Runx3基因启动子甲基化检测对乳腺癌患者早期诊断的临床意义

目的 探讨血浆Runx3基因启动子甲基化检测对诊断早期乳腺癌的临床意义.方法 2009年10月～2010年10月收集经病理确诊的乳腺癌患者60例,采用DNA甲基化特异性PCR方法检测60例乳腺癌患者的癌组织、癌旁正常组织及血浆中Runx3基因启动子异常甲基化情况.GraphPad Prism 4统计软件对乳腺癌组织和血浆中Runx3基因甲基化行x2检验分析.结果 癌旁正常组织中Runx3异常甲基化为6.67％,癌组织中Runx3异常甲基化率为58.33％,血浆中为78.33％,血浆中甲基化改变与癌组织甲基化改变具有显著相关性.Runx3基因甲基化与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小无相关性(x2分别为0.951,0.287,P＞0.05),而与患者临床分期和淋巴结转移密切相关(x2=5.188,P=0.023),其中癌组织中Ⅰ期+Ⅱ期患者甲基化率与Ⅲ期+Ⅳ期患者甲基化率比较差异显著(x2=8.625,P=0.003).结论 血浆Runx3基因启动子甲基化检测对早期诊断乳腺癌有一定诊断参考价值.     

Runx3基因在肝细胞癌中甲基化状态分析及临床意义

目的通过检测肝细胞癌组织中Runx3基因启动子区域甲基化状态,探讨Runx3基因启动子区域异常甲基化在肝细胞癌发生、发展过程中的临床意义。方法采用DNA甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）（MSP）技术对81例肝细胞癌患者肿瘤组织及其癌旁正常组织Runx3基因启动子区域甲基化状态进行检测。结果在肝细胞癌组织中,Runx3基因启动子区域甲基化率占43．2％（35／81）,而在相对应的癌旁正常组织中,Runx3基因启动子区域仅发现1例异常甲基化现象,其甲基化率占1．2％（1／81）（P〈0．01）;Runx3基因启动子区域甲基化状态与临床病理参数的关系差异均无统计学意义。结论Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与肝细胞癌发生早期密切相关,可作为肝细胞癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

Runx3基因启动子区甲基化与胃癌的关系

目的通过检测胃癌Runx3基因启动子区域甲基化状态，来探讨Runx3基因启动子区域甲基化在胃癌发生和发展过程中的临床意义。方法采用DNA甲基化特异性PCR（MSP）技术对37例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测。结果Runx3基因在37例胃癌及其癌旁组织中甲基化率分别为40．5％（15／37）和8％（3／37）。结论Runx3基因启动子区甲基化可能是肿瘤特异性的（P＜0．05），可作为胃癌早期诊断的分子标记物。     

胰腺癌细胞中Runx3基因表达及甲基化的研究

目的观察胰腺癌细胞中Runx3基因表达的情况,探讨其出现表达异常的机制。方法 (1)RT-PCR检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞及正常胰腺组织中Runx3mRNA表达情况(2)Western blotting检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中Runx3蛋白表达情况;(3)甲基化特异性PCR(MSP)检测胰腺癌Panc-1、BxPC-3、As-PC-1细胞及正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛的甲基化水平。结果 (1)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中未检测到Runx3基因mRNA表达,而正常胰腺组织可检测到Runx3基因mRNA表达;(2)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中未检测到Runx3蛋白表达;(3)Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞中Runx3基因启动子区CpG岛均发生甲基化,而正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛未检测到甲基化。结论胰腺癌细胞中存在Runx3基因失表达,其机制可能与Runx3基因启动子区CpG岛发生甲基化有关。     

Runx3基因甲基化与大肠癌发生和转移的关系

目的 探讨Runx3基因启动子甲基化与大肠癌发生发展过程的关系。方法 采用蛋白印迹技术（Western-Blot）检测30例大肠癌组织及肿瘤周围正常黏膜组织中Runx3mRNA的表达，同时用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果 30例大肠癌组织标本中Runx3基因的表达（6409．1042±298．2028）较肿瘤周围正常组织中表达明显下调（34565．3921±1108．2163），差异有统计学意义（P〈0．01）。正常黏膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化，30例大肠癌组织中有16例检测到Runx3基因启动子的甲基化，大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高（P〈0．05）。大肠癌标本中Runx3蛋白的表达与其病理临床特征密切相关，在低分化和有淋巴结转移大肠癌组织标本中Runx3蛋白的表达显著下调（P〈0．05）。结论 Runx3基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一，并且与大肠癌的发生发展密切相关。     

