COX-2表达对脑胶质瘤的放射敏感性和细胞周期的影响

背景与目的COX-2在胶质瘤的发生发展过程中发挥重要作用,近年来发现COX-2抑制剂对一些胶质瘤细胞有增强放射敏感性的作用.本研究的目的在于观察人恶性脑胶质瘤细胞的COX-2蛋白表达和COX-1/COX-2双重抑制剂对乙酰氨基酚(acetaminophen,ACE)对细胞COX-2 mRNA表达、克隆形成率和细胞周期的影响,并探讨ACE提高胶质瘤细胞放射敏感性的机制.方法选用人恶性脑胶质瘤细胞株SHG-44作为研究对象.免疫细胞化学和RT-PCR检测细胞COX-2表达,成克隆分析法测定对乙酰氨基酚对细胞的放射增敏作用,流式细胞仪检测细胞周期分布.结果免疫细胞化学染色SHG-44细胞的胞膜和胞质均有COX-2蛋白表达.RT-PCR检测对乙酰氨基酚作用后细胞中COX-2mRNA表达降低.对乙酰氨基酚联合放疗作用于SHG-44细胞与单纯照射组相比,显示了放射增敏作用,增敏比为1.23(D0值水平)或1.43(Dq值水平).细胞周期检测发现,不同时间各组细胞都出现了不同的周期分布,照射后12 h单纯照射组和放射加药组G2/M期细胞明显多于对照组,24 h后单纯照射组迅速下降到与对照组相等的水平,而放射加药组仍维持较高比例(P＜0.01),同时对放射抗拒的S期细胞比例最低.结论人恶性脑胶质瘤细胞株SHG-44的胞膜和胞质均有COX-2蛋白表达,对乙酰氨基酚能增加该细胞株的放射敏感性,其机制可能与抑制COX-2表达、改变细胞周期分布有关.     

DNA修复基因ERCC1启动子区甲基化与胶质瘤放射敏感性的相关性研究

背景与目的:胶质瘤的放射治疗效果与其放射敏感性密切相关,有许多因素影响着胶质瘤的放射敏感性。研究已经发现某些基因启动子区CpG岛的甲基化会导致基因的表达沉默,从而影响肿瘤放射敏感性。本文初步探讨了DNA修复基因ERCC1启动子区CpG甲基化与脑胶质瘤放射敏感性的关系。方法:培养4种胶质瘤细胞株MGR1、MGR2、SF767、T98G,集落形成实验法检测其放射敏感性,以2Gy照射后细胞存活集落数(SF2)作为标准表示。应用亚硫酸氢钠修饰后测序的方法对4株细胞中ERCC1基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行分析。进而分析其甲基化状态与放射敏感性的关系。结果:4种胶质瘤细胞株的放射敏感性存在较大差异,SF2均数范围从0.18到0.70;在ERCC1启动子区CpG为去甲基化状态细胞株的SF2值较高(MGR1,0.59±0.09;T98G,0.70±0.05),表示对放射线较抗拒;ERCC1启动子区CpG为甲基化状态细胞株的SF2值较低(MGR2,0.18±0.05;SF767,0.32±0.08),表示对放射线较敏感(t=-4.43,P<0.05)。结论:ERCC1启动子区CpG甲基化状态可能与胶质瘤细胞株放射敏感性相关,有希望成为预测胶质瘤放疗敏感性的新指标。     

人结肠癌放射抗拒性细胞株的建立

目的应用连续照射的方法建立人结肠癌放射抗拒细胞株SW480-R,为研究人结肠癌放射抗拒的机制提供模型。方法用2Gv剂量的x射线照射人结肠癌SW480细胞株,每天1次,每周5d,分别照射不同周期后,按照细胞存活率筛选出放射抗拒细胞株SW480．R,并检测细胞的倍增时间。以细胞克隆形成实验检测细胞的放射敏感性,MTT法检测照射后不同时间点的细胞存活分数,流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布,并分别与亲代结肠癌细胞株进行比较。结果经2Gy照射3周后细胞仍有存活,可作为放射抗拒细胞株的模型。SW480．R细胞株的倍增时间明显长于亲代SW480细胞株（脚．05）,SW480-R细胞株的放射抗拒l生增加,照射后12h的细胞存活率较SW480细胞株显著增高（98．40％US92．81％,P〈0．001）。流式细胞仪检测细胞周期显示,SW480一R细胞株的细胞周期分布与SW480细胞株不同,G2／M期明显增高。结论人结肠癌细胞株SW480每天经x射线照射2Gy,连续照射3周后可以得到具有放射抗拒细胞株SW480．R。此细胞株具有稳定的放射抗拒性,且与亲代细胞株有不同的细胞周期分布。     

