血清蛋白组学技术筛选寻常性银屑病相关蛋白的初步研究

目的初步探讨应用血清蛋白组学技术建立寻常性银屑病相关蛋白的优化筛选方法,筛选寻常性银屑病的相关蛋白,期望从中发现有意义的寻常性银屑病血清标志物。方法取寻常性银屑病患者及正常对照血清,应用ProteoExtract Albumin/IgG Removal Kit纯化血清蛋白,去除白蛋白和IgG,采用固相pH梯度(IPG)、等电聚焦(IEF)为第一向、SDS-PAGE垂自电泳为第二向的双向凝胶电泳(2-DE)和质谱分析鉴定差异蛋白。结果获得重复性和分辨率较好的血清双向凝胶电泳图谱,鉴定得到3个仅在银屑病组血清中表达和9个与对照组血清表达有差异的蛋白质。结论在寻常性银屑病患者血清与健康人血清中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学这一高通量的筛查技术可望从中发现与寻常性银屑病相关的标志物。     

应用ClinProt技术筛查寻常性银屑病不同中医证型患者的相关蛋白表达特征

目的应用Clin Prot技术联合MALDI-TOF技术,检测正常人和不同中医证型寻常性银屑病患者血浆及血T淋巴细胞膜上的相关蛋白。方法选择血热证、血瘀证、血燥证的寻常性银屑病患者各10例,同时选取10例健康人作为对照组,采用ClinProt技术联合MALDI-TOF技术建立血浆和T淋巴细胞膜差异蛋白图谱进行对比。结果与对照组的T淋巴细胞膜蛋白相比,血热组有1个表达上调的差异蛋白峰(4 747D),血瘀组有1个表达上调(4 747D)、2个表达下调的差异蛋白峰(2 068D、7 764D),血燥组有1个表达上调的差异蛋白峰(4 747D)。而对照组和不同证型银屑病患者的血浆差异蛋白相比较,血热组有3个表达上调的差异蛋白峰(6 631D,9 288D,4 965D),血瘀组有5个表达上调的差异蛋白峰(2863D,4 418D,6 631D,4 965D,3 241D),血燥组有2个表达上调的差异蛋白峰(4 965D,9 288D)和1个表达下调的差异蛋白峰(3 957D)。结论不同证型寻常性银屑病患者与健康人相比,血T淋巴细胞膜上及血浆中存在差异蛋白峰,这些蛋白可能与各个证型寻常性银屑病的发病机制有关。     

窄谱中波紫外线对寻常性银屑病患者外周血MCP-4表达水平的影响

目的探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)对寻常性银屑病患者外周血中单核细胞趋化蛋白-4(MCP-4/CCL13)表达的影响。方法采用夹心酶联免疫吸附法检测24例寻常性银屑病患者NB-UVB治疗前后和24例健康人外周血血清MCP-4水平。结果 24例寻常性银屑病患者患者血清MCP-4水平为(255.35±79.31)pg/mL,正常人对照组血清MCP-4水平为32.43±10.41pg/mL,两组差异有显著性(t=13.145,P0.05)。经NB-UVB治疗12周后,银屑病患者MCP-4水平明显下降(88.19±23.97)pg/mL,与治疗前差异有显著性(t=9.229,P0.05)。结论 NB-UVB可以降低寻常性银屑病患者血清中MCP-4的表达水平,MCP-4可能参与了角质形成细胞的增殖,参与银屑病的发病过程。     

银屑病患者外周血调节性T细胞的检测

目的 检测不同类型银屑病患者外周血中调节性T细胞（Treg）的水平。方法 用流式细胞仪和单克隆荧光抗体检测20例寻常性银屑病、15例脓疱性银屑病和10例红皮病性银屑病患者外周血中CD4+CD25bright调节性T细胞百分率，对寻常性银屑病患者中的10例进行了CD4+CD25hi-intCD127low/-调节性T细胞百分率的检测。结果 红皮病性银屑病组CD4+CD25bright调节性T细胞比例高于其他组（P < 0.01）；寻常性银屑病患者组CD4+CD25hi-intCD127low/-调节性T细胞在CD4+ T细胞中比例为4.39% ± 0.84%，正常人对照组为3.83% ± 1.68%，两组进行Mann-Whitney U检验，差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 CD4+CD25bright调节性T细胞可能与红皮病性银屑病的发病有关。     

