PCR检测血液中结核分枝杆菌三种标本处理方法的比较

为了早期快速诊断结核病,已有很多文献探索通过ＰＣＲ从血液中检出结核分枝杆菌[1～3]。但是多种血液成分对ＰＣＲ具有强烈的抑制作用,即使是用酚氯仿法提取纯化亦难以去除[4,5]。应用十二烷基硫酸钠(ＳＤＳ)处理标本能有效去除痰、胸腹水、脑脊液中ＰＣＲ抑制物[5],亦能有效去除血液中的抑制物[6]。我们应用ＳＤＳ处理144例临床高度疑含结核杆菌的血液标本,并和单个细胞法、皂素溶血法的结果进行比较,探讨该法在检测血液中结核分枝杆菌的临床应用价值。1　材料和方法11　　标本　144例血液标本采自本院1998年8月至2000年8月的住院患者,其中…     

PCR检测石蜡包埋组织中结构菌的探讨

用聚保酶链反应（ＰＣＲ）检测石蜡包埋组织中的结构杆菌（ＴＢ－ＤＮＡ－ＰＣＲ）３１例，其中回顾怀１３例，前瞻性１３例ＰＣＲ检测结果均呈阳性，与病理切片诊断相符；１８例前瞻性ＰＣＲ检测标本中，１０例为阳性，８便为阴性，其中有５例是由于采用的试剂盒（Ｔａｇ酶）质量差所致。由于ＰＣＲ敏感、特异、快速，对病理科外检的结核病正确诊断与鉴别诊断具有一定意义，值得在临床病理外检中应用。     

肺结核病人同份痰标本涂片,培养与PCR扩增123bp结果的比较

用国产ＦＳ－ＰＣＲ仪，进行简易痰标本处理，简易ＤＮＡ提取及两步法ＰＣＲ技术检测结核病人痰标本，扩增１２３ｂｐ阳性率７３．５％，而同份标本涂片抗酸杆菌阳性检出率１６．２％，结核菌培养阳性率２７．４％。保证了与经典痰处理，经典ＤＮＡ提取方法、三温循环ＰＣＲ相一致的敏感性和特异性，而且更省时，方法更简单，因而更适用于临床。     

羊水标本母体细胞污染的检测

目的 建立一种简便有效地鉴别羊水标本母体细胞污染的方法。方法 采用PCR术扩增羊水标本DNA中YNZ^22和ApoB两个VNTR位点，根据胎儿及其双亲扩增片断长度多态性判断是否存在母体污染。结果 检测35例标本，34例提供信息，其中4例检测到母体细胞污染。结论 检测羊水标本母体细胞污染对提高产前诊断的准确性具有一定的意义。     

巢式聚合酶链反应快速检测血液标本中

目的建立一种检测血液中伤寒沙门菌的方法.方法根据伤寒沙门菌特异鞭毛基因设计两对引物,通过巢式聚合酶链反应(PCR)扩增伤寒沙门菌DNA片断,扩增产物通过凝胶电泳进行分析.结果用伤寒沙门菌DNA系列稀释液进行试验,巢式PCR能够检出10个伤寒沙门菌.36份培养阳性标本,33份PCR阳性;6份培养阴性但临床高度可疑的伤寒病人标本PCR阳性10份其它原因引起发热的临床标本均为阴性.结论巢式PCR能够快速、特异、准确地检出血液中的伤寒沙门菌.     

巢式聚合酶链反应快速检测血液标本中伤寒沙门菌的实验研究

目的 建立一种检测血液中伤寒沙门菌的方法。方法 根据伤寒沙门菌特异鞭毛基因设计两对引物,通过巢式聚合酶链反应（PCR）扩增伤寒沙门DNA片断,扩增产物通过凝胶电泳进行分析。结果 用伤寒沙门菌DNA系列稀释进行试验,巢式PCR能够检出10个伤寒沙门菌。36份培养阳性标本,33份PCR阳性;6份培养阴性但临床高度可疑的伤寒病人标本PCR阳性;10份其它原因引起发热的临床标本均为阴性。结论 巢式PCR能够快速、特异、准确地检出血液中的伤寒沙门菌。     

聚合酶链反应检测痰标本中结核杆菌DNA的应用

对1373例痰标本中的结核杆菌DNA进行PCR检测,同时使用传统的痰浓缩集菌涂片法进行抗酸染色镜检。结果:PCR阳性率38％,(522/1373)涂片法阳性率13.4％。(184/1373)表明:PCR检测具有敏感度高、特异性强的优点,对结核病的早期诊断具有重要意义。     

PCR检测石蜡包埋组织中结核菌的探讨

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测石蜡包埋组织中结核杆菌（ＴＢ－ＤＮＡ－ＰＣＲ）３１例，其中回顾性１３例，前瞻性１８例。回顾性１３例ＰＣＲ检测结果均呈阳性，与病理切片诊断相符；１８例前瞻性ＰＣＲ检测标本中，１０例为阳性，８例为阴性，其中有５例是由于采用的试剂盒（Ｔａｇ酶）质量差所致。由于ＰＣＲ敏感、特异、快速，对病理科外检的结核病正确诊断与鉴别诊断具有一定意义，值得在临床病理外检中应用。     

聚合酶链反应（PCR）对诊断结核性胸腔积液的价值

应用聚合酶链反应技术直接检测４６例胸水标本中结核杆菌，并与涂片镜检查方法对比。结果显示ＰＣＲ检测胸液结核杆菌阳性率达４５．７％，明显优于胸液涂片镜检，具有良好的敏感性和特异性，可为临床提供早期病原学诊断依据，是快速检测液结核杆的好方法。     

