P27^kip1与细胞周期蛋白G在急性白血病中的表达及相关性研究

为了探讨P27^kip1与细胞周期蛋白G（cyclin G）在急性白血病患者中的表达及其相关性,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测89例急性白血病患者和10例正常人白细胞的P27^kip1与cyclin G mRNA水平,采用Wes—tern blot检测39例急性白血病患者和10例正常人白细胞的P27^kip1与cyclinG蛋白表达水平。结果显示：急性白血病初治／复发组的cyclin G mRNA与蛋白表达水平均明显高于缓解组和正常对照组（P〈0．05或P〈0．01）;缓解组与正常对照组之间无显著差异（P〉0．05）。急性白血病初治／复发组的P27^kip1 mRNA水平与缓解组和正常对照组比较均无明显差异（P〉0．05）。而急性白血病缓解组和正常对照组的P27^kip1的蛋白表达水平高于初治／复发组（P〈0．05）,缓解组与正常对照组之间无显著差异（P〉0．05）。P27却。与cyclin G的表达呈低度负相关。结论：P27螂。与cyclin G在白血病患者中有异常表达,与白血病的发生发展有一定联系;P27^kip1的低表达与cyclin G的异常高表达可能是白血病预后不良的因素之一。     

Hippo信号通路核心元件MST1在急性白血病患者中的表达及意义

本研究旨在探讨Hippo信号通路核心元件MST1基因在急性白血病患者中的表达情况及其与白血病发生、发展的关系.采用实时定量PCR检测50例初治急性白血病患者、33例正常人、23例完全缓解缓解患者及12例难治/复发患者的MST1基因的表达情况,采用Western blot进一步验证其蛋白的表达水平,结合临床资料对患者的预后因素进行分析.结果表明,与正常人相比,急性白血病初治患者MST1基因的表达水平明显减低(P＜0.05),完全缓解前后差异有统计学意义(P＜0.05),难治/复发患者与初治患者MST1基因表达水平无明显差异(P＞0.05),完全缓解患者与正常人MST1表达水平无明显差异(P＞0.05).结论:MST1基因的低表达与急性白血病的发病及预后相关.     

初诊白血病患者溶血磷脂酸酰基转移酶基因表达研究

本研究旨在检测白血病患者溶血磷脂酸酰基转移酶-β（lysophosphatidic acid acyltransferase β,lpaat β）mRNA的表达水平,为lpaatβ靶向治疗在白血病中的应用提供理论基础。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者lpaatβ mRNA的相对表达水平,分析其在各型白血病中的表达情况。结果,急性白血病（AL）患者lpaatβ mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）;急性髓系白血病（AML）患者lpaatβ mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）,且lpaatβ mRNA的表达水平与外周血白细胞计数（WBC≥20.0×109/L）、白血病细胞CD34表达呈正相关（p〈0.05）,与患者的髓外侵犯无明显相关性（p〉0.05）。除外急性早幼粒细胞白血病（APL）病例之外,lpaatβ mRNA的表达水平与AML患者的化疗敏感性呈负相关（p〈0.05）。慢性髓系白血病（CML）患者lpaatβ mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）。急性淋巴细胞白血病（ALL）患者lpaatβ mRNA的表达与正常对照组相比,差异无统计学意义（p〉0.05）。结论：AML、CML患者均存在着lpaatβ基因的超高表达。AML细胞产生的lpaatβ可能在AML细胞的异常增殖及化疗耐药中起着重要作用。     

同源盒基因HoxA10在急性白血病中的表达及相关研究

本研究探讨HoxA10基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义.运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,检测50例急性白血病患者和10例对照者（7例正常人、3例ITP）中HoxA10mRNA的表达水平;分析其在急性白血病中的表达规律及与临床预后的关系.结果表明：HoxA1o在各型急性髓系白血病中均表达,在急性淋巴细胞白血病和部分对照者中低表达.3例正常人不表达HoxA10.HoxA10 mRNA表达水平在急性髓系白血病明显高于急性淋巴细胞白血病患者和对照组（P＜0.01）,在急性髓系白血病中,M1型和M2型表达水平高于M4型和M5型,在M3型有显著高表达.骨髓中原、幼细胞比例和HoxA10mRNA表达水平呈正相关关系（r=0.635,P＜0.01）.未缓解组9例患者HoxA10表达水平高于缓解组8例患者,但无显著差异（P=0.258）.1例M2患者和1例M5患者缓解后HoxA10不表达.结论：HoxA10在急性髓系白血病中有异常高表达,具有髓系特异性,可作为区别淋系和髓系的标志性基因,但不是肿瘤细胞特有的基因,而是一类调控造血的转录因子,能与多种协同因子共同影响白血病的发生和发展.HoxA10的表达水平与肿瘤细胞负荷有关,与急性白血病的疗效有一定关系.     

