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1.
本研究探讨致敏小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞的分选及体外扩增。流式细胞术检测致敏小鼠及正常小鼠体内CD4+ CD25+ Treg细胞水平,免疫磁珠分选方法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载抗CD3/CD28单克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激CD4+ CD25+ Treg细胞进行体外扩增培养,用0.4%台盼蓝染色并计数检测细胞的活性,流式细胞术检测分选后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3基因的表达。结果表明:致敏小鼠体内CD4+ CD25+ Treg水平较正常小鼠升高(P<0.05)。分选出CD4+ CD25+ Treg细胞纯度平均达到87%,细胞活性大于97%,高表达Foxp3基因。体外扩增2周后细胞数扩增倍数能够达到42倍,CD4+ CD25+ Treg细胞所占比例为85.32%,Foxp3表达由(76.92±1.72)%稍下降至(75.33±2.11)%(P>0.05)。结论:免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4+ CD25+ Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力;体外成功扩增了CD4+ CD25+ Treg细胞,扩增后的CD4+ CD25+ Treg细胞表面标记及Foxp3基因表达无明显改变。 相似文献
2.
背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25-T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25-T细胞中的表达。方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25-T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25-T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25-T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25-T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25-T细胞中高表达。 相似文献
3.
目的为验证从C57BL/6小鼠脾脏中分离出高纯度CD4+CD25+Treg细胞及证实CD4+CD25+Treg细胞中Foxp3基因的表达。方法使用免疫磁珠分选出CD4+CD25+Treg细胞,流式细胞仪检测纯度;使用TRIZOL抽提Foxp3基因mRNA,使用RT—PCR方法逆转录出Foxp3基因的cDNA。结果从C57BL/6小鼠脾脏中分离出了纯度达到90%CD4+CD25+Treg。进一步应用RT—PCR技术克隆出Foxp3的cDNA,通过凝胶电泳证实了克隆出了Foxp3的cDNA。结论使用免疫磁珠方法能够分离出C57BL/6小鼠CD4+CD25+Treg细胞,并进行了Foxp3基因表达的鉴定。 相似文献
4.
目的利用不同种类树突状细胞(dendritic cells,DC)体外扩增获得表型和功能稳定的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)。方法免疫磁珠法(MACS)分离Balb/c小鼠CD4+CD25+调节性T细胞,利用与调节性T细胞同基因或异基因成熟DC、未成熟DC和调节性DC刺激其扩增,流式细胞术测定其纯度和表型。以CD4+CD25-T细胞作为反应细胞,验证扩增前后Treg细胞的免疫抑制功能。结果MACS分离的CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(95.38±1.82)%,同基因和异基因DC都能有效刺激Treg细胞体外扩增,其中同基因成熟DC扩增效果最为明显。而且同基因成熟DC扩增后CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(94.16±1.88)%,而且高表达Foxp3分子。当CD4+CD25+调节性T细胞与效应T细胞比例为1∶1时,能够有效的抑制效应T细胞的增殖,而且,同基因成熟DC扩增的CD4+CD25+调节性T细胞的抑制效果比新分离的Treg效果更好。结论同基因成熟DC能够体外扩增表型和功能稳定的Treg细胞。 相似文献
5.
目的:研究手术前后肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的比例变化,探讨其与肿瘤免疫的关系。方法:采用流式细胞术检测38例手术前后肺癌患者和35例健康对照者外周血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例。结果:肺癌患者手术后外周血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例为(13.27±3.15)%,显著低于手术前的(19.76±3.42)%(P〈0.05);手术前显著高于对照组(10.46±2.87)%(P〈0.05),而手术后与对照组无明显差异(P〉0.05)。结论:肺癌患者手术切除肿瘤后,外周血CD4+CD25+Treg水平明显下调,有助于肺癌患者免疫功能的恢复,增强肿瘤的免疫应答和抗瘤作用。 相似文献
6.
背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差.目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25- T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25- T细胞中的表达.方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25- T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25- T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25- T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+ T细胞为阳性对照组.荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达.结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+ T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25- T细胞高表达Foxp3基因.表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25- T细胞中高表达. 相似文献
7.