骨肉瘤外周血Runx3基因启动子甲基化检测及临床意义

目的研究骨肉瘤患者外周血Runt相关转录因子3(Runx3)基因启动子甲基化及临床意义。方法选择骨肉瘤患者及健康人作为研究对象,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测两组研究对象外周血Runx3基因启动子甲基化并比较其差异,分析骨肉瘤患者Runx3基因启动子甲基化与临床病理因素的关系。结果骨肉瘤患者外周血Runx3基因启动子甲基化率(57.1%)显著高于健康人(2.0%),差异有统计学意义(P0.05)。在不同性别、年龄、肿瘤部位和病理类型的骨肉瘤患者之间,外周血Runx3基因启动子甲基化率的差异无统计学意义(P0.05),在不同KPS评分、肿瘤最大径、病理性骨折、组织学分级和Enneking分期的骨肉瘤患者之间,差异均有统计学意义(P0.05)。KPS评分低于70分、肿瘤最大径大于或等于10cm、有病理性骨折、组织学分级G3+G4及Enneking分期晚的骨肉瘤患者,其Runx3基因启动子甲基化率显著高于KPS评分大于或等于70分、肿瘤最大径小于10cm、无病理性骨折、组织学分级G1+G2及Enneking分期早的骨肉瘤患者。结论骨肉瘤患者外周血Runx3基因启动子呈高甲基化状态,与KPS评分、肿瘤最大径、病理性骨折、组织学分级和Enneking分期密切相关,可用于评估骨肉瘤患者病情及预后。     

甲基化特异性PCR联合结合重亚硫酸盐限制性内切酶法在胃癌抑癌基因甲基化检测中的应用

目的探讨甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌组织中抑癌基因甲基化的准确性,联合应用MSP方法与结合重亚硫酸盐限制性内切酶法(COBRA)检测抑癌基因甲基化状态的意义。方法采用MSP检测胃癌组织抑癌基因Runx3启动子区甲基化的状态,随后再采用COBRA检测胃癌组织标本的甲基化状态。分析两种方法检测结果的关系。结果经MSP方法检测54例肿瘤组织中共有30例标本发生Runx3基因启动子区异常甲基化,甲基化阳性率为55.6%。经COBRA方法检测54例肿瘤组织中有27例出现酶切条带即存在甲基化,甲基化阳性率为50.0%。经COBRA方法检测,在MSP方法检测的30例阳性标本中有3例未出现酶切条带即为假阳性。在MSP方法检测Runx3基因甲基化阴性的24例标本中,经COBRA方法检测,Runx3基因甲基化阴性的标本亦为24例。两种检测方法检测结果的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论甲基化特异性PCR方法在检测胃癌抑癌基因甲基化状态的研究中具有较高的灵敏度,COBRA方法可以检测出MSP方法中的假阳性标本,联合应用两种方法检测胃癌组织中抑癌基因的甲基化状态会使实验结果更可靠、准确。     

胃癌中多基因甲基化状态及其表达的研究

目的了解胃癌中p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因启动子CpG岛的甲基化状态,并探讨基因异常甲基化与mRNA表达的关系及其意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测12例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁正常组织中5种基因的甲基化状态,以12例胃镜活检的正常胃组织作为对照,采用RT-PCR方法相应检测了5种基因的mRNA表达水平。并分析每种基因甲基化程度与表达水平之间的关系。结果胃癌组织中,p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因的甲基化率分别为41.7%、8.3%、58.3%、33.3%和58.3%,相应的癌旁正常组织中,p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因的甲基化率分别为8.3%、0.0%、8.3%、8.3%和16.7%,且75%的胃癌组织中至少有一种基因甲基化,显著高于癌旁正常组织25%(P<0.05),而健康对照组织中无基因甲基化,在甲基化的胃癌组织中均无p16、E-cadherin和DAPKmRNA表达,而癌旁正常组织、非甲基化的癌组织中均有其表达。结论胃癌中多基因启动子CpG岛高甲基化是一个频繁的事件,并且基因启动子高甲基化与其mRNA表达缺失有关,这可能参与了胃癌的发生发展。     

Runx3基因的主要作用机制及与转化生长因子β信号传导通路的关系

<正>人Runx家族包括三个成员,分别是Runx1、Runx2和Runx3基因,它们的基因产物在结构上具有许多相似之处,但功能各不相同。Runx1可调节造血相关基因的表达,是白血病染色体易位最常见的靶位点;Runx2对骨组织的形成和重建起重要作用,是骨细胞的特异转录因子~([1]);Runx3参与了多种生理过程,包括神经和树状突细胞的成熟等。1 Runx3基因的结构特点Runx3基因定位于染色体l P36.1,有6个外显     

抑癌基因Runx3与肿瘤

Runx3基因是LevanonD等于1994年发现的，最初被命名为急性髓性白血病2基因，以后又被称作多瘤病毒强化因子结合蛋白2基因、核心结合因子3基因，因其在小鼠胚胎发育过程及人类多种恶性肿瘤的发生发展中起重要作用而倍受关注。但是，Runx3基因的抑癌机制尚没有完全研究清楚，本文就Runx3基因的结构、抑癌机制及在肿瘤中研究现状做一综述。     

