TPO、TSP-1和TGF-β_1在特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓表达的改变及其意义

目的探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿骨髓血小板生成素(TPO)、血小板反应素1(TSP1)和转化生长因子β1,(TGFβ1)水平变化的意义。方法收集22例ITP患儿及17例相对正常儿童骨髓;ELISA法检测骨髓上清液TPO、TSP1和TGFβ1的含量。结果ITP患儿骨髓TSP1和TGFβ1水平均明显高于对照组(P<0.05);TPO水平稍高于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。结论检测ITP患儿的TPO、TSP1和TGFβ1表达水平对研究ITP的发病机制有重要价值。     

血浆可溶性选择素的检测及其在儿童ITP发病中的意义

目的探讨血浆可溶性选择素在儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病中的意义。方法选取40例儿童ITP患者,其中急性病例25例,慢性15例,在接受激素或丙种球蛋白冲击治疗前采集清晨空腹全血。对照组为15例健康体检儿童,采集清晨空腹全血。所有血液标本均先检测即时血小板计数,然后分离血浆检测可溶性选择素。结果ITP组血浆可溶性P-选择素(sP-selectin,sP)浓度均明显低于对照组(P<0.05),而每个血小板所表达的sP浓度(sP/Ph)浓度高于对照组10倍左右,其中急性组又明显高于慢性组(P<0.05)。此外,ITP组血浆可溶性E-选择素(sE-selectin,sE)浓度明显高于对照组(P<0.05),血浆可溶性L-选择素(sL-selectin,sL)浓度稍高于对照组,但无统计学意义(P>0.05)。结论ITP患儿体内存在血管内皮细胞活化,活化的内皮细胞可能是ITP病人体内可溶性P-选择素的主要来源,可溶性选择素P、E可能参与了ITP病人致敏血小板。     

特发性血小板减少性紫癜患儿治疗前后外周血长寿命浆细胞的检测及其意义

目的探讨长寿命浆细胞在特发性血小板减少性紫癜(ITP)外周血治疗前后的变化。方法用流式细胞术检测21例急性特发性血小板减少性紫癜(aITP)患儿、20例慢性特发性血小板减少性紫癜(cITP)患儿治疗前后和41名正常对照外周血长寿命浆细胞表面分子的改变;采用SPSS10.0进行统计学分析。结果cITP患儿外周血长寿命浆细胞表面分子表达率治疗前高于正常对照组(P<0.05),aITP患儿长寿命浆细胞表达率治疗前与正常对照组无显著性差异(P>0.05),cITP患儿外周血长寿命浆细胞表面分子表达率高于aITP患者(P<0.05),aITP患儿长寿命浆细胞表达率治疗前后无显著性差异(P>0.05),aITP患儿长寿命浆细胞表达率治疗前后无显著性差异(P>0.05)。结论长寿命浆细胞的改变提示其可能参与cITP自身免疫的病理机制,并为慢性ITP患儿治疗提供理论指导。     

血小板生成素和转化生长因子-β_1在儿童血液病中的研究

目的探讨血液病儿童血清和骨髓上清液中TGF-β1、TPO的水平及其临床意义。方法采用ELISA法测定急性特发性血小板减少性紫癜、再生障碍性贫血、急性淋巴细胞白血病患儿血清及骨髓上清液中TGF-β1、TPO水平。结果ITP患儿血清TPO水平高于对照组,但差异无显著性(P>0.05),TGF-β1水平明显高于对照组(P<0.01),骨髓上清液中TPO和TGF-β1水平均高于对照组(P均<0.01);AA患儿血清和骨髓TPO水平显著增高,与健康对照组比较具有显著性差异(P<0.01),ALL患儿TPO水平虽低于AA组,但仍明显高于对照组(P<0.01);AA组血清TGF-β1水平与正常对照组比较无显著性差异,ALL患儿血清及骨髓上清液中TGF-β1水平较对照组显著降低(P<0.01),CR后血清中和骨髓中TGF-β1水平上升,CR前后TGF-β1水平比较具有显著性差异(P<0.01)。结论TGF-β1、TPO在儿童血液病的病理生理过程中发挥重要作用,动态检测TGF-β1水平可为ALL患儿病情评估、预后估计提供客观依据。     

