AML1/ETO阳性急性髓系白血病患者FLT3基因高表达及其临床意义

本研究旨在探讨AML1/ ETO融合基因阳性的急性髓系白血病M2（acute myeloid leukemia with maturation,AML/M2）患者FLT3基因表达量与临床症状和预后的相关性及其意义.采用RQ-PCR法定量检测21例AML1/ETO阳性AML-M2患者初诊骨髓标本中FLT3基因的表达水平,并分析FLT3基因表达量的高低与临床特征、实验室其它检测结果及预后的关系.结果表明：患者FLT3基因表达水平（FLT3基因/内参基因）初诊时为1.65％-261.5％.据此将FLT3基因表达水平大于35％者归为高表达组（12例）,其表达水平低于35％者归为低表达组（9例）.高表达组患者初诊时白细胞计数＞ 10×109/L者8例（66.67％）,低表达组2例（22.22％）;伴有髓外浸润患者的比例在高表达组为25％,低表达组为0％,但由于例数较少,暂无统计学意义（P=0.0805;P=0.2286）.两组患者年龄以及骨髓原始细胞比例无明显差异（P =0.1369,P=0.6923）.FLT3基因高表达组和低表达组化疗完全缓解（CR）率为（66.67％ vs 88.89％）,其差异无统计学意义（P =0.3383）,而复发率（66.67％ vs 22.22％）及死亡率（50％ vs 22.22％）的差异虽无统计学意义（P =0.0805,P=0.3666）,但有很明显的差异趋势.结论：AML1/ETO阳性AML-M2患者FLT3基因表达量高提示患者预后不良,易复发,常规检测初诊AML1/ ETO阳性AML-M2患者骨髓中FLT3基因表达量对患者的危险度分层、预后评估以及个体化治疗方案的选择可能具有重要的指导意义.     

AML1/ETO9a异构体在M2型急性髓系白血病中表达的研究

目的研究AML1／ETO9a异构体在急性髓系白血病M2型（AML—M2）中的表达。方法应用R带染色体核型分析，结合RT—PCR技术检测各型白血病、骨髓增生异常综合征（MDS）、白血病细胞系及正常人骨髓中AML1／ETO融合基因和AML1／ETO9a异构体的表达。结果在30例初诊AML-M2中有15例AML1／ETO9a异构体表达阳性，同时在20例AML—M2完全缓解患者、18例非M2型急性白血病患者、5例慢性粒细胞白血病（CML）患者、3例MDS患者、3个白血病细胞系（NB4、KG-1、K562）及5份正常骨髓标本中均未检测到AML1／ETO9a异构体。15例AML1／ETO9a异构体阳性患者中有13例同时具有AML1／ETO融合基因及t（8；21），2例仅表达AML1／ETO9a异构体，AML1／ETO融合基因及t（8；21）均未检测到。结论AML1／ETO9a异构体可能与AML—M2相关，并可能与AMLI／ETO融合基因共同参与白血病的发生。     

AML1-ETO融合基因在儿童急性髓系白血病中的预后评估价值

目的 评估AML1 ETO融合基因对儿童急性髓系白血病的预后作用.方法 对AML1 ETO阳性或阴性的103例急性粒细胞白血病（AML）患儿的临床资料进行回顾性分析,采用Kaplan-Meier曲线评估患儿无病生存（DFS）率和总生存（OS）率,COX回归模型评估儿童急性髓系白血病中的预后因素.结果 ①103例AML患儿均进行了双诱导方案化疗.53例AML1 ETO阳性患儿第1疗程和第2疗程的完全缓解率分别为70％和92％,远期复发9例（17％）,53例患儿的5年DFS率和OS率分别为（63.6±7.3）％和（74.5±8.9）％.50例AML1 ETO阴性患儿第1疗程和第2疗程的完全缓解率分别为72％和94％,远期复发17例（34％）,患儿的5年DFS率和OS率分别为（52.2±6.1）％和（60.7±7.3）％.AML1 ETO阳性患儿远期复发率显著低于AML1 ETO阴性患儿（P＜0.05）,5年DFS率和OS率均显著高于AML1ETO阴性患儿（P＜0.05）;②单因素分析显示AML1 ETO阳性患儿中,年龄是影响预后的独立危险因素,年龄越大出现事故或死亡的风险性越大（P＜0.05）.结论 相比较于AML1 ETO阴性的AML患儿,AML1 ETO阳性的AML患儿经治疗后,其疾病的远期复发率低,长期疗效好,并且年龄是影响其远期治疗效果的重要因素.     