SALIA及BMI-1在急性白血病中的表达

本研究旨在探讨SALL4及BMI-1基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义。运用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测62例急性白血病患者和10例对照者（非恶性血液病患者）骨髓细胞中SALL4及BMI-1的mRNA的表达水平。结果表明：①SALL4mRNA在除M3及T—ALL外的急性白血病中均高表达，在髓系白血病中表达显著高于B淋巴细胞白血病（P=0．022，〈0．05）；在对照者中9例不表达，1例低表达；②SALL4 mRNA在初治AL中表达较对照组明显增高，完全缓解组的表达明显下降，与初治组有显著差异（P〈0．05）；复发组的表达也明显增高，且略高于初治组患者（P=0．414）；③BMI-1除在M3型中也高表达外与SALL4的表达规律一致，两者表达呈显著正相关（r=0．684，P〈0．01）。结论：SALIA及BMI-1在急性白血病中异常高表达，影响白血病的发生和发展，它可作为急性白血病的发病、复发及预后判断的可能指标。     

初治白血病患者april mRNA的表达研究

本研究旨在检测27例确诊白血病患者april mRNA的表达水平,为april分子靶向治疗在白血病中的应用提供理论基础。采用实时荧光定量PCR方法检测初治白血病患者april mRNA的相对表达水平,分析其在各型白血病中的表达变化。结果表明：急性白血病（AL）患者april mRNA的表达高于正常对照组,差异有统计学意义（p〈0.05）;急性髓系白血病（AML）患者april mRNA的表达高于正常对照组,其差异有统计学意义（p〈0.05）,且april mRNA的表达水平与外周血白细胞计数（WBC≥20.0×109/L）呈正相关（p〈0.05）,与患者的髓外侵犯及CD34表达无明显相关性（p〉0.05）。除外急性早幼粒细胞白血病（APL）病例,april mRNA的表达水平与AML患者的化疗敏感性呈负相关（p〈0.05）。急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性髓系白血病（CML）患者april mRNA的表达与正常对照组相比,差异无统计学意义（p〉0.05）。结论：AML患者存在着april mRNA的过表达。AML细胞产生的APRIL蛋白可能在AML细胞的异常增殖及化疗耐药中起着重要作用。     

急性白血病患者WT1基因表达及其临床意义

目的 观察WT1基因在白血病细胞的表达及其临床意义,探讨WT1基因表达与白血病疗效关系。方法 用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测初治及复发急性白血病患者73例治疗前WT1基因的表达,结合临床观察WT1表达阳性与急性白血病治疗疗效关系,并观察缓解后患者WT1基因表达的变化。结果 73例急性白血病患者WT1阳性53例（72．6％）,其中46例急性髓细胞白血病阳性32例（69．6％）,23例急性淋巴细胞白血病阳性17例（73．9％）。3例急性混合细胞白血病及1例急性浆细胞白血病均表达阳性。在急性淋巴细胞白血病和非M3型急性髓细胞白血病中,WT1表达阳性对治疗缓解率无明显影响。对21例患者治疗后动态观察,当完全缓解时,WT1表达转阴性;复发时WT1表达又转阳性。结论 WT1在急性白血病阳性率较高,但阳性与否对临床疗效无明显影响。WT1基因作为白血病标志用于急性白血病微小残留病的检测有重要价值。     

JAK家族基因与细胞因子信号传导抑制因子家族基因在白血病细胞中的表达及意义

目的 探讨SOCSs基因和JAKs基因在急性髓系白血病(AML)患者中的表达情况.方法 RT-PCR方法检测AML患者和正常对照骨髓SOCS 1～7、JAK 1～3和TYK 2 mRNA的表达.结果 ①AML患者SOCS 1、4、5、7的表达明显低于缓解组和正常对照组(P<0.01),SOCS 3、6表达水平较缓解组和正常对照组高(P<0.01),SOCS 2在各组无明显差异;AML患者JAK2、JAK3、TYK2 mRNA平均表达水平较缓解组和正常对照组明显增高(P<0.05).初治AML患者JAK1 mRNA表达水平较正常对照组略增高,但差异无统计学意义(P>0.05),复发AML患者JAK1 mRNA表达水平较正常对照组明显增高(P<0.05).结论 AML患者的SOCS 1、4、5、7基因表达缺失或降低,JAK家族基因表达明显增高,提示二者可能共同参与髓系白血病的发生.     

