H2O2诱导肝细胞凋亡时p53、bcl—2 mRNA的表达及其意义

目的 探讨H2O2诱导人类正常肝细胞系（L02细胞）凋亡时p53、bcl-2 mRNA表达的意义及丹参有效成分Rxa对其表达的影响。方法 以正常L02细胞为对照（L组）,以10μmol/L H2O2诱导L02细胞凋亡为细胞模型（LH组）,观察Rxa处理（LaH组,Rxa 2mmol/L）对p53、bcl-2 mRNA表达（原位杂交结合图像分析处理）的影响。结果 LH组2－6h p53 mRNA表达随凋亡细胞指数增高而增强,6－8h表达下降;bcl-2 mRNA表达弱。相比较LaH组各时限检测点p53 mRNA表达均低于LH组,bcl-2 mRNA表达较强（P＜0．01）。结论 Rxa可通过p53的细胞周期调控、DNA损伤修复作用和bcl-2的抗凋亡作用减轻L02细胞过氧化损伤。     

肝癌bcl-2基因异常及与p53蛋白表达的关系

为探讨bcl-2和p53基因与肝细胞癌的关系，采用半套式原位聚台酶链反应和免疫组化技术原位检测40例肝细胞癌中bcl-2／JH融合基因、bcl-2蛋白及突变型p53蛋白的表达。结果显示40例肝细胞癌中6例bcl-2蛋白阳性，发生bcl-2基因重排10例，25例p53蛋白阳性，bcl-2蛋白表达与bcl-2／JH融合基因间无相互相对应关系。p53蛋白与bcl-2蛋白表达及bcl-2基因重排间无明显关系。结果说明，bcl-2和p53基因均与肝细胞癌的发生有一定关系。bcl-2／JH融合基因不是引起bcl-2蛋白表达的唯一原因。bcl-2和p53基因在肝细胞癌变过程中无协同作用。     

Survivin基因在胰腺癌组织中的表达及与bcl-2和p53蛋白表达的关系

目的探讨Survivin基因在胰腺癌中的表达及与bcl 2、p5 3蛋白表达的相互关系。方法用RT PCR法检测 4 9例胰腺癌、5例慢性胰腺炎和 12例正常胰腺组织中SurvivinmRNA的表达 ,免疫组织化学法检测胰腺癌中bcl 2、p5 3蛋白表达。结果SurvivinmRNA在胰腺癌中表达率为76 % ,在慢性胰腺炎及正常胰腺组织中不表达 (P <0 0 5 )。Survivin基因表达与胰腺癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移无相关性 (P >0 0 5 )。Survivin基因表达与bcl 2蛋白表达不相关 ,与p5 3蛋白表达显著相关。结论Survivin基因在胰腺癌中过度表达 ,提示该基因对胰腺癌发生和发展起重要作用 ;抑癌基因p5 3的失活与Survivin基因的表达可能在胰腺癌的发生中起协同作用。     

bcl-2过表达对阿霉素诱导的膀胱癌细胞凋亡和活性氧产生的影响

目的探讨凋亡相关基因bcl-2过表达对阿霉素(ADR)诱导的膀胱癌细胞凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将bcl-2基因转入膀胱癌BIU87细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2基因的表达。比较BIU87、BIU87/neo和BIU87/bcl-2细胞对ADR的敏感性。用ADR分别作用于上述细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)产生情况。结果建立分别稳定表达bcl-2基因、新霉素抗性基因(neo)的膀胱癌亚克隆细胞株BIU87/bcl-2、BIU87/neo。RT-PCR BIU87/bcl-2细胞的bcl-2 mRNA水平显著高于BIU87、BIU87/neo(P＜0．01)。噻唑蓝(MTT)检测显示BIU87/bcl-2细胞对ADR的化疗敏感性明显降低(P＜0．01)。ADR作用24 h后,BIU87、BIU87/neo细胞凋亡率分别为(23．75±3．72)%、(21．94±1．27)%,而BIU87/bcl-2细胞为(3．38±0．95)%(P＜0．01)；ROS分别为(90．45±1．96)%、(88．41±3．88)%和(77．00±3．86)%,BIU87/bcl-2细胞较前两者明显降低(P＜0．01)。结论bcl-2基因能够抑制ADR诱导的膀胱癌BIU87细胞凋亡,降低细胞内ROS水平是其发挥抗凋亡作用的重要机制。     