脑胶质瘤干细胞和U251人胶质瘤细胞系X线辐射敏感性研究

目的:研究脑胶质瘤干细胞(Brain glioma stem cell) U251胶质瘤细胞系对不同剂量X线的射线敏感性.方法:从脑胶质瘤组织中分离培养脑胶质瘤肿瘤球,用CD133免疫磁珠技术分离得到脑胶质瘤干细胞;经不同剂量X线照射脑胶质瘤干细胞和U251细胞后,用软琼脂克隆形成实验检测两者的放射敏感性.结果:1)从脑胶质瘤组织中分离胶质瘤干细胞.2)随着照射剂量的增加,两种细胞的存活率均出现下降,但肿瘤干细胞的存活率明显高于U251细胞(t=-3.71,P＜0.01).3)根据公式SF=exp(-αD-BD2)对实验数据进行拟合,得到干细胞和U251细胞的α/β值分别为3.57、7.15.结论:脑胶质瘤干细胞与U251胶质瘤细胞系相比具有较强的辐射抗拒性.     

塞来昔布对脑胶质瘤细胞放射增敏效应的研究

[目的]观察COX-2选择性抑制剂塞来昔布（Celecoxib）对三种脑胶质瘤细胞放射增敏作用。[方法]选择适当浓度的COX-2选择性抑制剂Celecoxib进行放射增敏实验，设置单纯放射（R）组和放射＋药物（R＋D）组，采用集落形成法分别检测Celecoxib对脑胶质瘤SHG-44细胞株，767细胞以及大鼠脑胶质瘤C6细胞株的放射增敏效应，并绘制细胞存活曲线。[结果]Celecoxib对3种胶质瘤细胞株均显示出放射增敏效应，R＋D组与R组相比较，反映放射敏感性指标的SF2、D0.01、D0、Dq均出现下降。其中tSF2=8．315，P=0．014；tD0.01=9．28，P=0．011；tD0=3．985，P=0．058；tDq=3．348，P=O．075。[结论]Celecoxib在体外实验中可以提高脑胶质瘤的放射敏感性。Celecoxib有可能成为治疗胶质瘤的放射增敏剂。     

辐射诱导辐射耐受鳞癌细胞株的建立及其生物学特性

目的通过辐射人喉鳞癌细胞株Hep-2获得辐射耐受细胞株Hep-2R，建立一个放射敏感性研究的对比模型。方法用γ线反复照射Hep-2细胞，建立辐射耐受细胞Hep-2R。成克隆实验法测定两株细胞不同剂量照射后的细胞存活分数，拟合细胞存活曲线比较两种细胞株的放射生物学参数。光镜、电镜、活细胞计数、染色体分析及流式细胞仪周期分布比较其生物学差异。结果经7个月辐射诱导得到了一个放射敏感性不同于亲本细胞株的Hep-2R细胞株，并已稳定传30代以上且辐射耐受性能稳定。其SF2=0．680、D0=3．24Gy、D0=1．90Gy、N=1．80，而Hep-2细胞SF2=0．415、Db=2．06Gy、D0=1．01Gy、N=1．64。Hep-2R细胞形态及染色体数目发生了改变，群体倍增时间较亲本细胞延长。细胞周期分析显示G1期细胞增多，S、G2期细胞减少。结论通过辐射诱导可以从Hep-2细胞株得到辐射耐受细胞株Hep-2R，这种相同背景、不同放射敏感细胞株为进一步研究放射敏感性的分子机制提供了一个良好对比模型。     