聚合酶链反应反向膜杂交技术检测临床标本中结核分支杆菌的临床意义

目的：探讨聚合酶链反应（PCR）反向膜杂交技术检测临床标本中结核分支杆菌（TB）DNA的价值。方法：用PCR反向膜杂交技术检测522例结核及60例非结核患者临床标本中的TB－DNA,同时用培养,抗酸染色涂片及常规PCR法作对照。结果：PCR反向膜杂交法阳性率为80．6％（411／690）,培养为18．1％（125／690）,镜检为13．95（96／690）,常规PCR为59．6％（411／690）,PCR反向膜杂交法与常规法比较（P＜0．001）,差异有显著意义。PCR反向膜杂交法阳性检出率高于常规PCR（P＞0．05）,但差异无显著意义;该技术假阳性为零。结论PCR反向膜杂交技术检测临床标本中TB－DNA具有快速、高度特异性和敏感性,可为结核病的临床早期诊断提供一种新的病原学诊断手段。     

痰标本多种DNA提取方法检测结核杆菌的对比分析

本文应用ＰＣＲ技术检测结核杆菌，选择具有代表性的痰标本前处理方法，即方法Ｉ（ＮａＯＨ－ＳＤＳ标准裂解法）、方法Ⅱ（水煮法）、方法Ⅲ（ＮａＯＨ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００沸水浴裂解法）、方法Ⅳ（ＮａＯＨ－ＴＥ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００裂解法）。选取３０例结核病患者痰标本，同时进行以上４种方法作对比，结果表明方法Ｉ、Ⅱ、Ⅳ分别比方法Ⅲ有显著性差异，而方法Ⅳ从灵敏度和特异性等方面又优于方法Ｉ、Ⅱ。提示取痰     

痰标本多种DNA提取方法检测结核杆菌的对比分析

本文应用ＰＣＲ技术检测结核杆菌，选择具有代表性的痰标本前处理方法，即方法Ⅰ（ＮａＯＨＳＤＳ标准裂解法）、方法Ⅱ（水煮法）、方法Ⅲ（ＮａＯＨＴｒｉｔｏｎＸ１００沸水浴裂解法）、方法Ⅳ（ＮａＯＨＴＥＴｒｉｔｏｎＸ１００裂解法）。选取３０例结核病患者痰标本，同时进行以上４种方法作对比，结果表明方法Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ分别比方法Ⅲ有显著性差异，而方法Ⅳ从灵敏度和特异性等方面又优于方法Ⅰ、Ⅱ。提示取痰标本检测结核杆菌进行前处理时，方法Ⅳ比较安全、可靠。     

伤寒村菌粗糙型和稳定L型的PCR检测

用伤寒杆菌特异性ＤＮＡ引物通过聚合酶链（ＰＣＲ）检测伤寒杆菌粗糙型和稳定Ｌ型，探讨ＰＣＲ技术在特异性鉴定伤寒杆菌细胞壁缺陷变型上的应用。结果表明伤寒杆菌及其粗糙型和稳定Ｌ型的ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增和电泳后，均获得了特异性和阳性反应。ＰＣＲ技术在特异性检测常规细菌学方法难以检出或鉴定的伤寒村菌的粗糙型或稳定Ｌ型具有可用的前景，有利于对携带伤寒杆菌稳定Ｌ型的潜伏带菌者进行有效的病原学检查。     

结核分支杆菌DNA不同制备方法对PCR扩增结果的影响

聚合酶链反应(PCR)在结核分支杆菌检测中的应用日益广泛,结核菌模板的制备对于基因扩增至关重要。由于结核菌细胞壁脂类含量达 41%,其中大部分属蜡质,故该菌胞壁坚韧,一般的裂解剂不能将结核菌破坏,裂解效果不理想,传统的 DNA提取方法操作繁杂,不适于临床应用。所以探索快速、简便和灵敏的模板制备方法具有重要意义。我们采用Triton-X100和SDS两种方法裂解结核菌,提供基因扩增的模板,取得了满意效果,现报告如下。 材料与方法 1.菌种来源及菌悬液的制备10例结核分支杆菌临床分离株均来自河北省胸科医院检验科。从改良罗氏培养基上取菌放…     

地鼠多瘤病毒PCR检测方法的建立

目的  建立地鼠多瘤病毒（hamster polyomavirus, HaPyV）PCR检测方法,并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测。方法  设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物,以含HaPyV VP1片段的质粒PMD19T-HaPyV688为模板进行PCR扩增并测序确认扩增产物。以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增并对扩增产物进行斑点杂交鉴定以验证PCR方法的特异性。将定量的质粒PMD19T-HaPyV688 10倍系列稀释后进行PCR敏感性检测。以小鼠多瘤病毒(murine polyomavirus, MuPyV)检验PCR法对质粒DNA和病毒DNA检测的一致性。应用建立的方法对生产用地鼠肾细胞悬液进行HaPyV DNA检测。结果  仅含有质粒PMD19T-HaPyV688和MuPyV DNA的样品能够扩增出600 bp的片段,经斑点杂交及测序证明其分别为HaPyV和MuPyV的VP1特异基因片段。PCR所能检出的PMD19T-HaPyV688和MuPyV 的最少DNA拷贝数分别为5300和590。7个亚批生产用地鼠肾细胞悬液的HaPyV检测结果均为阴性。结论  建立的PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可用于生产用地鼠肾细胞HaPyV感染的检测。