B细胞CD40信号分子经NF-κB途径对pim-1激酶表达的调控

pim 1是一种编码丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶的主要原癌基因。TNFR家族成员CD4 0信号分子可通过NF κB途径使pim 1基因转录增加并引起pim 1蛋白含量的增加 ,该实验证明了这一点。另外 ,研究表明 :BCR和LPS受体复合物也可调节B细胞中pim 1的含量 ,其与B细胞生长增殖有一致性 ,所以 ,pim 1含量多少可能是B细胞生长、增殖的关键决定性因素     

一氧化碳对TLR4/NF-κB信号通路影响的研究进展

在炎性反应中Toll样受体4(TLR4)触发细胞内信号传导通路,从而激活核转录因子-κB(NF-κB),调控大量炎性因子释放。一氧化碳(CO)是一种新型递质,在多种炎性反应动物模型中,低浓度CO具有抗炎作用,而其发挥抗炎作用的机制十分复杂。本文就CO对TLR4/NF-κB信号通路影响的研究进展做一综述,阐述CO的抗炎作用。     

孤儿核受体NR4A1通过NF-κB/COX-2对氧化应激诱导的血栓形成的保护作用及机制研究

目的 分析孤儿核受体NR4A1对氧化应激诱导的血栓形成的保护作用及机制。方法 选取健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和NR4A1组,每组10只。用FeCl₃构建颈动脉血栓大鼠模型,用NR4A1激动剂促进大鼠NR4A1的表达。称取3组小鼠的血栓重量;采用苏木精-伊红染色观察颈动脉组织切片的血栓形成情况;采用蛋白质印迹法检测核转录因子-κB(NF-κB)/环氧合酶-2(COX-2)信号轴相关蛋白表达水平;采用硝酸还原酶法检测NO水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)水平;采用放射免疫分析法测定血栓素(TX)B2、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平。结果 对照组未形成血栓,NR4A1组大鼠血栓重量明显低于模型组,3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组与NR4A1组大鼠颈动脉组织NR4A1蛋白表达水平均低于对照组,且模型组低于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组与NR4A1组大鼠颈动脉组织p-NF-...     