目的:探讨检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血 CD4+ CD25+ Foxp3+调节性 T 淋巴细胞的水平与意义。方法采用流式细胞术检测32例 PBC 患者和23例健康体检者外周血 CD4+ CD25+ Foxp3+调节性 T 淋巴细胞亚群比例;采用实时荧光定量聚酶链反应(PCR)技术检测人叉头型基因 p3(Foxp3)mRNA 表达的水平。结果PBC 患者外周血 CD4+ CD25+ Foxp3+调节性 T 淋巴细胞明显低于对照组(P <0.05);Foxp3的 mRNA 水平差异无统计学意义(P >0.05)。结论PBC 患者外周血 CD4+ CD25+ Foxp3+调节性 T 淋巴细胞减少,免疫抑制功能减弱,提示 CD4+ CD25+ Foxp3+调节性 T 淋巴细胞在 PBC 的免疫发病机制中可能起重要作用,对评估 PBC 患者细胞免疫状态和预后有重要价值。 相似文献
8.
急性白血病儿童外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞和NK细胞的变化及其在白血病免疫中的意义 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究观察急性白血病患儿外周血CD4^+CCD25^+调节性T细胞(CD4^+CD25^+Treg)及自然杀伤细胞(nature killer cell,NK)在不同病程阶段的变化,了解白血病患儿的免疫状态,以探讨CD4^+CD25^+Treg细胞及NK细胞在急性白血病肿瘤免疫中的意义。建立流式细胞术检测外周血CD4^+CD25^+Treg细胞和NK细胞的方法:检测急性白血病初诊患儿25例、完全缓解患儿28例及20例正常健康对照者外周血CD4^+CD25^+Treg细胞及NK细胞的数量及比例。结果表明:初诊组、完全缓解组及对照组外周血CD4^+CD25^+CD127^+占CD4^+T细胞的比例分别为(9.55±2.41)%,(8.54±2.51)%和(6.25±0.85)%,在初诊患儿组和缓解患儿组高于正常对照组,且在初诊患儿组高于完全缓解组(P〈0.05);同时,与正常对照组比较,急性白血病患儿的NK细胞数量减少,完全缓解后患儿组NK细胞数量仍低于正常对照(4.11±3.87%和10.41±7.20%w14.06±5.95%,P〈0.05)。结论:联合应用CD4、CD25及cDl27检测Treg细胞简便可行、重复性好、检测结果可靠、准确,CD4^+CD25^+CD127^+T细胞可较好地反映CD4^+CD25^+Treg细胞的比例。急性白血病患儿外周血中Treg细胞数量升高,NK细胞数量降低,表明急性白血病患儿NK细胞免疫功能处于抑制状态。Treg细胞可能在白血病的发生、发展中起一定作用,参与NK细胞的调节可能是Treg细胞在白血病免疫中的一个环节。 相似文献
9.
本研究探讨自体调节性T细胞对T细胞淋巴瘤细胞系EIA的作用及其机制。应用免疫磁珠分离法(MACS)分选获得C57BL/6小鼠CD4+CD25+T细胞(Treg细胞),流式细胞术检测细胞纯度及Foxp3表达情况,MTY比色法检测分选的Treg细胞对T细胞淋巴瘤细胞系EL4的体外抑制作用,应用ELISA方法检测TGF—B1和IL-10的含量。结果表明:MACS分选获得CIM+CD25+T细胞纯度达91.6%,活细胞比例〉95%,Foxp3表达率为78.9%。MTT比色法证实自体Treg细胞在体外能够明显抑制EIA细胞的增殖(P〈0.05),且呈细胞因子非依赖性。作者首次证明,自体Treg细胞体外有明显抑制T细胞淋巴瘤细胞系EIA增殖的作用。 相似文献
10.
CD4^+CD25^+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能,其功能紊乱或数目下降是导致自身免疫性疾病的重要原因之一。近年来,研究发现Foxp3在调控CD4^+CD25^+Treg细胞的发育和功能上起着重要作用。本文就CD4^+CD25^+Treg细胞的免疫抑制机制、Foxp3在其发育和功能上的作用、IL-2和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)等对其产生、维持及活化的作用等方面作一综述。 相似文献
11.
背景:目前天然CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞稀少,远远不能满足临床需求。目的:建立有效的体外培养扩增小鼠CD4+CD25+T细胞体系。方法:从C57/BL6小鼠骨髓获得的成熟树突状细胞联合不同剂量转化生长因子β,体外扩增同基因或异基因CD4+CD25+T细胞。结果与结论:经过2周培养,磁珠分选后的CD4+CD25+T细胞的扩增倍数为自然调节性T细胞的(17.3±10.6)倍,0.2,2μg/L质量浓度对T细胞的扩增能力最强;经扩增后的T双阳性率为(85.38±1.82)%,CD127阳性率(78.86±0.91)%;体外扩增的调节性T细胞高表达FOXP3为天然调节性T细胞的1.5倍;调节性T细胞体外抑制实验结果表明:调节性T细胞对自体或异体CD4+T细胞抑制能力随着效靶比浓度的降低而降低,体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体CD4+T细胞抑制率(60.1±0.71)%,对异体CD4+T抑制率为(35.5±0.57)%(P<0.05)。提示在体外成功扩增了CD4+CD25+T细胞,并且具有免疫抑制功能,此方法扩增细胞数量多,细胞纯度有很大提高,方法简便。 相似文献
12.