bcl-2/bax mRNA在三氧化二砷体外诱导人胆管癌细胞株凋亡中的表达

目的 观察bcl-2、bax mRNA在三氧化二砷(As2O3)诱导人类胆管癌株QBC939、RBE细胞凋亡中的表达.方法 Rhodamine123染色检测线粒体膜通透性变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax mRNA的表达.结果 As2O3干预,实验组Rhodamine123荧光染色强度较对照组明显减弱;凝胶成像检测bcl-2/β-actin mRNA A比值,QBC939、RBE细胞对照组分别为0.41±0.03、0.84±0.03;24 h实验组为0.01±0.01、0.43±0.02.bax/GAPDHmRNAA比值QBC939、RBE细胞对照组分别为0.21±0.01、0.42±0.04;24 h实验组为1.44±0.16、1.15±0.21,对照组与实验组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 As2O3可能增加胆管癌细胞株线粒体膜的通透性,下调bcl-2mRNA表达,上调bax mRNA的表达,可能启动了线粒体凋亡信号传导途径.     

大肠癌bcl-2和p53基因表达对预后评估的意义

我们采用免疫组化法对大肠癌组织中bcl 2和p5 3的异常表达进行研究 ,探讨其与预后意义。1.资料与方法 :结直肠癌根治切除标本 93例 ,按全国大肠癌病理研究规范分类及Dukes分期[1] 。所有病例均随访5年以上或直至死亡。标本取材后经10 %甲醛固定 ,石蜡包埋 ,4 μm连续切片 ,分别作HE染色、bcl 2和p5 3的免疫组化染色。方法采用链霉素 生物素(SP)免疫组化法 ,一抗及SP试剂盒为美国ZYMED公司产品。p5 3和bcl 2蛋白阳性反应为黄到棕黄色细颗粒 ,p5 3定位于细胞核内 (图 1)。p5 3阳性细胞数超过观察细胞数的 5 %为阳性 ,≤ 5 %为阴性。bcl 2…     

p53、bcl-2和nm23基因在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的　研究胃癌组织中bcl 2、p5 3和nm2 3基因的表达及其与临床病理的关系 ,探讨bcl 2、p5 3和nm2 3基因与胃癌生物学行为的相关性。方法　采用免疫组化方法对 80例胃癌组织、3 7例不典型增生癌旁组织及 2 0例正常胃粘膜组织中的bcl 2、p5 3和nm 2 3基因的表达情况进行检测。 结果　bcl 2蛋白在胃癌癌旁轻、中、重度不典型增生组织中的表达阳性率分别为 7.1%、18.1%和 2 5 .0 % ,其在各组间表达的差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,bcl 2蛋白在高分化胃癌组织中的表达阳性率为 78.2 % ,明显高于在低分化胃癌组织中的表达 (4 8.5 % ,P<0 .0 5 )。p5 3在高分化胃癌组织中的表达阳性率为 72 .5 % ,明显低于低分化胃癌组织的 86.2 % (P<0 .0 5 )。nm 2 3在高分化胃癌组织中的表达阳性率为84.3 % ,明显高于低分化胃癌组织的 17.2 % (P<0 .0 5 )。伴有淋巴结转移的胃癌组织中nm 2 3的表达阳性率为 5 4.5 % ,低于无淋巴结转移者的表达阳性率 (85 .7% ,P<0 .0 5 )。p5 3与bcl 2在胃癌组织中的表达呈明显负相关。结论　bcl 2、p5 3和nm 2 3的表达与胃癌细胞的分化程度密切相关 ,对患者预后有重要参考价值。     

化疗诱导人肝癌细胞凋亡中p53和bcl-2基因的调控

目的 建立化疗药物丝裂霉素诱导肝癌细胞凋亡的模型,初步探讨在该凋亡过程 中重要凋亡相关基因ｐ５３和ｂｃｌ－２的调控作用。方法 用丝裂霉素诱导人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２凋亡,我显微镜和透射电镜观察肝癌细胞的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞ＤＮＡ片段的梯状条带,用流式细胞仪免疫荧光法检测凋亡不同时期Ｐ５３和Ｂｃｌ－２蛋白的表达量。结果 ８ｍｇ／ｍｌ丝裂霉素作用１２,２４,４８ｈ后,Ｐ５３蛋白表达量明显增高,尤以１２ｈ明显,而后逐渐下降。Ｂｃｌ－２蛋白在整个凋亡过程中无明显变化。结论 在化疗药物丝裂霉素诱导肝癌细胞凋亡过程中,ｐ５３基因参与了调控,并为凋亡信号传导途径中的早期事件。丝裂霉素诱导的肝癌细胞凋亡途径为ｐ５３依赖方式,而在该凋亡过程中,ｂｃｌ－２基因的调控并不重要。     