血小板相关抗体与儿童特发性血小板减少性紫癜转归的相关性分析

目的探讨血小板相关抗体(PAIg)与儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)转归的相关性。方法选择2008年12月-2010年12月江西省儿童医院收治的急性ITP患儿200例,应用ELISA方法检测患儿初诊时及治疗前后PAIg的表达,并与临床疗效相比较。结果 ITP患儿初诊时PAIgG、PAIgA及PAIgM抗体表达水平高于正常对照组;PAIgG、PAIgM、PAIgA表达水平与血小板计数之间均呈负相关。难治组ITP患儿初诊时PAIgM抗体水平要明显高于激素治疗有效的急性ITP患儿,并且PAIgM异常增高或合并PAIgG增高的比例显著高于急性ITP患儿(P<0.05)。治疗后,PAIgG和PAIgM同时升高的ITP患儿,治愈和显效组两种抗体水平均有显著下降(P<0.05),难治组两种抗体水平下降不明显(P>0.05)。结论 ITP的发生与血小板抗体水平增高密切相关,初诊ITP患儿PAIgM单独或合并PAIgG异常增高常提示预后不良。     

川崎病患儿治疗前后血清抵抗素和内脂素的变化

目的 检测急性期川崎病（KD）患儿静脉注射丙种球蛋白（IVIG）治疗前后血清中抵抗素和内脂素含量的变化及意义。方法 选择2011年1月至2013年1月确诊的KD患儿50例为研究对象,同时选取30例健康儿童和30例急性感染性疾病患儿作为对照。酶联免疫吸附法检测KD患儿IVIG治疗前后及对照儿童血清中抵抗素和内脂素的水平。结果 KD患儿血清抵抗素和内脂素含量均明显高于健康对照组和急性感染性疾病患儿（均P<0.05）;经过48 h治疗后,IVIG治疗有效KD患儿血清抵抗素含量较治疗前明显降低（P<0.05）,内脂素含量在IVIG治疗有效KD患儿治疗前后差异无统计学意义（P >0.05）;IVIG治疗无效KD患儿（n=12）治疗前血清抵抗素水平明显高于IVIG治疗有效组（n=38,P<0.05）,而内脂素含量在两组患儿治疗前差异无统计学意义（P >0.05）;KD合并冠脉损害与非冠脉损害患儿的抵抗素和内脂素水平差异均无统计学意义（P >0.05）。结论 KD患儿血清中高表达的抵抗素和内脂素可能参与了KD的发生和发展;血清抵抗素含量可能成为临床观察IVIG治疗效果的新监测指标。     

PKC信号传导对ITP患儿外周血T细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响

目的探讨蛋白激酶C(PKC)信号传导对ITP患儿外周血T细胞凋亡及其相关蛋白Fas、FasL表达的影响。方法无菌采集ITP患儿及正常健康儿童的外周抗凝血,分离T细胞,并分为三组,第一组为空白对照组,第二组加入PKC的激活剂PMA,第三组加入PMA与抑制剂H-7;在37℃、5%CO2条件下培养24小时,用流式细胞仪检测T细胞的凋亡率及Fas、FasL蛋白的表达。结果加入PMA培养液的正常组,T细胞的凋亡率和Fas、FasL蛋白表达与空白对照比较,差别均无显著性差异(P>0.05);加入PMA培养液的ITP组,T细胞的凋亡率与空白对照比较,差别有统计学意义(P<0.05),与加入PMA培养的正常组比较,差别也有显著性(P<0.05),ITP患儿T细胞Fas的表达与其它各组比较,差别均有统计学意义(P<0.05),而FasL的表达仅与ITP组空白对照相比有统计学意义(P<0.05);同时加入PMA和H-7培养液的ITP组,T细胞的的凋亡率和Fas、FasL蛋白表达与只加入PMA培养液的ITP组比较,差异也有显著性(P<0.05),而与空白对照比较,差别均无显著性(P>0.05)。结论PKC信号传导对ITP患儿T细胞凋亡及其相关蛋白Fas、FasL的表达产生影响,并且可能与ITP的免疫病理机制有关。     

