caspase-3基因mRNA和蛋白表达水平。结果：槲皮素能抑制HeLa细胞增殖,且在一定浓度范围内呈时间浓度依赖性,P〈0.05;使用浓度为10μmol/L的槲皮素处理HeLa细胞48h凋亡率为（2.18±0.04）%,20μmol/L为（3.75±0.11）%,40μmol/L为（6.04±0.07）%,80μmol/L为（9.65±0.04）%,160μmol/L为（21.41±1.81）%,与空白对组的（1.64±0.12）%比较差异有统计学意义,F=300.80,P〈0.01;随槲皮素浓度的增高HeLa细胞中MK mRNA和蛋白表达依次下降,其中80和160μmol/L组下降较明显,而Caspase-3的mRNA和蛋白表达随药物浓度增高表达增强,P〈0.01。MK与Caspase-3的蛋白表达呈负相关,r=-0.922,P〈0.01;MK与Caspase-3的mRNA表达呈负相关,r=-0.955,P〈0.01。结论：槲皮素可显著抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过下调MK、上调Caspase-3的表达水平而发挥抗宫颈癌作用。     

5-Aza-CdR对人喉鳞癌Hep2细胞凋亡及蛋白质表达的影响

目的：探讨5-Aza-CdR对人喉鳞癌Hep2细胞凋亡及蛋白质表达的影响。方法：Hep2细胞分别经10^-7mol/L 5-Aza-CdR和DMSO处理72h,应用Hoechst33258染色及流式细胞仪检测5-Aza-CdR对Hep2细胞凋亡的影响。抽提各组Hep2细胞总蛋白质,行双向电泳,采用PDQuest-7.0.1软件及MALDI-TOF质谱技术筛查5-Aza-CdR对Hep2细胞蛋白表达的影响,并通过Western blot对显著性差异蛋白质进行验证。结果：人喉鳞癌Hep2细胞在10-7mol/L 5-Aza-CdR处理72h后出现明显的细胞核致密浓染,Hep2细胞的凋亡率由对照组的（2.70±0.28）%增加到（13.96±0.41）%,具有统计学意义（P〈0.05）。双向电泳筛查了包括S100A4在内的5种表达显著差异的蛋白质,Western blot进一步验证了5-Aza-CdR能明显上调喉鳞癌Hep2细胞中S100A4的表达,进而证明了双向电泳结果的可信性。结论：5-Aza-CdR介导的Hep2细胞部分蛋白质表达改变,直接或间接地参与了5-Aza-CdR诱导的Hep2细胞凋亡的发生,为5-Aza-CdR在喉鳞癌探讨性治疗中的机制研究奠定基础。     

塞来昔布逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药及其机制探讨

目的观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对肿瘤多药耐药（MDR）的逆转作用,并探讨其初步作用机制。方法在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr中,应用MTT方法检测塞来昔布对多柔比星（阿霉素,DOX）的耐药逆转倍数;RT-PCR及Western blot方法检测基因及蛋白的变化;流式细胞术（FCM）检测细胞膜P-gp的表达、功能、细胞周期和凋亡。结果塞来昔布作用24小时后,MCF-7/Adr细胞对DOX的敏感性明显增加,浓度为10μmol/L及20μmol/L时,耐药逆转倍数分别为1.82和3.80,呈现剂量依赖性。COX-2、mdr1、c-Jun、YB-1、survivin等在基因和蛋白水平明显下调（P〈0.01）,NF-κB无明显差异（P〉0.05）;20μmol/L作用24小时,P-gp的功能受抑制;G0＋G1期细胞增多,S期细胞减少（P〈0.05）,凋亡率明显增高（P〈0.05）。结论选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布可有效逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药,在一定的浓度范围内呈现剂量依赖性,初步机制可能涉及干预转录因子的表达而下调mdr1,阻滞细胞周期及增加细胞凋亡。     

5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷对乳腺癌细胞RASSF1A甲基化的逆转作用

目的：通过甲基化抑制剂5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）作用于乳腺癌细胞株MCF-7,探索5-Aza-CdR逆转乳腺癌抑癌基因RASSF1A甲基化作用的机理。方法：体外培养乳腺癌细胞株MCF-7细胞,使用不同浓度5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷处理MCF-7细胞,对照组不加药。MSP及Western blot分别检测经5-Aza-CdR处理前、后RASSF1A DNA、蛋白的表达情况。结果：经去甲基化药5-Aza-CdR作用后,实验组恢复了RASSF1A的表达,明显高于对照组（ P〈0.05）。结论：去甲基化药5-Aza-CdR可以逆转乳腺癌细胞RASSF1A的甲基化作用,恢复了RASSF1A蛋白的表达,为临床治疗乳腺癌提供了理论基础。     