银屑病患者外周血干扰素γ和白介素18的表达

目的 探讨进行期银屑病患者外周血干扰素γ(IFN-γ)和白介素18(IL-18)的表达和相关性,及各型银屑病患者外周血IFN-γ的表达变化。方法 进行期寻常性银屑病20例,红皮病性银屑病19例,脓疱性银屑病10例,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中IFN-γ表达水平;对进行期寻常性银屑病患者,检测血浆中IL-18表达水平;检测葡萄球菌肠毒素(SEB)刺激下,进行期寻常性银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)上清液中IFN-γ和IL-18的表达水平。结果 进行期寻常性银屑病患者血浆IFN-γ水平为8.91±2.65,红皮病性银屑病为10.19±5.93,脓疱性银屑病为17.96±10.44,各型银屑病患者均高于正常人(5.70±2.82)。进行期寻常性银屑病患者血浆IL-18水平高于正常人。进行期寻常性银屑病患者PBMC在SEB刺激组IFN-γ和IL-18表达水平均高于空白对照组,且IFN-γ与IL-18表达水平呈显著正相关,r=0.55,P<0.05。结论 在银屑病的发病和进展中,检测IFN-γ的表达量,对早期判断银屑病病情进展、转归和治疗效果有指导意义。IL-18表达增高,推测IL-18可能也参与银屑病发病。     

银屑病并发代谢异常的临床分析

目的:分析银屑病及其4种类型并发代谢综合征(MS)和代谢异常因素的关系。方法:收集446例银屑病患者(银屑病组)和424例带状疱疹患者(对照组)的临床及实验室资料,比较两组并发MS及代谢相关因素的差异,同时比较4种类型银屑病患者间上述差异。结果:银屑病组并发MS与对照组比较结果为χ~2=12.781,P=0.000,寻常性银屑病(寻常性组)与脓疱性银屑病组(脓疱性组)并发MS的比例与对照组比较分别为χ~2=9.253,P=0.002;χ~2=13.973,P=0.000,脓疱性组中并发MS的比例与寻常性组比较为χ~2=4.426,P=0.035。银屑病组吸烟率、BP升高、三酰甘油(TG)升高、低密度脂蛋白(LDL-C)升高、高密度脂蛋白(HDL-C)降低及脂肪肝患病率与对照组比较结果分别为χ~2=17.887,P=0.000;χ~2=23.035,P=0.000;χ~2=649.269,P=0.000;χ~2=4.269,P=0.039;χ~2=67.160,P=0.000;χ~2=39.676,P=0.000;寻常性组LDL-C升高发生率与红皮病性银屑病(红皮病性组)比较为χ~2=6.323,P=0.012,与脓疱性组比较为χ~2=13.688,P=0.00,与关节病性银屑病(关节病性组)比较为χ~2=17.059,P=0.00;在空腹血糖(FBG)升高方面,脓疱性组发生率与寻常性组比较为χ~2=8.542,P=0.003;与红皮病性组比较为χ~2=3.962,P=0.047;脂肪肝患病率比较,寻常性组与红皮病性组和关节病性组比较结果分别为χ~2=8.173,P=0.004;χ~2=14.153,P=0.00,而脓疱性组与关节病性组比较结果为χ~2=4.898,P=0.027。结论:银屑病组并发MS及代谢异常明显高于对照组,脓疱性组高于其他3型。银屑病组吸烟及患脂肪肝的比例更高,BP、TG、LDLC3项指标升高及HDL-C降低概率高于对照组;寻常性组LDL-C升高概率明显高于其他3型,脓疱性组发生FBG升高概率高于寻常性组与红皮病性组;寻常性组脂肪肝患病率明显高于红皮病性组与关节病性组,而脓疱性组又明显高于关节病性组。     

