血友病A患者血浆FⅧ同种抗体ELISA检测方法的建立及其临床应用

目的建立血友病A患者血浆FⅧ同种抗体的ELISA检测方法,以评估经替代治疗的血友病A患者血浆FⅧ同种抗体的发生率.方法选取血友病A患者140例,其中重型84例,中型34例,轻型22例,所有患者均已经过FⅧ替代治疗;同时选取健康对照者80名.以本室制备的FⅧ单克隆抗体包被酶标板,封闭后加入重组人FⅧ,洗涤后加入待测稀释血浆,再次洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG,邻苯二胺显色,记录490 nm处的吸光度(A490)值.所有患者血浆样本同时采用改良的Nijmegen方法检测抑制物活性.结果通过ELISA法检测,血友病A患者产生血浆FⅧ同种抗体阳性率为40.0%(56/140),重型、中轻型患者产生抗体的阳性率分别为47.6%(40/84)、28.5%(16/56),两组患者产生同种抗体的阳性率差异有统计学意义(x2=5.079,P＜0.05);采用改良的Nijmegen方法检测,血友病A患者产生FⅧ抑制物阳性率为24.3%(34/140),重型、中轻型患者产生抑制物的阳性率分别为33.3%(28/84)、10.7%(6/56),两组患者产生抑制物的阳性率差异有统计学意义(x2=9.349,P＜0.05).其中,25例通过ELISA法检测出同种抗体阳性的患者未被检出抑制物活性.ELISA法与改良的Nijmegen法检出的阳性率分别为40.0%(56/140)、24.3%(34/140),差异有统计学意义(x2=15.75,P＜0.01),具有相关性(rn=0.59,P＜0.01);且两种方法检出结果存在一致性(Kappa=0.55,P＜0.01).结论 ELISA法能够提高FⅧ同种抗体的检出率,血友病A患者经替代治疗后,血浆FⅧ同种抗体发生率并不低,重型患者产生抗体的阳性率高于中轻型患者.     

大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者血浆IgG亚型及FⅧ结合表位鉴定

目的确定1例大疱性类天疱疮并获得性血友病 A 患者的临床和实验室诊断;通过体内外干预实验观察获得性血友病 A 患者体内的 FⅧ抑制物对正常人血浆及兔 FⅧ凝血活性(FⅧ:C)的影响;确定患者 FⅧ抑制物的 TgG 亚型和结构表位,以揭示该病发病的分子机制。方法用Ⅰ期法测定患者血浆 FⅧ:C;以 Bethesda 单位(BU)表示 FⅧ:C 抑制物滴度;用蛋白 A-琼脂糖柱纯化患者及正常人血浆 IgG;用活化部分凝血活酶时间(APTT)分析其对 FⅧ:C 的抑制作用;观察 FⅧ抑制物对兔血浆 FⅧ:C 活性的抑制作用;分别用抗 IgG_1、IgG_2、IgG_3、IgG_4抗体作 Western blot,结合灰度扫描确定患者血浆 IgG 亚型相对表达量;散射比浊法测定患者及正常人体内各 IgG 亚型浓度;用 FⅧ/FⅧ抑制物固相结合试验及 Western blot 鉴定患者 IgG 抗体(FⅧ抑制物)作用于 FⅧ的具体“表位”。结果①患者 APTT 明显延长,正常血浆不能纠正;FⅧ:C<1.5%,FⅧ抑制物滴度为147.8 BU;②纯化的患者 IgG 以剂量依赖方式抑制正常人混合血浆 FⅧ:C;动物实验显示患者血浆能以时间依赖方式延长兔血浆 APTT;③Western blot 结果显示 FⅧ抑制物成分主要为 IgG_4,其次为 IgG_1,FⅧ抑制物作用于FⅧ:C 的结构相对分子质量为44×10~3。散射比浊法测定结果显示患者体内 IgG_4、IgG_1含量明显高于正常人。结论研究结果证明大疱性类天疱疮并获得性血友病 A 患者体内 FⅧ抑制物对 FⅧ:C有抑制作用,FⅧ抑制物的 IgG 亚型主要为 IgG_4,其次为 IgG_1;患者 FⅧ抑制物作用于 FⅧ的表位为相对分子质量为44×10~3的肽段,揭示了该获得性血友病 A 发生、发展的分子机制。     

