低氧刺激结缔组织生长因子表达与肾间质纤维化

目的：观察低氧对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨低氧致肾间质纤维化的机制。方法： 单侧输尿管结扎（UUO）9 d大鼠动物模型，用RT-PCR方法检测肾组织中低氧标记分子-低氧诱导因子（HIF-1α）的mRNA水平，免疫组化方法观察假手术组及模型组肾组织中HIF-1α和CTGF的表达及部位，Western蛋白印迹技术检测肾组织CTGF的蛋白水平。体外实验，正常大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）分别置于低氧（1%O2）和正常氧条件下培养6 h，应用RT-PCR和Western蛋白印迹检测CTGF mRNA和蛋白表达水平。结果： 对照组肾组织未能检测到HIF-1α mRNA和HIF-1α蛋白表达；模型组肾组织有高水平HIF-1α mRNA，并出现HIF-1α蛋白表达，主要分布在小管-间质细胞；CTGF蛋白与HIF-1α蛋白表达部位及程度一致；低氧（1% O2）培养刺激NRK-49F细胞表达CTGF mRNA和蛋白。结论： 低氧刺激的CTGF的表达增加与肾间质纤维化的发生有关。     

HIF-1α和MMP-2在大鼠脑出血灶周脑组织中的表达

目的：通过动态观察脑出血灶周脑组织中缺氧诱导因子(HIF)-1α和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达,探讨HIF-1α和MMP-2表达之间的联系。方法：50只SD大鼠随机分成假手术组和脑出血模型组,分别于术后6 h,24 h,72 h,7 d,21 d处死大鼠。RT-PCR方法检测脑出血灶周组织HIF-1α和MMP-2 mRNA的表达及免疫组织化学方法检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达,并对HIF-1α和MMP-2的表达进行相关分析。结果：模型组术后灶周组织出现HIF-1α, MMP-2 mRNA表达上调和大量黄色的HIF-1α,MMP-2蛋白阳性细胞,于24~72 h达高峰。HIF-1α mRNA及其蛋白表达分别与MMP-2 mRNA及其蛋白表达呈正相关(分别r=0.588, P=0.002; r=0.765, P＜0.001)。结论：脑出血灶周脑组织中HIF-1α和MMP-2的表达上调,且HIF-1α可能调控MMP-2的表达。     

重组人促红细胞生成素对心梗大鼠HIF-1α与Survivin表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rHuEPO)对心梗大鼠心肌缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与生存素(Survivin)表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组、心肌梗死组和rHuEPO治疗组。用Western blot方法检测各组大鼠梗死区周围心肌中HIF-1α与Survivin的表达水平,RT-PCR方法检测梗死区周围心肌HIF-1αmRNA与Survivin mRNA表达变化。结果心肌梗死组大鼠心肌梗死区周围心肌HIF-1α蛋白与mRNA的表达水平显著高于假手术组,而Survivin蛋白与mRNA的表达水平则显著降低(P0.01);与心肌梗死组相比,rHuEPO治疗组心肌梗死区周围心肌HIF-1α蛋白与mRNA的表达水平明显降低,而Survivin蛋白与mRNA的表达水平则显著升高(P0.01)。结论 rHuEPO能够抑制心梗大鼠心肌梗死区周围心肌HIF-1α过表达并上调Survivin的表达。     

HIF-1α基因沉默对大鼠肝癌CBRH-7919细胞p27和Ki67表达的影响

目的: 探讨沉默缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因对大鼠肝癌CBRH-7919细胞在缺氧状态下p27和Ki67表达的影响。方法: 选用大鼠肝癌细胞株CBRH-7919作为研究对象,利用氯化钻(CoCl₂)模拟缺氧状态。构建HIF-1α siRNA特异性载体,利用小分子RNA干扰技术沉默肝癌细胞HIF-1α基因。应用real-time RT-PCR和Western blotting方法分别检测肝癌细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达变化,用Western blotting方法检测肝癌细胞 p27和Ki67 蛋白的表达变化。应用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果: 在缺氧条件下,肝癌细胞HIF-1α mRNA及蛋白表达显著增多(P<0.05)。HIF-1α基因被沉默后,HIF-1α mRNA和蛋白表达以及Ki67蛋白表达量明显减少(P<0.05),p27蛋白表达量显著增多(P<0.05)。转染组G₀/G₁期的肝癌细胞数量明显多于对照组,S期细胞显著减少(P<0.05)。 结论: 缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α的表达;特异性siRNA沉默HIF-1α,可能通过促进p27的表达和抑制Ki67的表达,在一定程度上抑制了肝癌细胞的增殖。     

脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制

目的：探讨脂多糖（LPS）活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子－1α（HIF-1α）的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α（TNF-α）中的作用。 方法： 应用HIF-1α 诱骗法（HIF-1α decoy）抑制其作用，并用Western blotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。 结果： HIF-1α蛋白含量在LPS组（1.95±0.57）和HIF-1α decoy组（1.89±0.59）均明显高于对照组（0.41±0.14，P＜0.05）；HIF-1α mRNA的表达在对照组（0.7838±0.3183）、LPS组（0.7622±0.3387）和HIF-1α decoy组（0.8155±0.3594）之间无显著差异（P>0.05）；LPS刺激24 h后，大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组（61 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组（90 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），但 HIF-1α decoy组TNF-α的产生仍然高于对照组（61 ng/L vs 94 ng/L, P<0.05）。 结论： 大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调，并且促进TNF-α的产生，提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。     

CXCL8、HIF-1α在宫腔粘连子宫内膜组织表达及相关性分析

目的 探讨CXC趋化因子配体-8(CXCL8)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在宫腔粘连（IUA）患者子宫内膜组织中的表达及相关性。方法 收集2018年6月至2020年9月行宫腔粘连分离手术（TCRA）治疗的IUA患者60例,IUA患者在行TCRA前判断IUA严重程度,轻度19例（轻度IUA组）,中度22例（中度IUA组）,重度19例（重度IUA组）。收集同期在本院因子宫纵隔、输卵管性不育行常规宫腔镜检查的25例患者为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测所有组织中CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA表达水平;Western blot检测组织中CXCL8、HIF-1α蛋白表达。免疫组化法检测组织中CXCL8、HIF-1α表达。Pearson法分析IUA患者子宫内膜组织中CXCL8、HIF-1α的相关性。结果 与对照组相比,轻度IUA组、中度IUA组、重度IUA组CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA及蛋白表达水平依次升高（P<0.05）;Pearson相关性分析显示,IUA患者子宫内膜组织CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA相对表达水平呈正相关（P<...     

乏氧对肺癌细胞系HIF家族成员HIF-1α、HIF-2α和HIF-β表达的影响及其相关性

目的 探讨乏氧对不同类型肺癌细胞乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、乏氧诱导因子-2α(HIF-2α)和乏氧诱导因子-β(HIF-β)基因表达的影响及其相关性. 方法 以0.5%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,采用定最RT-PCR和Western blotting方法 分别检测乏氧处理4～24h人肺癌细胞系SPCA1、A549、H446、SH77、H520和95D中HIF-1α、HIF-2α和HIF-βmRNA和蛋白水平的表达. 结果 1.常氧下不同肺癌细胞系HIF-1α、HIF-2α mRNA表达水平较低,短期乏氧HIF-1α mRNA降低而HIF-2α mRNA增加,随乏氧时间延长两者mRNA表达逐渐增加.2.HIF-1α和HIF-2α蛋白在常氧下表达均较低,乏氧下两者表达增强但变化趋势不一致,HIF-1α蛋白在所有细胞中均有表达,HIF-2α蛋白仅在某些细胞有表达.3.HIF-β mRNA和蛋白在常氧或乏氧下表达无明显变化.4.相关性分析表明,乏氧下HIF-2α mRNA与蛋白表达呈正相关(r=0.989,P=0.011);而HIF-1α和HIF-β mRNA与蛋白无相关性. 结论 肺癌细胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-β对乏氧刺激表现出不同的应答方式且具有细胞特异性,乏氧对HIF-1α和HIF-2α的调控可能分别发牛在翻译和转录水平,而对HIF-β无明显的调控作用.     