白细胞介素3受体α在急性白血病中的表达及临床意义的研究

目的研究白细胞介素3受体α mRNA(IL-3RαmRNA)在急性白血病(AL)中的表达及其在急性白血病中的临床意义。方法对80例急性白血病患者(包括56例初治急性白血病患者、9例复发患者和15例缓解患者),另外,15例健康人为正常对照组,KG-1α细胞株为阳性对照,应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测各组IL-3RαmRNA水平。结果IL-3RαmRNA在初治AL患者中表达水平明显高与正常对照组(P<0.05);IL-3Rα mRNA在缓解组表达水平高于正常对照组,但差别无统计学意义(P>0.05),但缓解组表达水平低于初治AL组,且差别有统计学意义(P<0.05);复发组平均表达水平高于正常对照组(P<0.05);AL患者中42例可进行疗效评估,初治IL-3Rα mRNA阳性AL患者中分为高表达与低表达组,IL-3Rα低表达患者的缓解率明显高于高表达患者,两者比较差别有统计学意义(P<0.05);7例复发的AL患者,仅有1例用药后达到完全缓解(CR),其IL-3Rα mRNA表达均阳性;余6例均未达到CR。结论在急性白血病患者IL-3Rα mRNA有异常过度高表达;IL-3Rα mRNA高表达的患者缓解率低,表明与白血病的发病及疗效预后有关;可用来作为判断疗效预后的一新指标。     

Hippo信号通路核心元件MST1在急性白血病患者中的表达及意义

本研究旨在探讨Hippo信号通路核心元件MST1基因在急性白血病患者中的表达情况及其与白血病发生、发展的关系。采用实时定量PCR检测50例初治急性白血病患者、33例正常人、23例完全缓解缓解患者及12例难治/复发患者的MST1基因的表达情况,采用Western blot进一步验证其蛋白的表达水平,结合临床资料对患者的预后因素进行分析。结果表明,与正常人相比,急性白血病初治患者MST1基因的表达水平明显减低(P<0.05),完全缓解前后差异有统计学意义(P<0.05),难治/复发患者与初治患者MST1基因表达水平无明显差异(P>0.05),完全缓解患者与正常人MST1表达水平无明显差异(P>0.05)。结论:MST1基因的低表达与急性白血病的发病及预后相关。     

急性髓系白血病TFPI-2基因表达及启动子甲基化的研究

本研究检测了组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2）基因在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者骨髓单个核细胞中的表达水平及其甲基化状态,探讨其与AML发生、发展及危险度分层的关系.分离33例初治、19例完全缓解、12例复发/难治AML患者及15例单纯缺铁性贫血患者（对照组）骨髓单个核细胞,采用实时定量PCR （RT-PCR）检测TFPI-2 mRNA在其中的表达水平,采用甲基化特异性PCR （MSP）检测启动子CpG岛甲基化状态.结果表明,初治组、完全缓解组及复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平均低于对照组（P＜0.05）,复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平明显低于初治组（P =0.006）,与完全缓解组相比,初治组TFPI-2 mRNA表达水平也显著降低（P=0.030）;64例AML患者TFPI-2基因启动子甲基化频率为64.63％ （42/64）,其中初治组、完全缓解组和复发/难治组患者中TFPI-2基因启动子甲基化频率分别为66.67％（22/33）、52.63％ （10/19）和83.33％ （10/12） （P＞ 0.05）;甲基化AML患者与非甲基化AML患者骨髓单个核细胞中TFPI-2 mRNA的相对表达量分别为0.165（0.005-2.099）和0.597（0.011-2.787） （P ＜0.05）,在对照组骨髓单个核细胞中未检测到TFPI-2基因启动子的甲基化;初治组经2个疗程化疗后,完全缓解组（CR）骨髓单个核细胞TFPI-2 mRNA表达量显著高于未完全缓解组（PR＋ NR） （P=0.031）.结论：在AML中TFPI-2基因表达下调或沉默与启动子甲基化有关,TFPI-2基因表达水平及启动子甲基化状态可以作为AML分层及病情进展的指标.     

