CD4＋CD25＋Treg细胞的分选、表型鉴定及Foxp3表达鉴定

目的为验证从C57BL／6小鼠脾脏中分离出高纯度CD4＋CD25＋Treg细胞及证实CD4＋CD25＋Treg细胞中Foxp3基因的表达。方法使用免疫磁珠分选出CD4＋CD25＋Treg细胞,流式细胞仪检测纯度;使用TRIZOL抽提Foxp3基因mRNA,使用RT—PCR方法逆转录出Foxp3基因的cDNA。结果从C57BL／6小鼠脾脏中分离出了纯度达到90％CD4＋CD25＋Treg。进一步应用RT—PCR技术克隆出Foxp3的cDNA,通过凝胶电泳证实了克隆出了Foxp3的cDNA。结论使用免疫磁珠方法能够分离出C57BL／6小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞,并进行了Foxp3基因表达的鉴定。     

炎症性肠病患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞的表达及意义

[目的]探讨CD4^＋CD25^＋Treg细胞在炎症性肠病（IBD）发病中的作用及其与疾病活动性的关系。[方法]采用三色流式细胞术检测40例IBD患者，其它肠病患者30例和健康对照者30例。IBD患者中活动期患者25例，缓解期患者15例，使用和未使用激素和／或免疫抑制剂活动期IBD患者分别为16例和9例。对以上各组外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞亚群的百分率进行测定。[结果]疾病活动期IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例明显低于其他肠病和正常对照组（P〈0．01），疾病活动期IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例明显低于疾病稳定期患者（P〈0．01）。活动期IBD患者中使用激素和／或免疫抑制剂与未使用激素和／或免疫抑制剂结果差异有统计学意义。IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞表达率与疾病活动指数评分呈负相关性。[结论]IBD患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞异常表达，可能参与疾病的发生发展，与疾病的活动性密切相关。     

恶性肿瘤患者伽玛刀治疗前后CD4^＋CD25^＋Treg细胞的变化

目的探讨恶性肿1瘤患者接受伽玛刀治疗前后其外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)比例变化。方法我们通过流式细胞仪检测恶性肿瘤患者伽玛刀术前及术后7~10天,外周血CD4+CD25+调节性T细胞的比例变化。结果恶性肿瘤患者伽玛刀术前及术后7~10天,外周血CD4+CD25+调节性T细胞的比例分别为28.55±5.2%,28.35±4.18%,没有明显差异。结论伽玛刀术后7~10天,恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的比例没有明显变化,提示伽玛刀对肿瘤治疗早期患者细胞免疫功能没有明显改变。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与肿瘤免疫治疗

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tregs）于1995年由Sakaguehi等首次报道，将去除了CD25^＋细胞的CD4^＋单阳细胞过继转移给裸鼠，则裸鼠发生多种自身免疫疾病；而将CD4^＋CD25^＋T细胞CD4^＋T细胞共同转移，则不发生自身免疫疾病。此研究揭示CD4^＋CD25^＋T细胞具有维持自身免疫耐受的功能。肿瘤的形成和进展与机体的免疫功能密切相关，CD4^＋CD25^＋T细胞在肿瘤免疫逃逸中起重要作用。本文就调节性T细胞在肿瘤免疫调节中的研究进展进行综述。     

急性动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD4~＋CD25~＋调节性T细胞（Treg）的动态变化研究

目的动态观察急性动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）的变化,探讨其临床意义。方法收集2012年2月-2012年12月在吉林大学中日联谊医院神经内科住院的发病7天内的急性动脉粥样硬化性脑梗死患者（即梗死组）48例,同期住院健康体检者（即对照组）30例。其中,梗死组按照时间（第1、2、3、5、7天）进行分组,采用流式细胞仪法测定全部人群外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）水平,分别比较各组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）水平,并分析其在梗死不同时间水平的变化,进行统计分析。常规检测血常规。结果梗死组患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比在第1天、第2天低于对照组,第5天、第7天高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）,第3天略低于对照组,差异无统计学意义（P〉0.05）。梗死组第1-2天血常规中白细胞及中性粒细胞较正常值显著异常升高,且中性粒细胞与Treg细胞百分比呈负性相关（相关系数r为-0.664,P〈0.01）。结论外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞水平变化可以成为评估急性动脉粥样硬化性脑梗死患者早期脑缺血的非侵入性指标;Treg细胞可作为急性动脉粥样硬化性脑梗死患者免疫稳态失衡和炎症反应的标志物之一。     

CD4+CD25+和CD8+调节性T细胞的作用机制

调节性T细胞（Treg）主要在机体免疫系统中发挥负向调节作用,既能抑制不恰当的免疫反应,又能限定免疫应答的范围、程度及作用时间,对CD4^＋和CD8^＋效应性T淋巴细胞的增殖起抑制作用,因此在移植物抗宿主病、自身免疫病、过敏性疾病等的发病机制和临床治疗中有潜在的应用价值.本文重点介绍CD4^＋CD25^＋Treg和CD8^＋Treg的作用机制,并简述调节性T细胞研究面临的挑战与展望.     