利用MALDI-TOF-MS技术初步探讨不同中医证型的银屑病外周血T淋巴细胞膜蛋白

目的:研究不同中医证型寻常型银屑病患者外周血T淋巴细胞膜上的差异表达蛋白,筛选特异性蛋白质标记物。方法:收集寻常型银屑病患者30例(其中血热证10例,血瘀证10例,血燥证10例)和健康对照10例的外周抗凝血;分别用磁珠分选出T淋巴细胞;提取T淋巴细胞的细胞膜蛋白;应用双向电泳/基质辅助激光解析电离飞行时间质谱联用技术(MALDI-TOF-MS),检测细胞膜蛋白的蛋白峰值。结果:寻常型银屑病组与健康对照组间差异蛋白峰为4个;血热证患者与血瘀证患者之间差异蛋白峰为1个,血热证患者与血燥证患者之间无差异蛋白峰,血瘀证患者与血燥证患者之间差异蛋白峰为1个。结论:寻常型银屑病和健康对照以及不同中医证型间外周血T淋巴细胞膜蛋白表达谱可能存在差异,但相关蛋白质的鉴定、筛选尚需更大样本量的研究。     

红斑、丘疹及鳞屑性皮肤病

寻常性银屑病皮损表皮中TGF—β受体活化Smad蛋白表达的检测,寻常性银屑病患者血清MCP-1和MIP-3α的检测及意义,窄谱中波紫外线对寻常型银屑病皮损中CD4、CD8和P—STAT3的影响,银屑病发病机制与Toll样受体（综述）．     

大麻素2型受体在寻常性银屑病皮损组织中的表达

目的 探讨大麻素2型受体在寻常性银屑病皮损组织中的表达及其意义。 方法 实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组化技术检测20例寻常性银屑病患者皮损组织及皮损周围组织、10例非银屑病患者的正常皮肤组织中大麻素2型受体在mRNA和蛋白不同水平的表达情况。 结果 寻常性银屑病皮损组织、皮损周围组织及正常皮肤中均有大麻素2型受体mRNA表达,寻常性银屑病组表达明显高于皮损周围组及正常对照组（P < 0.05）;三组皮损组织均有大麻素2型受体蛋白表达,且寻常性银屑病组表达明显高于皮损周围组、正常对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 寻常性银屑病皮损组织中大麻素2型受体在基因及蛋白水平表达均升高,提示大麻素2型受体可能与寻常性银屑病的发生发展有关联。     

Trappin-2在银屑病患者血清及皮损中的检测及临床意义

目的：检测trappin-2蛋白在银屑病患者血清及皮损中的表达。方法：用双抗体夹心ELISA法,检测50例寻常性银屑病患者和16例脓疱性银屑病患者外周血,以及32例寻常性银屑病患者和10例局限性脓疱性银屑病患者皮损负压吸疱液中trappin-2蛋白表达水平。结果：寻常性银屑病患者外周血及皮损组织液中trappin-2蛋白表达水平显著高于对照组（P值均〈0．01）,其中进行期和稳定期寻常性银屑病患者外周血trappin-2蛋白的表达差异有统计学意义（P〈0．05）,且与患者相应的银屑病皮损面积和严重度指数（PASI）呈正相关。局限性和泛发性脓疱性银屑病患者外周血及皮损组织液中trappin-2蛋白的表达水平与对照组相比,差异亦有统计学意义（P〈0．05）,与寻常性银屑病患者比较差异无统计学意义,且与病情活动指数无线性相关。结论：trappin-2蛋白在寻常性银屑病和脓疱性银屑病发病机制中可能起重要作用。     

二维电泳和质谱技术筛选寻常型银屑病皮损差异表达蛋白

目的:明确寻常型银屑病(psoriasis vulgaris,PV)皮损组织与正常人皮肤中的差异表达蛋白。方法:收集PV皮损组织及正常人皮肤组织。提取蛋白,进行二维凝胶电泳,选择在PV皮损组织中明显差异表达的蛋白点,进行质谱和生物信息学分析。结果:PV患者角质层和真皮层二维凝胶电泳鉴别蛋白总数分别为(1961±21)和(1928±49)个,确定差异表达蛋白30个,其中14个被鉴定分型:包括角质1型细胞骨架(K1C10、K1C14、K1C15、K1C16)、角质2型细胞骨架(K2C1),肌动蛋白(ARP3,ACTA,ACTBM),热休克蛋白(PHB,HSPβ1,CH60),中心体蛋白(CP135),膜联蛋白(ANXA4、ANXA5)。结论:差异表达蛋白可能在PV的病理形成中起重要作用,是潜在的PV诊断标记物。     

Hemoglobin A2 and F in patients with psoriasis.