急性血小板减少性紫癜循环免疫复合物各组分测定

应用PEG沉淀加免疫火箭电泳法对22例急性ITP患儿CIC各组分测定,结果ITP组血清Ig和C_3与正常组比较有显著和非常显著差异(P<0.05和0.01)。CIC各组分测定均较正常组高,尤CIC-IgG和CIC-C_3增高显著(P<0.05)。证实ITP组抗血小板抗体主要成份为IgG。文中就其发病机理进行探讨。     

特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓巨细胞病毒抗原的检测及临床价值

目的探讨骨髓中人巨细胞病毒（HCMV）感染在小儿特发性血小板减少性紫癜（ITP）中的作用及机制。方法采用二步法免疫组化检测81例ITP患儿骨髓中HCMV早期抗原,并行外周血血小板计数及ELISA法检测血HCMV-IgM。结果ITP患儿骨髓HCMV阳性率（61.73%）明显高于血HCMV-IgM阳性率（20.99%）,P〈0.01;慢性ITP骨髓HCMV阳性率（92.31%）高于急性ITP（55.88%）,P〈0.05;慢性ITP血HCMV-IgM、IgG阳性率与急性ITP相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。骨髓HCMV阳性组的平均年龄、治疗前血小板数、治疗后血小板上升值与阴性组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）,骨髓巨核细胞数及产板型巨核细胞数与阴性组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;血HCMV-IgM阳性组的平均年龄、治疗前血小板数、治疗后血小板上升值与阴性组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）;血HCMV-IgG阳性组的上述三项指标与阴性组相比,差异亦无统计学意义（P〉0.05）。骨髓HCMV阳性细胞数量分级与治疗前血小板计数之间无相关关系（P〉0.05）。结论HCMV感染在ITP中广泛存在,骨髓HCMV抗原的检测是评价ITP患儿HCMV感染的敏感、特异的指标;骨髓HCMV感染的ITP患儿存在病情加重、疗效不佳及慢性化的趋势;在骨髓HCMV致ITP的机制中,可能主要是影响外周免疫系统从而破坏成熟的血小板,而不是对血细胞生成的抑制。     

sCD40L、CD4~+CD45RA~+T细胞及CD4~+CD45RO~+T细胞在儿童ITP中的作用

目的探讨协同刺激分子可溶性CD40配体(sCD40L)及CD4+T辅助细胞CD45RA和CD45RO亚群在儿童特发性血小板减少性紫癜中的变化。方法用ELISA法检测25例ITP患儿血浆sCD40L水平;用微量全血流式细胞术法检测ITP患儿外周血CD4+T辅助细胞CD45RA和CD45RO的表达率;并对sCD40L与血小板计数进行相关分析。结果ITP患儿血浆sCD40L浓度明显升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);CITP组血浆sCD40L浓度升高更为明显,与AITP组或对照组比较差异均有显著性(P<0.05)。ITP患儿CD4+CD45RA+T细胞表达率下降,CD4+CD45RO+T细胞表达率升高,差异均有显著性意义(P<0.05),而AITP和CITP之间差异无显著性(P>0.05)。血浆sCD40L与外周血小板计数无相关性(r=-0.047,P>0.05)。结论CD40L高表达导致的CD40L/CD40信号传导通路异常可能参与ITP发病;ITP患儿存在Th细胞亚群偏移,表现为Th1细胞减少,Th2细胞增多。     