CD4+CD25+调节性T细胞及其与GVHD的关联性

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群，具有免疫无能和免疫抑制两大特性，通过细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子发挥对CD4^＋CD25^＋T细胞的抑制作用。GVHD是异基因造血干细胞移植最严重的并发症之一，近来有关CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与GVHD关联性的研究得出了两种截然相反的结论，即该类细胞可有效防治GVHD的发生及该类细胞与GVHD的发生率成正比。这一研究结果的明确将为GVHD的临床治疗提供新的思路。本文就CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及其免疫表型、特性、免疫调节作用机制及CD4^＋CD25^＋T细胞与GVHD的关联性的一些新的研究进展作一综述。     

删除CD4^＋CD25^＋T细胞对OVA诱导的小鼠体液免疫应答的影响

目的观察删除CD4＋CD25＋T细胞对OVA免疫小鼠体液免疫应答的影响。方法小鼠腹腔注射抗CD25单克隆抗体,分别于3天、10天、27天采血流式检测外周血中CD4＋CD25＋T细胞的比例;注射抗CD25单克隆抗体3天后,OVA加铝佐剂免疫未删除和删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠,7天后加强免疫一次,分别于初次免疫后7天,加强免疫后14天采血制备血清,ELISA法检测血清中OVA特异性IgE和IgG1的浓度。结果注射抗CD25单克隆抗体3天和10天,外周血中无CD4＋CD25＋T细胞;27天后CD4＋CD25＋T细胞的比例部分恢复。初次免疫7天后,删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠总IgE、OVA特异性IgE和IgG1浓度较未删除组升高;加强免疫14天后,删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠OVA特异性IgE较未删除组升高。结论删除CD4＋CD25＋T细胞能够影响小鼠OVA特异性体液免疫应答。     

溃疡性结肠炎患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞水平及其临床意义

目的：探讨溃疡性结肠炎（ UC）患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（ CD4＋CD25＋Treg）水平及其与疾病活动性关系。方法采用流式细胞仪检测50例不同病期UC患者（ UC组）和50名正常人（对照组）的外周血CD4＋CD25＋Treg水平,全自动ESR分析仪测定ESR。结果活动期UC组外周血CD4＋CD25＋Treg水平均明显低于对照组,且随着其病情程度的加重,其水平逐渐降低（P＜0.05）。 UC组CD4＋CD25＋Treg水平与ESR水平呈负相关（r＝-0.432, P＜0.05）。结论 UC患者外周血CD4＋CD25＋Treg降低水平与其炎症活动程度相关,其水平检测有助于判断病情严重程度。     

大鼠CD4~＋CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达

背景：调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。目的：以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP＋载体转染大鼠CD4＋CD25-T细胞,观察其在大鼠CD4＋CD25-T细胞中的表达。方法：以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4＋CD25-T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4＋CD25-T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4＋CD25-T细胞为阴性对照组,CD4＋CD25＋T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。结果与结论：成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4＋CD25-T细胞和CD4＋CD25＋T细胞,细胞存活率为（94±2）%,慢病毒转染的CD4＋CD25-T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4＋CD25-T细胞中高表达。     

应用供体抗原特异性CD4^＋CD25^＋ Treg细胞延长大鼠移植肾的存活

背景：随着磁分选技术的完善,体外分选、扩增足量的对移植抗原具有特异性的细胞已成为可能,但就其在体内应用剂量及免疫耐受的效能问题目前鲜有报道。目的：探索供体抗原特异性CD4＋CD25＋Treg细胞在体内应用诱导移植免疫耐受的量效关系。方法：以SD大鼠为供体、Wistar大鼠为受体,建立同种异体肾移植动物模型;体外分选、富集Wistar大鼠脾脏CD4＋CD25＋Treg细胞,并诱导其对SD大鼠供体抗原的特异性表型;根据不同数量（2×105、5×105、1×106、2×106）供体抗原特异性CD4＋CD25＋Treg细胞在肾移植中单剂量尾静脉注射,并以未注射组为对照。术后15d分析移植肾脏存活状况。术后4,9,15d采血检测各组肌酐水平,同时进行移植肾脏病理检查,按照BanffSchema标准进行诊断,并根据Watanabe的方法进行半定量评分。结果与结论：术后15d内对照组死亡率最高83.3%,2×105组次之66.7%,2×106组为58.3%,5×105组为33.3%,1×106组则全部存活;各实验组术后4,9,15d血肌酐水平均明显低于对照组（P〈0.05,P〈0.01）;术后第9,15天,2×105组、5×105组血肌酐水平均明显高于1×106组、2×106组（P〈0.05）;术后第4,9,15天移植肾脏病理检查的半定量评分结果显示,各时间段5×105组、2×105组与对照组间差异无显著性意义,各时间段1×106组与2×106组优于对照组（P〈0.05）。结果初步证实供体抗原特异性CD4＋CD25＋Treg细胞受体内应用能够改善大鼠移植肾功能,延长移植肾存活时间,1×106为相对理想的单次应用剂量。     