儿童急性髓系白血病WT1基因的实时荧光定量RT-PCR检测及其临床意义

本研究建立实时荧光定量RT-PCR方法检测儿童急性髓系白血病WT1基因(AML)mRNA的表达并探讨其临床意义。采用SYBR G reen I实时荧光定量RT-PCR方法,检测30例初治AML患儿、12例缓解期患儿(30份)、18例复发患儿,30例细胞形态学正常人的骨髓标本中的WT1基因的表达水平,并动态检测20例初治患儿WT1基因的表达。以ABL为内参照,采用2-△△ct法计算其相对表达量。结果表明:①初治AML患儿WT1基因的表达高于正常对照组和缓解组(p<0.001);缓解AML患儿WT1基因的表达与正常对照组的差异无统计学意义(p>0.05);复发AML患儿WT1基因的表达与初治组的差异无统计学意义(p>0.05);②动态监测儿童AML20例显示,初治时W T1高表达,完全缓解后W T1表达水平下降,复发时W T1表达水平明显升高。20例中5例在临床复发前3-7个月表达水平开始上升。③动态检测的20例患儿初治时W T1阳性组和阴性组完全缓解率(CR)、3年总生存率(O S)无显著差异(p>0.05),治疗后第22-30天的W T1阳性组3年O S显著低于阴性组(p<0.05)。结论:SYBR G reen I实时荧光定量RT-PCR方法是一种快速有效,灵敏度高,特异性好的方法。WT1基因在儿童急性AML中表现为促癌基因的作用,WT1基因表达水平的变化有助于疗效评价,微小残留病的检测和预后判断。     

急性白血病病人骨髓细胞BAALC基因表达及意义

目的通过检测脑和急性白血病胞质（BAALC）mRNA在急性白血病（AL）病人表达,探讨其与AL病情进展及预后关系。方法应用逆转录聚合酶链反应技术,检测20例急性髓系白血病（AML）、8例急性淋巴细胞白血病（ALL）及11例特发性血小板减少性紫癜（ITP）、缺铁性贫血（IDA）等非恶性血液病病人（对照组）骨髓单个核细胞BAALC mRNA表达水平。结果初治组AL病人BAALC mRNA表达水平较对照组显著升高（F=8.59,q=5.62,P〈0.05）;经治疗获完全缓解后,与初治组比较,其表达水平显著下降,两组比较差异有显著性（q=3.99,P〈0.05）。BAALC mRNA表达水平与AL病人外周血白细胞计数及骨髓原始细胞比例无明显相关性（P〉0.05）。结论 BAALC mRNA表达与AL疾病进展及预后密切相关,可作为AL预后判断的有意义指标。     

MRP在急性白血病患者骨髓涂片中表达的临床意义

目的 探讨多药耐药相关蛋白（multidrug resistance assoliated protien, MRP）在急性白血病（acute leukemia AL）患者骨髓涂片中的表达及其与临床疗效的关系。方法采用免疫组化染色技术检测42例AL患者骨髓涂片中MRP的表达。其中初发AL29例，复发13例。按FAB分类：其中急性淋巴细胞白血病（acute lymphocytic leukemia ALL）10例，急性髓细胞白血病（acute mylogenous leukemia AML）31例。结果 初发AL患者NRP的表达阳性率（17．2％）与复发患者（46．2％）有差异。骨髓涂片中MRP表达阳性患者化疗缓解率54．5％低于NRP表达阴性患者95％，具有统计学差异。结论AL患者骨髓涂片中MRP的检测是判断疗效的一个简便可行的方法，对其疗效有其一定影响关系。     

实时荧光定量RT-PCR检测SALL4基因的临床应用研究

本研究旨在建立实时荧光定量RT-PCR（FQ RT-PCR）检测婆罗双树样基因4（sal-like4,SALL4）mRNA的方法并研究该基因在各类型白血病中表达情况.应用实时荧光定量RT-PCR技术定量检测60例急、慢性白血病患者和10例志愿者的标本SALL4基因.结果表明,SALL4基因在完全缓解（CR）组各类型白血病中不表达或低表达,与对照组相比无显著差异（P＞0.05）,而在初诊和复发组中高表达,表达量显著高于CR组（P＜0.05）,但在初诊和复发两组间表达量无显著差异（P＞0.05）,其中SALL4基因在CLL、T-ALL、M3中不表达或低表达;相关BMI-1基因与其表达规律一致,两者显著相关（r=0.825,P＜0.01）.结论：实时荧光定量RT-PCR技术检测SALL4基因具有高敏感性和高特异性等优点,可作为进一步研究SALL4基因的方法;SALL4基因有可能成为部分白血病治疗转归及白血病微小残留病（MRD）监测指标之一.     