miR-146 调控TLR4/NF-κB 通路减少卵泡颗粒细胞凋亡及干预卵巢早衰中的机制研究

目的 探究miR-146 通过调控Toll 样受体4（TLR4）/ 核因子-κB（NF-κB）减少卵泡颗粒细胞凋亡和干预卵巢早衰（premature ovarian failure,,POF ）的机制。方法 野生小鼠实验:60 只SPF 级C57BL/6 小鼠随机分为对照组（n=30）和POF 组（n=30）。POF 组建立卵巢早衰模型,造模后15 天qPCR 检测2 组小鼠卵巢组织中miRNA-146表达水平;基因敲除鼠实验:40 只C57BL/6 小鼠和20 只miR-146 敲除小鼠分为三组:对照组（n=20）、野生型POF组（n=20）和miR-146 敲除POF 组（n=20）,野生型POF 组和miR-146 敲除POF 组建立POF 模型,建模后15 天HE染色分析各组小鼠卵巢组织病理情况及原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和闭锁卵泡数,ELISA 检测各组小鼠卵巢组织炎症信号通路分子TLR,NF-κB, 肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的表达水平;Western blot 检测卵巢组织凋亡蛋白BCL2-Associated X 蛋白（Bax）,B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl2）和TLR4 信号通路蛋白TLR4,NF-κB表达水平。结果 野生鼠实验表明与对照组相比,POF 组小鼠卵泡中miR-146 表达水平下调（0.51±0.14 vs 1.52±0.21）,差异具有统计学意义（t=7.338,P<0.01）;基因敲除鼠实验表明:与对照组相比,野生型POF 组和miR-146 敲除POF组原始卵泡（9.43±2.03,6.43±1.60 vs 16.82±2.11）、初级卵泡（6.15±1.11,5.01±1.10 vs 8.88±1.12）、次级卵泡（5.11±1.71,4.01±1.26 vs 7.11±1.34）均降低,闭锁卵泡（10.17±1.41,11.46±1.96 vs 7.18±1.64）升高,差异具有统计学意义（F=7.787, 8.214, 9.726, 7.811, 均P<0.01）。与对照组相比,野生鼠POF 组和miR-146 敲除POF 组小鼠卵巢组织TLR4（68.18±5.92pg/ml,91.11±16.34 pg/ml vs 24.81±2.81 pg/ml）,NF-κB（74.19±8.11 pg/ml,88.11±16.71pg/ml vs 68.18±5.92 pg/ml）,TNF-α（72.81±2.10 pg/ml,94.31±2.26 pg/ml vs 28.07±3.67 pg/ml）和IL-6（69.19±7.11,81.11±16.34 vs 19.43±10.81 pg/ml）分泌显著升高,差异均有统计学意义（F=6.281, 7.264, 8.724, 6.817, 均P <0.01）;与对照组相比,野生鼠POF 组和miR-146 敲除POF 组小鼠卵巢组织Bax 蛋白表达水平降低（1.18±0.19. 0.61±0.14 vs1.81±0.21）,Bcl2 蛋白表达升高（0.59±0.05, 0.91±0.05 vs 0.58±0.02）,TLR4（1.10±0.12, 0.41±0.04 vs 1.13±0.11）和NF-κB（0.81±0.02, 0.31±0.06 vs 0.87±0.27）降低,差异均有显著性统计学意义（F=7.235, 6.714, 7.612 ,7.737, 均P<0.01）。结论 miR-146 具有减少卵泡颗粒细胞凋亡的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB 信号通路的调控和抑制炎症因子的释放相关。     

肺癌患者外周血单个核细胞CD28/B7家族共刺激分子mRNA表达的初步研究

摘要：目的：探讨肺癌患者外周血单个核细胞中CD28/B7家族共刺激分子mRNA的表达水平。 方法：收集50例（鳞癌24例,腺癌26例）肺癌患者作为疾病组,50例体检健康者作为健康对照组,提取外周血单个核细胞,用Taqman探针实时荧光定量RT-PCR检测各组CD28、CD80、CD86、CTLA-4 mRNA的表达情况。 结果：肺癌患者CD28、CD80、CD86、CTLA-4 mRNA表达水平均低于健康对照组(P均<0.05);鳞癌组CD28、CD80、CTLA-4 mRNA表达水平低于腺癌组（P<0.05）,CD86稍高于腺癌组（P>0.05）,但均低于健康对照组 (P均<0.05)。 结论：肺癌患者CD28/B7家族共刺激分子表达降低,且与组织学类型有关,可能导致免疫系统发生紊乱。     

B7/CD28分子激发T细胞抗多发性骨髓瘤细胞的作用

目的探讨Ｂ７／ＣＤ２８分子激发Ｔ淋巴细胞抗多发性骨髓瘤（ＭＭ）作用和提高ＭＭ细胞抗原性的机制。方法采用人Ｂ７１基因对人ＭＭ细胞的转导、ＣＤ２８激发型单克隆抗体（单抗）的激发、同种异体混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）、免疫表型分析和白细胞介素２（ＩＬ２）ＥＬＩＳＡ法定量检测。结果ＸＧ细胞转染Ｂ７１ｃＤＮＡ后,能稳定高表达Ｂ７１,转染Ｂ７１ｃＤＮＡ前后细胞表达ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ５８、Ｂ７２（ＣＤ８６）、ＣＤ４０Ｌ、ＨＬＡⅠ和ＨＬＡⅡ抗原均无明显变化,转染Ｂ７基因后可使肿瘤细胞的抗原性明显增加,在ＭＬＲ中,ＸＧ７１转基因细胞较ＸＧ细胞更能显著介导ＣＤ８＋Ｔ细胞的活化、增殖和ＩＬ２的分泌。ＣＤ２８激发型单抗与Ｂ７１分子相似,能显著介导同种异体Ｔ细胞的混合淋巴细胞反应。结论人ＭＭ细胞不能有效地激发Ｔ细胞抗肿瘤的主要原因之一为其不表达Ｂ７１分子,转染Ｂ７１分子或者加入ＣＤ２８激发型单抗均能有效地提高肿瘤细胞的抗原性和对Ｔ细胞的激发作用,ＣＤ２８激发型单抗临床治疗ＭＭ更具有可行性。     