胃癌患者血清抑癌基因启动子超甲基化测定的临床意义

目的：探讨胃癌患者血清中抑癌基因超甲基化检测的临床意义。方法随机收集2011～2013年上海市静安区中心医院进行胃镜检查的患者,32例胃癌患者为胃癌组,29例萎缩性胃炎为萎缩性胃炎组和30例健康者为健康对照组。应用甲基化特异性PCR（MSP）方法,测定血清Ras相关区域家族基因1a（RASSFA1）基因、人类相关转录因子3（Runx3）基因、错配修复蛋白MutL同源物1（hmLH1）基因、多肿瘤抑制基因1（MTS1）也称P16基因、上皮E钙粘蛋白（E-Cadherin）基因、组织因子途径抑制物2（TFPI-2）基因启动子甲基化状态。结果胃癌组血清RASSF1A、RUNX3、hmLH1、P16、E-Cadherin、TFPI-2基因超甲基化阳性率分别为21．9％,40．6％,21．9％,34．4％,28．1％,28．1％;萎缩性胃炎组分别为3．5％,13．8％,0．0％,6．9％,3．5％,6．9％;对照组仅检出RUNX3基因启动子甲基化,阳性率3．5％;胃癌组血清6种基因启动子甲基化阳性率均明显高于萎缩性胃炎组和健康对照组（P＜0．05）。联合血清中6种基因启动子甲基化对胃癌诊断灵敏度为76．7％,较单独一个基因明显升高（P＜0．05）;特异性为86．5％,与RUNX3基因比较,差异无统计学意义（P＞0．05）,与其他5个基因单独测定特异性降低（P＜0．05）。结论 MSP检测能检测到血清中RASSF1A、RUNX3、hmLH1、P16、E-Cadherin、TFPI-2基因启动子超甲基化。6个基因启动子联合测定对胃癌诊断的灵敏度更高,可为胃癌的诊断、治疗以及判断预后提供新方法或依据。     

SOCS超甲基化与经典型慢性骨髓增殖性肿瘤的研究

目的 探讨细胞因子信号转导抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling,SOCS)基因超甲基化在经典型骨髓增殖性肿瘤(MPD)中的临床作用及其机制.方法 采用甲基化特异性PCR方法检测SOCS1、2、3基因CpG岛甲基化发生情况,直接测序法检测100例MPD患者JAK2V617F突变情况,用实时定量PCR方法检测SOCS1、2、3的mRNA表达情况.结果 100例MPD患者中有27例(27％)存在SOCS1基因超甲基化,9例(9％)存在SOCS2基因超甲基化,34例(34％)存在SOCS3基因超甲基化.在100例MPN患者中,64例(64％) JAK2V617F突变阳性.MPD患者中SOCS1和SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比,其SOCSl和SOCS3基因mRNA表达量明显减少(P＜0.05);SOCS1和SOCS3基因JAK2V617F突变组与野生型组相比,其SOCS1和SOCS3基因mRNA表达量明显减少(P＜0.05).结论 MPD患者中存在JAK2V617F突变及SOCS基因超甲基化,且JAK2V617F突变和SOCS基因甲基化导致SOCS mRNA表达水平降低,SOCS超甲基化和JAK2V617F突变可改变JAK-STAT信号通路等的转录活性而最终影响疾病的发展,这些改变可能代表了一种潜在的治疗方向.     

外周血SEPT9基因甲基化检测在结直肠癌中的研究进展

外周血SEPT9基因甲基化检测在结直肠癌(CRC)诊断和筛查中敏感性及特异性较高,目前有关外周血SEPT9基因甲基化检测的四种算法中,Septin9(1/3)算法灵敏性最高,Septin9(2/3)算法特异性最高.可根据研究的目的进行外周血SEPT9基因甲基化检测的算法选择,满足实际检测需求.SEPT9基因甲基化检测在...     

多发性骨髓瘤患者p16基因结构改变及启动子区甲基化的研究

目的探讨p16基因结构及启动子区CPG岛甲基化在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用.方法利用PCR-单链构象多态性、甲基化特异性PCR(MSP)技术研究骨髓瘤细胞株U266、LP1、KM3及MM患者p16基因结构改变及启动子区CPG岛甲基化状态.结果KM3细胞株为p16基因外显子2的同源缺失;U266、LP1细胞株及55.56%MM患者的p16基因启动子区存在CPG岛甲基化现象,p16基因甲基化与MM分期无关(P>0.05).结论p16基因甲基化在MM中较为常见,这可能为MM的治疗提供借鉴.     