抗凝血因子ⅧC2区单克隆抗体的制备及功能研究

目的 制备并鉴定抗凝血因子Ⅷ(FⅧ)c2区单克隆抗体(单抗),研究其对FⅧ活性的影响.方法 体外表达rFⅧ C2区蛋白,免疫BALB/c小鼠制备鼠源性单抗.不同剂量的单抗与正常人新鲜混合血浆孵育后测定FⅧ活性及活化部分凝血活酶时间(APTT)等;ELISA法测定该单抗对rhFⅧ与血管性血友病因子(vWF)、磷脂酰丝氨酸(PS)及血小板结合实验的影响.结果 获得一株抗FⅧC2区单抗,命名为SZ-132.与血浆孵育后呈剂量依赖方式抑制FⅧ活性,APTT明显延长;抗体浓度超过25μg/ml时,FⅧ活性为0;该抗体能够抑制rhFⅧ-vWF、rhFⅧ-PS及rhFⅧ与血小板的结合.结论 SZ-132是一株特异性针对FⅧ C2区的抑制性单抗.     

359例血友病A实验室诊断数据回顾分析

目的 调查分析本院血友病A患者的实验室诊断数据,了解医院就诊血友病A临床分型、抑制物存在情况及获得性血友病的诊断思路,为临床诊断和治疗提供证据.方法 对患者进行活化部分凝血活酶时间(APTT)和Ⅷ因子活性(FⅧ∶C)检测,抑制物筛查采用APTT纠正试验做定性判断,阳性者用Nijmegen定量检测抗体.结果 359名血友病A患者以重型和中型居多(共占81％),亚临床型仅14例.抑制物筛查22例阳性,FⅧ抗体定量检测平均抗体滴度35 BU.获得性血友病1例;2例患者同时存在FⅧ∶C、FⅨ∶C低下和抑制物阳性.结论 医院就诊的血友病A患者主要为重型和中型,亚临床型少见;FⅧ抑制物筛查及抗体滴度在临床治疗方案选择中及其重要;获得性血友病诊断思路应该为实验室数据结合临床、遗传学、自身免疫性检查等.     

猪因子Ⅷ治疗有抑制物的血友病人的效果

目前,控制有抗因子Ⅷ抑制物的血友病人的出血发作仍然是一个难题。在输入因子Ⅷ浓缩物后,发生强烈回忆反应的病人尤其如此。已经知道抗因子Ⅷ促凝成份(FⅧ:C)抗体可能是有种属特异性的,这种抗体中和猪因子Ⅷ较中和人因子Ⅷ为少。过去,曾用牛或猪因子Ⅷ浓缩物控制有高滴度抑制物的血友病人的严重出血发作。但是,由于引起某些严重变态反应和过敏反应伴有血小板减少而限制了它们的应用。晚近,一种用聚电解质分级分离法制备的高纯度猪因子     

抗因子Ⅷ抗体与临床处理的现状

血循环中出现因子Ⅷ(FⅧ)抗体,一般发生在甲型血友病。据道导,有5～20％的甲型血友病产生对FⅧ的抑制物。Shapiro报告有5～10％的甲型血友病患者对FⅧ促凝活性(Ⅷ:C)产生抑制物。瑞典有8％的重症甲型血友病循环中有抑制物。抑制物发生的百分率差异很大,为1～21％。抑制物出现可能与接受输血、冷沉淀物或FⅧ浓缩物有关。大多数发生于重型血友病。一旦发生出血,治疗很困难。现将抗FⅧ抗体及其临床处理中的有关问题综述如下:     

36例血友病A相关抑制物检测分析

目的 研究替代治疗后血友病A患者抑制物存在状况,以指导临床治疗方案的调整.方法 对病人进行活化部分凝血活酶时间(APTT)测定和Ⅷ因子活性(FⅧ:C)检测,抑制物检测采用APTT纠正试验做定性判断,阳性者用Nijmegen方法进行抗体定量检测.结果 全部36例血友病A患者替代治疗后FⅧ抑制物定性试验有2例出现阳性,FⅧ抗体定量检测抗体量分别为33BU和61BU.结论 通过对血友病A患者替代治疗后FⅧ抑制物的检测分析,有利于了解血友病A患者的替代治疗效果及预后.     

重组因子Ⅷ制剂Kogenate的临床试验

在40例甲型血友病病人接受家庭输注重组因子Ⅷ(rFⅧ)制剂Kogenate 1年,证明该制剂的安全性和有效性之后,从1989年1月开始,开展了一项用Kogenate处理以前未经治疗的甲型血友病病人(PUPs)的国际多中心临床试验。被研究的PUPs自首次接受Kogenate起每3个月用标准技术采集血液样本,用以检测FⅧ抑制物.检测采用Bethesda法。被检血液样本≥0.6Bethesda单位(BU),判为阳性;其样本还须做进一步试验,诸如其抗体的重、轻链特异性,FⅧ基因分析等。至今,已有66例PUPs和2例以前只经过最低     

