氯化甲基汞中毒大鼠周围神经损伤的病理演变

目的:探讨氯化甲基汞中毒大鼠周围神经损伤的病理改变及病理机制.方法:在WKAH大鼠服用氯化甲基汞4 mg/d所致的亚急性汞中毒模型上,采用组织病理、免疫组化、蛋白印迹等方法动态观察坐骨神经和后根神经节的病理演变,TUNEL染色观察细胞凋亡.结果:中毒后第11天后根神经节内可见散在大型神经元A被吞噬细胞浸润,电镜下A型神经元胞质内线粒体变性;坐骨神经远端轻微轴索变性,病变逐渐加重并向心性发展.第15天开始出现髓鞘崩解,MRF-1染色显示有少量的吞噬细胞反应.第18天出现明显轴索变性及髓鞘崩解,可见大量浸润的吞噬细胞;后根神经节内A型神经元近于消失,但B型神经元保留良好,B型神经元的上行终末胶状质下区亦出现明显变性.TUNEL染色未观察到节细胞凋亡.采用Western 印迹法观察到坐骨神经及后根神经节神经原纤维及髓鞘蛋白O随中毒时间延长逐渐降低,在第15天后尤为明显,与免疫组化结果相符合.结论:亚急性汞中毒模型中,A型神经元变性可能与汞中毒损伤线粒体膜继发的能量代谢障碍有关;而B型神经元变性则符合逆行性死亡的过程.     

甲醛对雌性大鼠卵巢颗粒细胞的影响

目的 研究大鼠染毒后甲醛时大鼠阴道脱落细胞、卵巢颗粒细胞的显微及超微结构、卵巢颗粒细胞凋亡率的影响.方法 将40只SD雌性大鼠随机分为正常组和3个不同浓度甲醛染毒组,腹腔注射甲醛,剂量分别为20.0、2.0和0.2 mg/kg,每天1次,连续14 d,每天观察阴道脱落细胞变化,14 d后处死所有大鼠取卵巢组织,应用苏木精-伊红染色光镜下观察雌性大鼠卵巢病理组织变化,应用电镜技术观察雌性大鼠颗粒细胞超微结构的变化,应用TUNEL染色观察卵巢颗粒细胞凋亡的情况.结果 甲醛染毒后,大鼠的阴道脱落细胞周期性变化被扰乱,HE染色后通过光镜观察,甲醛可造成雌性大鼠卵巢的病理组织结构的变化,其病理变化的程度与甲醛呈剂量依赖性;电镜检查发现甲醛可破坏卵巢颗粒细胞的细胞核及细胞器,且与甲醛呈剂量依赖性;TUNEL染色观察到甲醛染毒组大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡率随甲醛剂量增加而增加.结论 甲醛能够影响大鼠卵巢颗粒细胞的结构,诱导颗粒细胞凋亡,从而影响卵巢的性激素分泌功能.     

排卵后小鼠卵周颗粒细胞在输卵管内死亡过程的研究

目的研究随同卵细胞排到输卵管内的卵周颗粒细胞的死亡过程。方法用组织学、TUNEL、免疫组织化学和透射电镜技术,对交配后5、81、2 h小鼠的输卵管进行观察。结果交配后5 h,输卵管壶腹部可见颗粒细胞围绕在卵细胞周围,但在12 h基本消失。5 h 5%颗粒细胞呈TUNEL阳性反应,8 h 30%呈阳性反应。超微结构研究显示,这些细胞以细胞核呈现常染色质凝集和向细胞核边缘聚集改变为特点。此外,一些颗粒细胞以线粒体的肿胀,细胞膜、核膜和其他细胞器的膜破裂为特点。在颗粒细胞间还可见F4/80阳性细胞,其胞质中有TUNEL阳性小体。结论随同卵细胞排到输卵管的颗粒细胞消失速度快,主要通过细胞凋亡和坏死2种细胞死亡途径,巨噬细胞可能参与凋亡细胞的清除过程。     