甘氨酸受体在大鼠心肌细胞的表达

目的：检测成年大鼠心肌组织和新生大鼠心 肌细胞是否有甘氨酸受体（GlyR）mRNA和蛋白的表达。方法：选用成年 雄性SD大鼠心肌组织和新生SD大鼠培养心肌细胞，提取总RNA和膜蛋白，用逆转录－巢式聚 合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）检测GlyRα1和β亚基的mRNA 和蛋白表达。结果：成年大鼠心肌组织和新生大鼠培养心肌细胞均有与 脊髓组织GlyRβ亚基极为相似的mRNA和蛋白的表达；对于GlyRα1亚基，仅在新生SD大鼠培 养心肌细胞发现有mRNA的表达。结论：本研究证实在成年大鼠心肌组织 和新生大鼠心肌细胞中有与脊髓组织相似的GlyR亚基的表达，提示大鼠心肌细胞的膜上有Gl yR的存在。     

昆明山海棠对CIA大鼠模型中HIF-1α表达的影响

目的:研究昆明山海棠(THH)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型中低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其作用机制。方法:建立CIA大鼠模型,随机分组,治疗组分别采用高、中、低剂量THH每天灌胃1次,连续用药30d。动态观察关节炎指数(AI)及关节的病理改变,用RT-PCR及免疫组化染色法分别检测HIF-1αmRNA及其蛋白的表达。结果:THH可明显抑制CIA大鼠的足爪肿胀,明显减轻滑膜增殖及炎症反应,HIF-1α表达明显降低。结论:THH通过降低HIF-1α的表达,减轻CIA模型大鼠关节的炎症反应。     

大鼠纤维化心肌组织中神经钙黏附素蛋白的表达变化

目的　研究异丙肾上腺素致大鼠心肌纤维化中神经钙黏附素（N-cadherin）蛋白在心肌组织中的表达,为探讨心肌纤维化的信号转导机制和逆转心肌纤维化提供形态学资料。 方法　健康成年SD 大鼠注射ISO,造成心肌纤维化模型;取心肌组织,常规石蜡切片,Masson 染色,观察心肌组织胶原纤维改变;免疫组织化学和免疫荧光染色检测N-cadherin 的表达及分布;RT-PCR 方法检测大鼠心肌组织的N-cadherin 蛋白的mRNA 的表达变化;利用图像分析软件对N-cadherin 蛋白的免疫组化结果进行定量分析。 结果　免疫组化和免疫荧光结果显示,实验组与对照组相比N-cadherin 蛋白表达位置存在动态变化,表达量无显著差异;RT-PCR 方法检测大鼠心肌组织的N-cadherin mRNA 的表达与免疫组化结果具有一致性。 结论　N-cadherin 蛋白可能是维持心肌结构和生理功能所必需的。     

昆明山海棠对CIA大鼠模型中HIF-1α表达的影响

目的:研究昆明山海棠(THH)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型中低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响及其作用机制.方法:建立CIA大鼠模型,随机分组,治疗组分别采用高、中、低剂量THH每天灌胃1次,连续用药30d.动态观察关节炎指数(AI)及关节的病理改变,用RT-PCR及免疫组化染色法分别检测HIF-1 αmRNA及其蛋白的表达.结果:THH可明显抑制CIA大鼠的足爪肿胀,明显减轻滑膜增殖及炎症反应,HIF-1α表达明显降低.结论:THH通过降低HIF-1α的表达,减轻CIA模型大鼠关节的炎症反应.     

昆明山海棠对胶原诱导型关节炎大鼠的作用及可能机制

探讨昆明山海棠(THH)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的作用及可能机制。取60只大鼠随机分6组,建立CIA大鼠模型,分别采用不同剂量的THH每天灌胃1次,连续30d。动态观察关节炎指数(AI)及关节的病理改变,用RT-PCR及免疫组化法分别检测HIF-1αmRNA及其蛋白的表达。结果显示,THH可明显抑制CIA大鼠的足爪肿胀,减轻滑膜增殖及炎症反应,降低HIF-1α表达,其中以中剂量THH的治疗效果最佳。以上结果表明THH治疗CIA大鼠具有明显疗效,其作用机制可能与降低外周血以及滑膜组织内的HIF-1α的表达有关。     