金雀异黄素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的 探讨金雀异黄素（genistein,GEN）诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的分子机制.方法 用0、5、10、20 μmol/L GEN处理MDA-MB-231 细胞24 h.采用CCK-8、Hoechst 33342染色和流式细胞仪测定不同浓度GEN对 MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.采用Western blotting检测不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas相关死亡域蛋白（FADD）、活性半胱天冬酶8（cleaved caspase-8）、Fas、FasL蛋白表达水平.采用实时RT-PCR分析不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas、FasL基因表达水平.多组均数比较采用方差齐性检验后进行单因素方差分析.结果 在GEN作用24 h后,0、5、10和20 μmol/L组对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率分别为（3.00±1.41）%、（14.02±1.57）%、（27.5±1.52）%、（48.90±1.44）%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加（F=528.119,P=0.000）.两两比较显示：各浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）.0、5、10和20 μmol/L组诱导MDA-MB-231细胞的早期凋亡率分别为（3.40±0.40）%、（9.34±1.34）%、（19.26±0.93）%、（27.41±1.12）%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加（F=379.573,P=0.000）.两两比较显示：各浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）.Western blotting结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FADD、cleaved caspase-8、FasL蛋白表达升高（F=368.621、456.744、419.129,P均=0.000）,Fas蛋白表达差异无统计学意义（F=0.800,P=0.528）;与10（μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL蛋白表达降低有统计学意义（F=92.235,P=0.001）.实时RT-PCR结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FasL mRNA表达升高（F=646.983,P=0.000）,Fas mRNA表达差异无统计学意义（F=1.556,P=0.274）;与10 μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL mRNA表达降低有统计学意义（F=52.562,P=0.020）.结论 GEN通过上调Fas/FasL途径中FasL基因表达诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.     

肺腺癌细胞DR4基因启动子甲基化与TRAIL敏感性的相关性研究

目的 探讨DR4基因启动子甲基化水平与肺腺癌细胞株对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）敏感性之间的相关性。方法 选取未经5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）处理和10 μmol/L 5-Aza-CdR处理3 d后的肺腺癌细胞A549、LTEP-α-2,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用RT-PCR法、免疫印迹法和甲基化特异性PCR（MSP）法分别检测肺腺癌细胞株（A549、LTEP-α-2）DR4基因mRNA、蛋白表达和启动子区甲基化状态。结果 肺腺癌细胞（A549、LTEP-α-2）对低浓度TRAIL高度耐受,提高TRAIL浓度（15.625、31.25、62.5、125、250、500 μg／ml）作用细胞24、48 h后,细胞生长受到不同程度抑制,且呈剂量和时间依赖性;经5-Aza-CdR处理后,TRAIL对肺腺癌细胞的增殖抑制作用均较处理前显著增强（P＜0.05）,倒置显微镜下细胞形态表现出变圆、皱缩甚至脱落等特征。应用5-Aza-CdR处理后,125 μg／ml TRAIL诱导肺腺癌细胞的凋亡率较处理前明显升高（P＜0.05）。A549、LTEP-α-2细胞存在DR4 mRNA及蛋白的低表达,其基因启动子处于甲基化状态;经5-Aza-CdR处理后,肺腺癌细胞中DR4 mRNA及蛋白的表达均显著升高（P＜0.05）,其基因启动子处于非甲基化状态。结论 5-Aza-CdR可以逆转DR4基因启动子甲基化状态,上调基因表达,增强TRAIL诱导肺腺癌细胞凋亡的能力,从而逆转TRAIL耐药。5-Aza-CdR联合TRAIL可能是治疗肺腺癌的一种新策略。     

缺氧对人乳腺癌MCF-7细胞miRNA-21表达的影响及与细胞增殖和凋亡的关系

[目的]观察缺氧环境下人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的情况,初步探讨缺氧对miRNA-21表达的影响及其与细胞增殖、凋亡的关系。[方法]CoCl2人工模拟缺氧环境,四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测缺氧环境下细胞增殖状况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率．实时荧光聚合酶链反应（RT—PCR）测定不同缺氧程度下HIF-1α 和miRNA-21表达水平的变化。[结果]与常氧对照组相比较,CoCl2处理组的细胞明显受到抑制,但100、200μmol／LCoCl2处理组的细胞在一定时间内仍增殖,抑制率随缺氧时间和药物浓度增加而上升。流式细胞仪检测结果显示,CoCl2处理组细胞凋亡率高于对照组（P〈0．05）。RT-PCR检测显不,200、400μmol／L的CoCl2处理组培养24h后细胞的HIF-1α／和miRNA-21表达高于对照组（P〈0．05）。[结论]人乳腺癌MCF-7细胞可在一定缺氧程度和时间内生长,缺氧诱导细胞凋亡率增加,缺氧能上调HIF-1α、miRNA-21的表达,使之进一步耐受缺氧,其机制可能是上调的miRNA-21通过多个信号通路调控靶基因进而影响癌细胞的增殖及凋亡。