双表达外源性4-1BBL/RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究

目的探讨K562细胞表达外源性蛋白4-1BBL/RANTES后,对T细胞、NK细胞有无活化作用,为进一步构建人工抗原提呈细胞提供前提。方法采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-RANTES。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、RANTES分子的K562细胞(K562/4-1BBL/RANTES)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/RANTES细胞用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达;对NK细胞同时检测了活化性受体NKG2D的表达情况。结果受K562/4-1BBL/RANTES细胞刺激后,CD3+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK细胞的活化性受体CD69的表达与未受刺激前相比,均有明显上调;但与单纯K562细胞刺激组相比,无显著差异。另外,CD8+T细胞CD69的表达及NK细胞NKG2D的表达无明显变化。结论将4-1BBL和RANTES共表达于K562细胞,不具备活化淋巴细胞的效应。     

阻断B7／CD28及CD40／CD154共刺激信号对致敏小鼠免疫功能的影响

本研究旨在通过阻断致敏小鼠的B7／CD28及CIM0／CD154共刺激信号途径,探讨其免疫功能的变化,为应用于异基因骨髓移植的免疫耐受提供实验依据。将致敏的BALB／c小鼠分成4组：①CTLA4Ig＋anti—CD154鼠源性同型对照抗体;②anti—CD154单克隆抗体＋CTLA4Ig鼠源性同型对照抗体;③CTLA4Ig＋anti—CD154单克隆抗体;④CTLA4Ig及anti—CD154单克隆抗体的鼠源性同型对照抗体。正常BALB／c小鼠应用CTLA4Ig及anti—CD154单克隆抗体的鼠源性同型对照抗体。给予每只小鼠CTLA4Ig和anti—CD154单克隆抗体或相对应的同型对照抗体各500μg,于移植前7天尾静脉输注,每组小鼠各5只。移植当天处死各组小鼠,应用流式细胞仪检测脾细胞中CD19＋CD69＋B细胞数量、CD44high／CD62Lhigh／及CD44high／CD62Llow-T细胞数量。用流式细胞仪或ELISA法检测血清中抗体及细胞因子的变化。结果表明：小鼠致敏后CD19＋CD69＋B细胞数量与正常小鼠相比明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）,阻断B7／CD28或／和CIM0／CD154共刺激信号通路后可见抑制效应（P〈0．01）,两者同时阻断具有协同作用（P〈0．01）。小鼠致敏后记忆性T细胞CD44high／CD62Lhigh及效应性T细胞CD44high／CD62Llow/-与正常相比亦明显增多（P〈0．01）。阻断共刺激信号通路后可使其明显抑制,CTLA4Ig和anti-CD154单克隆抗体联合应用具有协同效应（P〈0．01）。各组小鼠细胞因子及IgG、IgM抗体均无明显差异（P〉0．05）,但血清中致敏抗体检测显示致敏后特异性抗体升高,阻断共刺激信号通路后其明显被抑制（P〈0．01）。结论：阻断B7／CD28或CD40／CD154共刺激信号途径均能抑制致敏小鼠的细胞免疫功能及体液免疫功能;同时阻断有协同作用。     