目的:探讨溃疡性结肠炎( UC)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞( CD4+CD25+Treg)水平及其与疾病活动性关系。方法采用流式细胞仪检测50例不同病期UC患者( UC组)和50名正常人(对照组)的外周血CD4+CD25+Treg水平,全自动ESR分析仪测定ESR。结果活动期UC组外周血CD4+CD25+Treg水平均明显低于对照组,且随着其病情程度的加重,其水平逐渐降低(P<0.05)。 UC组CD4+CD25+Treg水平与ESR水平呈负相关(r=-0.432, P<0.05)。结论 UC患者外周血CD4+CD25+Treg降低水平与其炎症活动程度相关,其水平检测有助于判断病情严重程度。 相似文献
13.
目的研究正常育龄妇女月经周期中雌激素变化对CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)水平的影响。方法采用流式细胞术检测20例正常育龄妇女月经周期中不同时期外周血Treg细胞水平;同时采用放射免疫法(RIA)检测外周血中雌激素水平,并分析两者相关性。结果 Treg细胞水平随雌激素的变化而波动,Treg细胞及雌激素水平在月经周期第13天最高,分别为[(20.72±2.24)%、(204.27±24.01)ng.L-1],在月经周期第3天最低,分别为[(11.27±1.23)%、(37.90±8.94)ng.L-1](均P〈0.05);Treg细胞水平与雌激素水平呈正相关(r=0.615,P〈0.005)。结论雌激素对体内Treg细胞的表达有调节作用。 相似文献
14.
目的探讨慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量与HCV-RNA的相关性。方法用流式细胞仪检测80例CHC患者和30例健康对照者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达,荧光定量PCR检测HCV-RNA含量。结果 CHC患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞明显高于健康对照组(P〈0.01),且随HCV-RNA载量增高,患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的含量逐渐升高(P〈0.01)。CD4+CD25+Treg细胞与HCV-RNA取对数后呈正相关(r=0.588,P〈0.01),与ALT呈正相关(r=0.306,P〈0.01)。结论 CHC患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞增高,且与HCV-RNA含量及ALT升高具有一致性。 相似文献
15.
目的观察磁珠分选的LFA-1基因敲除小鼠(LFA-1-/-)CD4+、CD62L+naive T细胞在不同刺激因素下向CD4+Foxp3+调节性T细胞(iTreg)及CD4+IL17A+细胞(TH17)之间转变的可塑性。方法采用LFA-1-/-C57/B6小鼠,免疫磁珠分选小鼠脾脏单个核细胞CD4+CD62L+naive T细胞并检测纯度,分选的naive T细胞完全培养基重悬后置于抗体包被的96孔细胞培养板中,分为iTreg组、TH17组(分为加IL6亚组、加IL6及IL23亚组)。其中iTreg组培养体系中添加重组小鼠IL2300U/ml,重组人TGFβ30ng/ml,TH17两亚组分别添加重组小鼠IL630ng/ml,重组人TGFβ3ng/ml及重组小鼠IL2330ng/ml、IL630ng/ml、重组人TGFβ3ng/ml,将96孔培养板置于37℃温箱培养90~108个小时,流式检测Foxp3+/CD4+T及IL17A+/CD4+T,荧光定量PCR检测分选细胞在不同刺激因素诱导下转录因子Foxp3mRNA及RORγtmRNA表达的变化。结果磁珠分选CD4+、CD62L+naiveT细胞纯度高于95%,分选出的naiveT细胞在IL2和TGFβ作用下能诱导出iTreg细胞,其特异性转录因子foxp3mRNA表达升高,而加入TGFβ和IL6或IL23作用下可诱导出TH17细胞,其特异性转录因子RORγtmRNA表达升高。结论 LFA-1-/-小鼠的CD4+、CD62L+naive T的诱导分化具有可塑性,在不同刺激因素作用下可实现iTreg和TH17细胞之间的诱导转变。 相似文献
16.