骨髓TPO与TGF-β1、TGF-βRⅢ的改变及其相关性在儿童ITP发病中的意义

目的 　探讨骨髓内环境中的血小板生成素 (TPO)、转化生长因子 β1 (TGF -β1 )及巨核细胞中转化生长因子 β1 的Ⅲ型受体 (TGF -βRⅢ )在儿童特发性血小板减少性紫癜 (ITP)发病中的意义。方法 　收集 2 8例急性ITP(AITP)患儿、16例慢性ITP(CITP)患儿和 2 0例相对正常儿童的骨髓 ;用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞 ;采用双抗体夹心ABC -ELISA法检测TPO、TGF -β1 水平 ;采用原位杂交法检测TGF -βRⅢ的表达情况。结果 　①AITP组与CITP组骨髓TPO的水平均高于对照组 ,且CITP组明显高于AITP组 (P <0 .0 5 ) ,但三组之间无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;②AITP组与CITP组骨髓TGF -β1 的水平及巨核细胞TGF -βRⅢ的表达均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且CITP组明显高于AITP组 (P <0 .0 5 ) ,三组之间有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;③除CITP组骨髓TPO与TGF -β1 的水平呈正相关关系外 (r =0 .65 3 ,P <0 0 5 ) ,其余两组均无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 　检测ITP患儿骨髓TPO、TGF -β1的水平及巨核细胞TGF -βRⅢ的表达情况对于研究ITP的发病机制以及早期分型和判断预后有重要参考价值。     

血小板表面TLR2和TLR4在儿童特发性血小板减少性紫癜中的变化及意义

目的：探讨血小板表面Toll样受体TLR2和TLR4、淋巴细胞表面CD86和血清中IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10表达的变化及相关性在儿童特发性血小板减少性紫癜（ITP）发病中的意义。方法：流式细胞学技术检测24例急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)患儿、21例慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）患儿和20例对照组儿童血小板表面TLR2和TLR4,CD86的表达水平;ABC-ELISA法检测血清中IL-2,IL-4,IL-10和IFN-γ的浓度。结果：①AITP组、CITP组患儿CD41+TLR2+和CD61+TLR4+表达显著低于对照组(P<0.01);且AITP组显著低于CITP组（P<0.01);②AITP组和CITP组CD86+表达较对照组显著增高（P<0.01）,AITP组和CITP组间差异无显著性;③AITP组和CITP组血清IL-2,IL-4,IL-10及IFN-γ浓度均较对照组显著增高（P＜0.05）,AITP组和CITP组间差异无显著性。④相关性分析：CD41+TLR2+表达与CD61+TLR4+表达呈正相关,二者均与CD86+表达及血清IL-2,IL-4,IL-10浓度呈负相关,与血清IFN-γ浓度无相关性。结论：联合检测血小板表面TLR2和TLR4、淋巴细胞表面CD86的表达和血清中IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10含量的变化及相关性对于研究儿童ITP的发病机制以及早期分型具有重要参考价值。［中国当代儿科杂志,2009,11（10）：797-801］     

儿童特发性血小板减少性紫癜小巨核细胞的研究

目的 探讨巨核细胞生长发育、小巨核细胞的出现在儿童特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenia purpura,ITP)中的意义。方法 对46例儿童ITP进行常规骨髓形态学、骨髓涂片CD41免疫酶标染色检测,并采用ELISA方法检测血小板相关抗体的含量。并分为急性ITP(acute ITP,AITP)组和慢性ITP(chronic：ITP,CITP)组进行统计学分析。结果 46例中36例为AITP,1O例为CITP;45例骨髓巨核细胞计数增高或正常,1例降低者为CITP。小巨核细胞检出率为98％,(45／46),I型淋巴样小巨核细胞检出率为35％(16／46)。CITPI型淋巴样小巨核细胞的检出率及计数高于AITP,其他三型小巨核细胞计数低于AITP,产板巨核细胞比例以及各型小巨核细胞数量与血小板相关抗体的含量无相关性。结论 儿童ITP骨髓巨核细胞系存在不同程度病态造血,其原因可能并非完全由于免疫因素,部分病例可能以骨髓巨核细胞自身异常为主。I型淋巴样小巨核细朐的出现以及数量的高低可存一定程度上提示ITP病程的长短和预后。     