急性低氧对小鼠脑的形态学和酶组织化学的影响

用低氧中毒实验观察5％O_2和10％O_2通气6h后小鼠脑的形态学和酶组织化学改变及恢复情况。结果发现,即时组小鼠大、小脑Nissl染色部分神经元胞浆浅染。乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)及细胞色素氧化酶(CCO)染色即时组较正常对照组为浅,提示酶活性下降,与显微分光光度计检测结果一致。电镜下可见大、小脑神经元有核染色质边聚及溶解,粗面内质网扩张并有脱颗粒现象,粗面内质网和游离核糖体减少,线粒体和高尔基复合体肿胀。部分颗粒细胞出现核膜扩张。胶质细胞也出现相似改变,微血管周围的星状胶质突起明显水肿。未见突触及髓鞘改变。上述形态学及酶组织化学改变于1～2周均恢复正常。     

低剂量甲基汞对仔鼠脑远期影响实验研究

本文利用电镜及微机处理等方法,对在宫内接触低剂量甲基汞的小鼠脑经过较长时间后发生的变化进行了研究。主要病变有:脑内的神经细胞明显变性、脱失,包括小脑颗粒细胞及蒲肯野细胞在内。超微结构观察显示线粒体肿大,有空泡及髓鞘样结构形成;内质网断裂成小囊泡;溶酶体显著增多;核膜增厚、不清,细胞突起有明显的变性及坏死;毛细血管基底膜及胶质膜增厚,意味血脑屏障有损伤。上述变化在妊娠晚期染汞小鼠表现尤为突出。     

一氧化碳中毒所致小鼠迟发性脑病的病理变化及机制

[目的]探讨小鼠一氧化碳中毒所致迟发性脑病大脑、脊髓、周围神经的病理变化及其发病机制。[方法]将小鼠随机分为2组：A组（8只）,空气（100ml／kg）腹腔注射1次／d,连续7d;B组（20只）CO（100ml／kg）腹腔注射1次,d,连续7d。观察实验动物神经系统表现,分别于1、2、3、4周取大脑、小脑、脊髓、周围神经多聚甲醛固定,KB、GFAP、EDI、MBP染色观察。电镜观察神经组织超微结构病理改变。[结果]迟发性脑病小鼠多在中毒后7d表现为精神萎靡、运动迟滞、活动减少等。组织病理学显示：中毒后1周海马神经元、小脑浦肯野细胞数量减少,大脑皮层神经元变性、数量减少,脑组织内小血管扩张、数量增多。第2～3周皮层神经元仍见到变性坏死,明显的胶质细胞反应。大脑及小脑白质结构疏松,KB染色可见到明显的髓鞘脱失,尤其是以胼胝体、视束损害明显。脊髓前外侧区可见到细胞变性。电镜可见第2周开始海马神经元出现核固缩、核碎裂,细胞凋亡。[结论]一氧化碳中毒所致小鼠迟发性脑病发病机制包括后期的细胞凋亡及炎症反应的发生。     

氯化甲基汞诱导脑胶质瘤细胞凋亡的形态学变化及意义

目的：通过观察氯化甲基汞(MMC)诱导大鼠脑胶质瘤细胞凋亡的形态学改变,探讨MMC的抗脑胶质瘤作用。方法：制备大鼠脑胶质瘤动物模型,将造模成功的大鼠随机分为对照组和实验组,实验组大鼠注射C6脑胶质瘤细胞1周后,每天灌胃给予10 mg·kg^-1MMC,连续5 d;对照组给予相同体积的生理盐水。除自然死亡外,其余存活大鼠在第24天全部处死,取大鼠脑组织,光镜及透射电镜观察其病理组织学改变。结果：大体病理显示,实验组大鼠肿瘤体积明显小于对照组;光镜下显示,实验组大鼠C6胶质瘤细胞生长密度低于对照组,并可见细胞体积变小、核固缩深染的凋亡形态学改变细胞。透射电镜显示,实验组大鼠肿瘤细胞发生核固缩、染色质周边化、核断裂、胞浆空泡变性等改变;对照组大鼠肿瘤细胞核体积增大,外形不规则,核常染色质为主,核仁突出。结论：MMC具有抑制大鼠体内C6胶质瘤增殖的作用,其机制可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现。     