AML1-ETO融合蛋白对BCL-2基因表达的影响

本研究旨在观察AML1-ETO在白血病细胞中对于抗凋亡基因日乳-2表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937-WT、U937-Mock和经AML1-ETO基因转染的U937-A／E1-4的细胞凋亡率;使用免疫印迹法检测cleavedcaspase-3蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测转染细胞和对照组细胞以及AMLM2患者白血病细胞BCL-2mRNA的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与BCL-2基因启动子之间直接的相互作用情况。结果表明：AML1-ETO转染细胞的凋亡率明显增加,且检测到cleavedcaspase-3蛋白的表达;转染了AML1—ETO 的U937细胞系和具有AML1—ETO融合基因的AML-M2患者中,BCL-2的mRNA表达水平显著下调;转染细胞沉淀富集的AML1-ETO直接结合的DNA中含有BCL-2基因的启动子序列。结论：BCL-2是AML-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调BCL-2的表达。     

急性髓系白血病中RAGE-1基因的表达

摘要本研究通过检测RAGE-1基因在急性髓系白血病（AML）患者骨髓单个核细胞（BMMNC）中的表达,探讨其表达水平与临床变量的相关性。应用RQ-PCR方法检测94例初诊AML患者BMMNC中RAGE-1基因表达水平,分析其与患者年龄、性别、血象、诊断分型和预后的关系,并比较治疗前后RAGE-1表达量的变化。结果表明：26例（28％）AML患者存在着RAGE-1转录本的过表达（1．34-16．34,中位3．07）;RAGE-1过表达阳性组与阴性组在性别、年龄、血象和FAB亚型之间均无显著性差异;不同核型预后分组之间RAGE-1过表达频率无显著性差异,且不同类型核型AML患者中RAGE-1转录本过表达频率也无差异。治疗后获得完全缓解的患者RAGE-1表达水平较治疗前明显降低。RAGE-1过表达组与阴性组患者的总体生存时间并无显著性差异。结论：RAGE-1基因过表达是AML中的一个常见分子事件,但对患者预后并无明显影响。     

MCL-1在原代急性髓系白血病细胞中的表达及其临床意义

目的:通过检测MCL-1在核型正常的原代急性髓系白血病(AML)细胞中的表达,探讨其表达水平与临床参数和预后之间的关系。方法:收集37例初诊AML(除APL外)且染色体核型为正常的患者标本,采用CD3单克隆抗体负分选法分离出原代AML细胞,应用实时荧光定量RT-PCR(FQ RT-PCR)和Western b1ot方法检测MCL-1及其蛋白表达水平,分析MCL-1表达水平与初诊时白细胞计数、血小板计数、血红蛋白水平、原始细胞比例、髓外浸润、肿瘤药敏、获得CR所需疗程数等临床参数之间的关系。结果:在原代AML细胞中,MCL-1及其蛋白水平的表达量与白细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数、原始细胞比例无相关性;初诊时发生髓外浸润和无髓外浸润的AML患者MCL-1表达无差别;1-2个疗程标准方案后获得CR的AML患者,其MCL-1表达水平低于未获得CR的AML患者(P0.05);MCL-1蛋白表达高的原代AML细胞对常规化疗药物体外药敏的耐药率高于表达低者(P0.05)。结论:MCL-1表达量可能与AML患者的多药耐药相关,可能成为AML患者临床预后判断的一个指标。     