低氧诱导大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF-α的机制

目的：研究低氧诱导肺泡巨噬细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及HIF-1α对肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法：应用HIF-1α诱骗法(HIF-1α decoy)抑制低氧(3％O2，5％CO2，92％N2)培养的肺泡巨噬细胞中HIF-1α的作用，并用免疫组织化学、Western blot、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果：HIF-1α在常氧对照组肺泡巨噬细胞核中表达呈阴性，在低氧组和HIF-1α decoy组表达呈阳性；低氧组和HIF-1α decoy组中HIF-1α蛋白的含量显著高于常氧对照组(P<0.05)。HIF-1α mRNA的含量在低氧组和HIF-1α decoy组明显高于常氧对照组(P<0.05)；培养的巨噬细胞上清液中TNF-α的含量在低氧组(115±17 ng／L)明显高于常氧对照组(69±13 ng／L，P<0.05)和HIF-1α decoy组(81±15 ng／L，P<0.05)。结论： 低氧可明显诱导肺泡巨噬细胞HIF-1α的表达和活性增强，后者能促进TNF-α的产生，提示在可导致肺部低氧的炎症性疾病如COPD中HIF-1α可能发挥重要作用。     

siRNA敲减缺氧诱导因子1α表达对口腔鳞癌细胞活力及癌胚抗原相关细胞黏附分子1表达的影响

目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与口腔鳞癌细胞活力和凋亡的关系以及作用机制。方法:采用RT-PCR和Western blot检测口腔鳞癌细胞系Tca8113和CAL27以及正常口腔上皮细胞NOK中HIF-1α和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)的mRNA和蛋白表达量; RNA干扰技术沉默口腔鳞癌CAL27细胞中HIF-1α的表达,实验分为空白对照组、无义对照组和siRNA-HIF1-α组,MTT实验检测敲减HIF-1α表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot检测HIF-1α、P21、血管内皮生长因子(VEGF)、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:HIF-1α和CEACAM1在口腔鳞癌细胞中的表达量显著高于正常口腔细胞(P 0. 05),且二者表达量呈正相关; HIF-1α和CEACAM1在CAL27细胞中的表达量显著高于Tca8113细胞(P 0. 05)。siRNA-HIF-1α组细胞中的HIF-1α蛋白表达量显著低于空白对照组(P 0. 05)。敲减HIF-1α表达显著抑制CAL27细胞的活力(P 0. 05),促进其凋亡(P 0. 05),显著增加P21和Bax的蛋白水平(P 0. 05),明显降低VEGF和Bcl-2的蛋白水平(P 0. 05)。结论:HIF-1α在口腔鳞癌中高表达,干扰HIF-1α的表达可显著抑制细胞的活力,促进其凋亡。这可能是通过调控HIF-1α下游靶基因的表达以及肿瘤血管的生成来发挥作用的。     

缺氧诱导因子1α在妊高征和正常妊娠胎盘组织中的差异表达

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白及其mRNA在妊高征和正常妊娠胎盘组织中的表达的差异。方法:应用Westernblot检测10例妊高征和10例年龄匹配的正常妊娠的胎盘组织中HIF-1α蛋白表达的水平;应用实时定量PCR,检测两种组织中HIF-1αmRNA表达的水平。结果:与正常妊娠胎盘组织相比较,妊高征胎盘组织中HIF-1α蛋白和mRNA的表达水平明显增加(P<0.05)。结论:HIF-1α在妊高征胎盘组织中表达增高,可能与妊高征的病因及病理生理有关。     

高压氧对精索静脉曲张大鼠睾丸组织缺氧诱导因子1α、 脂质过氧化物、血管紧张素转化酶的影响及其作用机制*

目的：分析高压氧对精索静脉曲张大鼠睾丸组织缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、脂质过氧化物（LPO）、血管 紧张素转化酶（ACE）表达的影响及其机制。方法：将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和高压氧组;模 型组和高压氧组行精索静脉曲张手术造模,假手术组仅手术而不造模;假手术组和模型组大鼠手术或造模成功后 正常饲养,高压氧组采用高压氧进行干预治疗;取睾丸计重,行TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡;用免疫印迹 和实时荧光定量PCR法检测睾丸组织中HIF-1α、LPO、ACE及其mRNA表达;用ELISA 检测试剂盒测定睾丸组 织LPO、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、ACE表达水平。结果：高压氧组大鼠左侧、右侧和两侧 睾丸质量均明显高于模型组;高压氧组大鼠睾丸细胞凋亡率均明显低于模型组,睾丸组织LPO表达水平明显低于 模型组,而SOD、CAT、ACE表达水平均明显高于模型组;高压氧组大鼠睾丸组织HIF-1α、LPO蛋白和mRNA 表达均明显低于模型组,ACE蛋白和mRNA水平明显高于模型组。结论：高压氧对雄性SD大鼠精索静脉曲张干 预后可有效调节大鼠睾丸组织中HIF-1α、LPO和ACE的表达,进而减少睾丸细胞凋亡。     