高热惊厥大鼠脑病理变化及超微结构的实验研究

目的：探讨反复高热惊厥（febrile seizure，FS）是否能引起发育期大鼠脑损伤。方法：51只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（NC组，n=14）、高热对照组（HC组，n=19）及高热惊厥组（FS组，n=18）。水浴法建立FS模型，每日诱导2次，共10次。采用HE染色观察FS大鼠海马神经元病理形态，TUNEL染色观察神经元凋亡，电镜观察海马CA1区神经元、突触、穗鞘、胶质细胞、缝隙连接、毛细血管等超微结构变化。结果：HE染色可见FS组海马神经元发生变性和坏死。TUNEL染色可见FS组凋亡指数明显增高。电镜观察可见FS组神经元出现胞膜皱缩，细胞体积缩小，胞浆密度增加，核膜内陷，胞核深染；线柱体肿胀、脊断裂甚至空泡化，粗面内质网、游离核糖体肿胀，密度低；突触间隙增宽；髓鞘松解；胶质细胞水肿；毛细血管周围水肿。结论：频繁的FS发作可导致发育期大鼠海马神经元损伤。     

燃煤型氟中毒对雌鼠卵巢TGF-α的影响

目的:动态观察燃煤型氟中毒对雌鼠卵巢转化生长因子(TGF-α)的影响.方法:SD雌鼠90只,随机均分为对照组、中氟组和高氟组,于不同时间段(60d、120 d、180 d)观察氟斑牙,用离子选择电极法测定雌鼠尿氟、骨氟含量;电镜下观察卵巢凋亡情况,用TUNEL技术检测卵巢凋亡细胞数,用免疫组化法检测卵巢TGF-α的表达.结果:随着染氟剂量增加和染氟时间的延长,雌鼠氟斑牙症状逐渐加重,尿氟、骨氟含量增加,染氟组卵巢凋亡细胞数明显增加;与对照组相比,相同染氟时间各染氟组卵巢颗粒细胞TGF-α蛋白表达量均降低(P＜0.05),高氟组低于中氟组,差异有统计学意义(P＜0.05);相同染氟剂量,随着染氟时间延长,各染氟组TGF-α含量逐渐减少,中氟组60d高于120 d和180d,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:氟中毒可能导致卵巢组织细胞超微结构损伤,严重破坏颗粒细胞中线粒体,影响卵巢细胞的能量供应,促使卵巢颗粒细胞凋亡;氟中毒可导致TGF-α分泌减少使其参与阻碍卵泡凋亡和闭锁的作用减弱,促使卵巢颗粒细胞的凋亡增加.     

蛇床子素对人肺鳞癌NCI-H520细胞系增殖、凋亡的影响

目的 探讨天然化合物蛇床子素对肺鳞癌NCI-H520细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT比色法检测蛇床子素对NCI-H520细胞增殖的影响;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测诱导细胞凋亡;Hoechst 33342核染色观察细胞核的形态变化.结果 蛇床子素对NCI-H520有明显的增殖抑制作用,且呈现明显时间剂量依赖性;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法结果显示蛇床子素可以诱导细胞凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性;药物处理组细胞核经Hoechst 33342染色可见染色质边集、核碎裂等典型的细胞凋亡改变,而空白对照组没有相应的变化.结论 蛇床子素可以抑制NCI-H520细胞的增殖、诱导细胞凋亡.     