银杏叶提取物对脐静脉内皮细胞Toll样受体4/核因子-κB途径及细胞间黏附分子1表达的影响

目的：观察具有抗血小板活化因子、清除氧自由基、抗氧化作用的银杏叶提取物对脂多糖介导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4/核因子-κB信号途径及细胞间黏附分子、E-选择素表达的影响.方法：①实验于2003-01/2004-12在大连医科大学附属第二医院实验中心完成.取健康产妇分娩后的新鲜婴儿脐带（由本院分娩的产妇自愿提供）,应用胶原酶消化人脐静脉内皮,收集内皮细胞进行培养.②将培养成融合状态的内皮细胞随机分为4组：对照组：M199培养基中不加其他干预物质;脂多糖组：M199培养基中加入脂多糖1 mg/L;脂多糖＋银杏叶提取物50组：预先加入银杏叶提取物50（80 mg/L）,60 min后加入脂多糖1 mg/L;脂多糖＋咖啡酸苯乙酯组：预先加入咖啡酸苯乙酯（20 mg/L）30 min.于预12 h,收集细胞检测Toll样受体4和细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平;干预1 h,收集细胞提取核蛋白检测转录核因子κB p65活化变化.③采用反转录聚合酶链反应检测Toll样受体4和细胞间黏附分子1、E-选择素mRNA表达水平;采用蛋白质印迹技术检测Toll样受体4蛋白表达水平及核因子-κB活化的变化;采用酶联免疫吸附方法检测人脐静脉内皮细胞表面细胞间黏附分子1,E-选择素蛋白表达.④多个样本均数的比较采用方差分析,多个样本均数的两两比较采用q检验结果：①人脐静脉内皮细胞Toll样受体4 mRNA和蛋白表达（A值）：脂多糖组明显高于对照组（P＜0.01）,脂多糖＋银杏叶提取物组和脂多糖＋咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组（P＜0.05～0.01）.②人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1、E-选择素mRNA和蛋白表达（A值）：脂多糖组明显高于对照组（P＜0.01）,脂多糖＋银杏叶提取物组和脂多糖＋咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组（P＜0.05～0.01）.③人脐静脉内皮细胞核蛋白核因子-κB p65活化（A值）：脂多糖组明显高于对照组（P＜0.01）,脂多糖＋银杏叶提取物组和脂多糖＋咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组（P＜0.05）.结论：银杏叶提取物可能通过抑制核因子-κB活化,进而减弱Toll样受体4/核因子-κB途径从而抑制脂多糖介导的黏附分子表达及炎症反应.     

白芍总苷对接触性皮炎小鼠核因子-κB、CD1a因子、肿瘤坏死因子的影响

目的探讨白芍总苷对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的治疗作用。方法以2,4-二硝基氟苯(DNFB)对小鼠进行皮肤致敏及激发,制成小鼠接触性皮炎模型,观察白芍总苷对小鼠耳肿胀度、组织病理改变及皮损处核因子-κB(NF-κB)、CD1a因子表达及血清肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的影响。结果白芍总苷能显著抑制ACD小鼠的耳肿胀度,可降低诱发后的小鼠血清TNF-α水平,下调NF-κB、CD1a的表达。结论白芍总苷对小鼠ACD有治疗作用,这与其下调炎性细胞因子水平有关,也可能与下调NF-κB、CD1a的表达有关。     