脑胶质瘤细胞放射抗拒的比较蛋白质组学研究

背景与目的：脑胶质瘤是神经外科最常见的恶性疾病,放射治疗是重要手段之一,但大部分患者对放疗不敏感或放疗后复发。本文研究人脑胶质瘤细胞株MGR2及其经间歇性大剂量X射线照射而存活的后代细胞MGR2R52在蛋白质组水平的表达差异,旨在探讨胶质瘤放射敏感性以及放射后存活肿瘤细胞的分子机制以提高胶质瘤的治疗效果。方法：提取MGR2和MGR2R52及二者经2Gy照射后继续培养48h细胞的总蛋白,分别进行Cydye染料标记和胶内差异双向电泳（2D-DIGE）分离;经Typhoon 9400型多功能激光扫描仪不同波长的激光扫描后,获取荧光胶内差异表达图谱,继而采用DeCyder软件进行图谱分析;选取2D-DIGE图谱中差异表达≥1.5倍且P值≤0.001的蛋白质斑点,通过全自动斑点处理工作站切点、酶解和点样后,使用基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱仪（MALDI-TOFMS）进行蛋白质的肽指纹图谱（PMF）鉴定。结果：MGR2与MGR2R52之间共有110个蛋白点强度差异≥1.5倍（P〈0.001）,经MALDI-TOF-MS鉴定发现干扰素诱导的Mx蛋白和人发动蛋白2（片断474-870）在MGR2R52中表达显著增高,分别增加4.66及9.03倍,并且两者同属于发动蛋白家族。结论：发动蛋白家族在放射存活的胶质瘤细胞中表达明显增加,其在胶质瘤细胞放射抗拒机制中的作用可能与促进细胞内吞功能有关,在此基础上进行胶质瘤放疗联合以腺病毒为载体的基因治疗研究,将有可能提高胶质瘤的治疗效果。     

miR-21与胶质瘤SHG-44细胞放射敏感性的关系

目的 探讨miR-21与胶质瘤SHG-44细胞放射敏感性的关系及其机制.方法 建立胶质瘤辐射抗性细胞模型SHG-44抗,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测SHG-44和SHG-44抗细胞中miR-21的表达.通过反义寡核苷酸序列AS-miR-21敲低SHG-44抗细胞中miR-21的表达,以实时定量PCR验证敲低效果.采用成克隆实验测定miR-21敲低前后SHG-44抗细胞的放射敏感性,通过检测caspase-3的活性评估细胞凋亡.结果 SHG-44抗细胞的miR-21表达量是SHG-44细胞的1.49倍.成克隆实验结果显示,敲低miR-21表达后,SHG-44抗细胞的放射敏感性提高,平均致死剂量和准阈剂量的放射增敏比分别为1.48和1.54.AS-miR-21转染组、单纯放射组及转染联合放射组SHG-44抗细胞的caspase-3表达水平分别为2.24±0.14、2.05±0.19和5.72±0.45,转染联合放射组分别高于AS-miR-21转染组和单纯放射组.结论 miR-21可能参与了胶质瘤辐射抗性的形成,有望成为治疗辐射抗性胶质瘤的潜在靶点.     

氯化钴诱导缺氧对脑胶质瘤T98G细胞株放射敏感性的影响

摘 要：［目的］观察氯化钴诱导的缺氧对脑胶质瘤细胞周期的改变及放射敏感性的影响。［方法］ 用氯化钴诱导胶质瘤T98G细胞缺氧,细胞克隆形成实验观察细胞放射敏感性。流式细胞仪检测细胞周期的变化。［结果］ T98G细胞在缺氧状态下放射敏感性较常氧下明显降低,差异有统计学意义。氯化钴诱导细胞缺氧后,与常氧状态相比,S期细胞比例由4.7%提高至24.0%,G1期细胞比例由90.4%降至66.7%。［结论］ 氯化钴诱导的缺氧能改变胶质瘤T98G细胞株的细胞周期,降低细胞的放射敏感性。     

人脑胶质瘤细胞株MGR2放射抗拒性的诱导

背景与目的:放射治疗是脑胶质瘤重要辅助治疗手段之一,但脑胶质瘤放射敏感性存在很大差异。本研究通过对放射相对敏感的人脑胶质瘤细胞株进行放射诱导得到具有稳定放射抗拒性的后代细胞,从而为研究胶质瘤放射抗拒机制提供具有可比性的成对细胞。方法:选取对X射线相对敏感的人脑胶质瘤细胞株MGR2[2Gy照射下的存活分数(survivalfractionof2Gy,SF2)为0.180±0.05]进行间歇性大剂量X射线照射(每次2Gy,共3次,而后每次5Gy,共2次),每次照射后的细胞继续培养,待5～8周存活的细胞状态稳定后进行下一次照射,整个照射及培养过程历时11个月,最终得到的后代细胞命名为MGR2R(MGR2radiationinduction)。采用MTT法检测MGR2和MGR2R细胞生长的倍增时间,平板集落形成法和线性二次模型(L-Q模型)拟合MGR2和MGR2R细胞的存活曲线并计算相关放射生物学参数和SF2值。血清饥饿细胞周期同步化方法检测MGR2和MGR2R的细胞周期变化。结果:MGR2的倍增时间为3.6天,MGR2R的生长速度减慢,倍增时间为4.0天。MGR2和MGR2R的α值分别为0.447和0.089(t=4.524,P=0.011),β值分别为0.177和0.141(t=1.562,P=0.193),SF2值为0.208和0.478(t=-6.062,P=0.040),MGR2R的放射抗拒性增加。细胞周期同步化后MGR2的细胞周期分布为G1期54.8%,S期30.9%,G2期14.3%,去同步化后G1期35.9%,S期51.2%,G2期12.8%,MGR2R正常生长时存在G2期阻滞(81.7%),同步化后G1期55.7%,S期27.8%,G2期16.6%,去同步化后分别为G1期56.4%,S期26.7%,G2期16.9%,MGR2R存在G1期阻滞,去同步化后两者细胞周期改变不同。结论:人脑胶质瘤细胞株MGR2经间歇性大剂量X射线多次照射后得到的后代细胞MGR2R具有稳定放射抗拒性。MGR2R生长速度减慢,倍增时间延长,同时存在G1和G2期阻滞,可能与其放射抗拒性的产生有关。     