bcl-2蛋白在肝细胞肝癌发生过程中的表达及其与肝细胞凋亡变化的关系

为探讨肝细胞肝癌发生过程中ｂｃｌ２蛋白的变化规律及与细胞凋亡变化的关系,运用ＴＵＮＥＬ法和免疫组化方法检测石蜡保存的肝细胞肝癌组织（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＨＣＣ）、肝硬变组织（ｌｉｖｅｒｃｉｒｈｏｓｉｓ,ＬＣ）和正常肝组织（ｎｏｒｍａｌｌｉｖｅｒ,ＮＬ）中细胞凋亡发生率和ｂｃｌ２的表达。结果：从ＮＬ、ＬＣ到ＨＣＣ组织,细胞凋亡活性出现增强;ｂｃｌ２蛋白的表达逐渐下降,ＬＣ和ＨＣＣ组比较,Ｐ＜０．０５。结论：ｂｃｌ２的表达可能与肝细胞凋亡的抑制有关;在肝癌发生过程中,ｂｃｌ２表达下降可能是引起肝癌细胞凋亡增加的原因之一。     

p53、bcl-2、c-erbB-2在胃癌及癌前病变中表达的意义

目的：研究p53、bcl-2、c-erbB-2基因在胃癌及癌前病变中的表达，探讨其与胃癌发生的关系。方法：采用免疫组化SABC法，检测p53、bcl-2、c-erbB-2基因蛋白在98例胃癌、39例肠上皮化生、40例不典型增生和20例正常胃粘膜中的表达。结果：①p53在胃癌中的阳性表达率为55．1％，早期胃癌和进展期胃癌分别为50．0％，55．4％；在肠上皮化生中的表达率为12．8％，与早期胃癌比较有统计学差异（P〈0．05），随不典型增生程度的加重p53的表达率逐渐升高，依次为5％，20％，60％，其中轻中度与重度不典型增生差异有统计学意义（P〈0．05），而在正常胃粘膜中未见p53表达②bcl-2在正常胃粘瞑中有弱阳性表达（10．0％），在不典型增生中为50．0％，在胃癌中为44．9％，不典型增生与胃癌中的表达均显著高于正常胃粘膜（P〈0．05）。③c-erbB-2在胃癌中的阳性表达率为55．1％，其中在早期胃癌中的表达率较低（16．7％），在重度不典型增生和进展期胃癌中的表达率较高，分别为60．0％和57．6％，二者与早期胃癌比较差异有统计学意义（P〈0．05）。④c-erbB-2表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关（P〈0．05），与胃癌分化程度无关（P〉0．05）；bcl-2表达与胃癌的分化程度有关（P〈0．05），低分化者bcl-2表达率高，与淋巴结转移，浸润深度无关（P〉0．05）；p53表达与上述临床病理因素均无关（P〉0．05）。结论：p53，bcl-2，c-erbB-2参与了胃粘膜的癌变过程。     

小鼠乳腺癌中p53与bcl-2/bax基因表达的相关性研究

目的探讨p53基因和bcl-2/bax基因在乳腺癌发病机制中的作用以及它们之间的相互关系。方法以小鼠乳腺癌BCML-TA299可移植模型为研究对象,用免疫组织化学染色法观测α-干扰素(INF-α)干扰后p53基因与bcl-2/bax表达的关系。结果实验性乳腺癌BCML-TA299治疗组荷瘤鼠生存期较对照组延长,且随着时间的推延治疗组肿瘤的体积明显低于对照组的肿瘤体积;治疗组与对照组比较,肺转移率低。对照组p53蛋白阳性表达率为92.01±0.48,而治疗组中p53呈阴性表达。对照组瘤组织bcl-2蛋白表达为50.21±0.52,bax蛋白表达为12.08±0.13;治疗组瘤组织bcl-2蛋白表达为12.01±0.2,bax蛋白表达为48.19±0.57。对照组p53蛋白表达与bcl- 2呈正相关,而与bax呈负相关(P<0.05);治疗组中p53呈阴性表达,bcl-2和bax表达与对照组结果相反。结论bcl-2和bax的表达受p53调节。p53、bcl-2/bax在乳腺癌发病机制中起着较重要的作用。     

Comparison of p53 and bcl-2 expression in initial, synchronous, and metachronous colorectal adenomas