CD4+CD25+T调节细胞与血液系统疾病

CD4＋CD25＋T调节细胞具有低反应性和免疫抑制性两大特点，分为天然CD4＋CD25＋T调节细胞和诱导CD4＋CD25＋T调节细胞两群，除表达CD25外，还表达胞浆细胞毒性T淋巴细胞抗原4和糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体，Foxp3是它的特异性转录因子。CD4＋CD25high T细胞是CD4＋CD25＋T细胞中发挥调节功能的亚群，与多种免疫细胞有复杂的相互关系。近年来发现CD4＋CD25＋T调节细胞在多种血液系统疾病中，存在数量变化和功能异常。骨髓移植后，输注供体CD4＋CD25＋T细胞，能够抑制GVHD，同时保留GVL作用。本文对此作文献综述。     

月经周期雌激素变化对外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞水平的影响

目的研究正常育龄妇女月经周期中雌激素变化对CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg细胞）水平的影响。方法采用流式细胞术检测20例正常育龄妇女月经周期中不同时期外周血Treg细胞水平;同时采用放射免疫法（RIA）检测外周血中雌激素水平,并分析两者相关性。结果 Treg细胞水平随雌激素的变化而波动,Treg细胞及雌激素水平在月经周期第13天最高,分别为[（20.72±2.24）%、（204.27±24.01）ng.L-1],在月经周期第3天最低,分别为[（11.27±1.23）%、（37.90±8.94）ng.L-1]（均P〈0.05）;Treg细胞水平与雌激素水平呈正相关（r=0.615,P〈0.005）。结论雌激素对体内Treg细胞的表达有调节作用。     

CD4+ CD25+调节性T细胞

机体的免疫系统维持着对感染性抗原的反应和自身耐受的平衡,而对自身抗原产生免疫耐受则是防止发生自身免疫病的关键。阴性选择中的克隆清除、免疫无能和克隆忽略被认为是控制自身反应性T细胞的主要机制。近些年随着研究的深入,CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（Treg细胞）在维持自身耐受中的作用得到进一步的认识。     

哮喘患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞与细胞因子的表达及意义

目的 探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞与细胞因子在哮喘儿童外周血中的比例改变,并探讨其临床意义。方法分离哮喘患儿和正常人外周血单个核细胞（PBMC）,用流式细胞仪分析CD4＋CD25＋调节性T细胞在外周血单个核细胞中的比例;酶联免疫吸附法（ELASA）检测外周血TGF—p和IL-10水平。结果急性发作期组患儿外周血CD＋CD25＋Tr及细胞因子水平明显低于缓解期组和正常对照组（P〈0．05）,而缓解期患儿与对照组无显著性差异（P〉0．05）。结论CD4＋CD25＋调节性T细胞和细胞因子可能参与了哮喘的发生与发展。     

手术前后肺癌患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的表达

目的：研究手术前后肺癌患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）的比例变化,探讨其与肿瘤免疫的关系。方法：采用流式细胞术检测38例手术前后肺癌患者和35例健康对照者外周血CD4＋CD25＋Treg占CD4＋T细胞的比例。结果：肺癌患者手术后外周血CD4＋CD25＋Treg占CD4＋T细胞的比例为（13．27±3．15）％,显著低于手术前的（19．76±3．42）％（P〈0．05）;手术前显著高于对照组（10．46±2．87）％（P〈0．05）,而手术后与对照组无明显差异（P〉0．05）。结论：肺癌患者手术切除肿瘤后,外周血CD4＋CD25＋Treg水平明显下调,有助于肺癌患者免疫功能的恢复,增强肿瘤的免疫应答和抗瘤作用。     

急性动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）水平的变化及临床意义

目的 测定急性动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）的水平的变化,并探讨其临床意义.方法 收集2012年2-12月在吉林大学中日联谊医院神经内科住院的发病7天内的急性期动脉粥样硬化性脑梗死患者（即梗死组）48例和同期住院健康体检者（即对照组）30例外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）水平,分别记录梗死组患者神经功能缺损程度、梗死病灶体积以及颈动脉内-中膜厚度.结果 ①梗死组不同神经功能缺损程度患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比均较对照组显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中,重度组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比低于中度组,中度组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比低于轻度组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.②梗死组不同梗死病灶体积患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比均较对照组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中,大灶组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比低于中灶组,中灶组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比低于小灶组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.③梗死组患者均经颈动脉血管超声证实有颈动脉粥样硬化（CAS）,根据病变程度分为三组：颈动脉内膜增厚组（A亚组）、颈动脉斑块组（B亚组）、颈动脉狭窄组（C亚组）,三组患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比均较对照组降低.其中,C亚组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比低于B亚组,B亚组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）百分比低于A亚组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）水平在脑缺血急性期明显降低,与脑梗死后神经功能缺损程度、梗死灶体积、颈动脉粥样硬化程度有关.     