多参数流式细胞术在AML1/ETO阳性急性髓系白血病诊断中的应用研究

目的本研究旨在探讨多参数流式细胞术(multiparameter flow cytometry,MFCM)在AML1/ETO融合基因阳性的急性髓系白血病(AML)诊断中的应用价值以及分析AML1/ETO融合基因阳性患者的骨髓细胞免疫表型,为病人早期诊断、分型和预后分层提供依据。方法将细胞遗传学或分子遗传学检查到AML1/ETO融合基因阳性作为金标准,筛选南昌大学第一附属医院2010年1月-2018年1月期间收治初诊AML1/ETO阳性AML患者44例,阴性患者44例,收集所有患者实验室信息(主要包括骨髓细胞形态学,多参数流式细胞术,细胞遗传学或分子遗传学检测结果)。采用四格表分别对骨髓细胞形态学和流式细胞术两种方法诊断AML1/ETO融合基因结果真实性和可靠性进行评价,比较骨髓细胞形态学、流式细胞术检查的诊断效能指标,探讨多参数流式细胞术在AML1/ETO融合基因相关的AML早期诊断中的应用价值并分析AML1/ETO阳性AML的免疫表型特点。结果 AML1/ETO阳性患者均表达CD117、CD34、CD33以及HLA-DR(阳性率100.00%),43例表达CD13(阳性率97.73%),42例表达CD19(阳性率95.45%)。CD117、CD34、HLA-DR以及CD19共表达的阳性率高达95.45%,而在44例AML1/ETO阴性患者中,均无此表型特点。多参数流式细胞术检测的灵敏度(81.82%vs25.00%),符合率(88.64%vs62.50%)以及阴性预测值(84.00%vs57.14%)明显高于形态学,漏诊率(18.18%vs75.00%)明显低于形态学,特异度(95.50%vs100%)略低于形态学,综合诊断效能明显优于形态学。结论多参数流式细胞术在AML1/ETO融合基因阳性AML的诊断中具有重要的应用价值,CD117、CD34、HLA-DR以及CD19的共表达是AML1/ETO融合基因阳性AML独特的免疫表型。     

AML-1/ETO基因相关的AML-M2型白血病免疫表型分析

本研究探讨AML/ETO基因重排的FAB分型为AML-M2患者的骨髓免疫表型的特征和预测性,以及与急性早幼粒白血病（APL）的区别。应用流式细胞术分析17例经荧光原位杂交（FISH）检测AML-1/ETO融合基因阳性、FAB分型为AML-M2（M2/ETO＋）患者骨髓的免疫表型,并与34例AML-1/ETO阴性、FAB分型AML-M3、临床诊断为APL患者进行了比较。结果发现,17例M2/ETO＋患者骨髓中均可见一群（15.89%-68.53%）原始细胞和一群SSC较高异质性的粒细胞。原始细胞表达干细胞相关抗原CD34、HLA-DR和髓系抗原CD33、CD13、MPO。在M2/ETO＋患者中CD33表达强度显著低于APL患者（P〈0.001）,HLA-DR、CD19和CD34＋CD56＋共表达的阳性率均显著高于APL患者（P〈0.001）,而CD9的表达率则显著低于APL患者（P〈0.001）。M2/ETO＋患者粒细胞表达分化的髓系抗原CD11b和CD15,并可分为CD15＋CD11b-和CD15＋CD11b＋两群,而成熟的粒细胞标志CD10均为阴性,与早幼粒细胞的表达图形相似。17例（100%）M2/ETO＋患者的粒细胞均表达CD56,显著高于M3患者（6/34例,17.56%）。结论：AML-1/ETO基因重排的AML-M2型（FAB分型）白血病具有独特的免疫表型,对其基因重排有较高的预测性。应用多参数免疫分型技术可较容易地将M2/ETO＋亚型白血病与APL鉴别。     

B7-H1基因表达水平预测急性髓系白血病患者的诱导治疗反应

为了探讨急性髓系白血病（AML）患者白血病细胞BT-H1基因表达的临床意义,本研究应用SYBRGreenI实时定量RT-PCR法检测了40例初治AML患者骨髓单个核细胞（BMMNC）B7-H1 mRNA的表达情况,跟踪检测了10例复发患者BMMNCB7-H1 mRNA的表达情况,并对40例AML患者的临床特征与B7-H1基因表达水平进行相关性分析。结果表明：初治AML患者BMMNCB7-H1 mRNA表达阳性,但表达水平低于正常人。复发时B7-H1 mRNA表达水平较初诊时明显升高。B7-H1基因表达水平与患者性别、年龄、外周血白细胞计数、骨髓中幼稚细胞比例、CD34抗原阳性与否均无相关性,但与治疗反应有显著相关性。诱导化疗后未获完全缓解（CR）的患者,其治疗前B7-H1 mRNA表达水平明显高于化疗后获得CR的患者。结论：初诊AML患者BMMNCB7-H1基因表达水平与患者在诱导化疗后是否获得缓解呈负相关。B7-H1基因表达水平有可能用于预测AML患者的预后。     