肾癌组织中Tim-3基因的甲基化分析

目的分析肾癌组织中Tim-3基因启动子的甲基化情况,探讨Tim-3甲基化在肾癌发生中的可能作用。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）检测20例肾癌组织和3例癌旁组织中Tim-3基因启动子甲基化状态,分析检测结果。结果肾癌组织中有11例（55%）检测到了Tim-3基因甲基化表达,相应癌旁组织中没有检测到Tim-3基因甲基化表达。结论肾癌组织中Tim-3基因启动子发生甲基化,Tim-3基因甲基化可能与肾癌的发生发展有关。     

FANCF基因甲基化与宫颈癌关系研究进展

宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤之一.如何早期诊断、提高治疗效果及患者生存率是目前研究热点.宫颈癌组织中抑癌基因的甲基化越来越受到关注.启动子CpG岛异常甲基化导致的基因失活是肿瘤发生发展过程中除基因突变和染色体物质缺失外的第3种机制.在某些情况下是抑癌基因失活的唯一机制.FANCF定位于11号染色体短臂l区5带,该基因的甲基化与宫颈癌的发生、发展有一定关系.本文针对FANCF基因启动子甲基化在宫颈癌发生及耐药形成中的作用作一综述.     

食管鳞癌细胞中五聚素3基因的表达及甲基化

目的研究食管鳞状细胞癌(ESCC)中五聚素3(PTX3)基因的表达以及基因启动子区甲基化状态对其表达的影响。方法采用RT-PCR、甲基化特异性PCR(MSP)、亚硫酸氢盐测序等方法对ESCC细胞进行检测PTX3基因mRNA的表达、基因启动子区甲基化状态。应用甲基转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-DC)去甲基化处理对该基因表达的影响。结论 RT-PCR结果显示PTX3 mRNA在细胞株TE-11、EC109、EC9706、KYSE30、KYSE510均不表达,在KYSE410,Het-1A细胞株中有PTX3 mRNA表达。MSP结果显示TE-11、EC109、EC9706、KYSE30、KYSE510存在PTX3基因甲基化,而KYSE410,Het-1A细胞株中不存在PTX3基因甲基化。甲基化测序结果进一步证实了MSP结果结果,28个CpG位点中,TE-11、EC109、EC9706、KYSE30、KYSE510甲基化程度分别为64.3%,81.0%,94.5%,78.5%及81.0%,而KYSE410,Het-1A不存在甲基化。ESCC细胞株PTX3基因启动子处于异常的高甲基化状态,经5-Aza-DC处理后,高甲基化的PTX3基因启动子去甲基化,处理前PTX3基因启动子高甲基化的细胞株其mRNA均不表达,去甲基化处理后能重新激活该基因表达。结论 PTX3基因启动子高甲基化是PTX3表达失活的主要原因之一,PTX3基因启动子甲基化检测可作为ESCC的潜在肿瘤标志物之一。     

RUNX3基因甲基化和去甲基化与肿瘤的研究进展

人RUNT相关转录因子3(RUNX3)属于RUNT家族成员之一,是目前热门研究的一个抑癌基因。阐述RUNX3基因的结构特点,综述RUNX3基因的甲基化和去甲基化情况与肿瘤发生发展的关系,得出通过甲基化抑制剂可以诱导抑癌基因的重新表达,从而达到治疗肿瘤的目的。     

膀胱移行细胞癌组织基因的P14ARF、DAPK、RARβ甲基化变异分析

目的 通过检测新鲜冰冻膀胱癌组织中P14ARF、DAPK、RARβ基因的启动子CpG岛基因的甲基化状态,探讨P14ARF、DAPK、RARβ在膀胱癌发生过程中的作用及诊断意义.方法 采用甲基化特异性PCR技术检测48例手术切除的膀胱癌组织和其中13例相应癌旁组织标本、17例非肿瘤患者正常膀胱组织中DAPK、RARβ、P14ARF基因的甲基化情况.结果 48例膀胱癌组织中发现P14ARF基因异常甲基化13例(27.0%),DAPK基因异常甲基化13例(27.0%);RARβ基因异常甲基化44例(91.6%);17例腺性膀胱炎组织中发现P14ARF基因异常甲基化0例,DAPK基因异常甲基化2例(11.7%);RARβ基因异常甲基化3例(17.6%);13例正常膀胱组织中,仅有2例RARβ基因异常甲基化,P14ARF基因、RARβ基因异常甲基化膀胱癌组织与腺性膀胱炎组织差异有统计学意义(P<0.01;P<0.05).结论 P14ARF、DAPK、RARβ基因异常甲基化与膀胱癌发病密切相关,RARβ基因可作为正常膀胱组织与癌组织鉴别诊断的标志物.