牛磺酸和锌对急性缺氧小鼠脑组织HIF-1α mRNA表达的影响

 目的：研究牛磺酸和锌对急性缺氧小鼠脑组织缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1 alpha，HIF-1α）mRNA表达的影响，探讨其对缺氧脑的保护作用机制。方法：复制小鼠急性缺氧模型，采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，研究用药后实验小鼠脑组织HIF-1α mRNA表达的变化。结果：正常对照组无HIF-1α mRNA表达，各组小鼠缺氧后脑组织HIF-1α mRNA表达明显高于对照组(P<0.05)；牛磺酸组和牛磺酸+硫酸锌组缺氧后小鼠脑组织HIF-1α mRNA增多最明显，与硫酸锌组有显著差异（P<0.05）；而用药的3组与生理盐水组相比，缺氧后小鼠脑组织HIF-1α mRNA的增多都有显著差异（P<0.05）。结论：急性缺氧时牛磺酸和锌能够增加脑组织HIF-1α mRNA的表达，这可能是其抗脑缺氧机制之一，而两者联合使用比单纯硫酸锌抗缺氧作用更明显。     

HIF-1α、MT、Slug和E-cadherin在人乳腺癌中的表达及其意义

目的:探讨HIF-1α、MT、Slug和E-cadherin在人乳腺癌中的表达及其意义。方法:采用免疫组化SP法,检测术前未使用放疗、化疗及激素治疗的69例乳腺癌组织中HIF-1α、MT、Slug和E-cadherin的表达情况。采用RT-PCR方法检测乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中HIF-1α、MT、Slug和E-cadherin mRNA的表达情况。结果:免疫组化结果表明:在69例乳腺癌组织中,HIF-1α、MT、Slug和E-cadherin的阳性率分别为71.01%、42.03%、43.48%和50.72%。HIF-1α、Slug和E-cad-herin的表达对于TNM分期和腋淋巴结转移有显著性差异(P<0.05);MT的表达对于TNM分期有显著性差异(P<0.05)。在69例乳腺癌组织标本中HIF-1α与MT表达呈显著正相关(r=0.285,P<0.05),MT与Slug呈显著正相关(r=0.379,P<0.01),Slug与E-cadherin呈显著负相关(r=-0.422,P<0.01)。RT-PCR半定量结果显示:HIF-1α、MT、Slug和E-cadherinmRNA在人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中均有表达,但在恶性程度更高的MDA-MB-231细胞中HIF-1α、MT、Slug表达较高,而E-cadherin表达较低,差异具有显著性(P<0.05)。结论:HIF-1α、MT、Slug和E-cadherin在乳腺癌中的表达情况可作为监测乳腺癌发展的指标。     

HIF-1α因子在在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的检测HIF-1α（缺氧诱导因子-1α）因子蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法 1.采用免疫组织化学染色的方法,检测72例子宫内膜癌组织标本中HIF-1α蛋白的表达;2.采用胶体金标记免疫电镜的方法,检测子宫内膜癌组织中HIF-1α蛋白在超微结构中的表达。结果 1.免疫组织化学染色结果显示：在收集的72例临床子宫内膜癌组织标本中,39例HIF-1α表达为阳性,阳性率为54.2%（39/72）;2.胶体金标记免疫电镜结果显示：黑色圆形的HIF-1α胶体金颗粒存在于内膜癌细胞的内质网和核膜上,偶见核内。结论免疫组化和免疫电镜显示：子宫内膜癌组织中存在HIF-1α的表达,提示HIF-1α可作为子宫内膜癌治疗的新的分子靶点。     

PI3K对心梗大鼠TNF-α表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)抑制剂LY-294002对心梗大鼠心肌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组、心肌梗死组和PI3K抑制剂组。分别用Western blot和RT-PCR方法检测各组大鼠梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白和TNF-α mRNA表达变化。结果 心肌梗死组心肌梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白、TNF-α mRNA表达水平显著高于假手术组(p<0.05),PI3K抑制剂组心肌梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白、TNF-α mRNA表达水平则明显低于心肌梗死组(p<0.05)。结论 PI3K能够上调心肌梗死大鼠TNF-α的表达。