非血友病患者获得性Ⅷ因子抑制物

据报道大约15％～35％的血友病A病人可出现Ⅷ因子抗体,但在少数非血友病患者偶尔体内亦会出现Ⅷ因子抑制物,作者自1980～1995年间共遇到10例,本文就其临床特点及其治疗结果进行报道。 10例患者大多在损伤或手术后短期内有突然出血倾向,经血清学检测证实体内存在Ⅷ因子抑制物。男性4例,女性6例,年龄21～80岁。Ⅷ因子抑制物采用Bethesda方法测定,同时还进行了aPTT及Ⅷ因子等检测。所有均进行全面的临床及相关实验室检查,除外恶     

问：什么是获得性血友病A？形成凝血因子Ⅷ抑制物的原因有哪些？

答：获得性血友病A是指非先天性的血友病的患者体内产生了抗因子Ⅷ的抗体，使因子Ⅷ的水平严重降低而引起的一种罕见的出血性疾病。患者合成因子Ⅷ的能力正常，但测定因子Ⅷ：C常常很低。多见于老年人和青年人，可发生在女性。临床出血症状与血友病相似，常表现为肌肉等软组织血肿，但一般不出现关节出血。实验室检查活化部分凝血活酶时间(APTT)明显延长，且不能被正常血浆纠正，     

我国人凝血因子Ⅷ制品中血管性血友病因子效力分析

目的 获得国内人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制品中血管性血友病因子(vWF)的效力信息.方法 获得国内7家及国外1家血液制品厂生产的FⅧ制品,检测其中FⅧ和vWF各项指标.结果 国内7家FⅧ制品中有2个厂家FⅧ制品中vWF活性损失超过25％;国内不同厂家FⅧ制品中vWF活性与FⅧ活性比值差异较大,P＜0.05.C、D、F厂家制品...     

FⅧ抑制物的特点及其临床治疗

FⅧ抑制物是人体内最常见的抗凝血因子抗体,通过抑制FⅧ∶C活性引起获得性血友病A(AH0 A)。AH- A是一种罕见的出血性疾病,死亡率较高。与遗传性血友病相比,AH -A具有独特的临床特点及治疗措施。早期诊断及选择合理治疗方案对AH-A的预后有积极意义。     

血友病患者治疗中以聚苯乙烯衍生物作为Ⅷ因子抗体体外吸附剂

背景和目的 本文介绍一种新的以亲和力矩阵的免疫吸附途径,去除血友病患者中Ⅷ因子抗体(抗-FⅧ)的方法。材料和方法 10例携有抗-FⅧ的血友病患者,在研究期间,循环通过一次或两次带有聚合物填充物的柱滤器后,检测其抗体水平,总     

血友病甲因子Ⅷ抑制物单中心34年的实验观察(1994～1997)

有效的血液置换治疗,提高了血友病病人的生活质量,并延长了生命。但同时可导致两个严重的并发症:产生抗因子Ⅷ抗体(抑制物)及输血导致的感染。作者在单中心血友病实验中心对431例血友病甲自然病程中的抗因子Ⅷ抗体(抑制物)进行了34年的回顾性研究。 病人及方法 431例病人共计随访5626例年。研究早期,对重型病人至少每年检测一次抑制物,并对临床事件者随时检测;1985年后所有重型病人每隔3～4月检测一次。抑制物的评估检测在研究早期用Biggs及Bidwell方法,1979年后用Bethescho方法;重型病人的内含子22反向转录用Suwthen blot方法。 结果 (1)发病人口的统计学 431例中239(55％)为重型(因子Ⅷ:C<2u/dl),45例(11％)为中型(因子Ⅷ:C2-5u/     

凝血因子Ⅷ浓缩物热处理效果

作者回顾分析了苏格兰国立输血中心混有抗HIV阳性血为原料制备、并经加热处理的两批凝血因子Ⅷ浓缩物治疗血友病患者的情况,以评价热处理灭活HIV病毒的效果。这两批因子Ⅷ浓缩物的原料血浆中均混有HIV阳性血浆(当时尚未对献血者进行抗HIV     

猪因子Ⅷ治疗获得性血友病

作者分析欧洲及北美洲47个治疗中心65例获得性血友病(74例次急性出血)应用猪因子Ⅷ(FⅧ)浓缩物治疗的结果。在应用猪FⅧ前,44例已用过各种血制品,21例未经治疗。猪FⅧ平均起始剂量为84IU/kg,可增加血浆FⅧ:C活性0.85IU/ml,持续治疗平均8.5天。 结果 所观察64例中50例(78％)临床反应极好或良好,8例轻度反应,6例无反应。65例中10例     

什么是获得性血友病A?形成凝血因子Ⅷ抑制物的原因有哪些?