3种方法检测HCMV先天性感染对老年小鼠大脑皮质细胞凋亡的比较

目的分析TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术和透射电镜3种细胞凋亡检测方法的优缺点。方法在已建立的HCMV先天性感染小鼠中枢神经系统模型基础上,选用鼠龄为24个月模型鼠进行试验。试验分为3组(每组6只)HCMV先天性潜伏感染老年小鼠组(A组)、HCMV先天性潜伏再激活感染老年小鼠组(B组)和正常对照老年小鼠组(C组)。采用TUNEL法和流式细胞仪检测各组小鼠大脑皮质细胞凋亡情况,采用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构变化。结果TUNEL法和流式细胞术检测发现C组凋亡细胞最少,A组凋亡细胞比率较C组有所升高,而B组凋亡细胞最多;检测结果经T检验分析发现A组、B组与C组各组间凋亡率差异均有显著性。透射电镜检测发现,同C组比较,A组和B组部分神经元细胞核染色体固缩,核物质碎片化,凋亡小体形成等特征性凋亡改变。结论HCMV先天性感染可致老年小鼠大脑皮质细胞凋亡。TUNEL法和流式细胞术可用于凋亡的定量检测,但TUNEL法易受主观因素的影响,而透射电镜是凋亡定性检测的可靠方法。     

Sonic Hedgehog信号在小脑早期发育中的作用

目的:研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在小脑发育早期对小脑外颗粒层的颗粒细胞前体(GCP)细胞增殖迁移的影响?方法:通过石蜡切片免疫荧光观察小脑外颗粒层GCP细胞增殖情况;建立体外培养小鼠脑片系统,检测小脑外颗粒层GCP细胞的增殖和动态迁移情况?结果:小鼠出生后7 d小脑外颗粒层增殖的GCP细胞最多;Shh信号通路促进小脑外颗粒层GCP细胞的增殖,用环巴胺(cyclopamine,CPA)抑制信号通路后小脑外颗粒层GCP细胞增殖受到抑制,但迁移不受影响?结论:Shh信号通路是促进小脑外颗粒层细胞增殖及有丝分裂必不可少的一部分,且它的作用只部分局限于外颗粒层?     

鸡和大鼠小脑发育的比较观察

观察发育阶段不同的鸡和大鼠的小脑标本外形,并在光学显微镜和电子显微镜下观察了结构。鸡卵在孵育的第6天,小脑原基出现。第15天小脑皮质形成,普肯野氏细胞(普氏细胞)排成一层。新生鸡小脑皮质发育近成年状态,普氏细胞发育基本完成。大鼠在生后第5天小脑皮质形成,第20天发育成熟。在生后第5天普氏细胞排成一层,第20天接近成熟状态,此时在电子显微镜下显示为粗面内质网和多聚核蛋白体区域性集中分布。鸡小脑比大鼠小脑发育早,这是种属差异。     

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤Bcl-2和Bax表达的调控

目的研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌细胞凋亡作用及其机制。方法采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机平均分为对照组、溶剂(DMSO)组、DHA200μmol/kg体质量组和DHA100μmol/kg体质量组,经13d干预后,电镜观察肿瘤组织形态学表现;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果与对照组及DMSO组比较,DHA治疗组电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2表达减弱、Bax表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL检测结果显示肿瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DHA具有较强的诱导前列腺癌细胞凋亡作用,这种作用可能是通过下调Bcl-2和上调Bax表达实现的。     

丝裂霉素对小鼠淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达的影响

目的：探讨丝裂霉素（MMC）对小鼠淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达的影响。 方法：采用免疫荧光染色及流式细胞术检测P21蛋白表达的时程和量效改变。 结果：时程实验研究证实,给予2 mg•L^-1 MMC处理后,EL-4细胞中P21蛋白表达在2～48 h 明显高于对照组（P<0.05, P<0.01）。量效实验结果证实,给予1、2和4 mg•L^-1 MMC处理后24 h,P21蛋白表达与对照组相比明显增高（P<0.01）。结论：MMC能诱导P21蛋白表达增高,并存在时间和剂量依赖关系。     

酒石酸锑钾在诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡中的影响

目的:本研究旨在明确酒石酸锑钾(PAT)在体外对人肝癌BEL7402细胞凋亡的影响及抑癌机制。方法:用PAT以不同浓度、不同时间作用于人肝癌BEL7402细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、TUNEL染色法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:PAT以剂量依赖和时间依赖的方式抑制BEL7402细胞的生长。5～40μmol·L-1的PAT处理48h后,形态学上,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。DNA末端原位标记染色法、流式细胞仪均能检测到凋亡细胞。结论:PAT在体外诱导肝癌BEL7402细胞凋亡,能作为一种凋亡诱导剂用于肝癌的治疗。     