特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓巨核细胞表面CXCR4受体及其配体的研究

目的 探讨急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)患儿骨髓巨核细胞表面CXCR4受体表达改变及其配体——基质细胞来源性因子1α(SDF-1α)水平变化的意义。方法 收集28例AITP患儿及12例正常对照儿童的骨髓;用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞;采用ABC免疫细胞化学染色法检测巨核细胞受体CXCR4的表达水平;ELISA法检测骨髓上清液SDF-1α的含量;用统计学分析软件包SPSS10．0对实验数据进行统计学分析。结果 28例初治AITP患儿骨髓CXCR4与SDF-1α水平均明显低于正常对照组;28例中10例大剂量丙种球蛋白(简称丙球)敏感组患儿治疗后CXCR4与SDF-1α水平均明显高于治疗前;另外28例中6例对丙球不敏感的患儿治疗前巨核细胞表面CXCR4的表达明显低于丙球敏感组治疗前患儿。结论 初治AITP患儿骨髓巨核细胞成熟障碍与血小板生成障碍可能与骨髓CXCR4／SDF-1α体系水平下降有关;而丙球治疗AITP的作用机理可能与增强骨髓CXCR4／SDF-1α体系表达有关;巨核细胞表面CXCR4表达水平可能在预测丙球的治疗效果方面有意义。     

Toll样受体在儿童ITP的表达及临床意义

目的探讨外周血血小板表面天然免疫分子TLR2、TLR4表达的变化及相关性在儿童特发性减少性紫癜(ITP)发病中的意义。方法采用流式细胞学技术检测24例急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)患儿、20例慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患儿和20例对照儿童外周血血小板表面TLR2、TLR4的水平。采用SPSS13.0进行统计学分析,P<0.01为差异有统计学意义。结果AITP组、CITP组患儿CD41+TLR2+、CD61+TLR4+阳性率显著低于对照组(P<0.01);并且AITP组显著低于CITP组(P<0.01);两者的表达呈正相关(rs=0.65,P<0.01)。结论联合检测外周血血小板表面TLR2和TLR4表达的变化有助于进一步研究儿童ITP的发病机制,有望成为ITP患儿早期分型的指标之一。     

转录因子GATA-1及核因子-E2在特发性血小板减少性紫癜患儿骨髓巨核细胞上的表达

目的探讨转录因子GATA-1和NF-E2在急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)患儿骨髓巨核细胞表达水平的改变及其意义。方法分别收集25例AITP和18例相对正常儿童的骨髓;用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞;采用 ABC免疫细胞化学染色法检测巨核细胞GATA-1和NF-E7的表达水平。结果初治AITP患儿25例骨髓GATA-1和NF-E2水平均明显高于对照组(P<0.01);其中9例丙种球蛋白(丙球)治疗有效组治疗后GATA-1和NF-E2水平均明显高于治疗前(P< 0．01)。结论转录因子GATA-1和NF-E2在AITP患儿骨髓巨核细胞的表达增强。GATA-1和NF-E2均参与巨核细胞生成的调控及AITP的发病过程。     

sCD40L、CD4＋CD45RA＋T细胞及CD4＋CD45RO＋T细胞在儿童ITP中的作用

目的探讨协同刺激分子可溶性CD40配体（sCD40L）及CD4＋T辅助细胞CD45RA和CD45RO亚群在儿童特发性血小板减少性紫癜中的变化。方法用ELISA法检测25例ITP患儿血浆sCD40L水平;用微量全血流式细胞术法检测ITP患儿外周血CD4＋T辅助细胞CD45RA和CD45RO的表达率;并对sCD40L与血小板计数进行相关分析。结果ITP患儿血浆sCD40L浓度明显升高,与对照组比较差异有显著性（P〈0.05）;CITP组血浆sCD40L浓度升高更为明显,与AITP组或对照组比较差异均有显著性（P〈0.05）。ITP患儿CD4＋CD45RA＋T细胞表达率下降,CD4＋CD45RO＋T细胞表达率升高,差异均有显著性意义（P〈0.05）,而AITP和CITP之间差异无显著性（P〉0.05）。血浆sCD40L与外周血小板计数无相关性（r=-0.047,P〉0.05）。结论CD40L高表达导致的CD40L/CD40信号传导通路异常可能参与ITP发病;ITP患儿存在Th细胞亚群偏移,表现为Th1细胞减少,Th2细胞增多。