自体外周造血干细胞移植治疗13例AML1/ETO(+)急性髓系白血病的疗效观察

本研究分析自体外周造血干细胞移植治疗AML1／ETO（＋）急性髓系白血病（AML）的疗效及定量监测融合基因AML1／ETO在治疗中的应用。对2007年8月-2012年11月在本院进行自体移植的AML1／ETO（＋）AML患者13例进行回顾性分析,中位随访26（7．8—75．8）个月,计算总生存率（OS）、无白血病生存率（1eukemia—freesurvival,LFS）和累积复发率（relapserate,RR）,并对生存情况进行单因素分析。结果表明,3年的总体存活率为（70．5±15．3）％,3年的无白血病存活率为（51．3±16．7）％,3年的累积复发率为48．7％。在5例复发患者中对4例进行了A舭J／ETO定量监测,发现形态学复发前AML1／ETO表达量均明显升高。在单因素分析中,患者年龄、性别、初诊时白细胞数量、自确诊白血病到进行移植的时间间隔、回输MNC数量等对总体存活率的影响均差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论：自体造血干细胞移植对AML1／ETO（＋）AML患者具有良好疗效,定期定量监测AML1／ETO表达量可预知早期复发,中高危患者复发后采用异基因移植可再次获得长期生存机会。     

急性髓系白血病中HtrA2和WT1基因的表达

本研究通过检测HtrA2和WT1基因在急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞及细胞系中的表达,探讨其表达水平与临床变量的关系及二者之间的相关性。应用RQ-PCR方法检测104例初诊AML患者的HtrA2和WT1基因表达水平;比较其表达量与正常对照的差别,并分析与年龄、性别、白细胞计数、诊断分型、预后分型及治疗疗效的关系;比较治疗前后表达量的变化,分析HtrA2与WT1二者相关性。结果表明:AML患者骨髓细胞中HtrA2表达量显著低于正常对照组(P<0.01),而WT1则显著高于正常对照组(P<0.01);二者表达量与患者年龄、性别、白细胞计数无关;HtrA2在不同的NCCN预后分组中表达量无显著差异,而WT1在预后良好组表达量明显低于预后中等组(P=0.003);无论完全缓解(CR)组还是非完全缓解(non-CR)组HtrA2表达量在治疗后均显著高于治疗前(P<0.05),而WT1表达量只有在CR组治疗后才低于治疗前(P<0.01),non-CR组治疗后虽然也低于治疗前,但差异无统计学意义;HtrA2与WT1的表达水平呈弱负相关(r=-0.249,P=0.011)。结论:HtrA2和WT1表达与白血病的发生、发展密切相关,二者表达水平呈负相关,上调HtrA2基因的表达和干扰WT1基因的表达有望成为白血病治疗的靶点。     

成人急性髓系白血病患者AML1融合基因的快速检测及其临床意义(英文)

本研究旨在检测AML1相关融合基因在成人急性髓系白血病(AML)患者中的发生率,并初步分析AML1融合基因与AML发生、发展及预后的相关性。利用多重巢式RT-PCR方法对168例初治AML患者的骨髓标本进行AML1融合基因(AML1-ETO,AML1-EVI1,AML1-MDS1,AML1-MTG16,AML1-PRDM16,AML1-LRP16,AML1-CLCA2和AML1-PRDX4)的快速检测。结果表明,168例AML初治患者的骨髓标本中,有18例出现AML1融合基因,其阳性率为10.7%,其中12例AML1-ETO阳性(7.14%),2例AML1-EVI1阳性(1.19%),1例AML1-MDS1阳性(0.6%),1例AML1-MTG16阳性(0.6%),1例AML1-PRDM16阳性(0.6%),1例AML1-CLCA2阳性(0.6%)。在AML1-ETO阳性患者中,有10例经过初次化疗达到完全缓解,2例经过了第二次化疗达到完全缓解;2例AML1-EVI1阳性患者经过初次化疗后并没有达到完全缓解;AML1-MDS1,AML1-MTG16,AML1-PRDM16及AML1-CACL2阳性患者经过初次化疗后均未达到完全缓解。结论:AML1融合基因在AML中较为常见,可以作为急性白血病诊断和预后标志,同时也为微小残留病(MRD)的检测提供了分子标志。     