动态监测血清乳酸脱氢酶水平在急性白血病中的临床意义研究

目的通过动态监测急性白血病(AL)患者血清乳酸脱氢酶(LDH)水平,探讨LDH对AL患者病情监测和预后评估的临床意义。方法回顾分析初诊的1 184例AL患者的2 170例次LDH水平,评估患者LDH水平随疾病进程的变化趋势并探究其与AL的预后和疾病进展的关系,同时分析LDH与血细胞、骨髓白血病细胞比例、白血病融合基因和流式细胞术分型等相关辅助诊断指标的关系。结果 AL患者不同病程阶段的LDH水发平不同,其中初发组及复发组LDH水平明显高于缓解组及正常对照组(P0.05)。缓解组LDH水平有所减低,但仍高于正常对照组(P0.05)。急性淋巴细胞白血病(ALL)组LDH水平明显高于急性髓性白血病(AML)组(P0.05)。与其他AL诊断及预后相关指标比较,LDH与骨髓白血病细胞百分数、白血病相关融合基因、细胞免疫分型等都有相关性(P0.05)。结论不同病程阶段、不同亚型AL患者的血清LDH水平有差异,血清LDH水平可作为AL诊断、疾病进程及疗效评估的辅助指标。     

TYK2、SOCS7基因在急性白血病患者中的表达及临床意义

目的探讨TYK2、SOCS7基因在白血病中的表达及临床意义。方法将入院患者分为急性白血病（AL）初治组、AL缓解组和正常对照（NC）组,采用RT-PCR方法检测白血病和NC组骨髓单个核细胞中TYK2、SOCS7mRNA的表达,及与侵袭性真菌感染的相关性。结果 TYK2在初治AL患者高表达,缓解后表达减低（P〈0.05）,且阳性病人易患侵袭性真菌感染。SOCS7在初治AL患者低表达,缓解后表达升高（P〈0.05）,SOCS7表达与侵袭性真菌感染呈负相关。TYK2＋组的缓解率为40%（12/30）,明显低于TYK2-组（100%,4/4）,两组之间有差异（χ^2=3.96,P=0.047）。SOCS7＋组的缓解率为31%（10/33）,明显低于SOCS7-的缓解率为100%（1/1）,两组之间有差异（χ^2=6.032,P=0.014）。初治TYK2＋比TYK2-易患侵袭性真菌感染（χ^2=4.073 P=0.044）。SOCS7-比SOCS7＋组亦易患侵袭性真菌感染（χ^2=4.331 P=0.037）。结论 TYK2的高表达及SOCS7低表达可能在白血病的发生发展中起重要作用,且与侵袭性真菌感染有相关性。     

Livin和Survivin基因在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

本研究旨在探讨凋亡抑制蛋白家族成员livin和survivin基因在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)中的基因表达及其临床意义。应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测95例成人ALL患者(包括52例初治ALL患者,23例治疗后复发的ALL患者以及20例完全缓解的ALL患者)骨髓中和20例健康者外周血中的livin和survivinmRNA表达情况。结果表明,成人ALL患者初治组、复发组中livin和survivin的表达均明显高于缓解组和正常对照组;初治成人ALL患者中,livin和survivin的表达与否与患者的年龄、性别、分型、初诊时白细胞水平均无明显相关;初治成人ALL患者中,livin、survivin表达阳性的患者缓解率明显低于表达阴性的患者;livin和survivin在成人ALL初治组中的表达无明显相关性。结论:livin和survivin可能参与成人ALL的发生与发展;livin和survivin高表达可能是成人ALL预后不良指标;livin和survivin在成人ALL中可能没有协同表达作用。     

eIF4E在白血病中的表达及其临床意义

本研究旨在比较eIF4E在正常人和白血病患者中的表达水平,了解eIF4E是否在白血病的发生和发展中起到一定的作用。收集10例正常人和76例白血病患者的外周血细胞标本,76例患者包括39例急性髓系白血病,15例慢性髓系白血病和22例急性淋巴细胞白血病,分离标本中的白细胞,分别通过实时定量PCR和Western blot检测eIF4E在mRNA和蛋白质水平的表达变化。结果表明,就eIF4E mRNA绝对表达水平而言,在急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病及慢性髓系白血病急变期,其表达增高,与正常对照比较有显著性差异(P<0.05);在慢性髓系白血病慢性期,其表达水平无明显改变,在慢性髓系白血病加速期,其表达水平虽有所上调,但与正常对照无显著性差异。就eIF4E mRNA相对表达水平而言,在慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病及除M4、M5之外的急性髓系白血病中,其表达均无显著性变化。eIF4E蛋白质表达在急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病加速期和急变期中均有不同程度的增高,与正常对照比较有显著性差异(P<0.05)。结论:虽然eIF4EmRNA相对表达水平在大多数白血病中并无显著性改变,但是eIF4E mRNA绝对表达水平及其蛋白质水平在大多数白血病中均显著性上调。因此推测,eIF4E可能对白血病的发生和发展起到一定的作用,以它为靶点治疗白血病,尤其是复发和难治性白血病,可能是一条有希望的途径。