核因子-κB与细胞间黏附分子-1在角膜移植排斥反应中的表达及环孢素A对两者表达的影响

目的探讨核因子-κB在角膜移植排斥反应中的作用,为进一步研究角膜移植排斥反应发病机制及治疗提供新的思路.方法实验于2004-12/2005-02在南方医科大学珠江医院眼科完成.实验分组同基因移植组Wistar大鼠5只为供者,Wistar大鼠10只为受者;同种异体移植组Wistar大鼠5只为供者,SD大鼠10只为受者.同种异体移植+环孢素A治疗组Wistar大鼠5只为供者,SD大鼠10只为受者.建立大鼠穿透性角膜移植动物模型,用免疫组织化学染色法检测角膜移植术后植片中核因子-κB和细胞间黏附分子-1表达,显微镜下记数植片中央区400倍视野中阳性细胞数的平均值,并以植片排斥反应指数及病理学表现作参照.结果纳入实验大鼠30只,均进入结果分析.①同基因移植组角膜植片中的角膜上皮细胞、基质细胞及内皮细胞有核因子-κB和细胞间黏附分子-1的微弱表达,表达强度分别为3.16±1.25,2.83±1.54;同种异体移植组角膜上皮细胞、内皮细胞、基质层细胞及新生血管内皮细胞核因子-κB和细胞间黏附分子-1表达增强,分别为16.77±2.76,13.63±1.93;同种异体移植环孢素A治疗组角膜上皮细胞、内皮细胞、基质层细胞及新生血管内皮细胞有核因子-κB和细胞间黏附分子-1的弱表达,分别为6.77±1.86,4.57±1.91.②各组间核因子-κB和细胞间黏附分子-1的表达强度有显著性差异(P＜0.01).③对比观察发现,各组角膜植片中NF-κB和细胞间黏附分子-1的表达部位和强度相似,相关性分析核因子-κB与细胞间黏附分子-1的表达强度呈正相关(r=0.875,P＜0.01),且核因子-κB的表达与排斥反应指数也具有明显的正相关性(r=0.829,P＜0.01).结论核因子-κB可能通过调控细胞间黏附分子-1等基因的表达,参与角膜移植排斥反应的发生,在角膜移植免疫中起着中心调控者的作用.而免疫抑制剂GsA通过减弱核因子-κB核转位和发挥活性,抑制排斥反应.     

HIF-1α通过TLR4/NF-κB信号通路对 心肌缺血-再灌注大鼠心肌损伤的保护机制分析

目的分析缺氧诱导因子1α(HIF-1α)通过TLR4/NF-κB信号通路保护心肌缺血-再灌注(MIRI)大鼠心肌损伤的作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、MIRI组和HIF-MIRI组各10只,HIF-MIRI组于造模前24 h腹腔注射二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG,20μg/g),MIRI组和HIF-MIRI组大鼠采用手术结扎法制备MIRI模型,对照组只打开心包,不结扎。造模成功后,HE染色检测各组大鼠心肌组织损伤;试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平; ELISA法测定心肌组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β和IL-6水平;实时荧光定量(RT)-PCR测定HIF-1αmRNA的表达; Western Blot检测HIF-1α、Toll-样受体4(TLR4)、核转录因子(NF-κB)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达。结果与对照组相比,MIRI组和HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA的表达显著上调(P 0. 01),HIF-1α、TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与MIRI组相比,HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH水平、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6显著下降(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA和蛋白的表达显著上调(P 0. 01),TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著下调(P 0. 01),HE染色显示心肌组织的病理变化明显减轻。结论 HIF-1α可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放,降低机体炎症因子水平,改善MIRI心肌损伤。     

白芍总苷对接触性皮炎小鼠核因子-κB、CD1a因子、肿瘤坏死因子的影响

目的探讨白芍总苷对小鼠变应性接触性皮炎（ACD）的治疗作用。方法以2,4-二硝基氟苯（DNFB）对小鼠进行皮肤致敏及激发,制成小鼠接触性皮炎模型,观察白芍总苷对小鼠耳肿胀度、组织病理改变及皮损处核因子-κB（NF-κB）、CD1a因子表达及血清肿瘤坏死因子（TNF-α）水平的影响。结果白芍总苷能显著抑制ACD小鼠的耳肿胀度,可降低诱发后的小鼠血清TNF-α水平,下调NF-κB、CD1a的表达。结论白芍总苷对小鼠ACD有治疗作用,这与其下调炎性细胞因子水平有关,也可能与下调NF-κB、CD1a的表达有关。     