HbA2 and HbF were studied in 91 patients with different forms of psoriasis: 29 with psoriasis vulgaris placata (restricted forms); 31 with psoriasis generalisata and erythroderma psoriaticum; 21 with psoriatic arthritis; 10 with psoriasis pustulosa. Statistically significant increase of HbA2 was established in patients with psoriasis vulgaris placata (restricted forms) as well in patients with psoriatic arthritis. HbF is statistically significant increased in all forms of psoriasis. The authors suggest, that there is probably in psoriasis a disturbance in the synthesis of the globine chains, which is genetically dependent.     

银屑病患者罹患冠心病的风险评估

目的 评估银屑病患者10年内患冠心病的风险值,探讨银屑病病程、家族史及类型对冠心病风险的影响。 方法 银屑病组来自2008年12月至2010年12月四川大学华西医院皮肤科322例银屑病住院患者。对照组来自同期的297例急性皮肤病（急性荨麻疹１５１例、药疹３３例、带状疱疹１１３例）住院患者。运用Framingham风险评分模型估计银屑病组与对照组10年内患冠心病的风险。用Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis检验、?字２检验分析两组之间危险因素及风险值差异性。结果 10年内首次发生冠心病事件的风险在银屑病组与对照组分别为6%和4%（Z = 4.342,P = 0.000）,在寻常性银屑病组、脓疱性银屑病组、关节病性银屑病组和红皮病性银屑病组分别为6%、4%、7%、7%（H = 8.484,P < 0.05）,在银屑病家族史阳性组与阴性组均为6%。冠心病的风险值与银屑病病程无相关性（P > 0.05）。结论 银屑病患者10年内患冠心病的风险高于急性荨麻疹、药疹和带状疱疹患者,关节病性、红皮病性银屑病的风险值比脓疱性高。冠心病的风险值与银屑病病程无相关性,银屑病家族史对冠心病风险值无明显影响。     

胎盘型钙黏蛋白在寻常性银屑病患者血清和皮损中的表达及意义

目的探讨胎盘型钙黏蛋白（P-cadherin,P-cad）在寻常性银屑病发病中的作用和意义。方法选择寻常性银屑病患者40例,分别采用酶联免疫吸附法和免疫组化法检测患者血清和皮损中P-cad的表达,另40名正常人作为对照。结果寻常性银肩病患者血清中P-cad表达水平明显高于正常对照者（P〈0.01）,表达水平与病情严重程度呈正相关;寻常性银屑病患者皮损中P-cad在角质形成细胞（keratinocyte,KC）各层均有表达,而正常对照组仅在表皮基底层表达,表达水平差异有统计学意义,且与银屑病皮损严重程度指数（PASI）呈正相关。结论P-cad在寻常性银屑病呈高表达,且与疾病严重程度呈正相关。     

促炎细胞因子对寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞表达DARC的影响

目的研究促炎性细胞因子对寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞表达达菲抗原趋化因子受体(Duffy antigen/receptor for chem okines,DARC)的影响,探讨DARC在银屑病发病机制中的作用。方法分离、纯化寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞,用促炎性细胞因子IL-1β、IL-6或TNF-α刺激,应用FACS技术和RT-PCR方法检测寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞DARC蛋白和mRNA表达。结果寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞在受到促炎性细胞因子IL-1β、IL-6或TNF-α刺激后,细胞表面DARC蛋白的表达明显降低(P<0.01),细胞内DARC mRNA表达增加。其中以进行期寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞DARC表达的改变更为明显。结论促炎性细胞因子能调节银屑病患者外周血淋巴细胞表面DARC蛋白和细胞内DARC mRNA的表达。     

The inflammatory response in mild and in severe psoriasis

BACKGROUND: Psoriasis is a chronic and recurrent inflammatory skin disease. The inflammatory response represents a fundamental ability of the organism to protect itself from infectious agents and from injury. OBJECTIVES: To evaluate the inflammatory response in mild and in severe psoriasis, to evaluate the endogenous systems counterbalancing the deleterious effects of the inflammation products, and to establish values of prognostic significance. METHODS: The study was performed in a control group (n = 40) and in 60 patients with psoriasis vulgaris, half presenting with mild psoriasis, and the other half with severe psoriasis. We evaluated total and differential leucocyte count; elastase, lactoferrin and lipid peroxidation as markers of neutrophil activation; total plasma antioxidant capacity (TAS), transferrin, ceruloplasmin, alpha(1)-antitrypsin and alpha(2)-macroglobulin as markers of the endogenous antioxidant and antiprotease systems; and fibrinogen, erythrocyte sedimentation rate, C-reactive protein (CRP), haptoglobin, C3 and C4 complement proteins as markers of inflammation. RESULTS: Our data suggested that psoriasis is an inflammatory condition in which neutrophils seem to play a crucial role by contributing to the development of oxidative and proteolytic stress. The worsening of the disease seemed to be linked to the enhancement of the inflammatory response and of the imbalance between neutrophil activation products and their inhibitors. CONCLUSIONS: We propose values for elastase, CRP, elastase/alpha(2)-macroglobulin, elastase/alpha(1)-antitrypsin, thiobarbituric acid/TAS and elastase/neutrophil ratios with prognostic significance for the worsening of psoriasis.     