CD4+CD25+T调节细胞具有低反应性和免疫抑制性两大特点,分为天然CD4+CD25+T调节细胞和诱导CD4+CD25+T调节细胞两群,除表达CD25外,还表达胞浆细胞毒性T淋巴细胞抗原4和糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体,Foxp3是它的特异性转录因子。CD4+CD25high T细胞是CD4+CD25+T细胞中发挥调节功能的亚群,与多种免疫细胞有复杂的相互关系。近年来发现CD4+CD25+T调节细胞在多种血液系统疾病中,存在数量变化和功能异常。骨髓移植后,输注供体CD4+CD25+T细胞,能够抑制GVHD,同时保留GVL作用。本文对此作文献综述。 相似文献
17.
目的研究原发性肝癌(HCC)患者外周血中CD4+ CD25+细胞和CD8+ CD28-调节性T细胞的表达及意义。方法采用流式细胞仪测定93例HCC患者和24名健康人外周血中的CD4+ CD25+细胞和CD8+ CD28-调节性T细胞水平。结果 HCC患者外周血中的CD4+ CD25+细胞[(14.39±4.58)%]和CD8+ CD28-调节性T细胞[(24.05±5.64)%]表达均显著高于对照组[(8.37±1.73)%、(15.93±4.84)%,P〈0.05];CD8+CD28-调节性T细胞与HCC的分期呈正相关(r=0.463,P〈0.001)。结论 CD4+ CD25+细胞和CD8+ CD28-调节性T细胞在HCC患者外周血中呈高表达,且CD8+ CD28-调节性T细胞与HCC的病情及预后相关。 相似文献
18.
目的 测定急性动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平的变化,并探讨其临床意义.方法 收集2012年2-12月在吉林大学中日联谊医院神经内科住院的发病7天内的急性期动脉粥样硬化性脑梗死患者(即梗死组)48例和同期住院健康体检者(即对照组)30例外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)水平,分别记录梗死组患者神经功能缺损程度、梗死病灶体积以及颈动脉内-中膜厚度.结果 ①梗死组不同神经功能缺损程度患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比均较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);其中,重度组外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比低于中度组,中度组外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比低于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05).②梗死组不同梗死病灶体积患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比均较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);其中,大灶组外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比低于中灶组,中灶组外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比低于小灶组,差异均有统计学意义(P<0.05).③梗死组患者均经颈动脉血管超声证实有颈动脉粥样硬化(CAS),根据病变程度分为三组:颈动脉内膜增厚组(A亚组)、颈动脉斑块组(B亚组)、颈动脉狭窄组(C亚组),三组患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比均较对照组降低.其中,C亚组外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比低于B亚组,B亚组外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)百分比低于A亚组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)水平在脑缺血急性期明显降低,与脑梗死后神经功能缺损程度、梗死灶体积、颈动脉粥样硬化程度有关. 相似文献
19.
目的探讨半乳凝素-10(galectin-10)在CD4 CD25 CD127low/-调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)中的表达及其与Foxp3的相关性。方法通过流式细胞术分选健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中Treg细胞与CD4 CD25-CD127 T细胞,经微量抽提RNA后,用RT-PCR检测galectin-10和Foxp3的mRNA表达水平。结果galectin-10和Foxp3的mRNA显著表达于Treg细胞,几乎不表达于CD4 CD25-CD127 T细胞。健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中的结果一致。结论ga-lectin-10基因高表达于Treg细胞中,可以作为Treg细胞一项新的标志物。 相似文献
20.
目的探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)在慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染中的免疫调节作用,分析HBV感染的慢性化是否与外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达率有关。方法本院2008年6月-2009年5月收治的HBV感染者60例,其中乙型肝炎活动期患者30例,HBV携带者30例,选择同期门诊体检者30例为对照者。应用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达,结合HBV感染者临床情况分析各组外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的比率与血清HBeAg和HBVDNA含量的关系。结果HBV感染及HBV携带者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达率较健康对照组显著增高[(8.68%±1.23)%与(1.38±0.6)4%,P〈0.01];慢性乙肝携带组与慢性乙肝恢复组比较,外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达率差异有统计学意义[(8.68±1.23)%与(2.63±1.38)%,P〈0.01];HBVDNA病毒含量及Ⅻb堍含量与外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达率之间存在正相关(P〈0.01)。结论HBV感染者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平与疾病进展明显相关,Treg在慢性乙型肝炎携带者中明显增高,并与病毒载量相关,提示Treg在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节作用,可能是造成乙肝病毒感染慢性化的重要因素。 相似文献