答:获得性血友病A是指非先天性的血友病的患者体内产生了抗因子Ⅷ的抗体,使因子Ⅷ的水平严重降低而引起的一种罕见的出血性疾病。患者合成因子Ⅷ的能力正常,但测定因子Ⅷ:C常常很低。多见于老年人和青年人,可发生在女性。临床出血症状与血友病相似,常表现为肌肉等软组织血肿,但一般不出现关节出血。实验室检查活化部分凝血活酶时间(APTT)明显延长,且不能被正常血浆纠正,凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)正常;抗体滴度可用Bethesda试验测定。此病约50%以上病例原因不明,无相关疾病。其他可伴发于系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、药物反…     

狼疮抗凝物伴凝血因子Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ缺乏的检验诊断:附13例报告

目的 探讨狼疮抗凝物伴凝血因子(Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ)缺乏的检验诊断方法.方法 检测13例狼疮抗凝物伴凝血因子(Ⅷ、、Ⅸ和Ⅺ)缺乏患者(包括长期服用氯丙嗪的精神分裂症5例、抗磷脂综合征2例、天疱疹1例、原因未明5例)、1O例血友病A患者和48名健康志愿者的凝血因子活性、凝血因子抗体、抗心磷脂抗体(ACA)、狼疮抗凝物(LA)以及凝血酶的生成.结果 13例狼疮抗凝物伴凝血因子(Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ)缺乏患者的活化部分凝血活酶时间(APTT)延长,凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ活性(FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ∶C)降低,针对这些凝血因子的抗体及LA均为阳性,6例ACA为阳性.其中LA阳性、伴凝血因子(Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ)缺乏组中,11例无出血患者的凝血酶生成试验(TGT)的延迟时间值为(5.60±1.18)min,高于正常对照组的(1.88±0.25)min,差异具有统计学意义(t=10.05,P＜0.01);达峰时间值为(8.11±1.91)min,高于正常对照组的(4.10±0.36)min,差异具有统计学意义(t=8.83,P＜0.01);凝血酶生成潜力(ETP)值为(1640.87±279.80)nmol·L-1·min-1,高于遗传性血友病A组的(734.59±118.30)nmol·L-1·min-1,差异具有统计学意义(t=9.77,P＜0.01);ETP比值为(86.00±14.66)%,高于遗传性血友病A组的(38.50±6.20)%,差异具有统计学意义(t=9.77,P＜0.01).遗传性血友病A组的达峰时问值为(8.01±1.81)min,高于正常对照组的(4.10±0.36)min,差异具有统计学意义(t=8.20,P＜0.01);而延迟时间值为(2.01±0.84)min,与正常对照组的(1.88±0.25)min比较,差异无统计学意义(t=1.26,P＞0.05).结论 狼疮抗凝物伴凝血因子(Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ)缺乏和遗传性血友病是以APTT、PT、PLT和APTT纠正试验作为筛选试验;以LA、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ∶C和它们的抗体检测作为确诊试验;检测LA和ACA可为寻找病因提供依据;ETP值和ETP比值是判断LA阳性伴凝血因子(Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ)缺乏患者临床是否出血的较敏感指标.     

人工乏因子Ⅷ基质血浆研究进展

<正> 血友病甲是一种严重的遗传性凝血系统障碍疾病,由于患者血浆中的凝血因子Ⅷ缺乏而引起,可导致严重出血。治疗这种疾病的各种制剂中FⅧ活性(FⅧ∶C),以及患者或基因携带者血浆中的FⅧ∶C,一般多采用一期法来测定。此法需要乏因子Ⅷ血浆作基质。以往这     

血友病A患者产生凝血因子Ⅷ抑制物的相关因素分析

目的 分析血友病A患者的临床特征,探讨其凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物产生的相关因素.方法 回顾性分析113例血友病A患者的临床资料及治疗情况.用一期法检测FⅧ活性,确定血友病的严重程度;对85例经过FⅧ替代治疗的患者进行FⅧ抑制物检测,并分析FⅧ抑制物产生的相关闪素.结果 FⅧ活性检测显示113例患者中重型74例,中型27例,轻型12例.本组经FⅧ替代治疗的患者产生FⅧ抑制物的发牛率为28.24%,抑制物水平均为低滴度,均发生在中、重型患者.首次使用FⅧ持续时间、血友病患者严重程度、是否有大出血或手术大量使用FⅧ史均与FⅧ抑制物是否产生相关(P<0.05).结论 血友病A患者产生FⅧ抑制物以低滴度为主,多发生在中、重型患者.首次使用FⅧ持续时间超过5 d,中、重型.曾大出血或手术使用大剂量FⅧ等均与FⅧ抑制物产生相关.