VEGF和Notch1在非小细胞肺癌放射抗拒中的作用机制研究

在肺癌的放疗中,放射抗拒是治疗失败的主要生物学因素.为了解肺癌放射抗拒的成因,建市了A549细胞系的放射抗拒模型,并通过对Notch1和VEGF在放射抗拒形成过程中变化的研究来探讨其放射抗拒的机制.     

三羟基异黄酮对胶质瘤细胞放射敏感性影响

三羟基异黄酮(Genistein)是大豆异黄酮的主要成分,属于多酚类化合物,具有抑制心血管疾病发生、抗肿瘤等生物学作用;国外研究表明Genistein与放射联合可增强肿瘤放射敏感性,如肝癌、食管癌、前列腺癌和宫颈癌^[1-4]。但Genistein联合放射对胶质瘤放射敏感性的影响目前尚未有研究报道。本实验通过Genistein联合放射作用于U251细胞,观察其对U251细胞增殖与凋亡影响,研究Genistein对U251细胞放射敏感性影响,为Genistein应用于胶质瘤治疗提供可靠依据,以期提高胶质瘤的放疗效果。     

食管鳞癌放射抗拒细胞株特征性蛋白指纹图谱的实验研究

目的：探讨食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株特征性蛋白指纹图谱，为进一步的临床研究提供依据。方法：确定食管鳞状细胞癌细胞株（ECa109）的亚致死剂量射线。构建食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株模型（ECa109－IR）。克隆生存实验、细胞增殖实验和流式细胞术检测 ECa109－IR 具有放射抗拒性。将食管鳞癌放射抗拒细胞株（ECa109－IR）与食管鳞癌放射敏感细胞株（ECa109）送至北京进行蛋白指纹图谱的检测。结果：成功构建食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株（ECa109－IR）。克隆生存实验、细胞增殖实验、流式细胞术证实 ECa109－IR 具有放射抗拒性。蛋白指纹图谱表明：ECa109－IR 细胞和 ECa109细胞的蛋白质荷比峰存在明显差异（P ＜0．05的差异峰为21个，P ＜0．01的差异峰为19个），21个差异表达的蛋白质峰中，13个质荷比峰在 ECa109－IR 中表达下调，8个质荷比峰在 ECa109－IR 中表达上调。结论：ECa109－IR 和 ECa109蛋白指纹图谱之间有21个存在明显差异的蛋白峰（即两者之间存在差异蛋白），这些差异蛋白峰可能与肿瘤细胞放射抗拒相关，可为食管癌的临床研究提供依据。本研究的不足之处为未进行差异表达蛋白的分离鉴定，下一步的计划是鉴定具体蛋白，提出食管鳞癌放疗敏感性的预测模型。     

鼻咽癌放射敏感性的分子生物学研究进展

鼻咽癌是我国南方地区常见的恶性肿瘤之一, 由于其解剖位置的特殊性以及对放射线敏感的特性, 放射治疗是首选的治疗手段。鼻咽癌治疗失败的原因之一为放射抗拒, 研究其抗拒机制、寻找放射增敏途径是提高治愈率的途径之一。通过预测肿瘤细胞内在放射敏感性来推测个体肿瘤放射治愈的可能性是当前的研究热点。本文将对国内外在鼻咽癌放射敏感性分子生物学方面的研究近况进行综述。      

胶质瘤干细胞对放射线一定抗拒吗?