寻常性银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体和TNF-α受体mRNA表达的研究

目的 探讨寻常性银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA和TNF-α仅受体mRNA的表达及其在银屑病发病机制中的作用.方法 采集50例寻常性银屑病患者外周静脉血,分离单一核细胞后,以RT-PCR法检测其IFN-γ受体mRNA和TNF-α受体mRNA的表达,PASI评分法评估银屑病的严重程度.以24例正常人作对照.结果 50例银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA的表达均值为1.11±0.55,其中37例进行期患者为1.13±0.57,13例静止期患者为1.03±0.52,正常人对照组为0.72±0.17,银屑病患者显著高于正常人对照组(P=0.0034),进行期显著高于正常人对照组(P=0.008),而静止期与正常人对照组差异无统计学意义.正常人对照组和银屑病患者外周血单一核细胞TNF-α受体mRNA的表达水平差异无统计学意义.银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA表达水平与TNF-α受体mRNA表达水平及PASI值均无相关性.结论 IFN-γ受体mRNA在寻常性银屑病患者外周血单一核细胞中异常高表达,但与疾病的活动性无关.     

超保守区非编码RNA在银屑病外周血单个核细胞中差异表达的初步研究

目的:用高通量Arraystar T-UCR芯片研究超保守区非编码RNA(T-UCR)在银屑病外周血单个核细胞(PBMC)中的差异表达谱。方法:抽取7例寻常型银屑病患者及3例正常人的外周血,分离PBMC后提取总RNA,将总RNA纯化,转录合成荧光标记的cRNA,cRNA样本片段化后与芯片杂交,使用Agilent G2505C芯片扫描仪扫描芯片,配合数据处理软件读取、处理数据,筛选出1.5倍及以上差异表达基因。结果:共有109种已知T-UCR在PBMC中表达,银屑病组与健康对照组相比,有5个T-UCR呈共同差异表达,其中上调1个,下调4个;有2 043种可能是新的T-UCR在PBMC中表达,共182种呈共同差异表达,其中上调100个,下调82个;与UCR区域重叠的mRNAs和UCR邻近基因分别有232个和67个表达有差异,Gene Ontology分析发现在参与细胞生理过程的36个差异表达的与UCR区域重叠的mRNAs中,有5个参与T细胞免疫活性相关的生物过程,例如T细胞活化、免疫反应中T细胞的分化等。结论:T-UCR可能参与寻常型银屑病的发病。     

磷酸化c-Jun氨基末端激酶和P38丝裂原活化蛋白激酶在寻常性银屑病皮损中的表达

目的 探讨磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和P38丝裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）在寻常性银屑病皮损中的表达。 方法 收集30例确诊的寻常性银屑病患者皮损,同时收集30例健康人皮肤组织作为对照组。采用免疫组化及Western印迹法分别检测p-JNK和p-P38MAPK蛋白在寻常性银屑病皮损组织和正常人皮肤中的表达情况。 结果 免疫组化结果显示,寻常性银屑病皮损组织p-JNK和p-P38MAPK表达的平均吸光度（AOD）值分别为0.663 ± 0.016和0.436 ± 0.011,均明显高于对照组（0.333 ± 0.009和0.306 ± 0.010）,差异有统计学意义（t = 44.869、21.913,均P < 0.001）。Western印迹法同样显示,寻常性银屑病皮损p-JNK和p-P38MAPK蛋白相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义（t值分别为20.477和165.084,均P < 0.05）。结论 JNK和P38MAPK的活化可能参与了寻常性银屑病表皮细胞的过度增殖。