茯苓四逆汤调节TLR-4/NF-κB通道对脓毒症大鼠心肌抑制的保护机制研究

目的:探讨茯苓四逆汤调节TLR-4/NF-κB通道对脓毒症大鼠心肌抑制的保护作用机制.方法:SPF级SD雄性大鼠120只,随机分成6组:正常组、假手术组、模型组,中药低、中、高剂量组.通过盲肠结扎穿孔法(CLP法)制作脓毒症模型.造模后6h开始给药,持续给药3d.正常组、假手术组、模型组予等量生理盐水,中药各剂量组予相应剂量茯苓四逆汤,均为灌胃给药.观察大鼠生存状态,于术前和术后24h、48h、72h各选5只大鼠处死,采用Western blotting法及QPCR检测心肌组织NF-κB、H-FABP的蛋白和TLR-4的基因表达,同时以ELISA法检测心肌细胞TNF-α、IL-6含量.结果:与正常组比较,模型组及中药各剂量组TNF-α、IL-6水平及NF-κB、H-FABP蛋白表达明显升高,TLR-4基因表达亦增高;与模型组同时间点比较,中药各剂量组TNF-α、IL-6水平明显下降,NF-κB和H-FABP蛋白水平比较也有统计学差异;中药各剂量组同时间比较发现,剂量越高,其TNF-α、IL-6水平下降越明显,下调NF-κB和H-FABP蛋白表达水平越明显,TLR-4 mRNA转录水平降低的越明显,差异均有统计学意义.结论:茯苓四逆汤能减轻脓毒症大鼠心肌抑制,通过抑制炎症反应,负反馈调节TL R-4/NF-κ B信号通路,从而缓解心肌抑制.     

银杏叶提取物对脐静脉内皮细胞Toll样受体4/核因子-κB途径及细胞间黏附分子1表达的影响

目的观察具有抗血小板活化因子、清除氧自由基、抗氧化作用的银杏叶提取物对脂多糖介导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4/核因子-κB信号途径及细胞间黏附分子、E-选择素表达的影响.方法①实验于2003-01/2004-12在大连医科大学附属第二医院实验中心完成.取健康产妇分娩后的新鲜婴儿脐带(由本院分娩的产妇自愿提供),应用胶原酶消化人脐静脉内皮,收集内皮细胞进行培养.②将培养成融合状态的内皮细胞随机分为4组对照组M199培养基中不加其他干预物质;脂多糖组M199培养基中加入脂多糖1 mg/L;脂多糖+银杏叶提取物50组预先加入银杏叶提取物50(80 mg/L),60 min后加入脂多糖1 mg/L;脂多糖+咖啡酸苯乙酯组预先加入咖啡酸苯乙酯(20 mg/L)30 min.于预12 h,收集细胞检测Toll样受体4和细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平;干预1 h,收集细胞提取核蛋白检测转录核因子κB p65活化变化.③采用反转录聚合酶链反应检测Toll样受体4和细胞间黏附分子1、E-选择素mRNA表达水平;采用蛋白质印迹技术检测Toll样受体4蛋白表达水平及核因子-κB活化的变化;采用酶联免疫吸附方法检测人脐静脉内皮细胞表面细胞间黏附分子1,E-选择素蛋白表达.④多个样本均数的比较采用方差分析,多个样本均数的两两比较采用q检验结果①人脐静脉内皮细胞Toll样受体4 mRNA和蛋白表达(A值)脂多糖组明显高于对照组(P＜0.01),脂多糖+银杏叶提取物组和脂多糖+咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组(P＜0.05～0.01).②人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1、E-选择素mRNA和蛋白表达(A值)脂多糖组明显高于对照组(P＜0.01),脂多糖+银杏叶提取物组和脂多糖+咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组(P＜0.05～0.01).③人脐静脉内皮细胞核蛋白核因子-κB p65活化(A值)脂多糖组明显高于对照组(P＜0.01),脂多糖+银杏叶提取物组和脂多糖+咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组(P＜0.05).结论银杏叶提取物可能通过抑制核因子-κB活化,进而减弱Toll样受体4/核因子-κB途径从而抑制脂多糖介导的黏附分子表达及炎症反应.     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