Musashi-2在急性髓系白血病干细胞中的表达研究

本研究旨在探讨检测AML患者Musashi-2（Msi2）的表达与其他临床参数特别是CD34表达的相关性.提取临床初诊确诊为急性髓系白血病（AML）患者骨髓标本的总RNA,荧光定量RT-PCR检测患者Msi2的表达水平;流式细胞术检测上述病人的CD34表达水平;综合分析其他实验室检查资料和患者的临床表现,分析初诊AML患者Msi2表达情况以及Msi2表达与CD34表达的相关性.结果表明：①初诊AML患者骨髓Msi2表达显著高于正常对照骨髓（P＜0.05）,各亚型中Msi2表达以M1、M4和M5中表达较高,显著高于AML其他亚型中的表达（P＜0.05）;②Msi2的表达与患者年龄、性别、初诊时外周血白细胞数、AML1/ ETO融合基因、PML/ RARa融合基因均无关（P＞0.05）;③CD34＋组AML患者Msi2表达显著高于CD34-AML患者（P＜0.05）.结论：Msi2表达于白血病干细胞,Msi2在初诊AML中高表达,以M1、M4和M5亚型中表达尤为显著,在CD34＋ AML患者中Msi2高表达.     

急性髓系白血病Kindlins和血管生成素表达研究

本研究旨在探讨不同白血病细胞系、成人急性髓系白血病Ang-1、Ang-2、Tie-2、Kindlin-2、Kindlin-3的表达情况及其意义。采用RQ-PCR方法检测88例AML患者、9例非肿瘤患者(对照组)以及K562、KG-1a、U937、HL-60、Jurkat细胞株中Ang-1、Ang-2、Tie-2、Kindlin-2、Kindlin-3表达水平,分析阳性率及表达水平在AML患者与对照组间的差异,探讨上述5种基因之间及其与AML分型、预后的关系。结果表明,Ang-1,Ang-2,Kindlin-3在K562、KG-1a、HL-60、U937、Jurkat细胞系中均有表达,Tie-2仅表达于KG-1a、HL-60细胞系中,Kindlin-2表达于K562、KG-1a、HL-60中。5种基因均表达于AML患者及对照组中。Ang-1、Ang-2在起病时白细胞计数较高组的表达水平较高(P<0.001,P=0.001),在伴有t(8;21)和t(15;17)的AML患者中表达均较低(P<0.001,P=0.005)。Ang-1在NCCN预后良好组表达较低(P=0.020);Ang-1低表达组完全缓解率(CR)较高(P=0.027)。Kindlin-2在AML患者中表达水平较低(P=0.010),起病时白细胞计数较高组的表达水平较低(P=0.020),伴有t(8;21)和t(15;17)AML的表达均较高(P=0.016),治疗缓解后Kindlin-2及Kindlin-3表达明显升高(P<0.001,P=0.004)。结论:Ang-1与AML不良预后因素相关;Kindlin-2在AML中低表达,与AML良好预后因素相关,可能是一个预后较好的标志。     

CD200在急性髓系白血病中的表达特点及其临床意义

本研究探讨急性髓系白血病（acute myelocytic leukemia,AML）中CD200的表达率与临床特征的关系,分析CD200在AML预后判断中的价值。应用流式细胞术检测CD200及免疫表型,用R显带技术分析染色体核型,FISH技术检测AM L1/ETO、PM L/RARa和inv（16）,PCR方法检测AM L1/ETO和PM L/RARa融合基因。结果表明：在54例初诊患者中CD200抗原表达阳性率为57.41%（31/54）;CD200抗原表达在性别与年龄方面差异无统计学意义（P〉0.05）;CD200抗原表达在CD34和CD117之间具有显著的统计学意义（P〈0.05）;CD200抗原表达在染色体核型差异方面无统计学意义（P〉0.05）;核心结合因子（core binding factor,CBF）阴性的AML中CD200抗原表达在CD34和CD117表达方面均具有显著的统计学意义（P〈0.05）。结论：CD200的表达与AML预后不良相关。