羟色胺对体外培养的人胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的：探讨5-羟色胺(5-HT)对胎盘滋养细胞凋亡的影响及其与妊娠高血压疾病发生、发展的相关关系。方法：将正常妊娠37~39周经剖宫产术获取的无菌胎盘滋养细胞分离、纯化、高糖型DMEM培养传代，第1～2代培养的细胞分成4组，加无菌蒸馏水对照组和加入0.1、1及10 μmol·L^-1浓度5-HT组，分别孵育培养3、6、12及24 h后，采用TdT末端转移酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）检测各组培养的胎盘滋养细胞凋亡指数；采用电镜观察各组凋亡滋养细胞的超微结构。结果：10 μmol·L^-1 5-HT组培养3、6、12及24 h可使胎盘滋养细胞凋亡指数分别升至8.40±2.48、17.82±5.43、29.53±7.41及45.56±12.10，与对照组(1.21±0.97、2.30±1.24、3.89±2.32及7.34±5.59)比较，差异均有显著性（P<0.05）；1 μmol·L^-15-HT组在培养12及24 h可使胎盘滋养细胞凋亡指数升高至17.96±3.48、23.76±8.47，与对照组比较差异均有显著性（P<0.05）；0.1 μmol·L^-1 5-HT组胎盘滋养细胞凋亡指数与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。透射电镜下可见对照组及0.1、1和10 μmol·L^-1浓度5-HT处理组发生凋亡的胎盘滋养细胞均呈特征性的凋亡细胞改变：染色质固缩成块，核仁裂解消失，可见凋亡小体。结论：高浓度5-HT可促进胎盘滋养细胞凋亡，此机制可能与妊娠期高血压疾病的发生、发展有关。     

神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注小脑神经细胞凋亡的影响

目的 观察神经生长因子(NGF)对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡的影响。方法 采用闭塞大鼠四动脉建立全脑缺血模型，应用光镜、电镜及末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血30min再灌注7d小脑皮层神经细胞凋亡的情况。结果 模型组小脑皮层神经细胞有明显形态学损伤，蒲肯野细胞凋亡明显。NGF组(1000u／kg，2000u／kg)神经细胞结构损伤明显减轻，凋亡细胞明显减少。结论 NGF对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡有明显抑制作用。     

氯化甲基汞对不同发育阶段小鼠脑组织神经元c-fos基因表达的影响

目的:探讨氯化甲基汞(Methylmercury chloride,MMC)对不同发育阶段小鼠大、小脑组织神经元c-fos表达的影响.方法:选用1、4、8、16、28天龄和成年(P1、P4、P8、P16、P28、AD)雄性昆明系小鼠,实验组腹腔注射10 mg*kg-1 MMC,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,染毒后各天龄组小鼠按下述时间点在麻醉状态下取脑组织, P8组小鼠在30、45、60、120和180 min时间点及其余各组在45 min时间点迅速取脑组织,常规石蜡包埋,采用原位杂交法观察MMC对大、小脑神经元c-fos基因表达的影响.结果:P8小鼠大脑和小脑c-fos mRNA阳性细胞率在第30分钟时开始增加,45 min时间点最高,随着时间的延长逐渐减少;P8实验组45 min阳性表达率小脑高于大脑(P<0.05);45 min时间点实验组大脑和小脑c-fos mRNA阳性细胞率随小鼠天龄的增加而减少;P1、P4、P8天龄组大脑阳性细胞率高于对照组高(P<0.05);P1、P4、P8、P16、P28天龄组小脑阳性细胞率高于对照组 (P<0.05).结论: MMC可诱导小鼠大、小脑神经元c-fos基因表达,这可能是MMC神经损伤的机理之一.