TSNⅡA对大鼠IRI肾脏TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨丹参酮ⅡA(TSNⅡA)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)肾脏Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响及对炎症因子水平的下调作用,并分析其对肾脏IRI保护作用机制。方法选取雄性Wistar大鼠建立大鼠肾IRI模型,采用随机数字表表法随机分为五组,每组12只,其中A组大鼠为假手术组;B组为IRI模型组;C组为ST2825干预组,注射ST2825(100 mg/kg);D组为Bay-7082干预组,注射Bay-7082(50μg/kg);E组为TSNⅡA干预组:实验前3 d开始TSNⅡA干预组股静脉注射丹参酮ⅡA注射液(5 mg/kg),每天1次。18 h后,取大鼠下腔静脉血液2 ml,检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)浓度,并处死大鼠,应用免疫组化法检测肾脏TLR4和NF-κB阳性表达率。结果 B、C、D和E组TLR4和NF-κB阳性率均高于A组,C、D和E组TLR4和NF-κB阳性率均低于B组,E组TLR4和NF-κB阳性率分别为(38.27±2.87)%和(40.76±4.20)%,均高于C和D组,差异均具有统计学意义(P0.05)。B、C、D和E组血清TNF-α、IL-1和IL-6水平均高于A组,C、D和E组血清TNF-α、IL-1和IL-6水平均低于B组,E组血清TNF-α、IL-1和IL-6水平分别为(76.02±4.28)pg/L、(86.41±6.32)ng/L和(80.28±5.60)ng/L,均高于C和D组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论TSNⅡA能够下调大鼠肾脏TLR4和NF-κB水平,抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低炎症因子水平,实现对肾脏IRI的改善与保护作用。     

核因子-κB对糖尿病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1与细胞间黏附分子-1表达的影响

目的：探讨核因子-κB（NF．κB）对糖尿病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响，以及抑制其表达对肾脏的保护作用。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、糖尿病模型组（DM组）、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯干预组（DP组），用链脲佐茵素诱导糖尿病大鼠模型。于8周末检测血糖、糖化血红蛋白、肾重指数及尿白蛋白排泄率。应用免疫组织化学染色技术检测肾组织NF-κB、MCP-1以及ICAM-1的表达。结果：（1）与NC组相比，DM组大鼠肾重指数、尿白蛋白排泄率显著增高。DP组也有增高但显著低于DM组（均P〈0.01）；（2）DM组大鼠肾组织NF-κB、MCP-1以及ICAM-1的表达显著高于NC组，DP组的表达显著低于DM组而高于NC组（均P〈0．01）；（3）NF．κB的表达与MCP-1、ICAM-1、尿白蛋白排泄率、肾重指数呈明显正相关（r=0．885，P〈0，01；r=0．861，P〈0．01；r=0．796。P〈0．01；r=0．457。P〈0．01）。结论：糖尿病大鼠肾组织中NF-κB表达明显增加，抑制其活性可减少MCP-1、ICAM-1的表达，减轻单核／巨噬细胞的浸润。延缓糖尿病肾病的发展。     

自身反应性T细胞及共刺激分子CD28／CTLA-4／B7、CD40／CD40L和ITP

血小板抗原特异性自身反应性T细胞的活化在特发性血小板减少性紫癜（ITP）的发病机制中起着关键性作用，T细胞的活化除需要抗原递呈细胞表面MHCⅡ抗原复合物外还需要共刺激分子（第二信号），主要包括CD28／CTLA-4／B7和CD40／CD40L。本文就自身反应性T细胞和共刺激分子CD28／CTLA-4／B7、CD40／CD40L在ITP中的作用机制及潜在的治疗价值作一综述。