To investigate the significance of p53 and bcl-2 expression in metachronous colorectal adenomas arising in the remaining colon after carcinoma resection, we analyzed p53 and bcl-2 expression immunohistochemically in initial adenomas (type I), synchronous adenomas with concurrent carcinoma (type II), and metachronous adenomas arising after resection of initial adenomas (type III) or carcinoma (type IV). The incidence of p53 immunoreactivity in type IV adenomas with mild dysplasia was significantly higher than that in type I, type II, or type III adenomas with mild dysplasia. bcl-2 immunoreactivity was more frequently detected in type IV adenomas with mild dysplasia than in type I or type III adenomas with mild dysplasia. Coexpression of p53 and bcl-2 was detected in 16% of the type IV adenomas, this being a significantly higher frequency than that seen in the type I, type II, or type III adenomas. These results suggest that the evaluation of p53 and bcl-2 in metachronous adenomas in the remaining colon after resection of carcinoma may be a useful biologic marker for assessing the risk of cancer development. This work was supported in part by a Grant-in-Aid from the Ministry of Education, Science, and Culture of Japan     

肾细胞癌中bcl-2、p53、增殖细胞核抗原表达与细胞增殖和凋亡

目的 探讨肾细胞癌(RCC)中bcl—2、p53、增殖细胞核抗原(PCNA)表达与细胞增殖、凋亡及病理参数之间的关系。方法 应用链霉亲和素辣根过氧化物酶(SABC)法分析34例RCC标本中bcl—2、p53和PCNA蛋白的表达，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷苦(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。结果 34例RCC标本中，15(44．1％)例bcl-2阳性表达，表达阳性率与增殖指数(PI)、凋亡指数(AI）及RCC病理学参数无关；仅有3例p53表达阳性；PI为6．0％--24．0％(平均为12．3％)，AI为2．0％--8．0％(平均为5．4％)；PI与肿瘤分级、分期密切关系，AI与肿瘤分级有明显关系。结论 明显增高的PI和AI与肿瘤恶性表型有关，提示在RCC中肿瘤细胞过度增殖伴有频繁的凋亡发生。     

Immunohistochemical expression of p53 and bcl-2 proteins is not associated with sarcomatoid change in renal cell carcinoma

An immunhistochemical study was conducted to examine the expression of p53 and bcl-2 proteins in RCC (renal cell carcinoma) with sarcomatoid change in order to determine whether abnormalities in those proteins are associated with an enhanced malignant potential of RCC. Paraffin-embedded tissues from 11 patients with RCC, in which sarcomatoid change was prominent, were stained using anti-p53, bcl-2 and Ki-67 antibodies. Immunoreactivities for these antibodies were compared between the sarcomatoid components and corresponding basic histologic (clear or papillary) components in individual cases. Measurement of the mean nuclear areas of each component was also performed using an image analyzer system. There was no substantial increase in immunoreactivity for p53 or bcl-2 proteins in sarcomatoid components as compared with basic components. In contrast, the percentage of Ki-67-positive cells and the mean nuclear area were signficantly larger in sarcomatous components than in basic components. The expression of p53 and bcl-2 proteins was not likely to play a major role in the sarcomatoid change of RCC. Received: 8 June 1998 / Accepted: 14 August 1998     

中波紫外线照射对HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达的影响

目的：研究中波紫外线（UVB）照射对永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p5 3mRNA和p53蛋白表达的影响.方法：以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测照射后不同时间点的p5 3mRNA和p5 3蛋白的表达水平;同时检测不同剂量UVB照射后同一特定时间点p5 3mRNA和p53蛋白的表达水平.结果：30mJ/cm^2的UVB照射后HaCaT细胞的p5 3mRNA和p5 3蛋白表达逐渐增加,4h达到峰值,后逐渐恢复至照光后24h接近正常值;不同剂量UVB照射4h后,p53mR-NA和p53蛋白表达随剂量增加而增加.结论：HaCaT细胞p5 3mRNA和p5 3蛋白表达与UVB照射存在一定的时间和剂量关系.     

紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶、凋亡及p53/bcl-2表达影响的研究

目的 观察紫杉醇对MCF-7细胞端粒酶活性、凋亡及其p53/bcl-2表达的影响，以了解紫杉醇的抗癌机理。方法 运用体外细胞培养、端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法（TRAPELISA）及流式细胞技术观察、分析不同浓度的紫杉醇作用72h的MCF-7细胞。结果 紫杉醇能以浓度依赖方式下凋端粒酶活性并诱导细胞凋亡，使其bcl-2基因的表达显著降低，而P53基因的表达则增强。端粒酶活性下调与细胞凋亡及其P53/bcl-2基因表达有关。结论 紫杉醇能下调端粒酶活性、诱导细胞凋亡、降低bcl-2的表达和增强p53的表达，这可能是紫杉醇抗癌作用的重要机理之一。