CIK治疗前后肿瘤患者外周血CD4~＋ CD25~＋调节型T细胞变化研究

目的探讨细胞因子诱导的杀伤（Cytokine-induced killer cells,CIK）细胞治疗后肿瘤患者的免疫功能改变。方法采用流式细胞术检测28例肿瘤患者经CIK细胞治疗前后外周血CD4＋CD25＋T细胞比例。结果肿瘤患者CD4＋CD25＋T细胞比例明显高于对照组（P〈0.05）。经CIK细胞治疗后,CD4＋CD25＋T细胞比例降低,与治疗前比较有统计学意义（P〈0.05）,但治疗后CD4＋CD25＋T细胞比例仍高于对照组,且差异有统计学意义（P〈0.05）。结论肿瘤患者免疫功能处于抑制状态,CIK细胞治疗能在一定程度上提高患者机体的免疫功能。利用流式细胞术监测患者外周血CD4＋CD25＋T细胞的变化,对于评价疗效与判断预后具有一定的价值。     

川崎病外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞与其他免疫细胞的关系研究

目的 探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在川崎病发病机制中作用.方法 以2006年12月～2008年2月入院的32例KD患儿为研究对象,以年龄匹配的30例儿童作为对照组（其中15例急性呼吸道感染的发热患儿为非KD发热组,15例健康体检患儿为健康组）,KD患儿分别于静脉注射丙种球蛋白（IVIG）治疗前和IVIG治疗后热退2～3天取外周血,用流式细胞仪测定外周血单个核细胞CD4＋CD25＋调节性T细胞及其他免疫细胞比例,并分析其关系.结果 急性期KD患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例与非KD发热患儿和健康对照组相比均明显降低（P〈0.01）.而IVIG治疗后热退2～3天,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例明显升高,接近于正常水平.同时,急性期KD患儿外周血中,CD3＋CD4＋、CD19＋CD23＋细胞业群比例明显增高,而CD3＋CD8＋、CD16＋CD56＋细胞亚群比例明显下降.在IVIG治疗后热退2～3天,CD3＋CD4＋,CD19＋CD23＋细胞亚群比例均有明显的下降,CD3＋CD8＋细胞比例升高,但未见CD16＋CD56＋细胞比例的升高.且在KD急性期,CD3＋CD4＋、CD19＋CD23＋细胞亚群比例与CD4＋CD25＋调节性T细胞比例成负相关性（P〈0.01）,而CD3＋CD8＋、CD16＋CD56＋细胞亚群比例则与其没有明显的相关性（P〉0.05）.在IVIG治疗后热退2～3天,CD3＋CD4＋、CD19＋CD23＋细胞亚群比例仍与CD4＋CD25＋凋节性T细胞比例呈负相关（P〈0.01）.结论 CD4＋CD25＋调节性T细胞可能通过对体内免疫细胞的调控参与了KD的发病机制.     

急性淋巴细胞白血病的免疫分型及CD4＋CD25＋T调节细胞检测

背景：在急性淋巴细胞白血病发病过程中,CD4＋CD25＋T调节细胞对机体免疫反应可能起着一定的调节作用。目的：观察急性淋巴细胞白血病患者的免疫分型及外周血CD4＋CD25＋T调节细胞的变化情况。方法：采用流式细胞仪对35例急性淋巴细胞白血病患者进行免疫分型,并检测外周血CD4＋CD25＋T调节细胞的数目,与18名健康对照作比较。结果与结论：急性B细胞淋巴细胞白血病22例,急性T细胞淋巴细胞白血病13例;22例急性B细胞淋巴细胞白血病中CD19的阳性表达率最高（100%）,而13例急性T细胞淋巴细胞白血病中CD7阳性表达率最高（100%）。急性B细胞淋巴细胞白血病患者外周血CD4＋CD25＋T调节细胞和急性T细胞淋巴细胞白血病患者差异无显著性意义（P〉0.05）,但均高于健康对照（P〈0.05）。表明急性B细胞淋巴细胞白血病中CD19阳性表达率最高,急性T细胞淋巴细胞白血病中CD7阳性表达率最高,同时急性淋巴细胞白血病患者外周血CD4＋CD25＋T调节细胞水平显著增高。