放射治疗是恶性胶质瘤最重要的辅助治疗方法之一。近年来多数研究表明胶质瘤干细胞相对于非干细胞对于放射线更加抗拒。但是最近有研究表明,胶质瘤干细胞并不一定比传统胶质瘤细胞系抗拒。并且,报道发现微环境有助于胶质瘤细胞放射损伤的修复。以后的研究需要更加重视胶质瘤细胞在体内对于放射线的反应。     

人脑胶质瘤细胞SHG-44照射后COX-2表达与放射敏感性的关系

目的:探讨人脑胶质瘤细胞SHG-44照射存活后代细胞对放射敏感性的变化,以及环氧合酶-2(COX-2)的表达情况,为临床使用COX-2抑制剂提供理论依据。方法:采用克隆形成率研究SHG-44及SHG-44照射存活后代细胞的放射敏感性;并分别用RT-PCR方法及免疫组化的方法检测COX-2基因mRNA和蛋白的表达情况。结果:与SHG-44细胞相比,SHG-44照射后代细胞对放射的敏感性下降,COX-2 mRNA及蛋白表达均升高。COX-2表达水平与SHG-44照射后代细胞放射敏感性呈负相关。结论:辐射诱导了SHG-44细胞COX-2表达的升高,使SHG-44照射后代细胞对放射敏感性下降,COX-2表达的升高可能是导致其辐射耐受的原因之一。     

LyGDI对肺癌A549细胞放射敏感性影响的观察

目的:研究X射线对稳定转染鸟苷解离抑制因子(LyGDI)A549细胞株放射敏感性的影响及相关机制。方法:应用生长曲线观察细胞增殖能力,流式细胞术检测不同剂量照射后转染组和对照组细胞的周期分布及凋亡率,克隆形成试验观察转染组细胞放射敏感性。结果:转染组细胞相对于对照组增殖能力减弱,F=212.55,P<0.01;克隆形成能力减弱,放射敏感性增加,F=7.56,P<0.05;流式细胞术检测到辐射诱导凋亡增加,F=18.45,P<0.01;细胞周期检测提示转染组G2期阻滞受抑制,F=6.29,P<0.05。结论:过度表达的LyGDI上调A549细胞放射敏感性,其可能机制为抑制G2期阻滞促进凋亡。     

脑胶质瘤放射敏感性研究概况

肿瘤对放射线的敏感性直接影响到放疗效果。人脑胶质瘤内在放射敏感性的影响因素很多，放射线引起的细胞凋亡、细胞周期变化、基因突变以及放射损伤和损伤修复等均与脑胶质瘤的内在放射敏感性密切相关。2Gy照射后的存活分数（survival fraction at 2Gy，SF2）是内在放射敏感性的重要反映指标。但体外试验所得的脑胶质瘤内在放射敏感性的检测结果（SF2）与临床放射治疗疗效以及患者预后之间有无关联，目前尚无定论。SF2能否作为胶质瘤临床放射治疗疗效和患者预后的评价指标还有待进一步的研究。     

两株人肝癌细胞QSG-7701和HepG2放射敏感性的体外研究

在研究肿瘤的辐射效应之初就有人发现 [1], 各种肿瘤细胞对辐射的敏感性有明显差异 , 因而在接受放射治疗时效果也不一样 . 体外培养细胞株的存活分数 (surviving fractionm,SF)在受到 2 Gy照射后 (简称 SF2)可以在 0.01～ 0.90之间变动 , 即使是同一肿瘤的不同细胞株 , SF2也可以相差数十倍 [1]. 放射诱发细胞凋亡现象是近年放射生物学研究的一个热点 . 有人在研究鼠的肿瘤时发现 [2], 细胞放射反应与照射后凋亡水平具有相关性 .     

缺氧诱导因子-1对人脑胶质瘤细胞株T98G放射线敏感性的影响

目的:观察缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factory-l,HIF-1)以及其拮抗剂对人脑胶质瘤细胞株T98G放射线敏感性的影响,初步探讨缺氧影响放疗疗效的机制.方法:以化学性缺氧模型观察缺氧诱导因子-1对细胞放射敏感性的影响,以及缺氧诱导因子-1拮抗剂毛壳菌素的放射增敏作用.结果:氯化钴显著降低放射线对T98G细胞的增殖抑制作用,使用毛壳菌素拮抗缺氧诱导因子-1的转录活性可逆转放射线脱敏现象.结论:氯化钴抑制胶质瘤细胞的放射线敏感性,该作用与缺氧诱导因子-1的转录活性相关.