总黄曲霉毒素ELISA定量检测试剂盒研制

目的研究并建立敏感、特异和快速的针对食品中总黄曲霉毒素的ELISA检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速定量检测试剂盒。方法在生产抗总黄曲霉毒素单克隆抗体基础上,利用间接竞争ELISA方法,研制出食品中总黄曲霉毒素快速检测试剂盒,并对试剂盒的各项技术参数进行测定。结果该试剂盒对黄曲霉毒素B G标准品的最低检出浓度为0.26 ng/ml,标准曲线的线性范围为0.26-20.00 ng/ml,线性方程y=-0.4463x 0.3532(R2=0.9915);对黄曲霉毒素B G50%的抑制浓度为2.08 ng/ml;试剂盒的条内变异系数为4.18%,条间变异系数为5.21%,抗体亲和力常数为1.52×10-10mol/L;对玉米3个加标水平的平均回收率分别为98.63%,94.56%和1 12.05%;对花生的3个加标水平的平均回收率分别为88.66%,87.50%和85.60%。试剂盒37℃可放置96 h以上;试剂盒对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的交叉反应率分别为100%,57.5%,104%和19%,与其他真菌毒素无交叉反应。结论研制出的ELIS试剂盒能定量检测食品中总黄曲霉毒素。     

抗T-2毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备并鉴定抗T-2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,以期为T-2毒素的快速检测提供有力的抗体工具。方法:采用琥珀酸酐法将T-2毒素活化为T-2HS,T-2HS在DCC与NHS作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联合成完全抗原。以T-2HS-BSA为抗原,免疫BALB/c小鼠,用ELISA筛选、建立分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株。测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价,用间接竞争法检测单克隆抗体细胞株的特异性。结果:建立了1株稳定分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株T-1B3,该细胞株所分泌的单隆抗体Ig亚类为IgG1,ELISA检测结果表明抗T-2毒素抗体可以与T-2毒素发生特异性反应,工作浓度为1:6.5×104,IC50为3.6 ng/ml。该抗体与HT-2毒素的交叉反应为65.9%,与黄曲霉毒素无交叉。结论:制备出能分泌具有较高特异性和亲和力的抗T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

抗黄曲霉毒素M1的单克隆抗体细胞株的建立

本研究建立了抗黄曲霉素素ＡＦＭ１的单克隆抗体细胞株,用ＡＦＭ１－肟＝朱血清白蛋白（ＡＦＭ１－ｏｘｉｍｅ－ＢＳＡ）ＷＪＭ ＢＵ ＴＲ ＱＫＵＭ本研究建立     

抗黄曲霉毒素B1单抗制备及免疫学定量方法建立

目的本研究合成并鉴定了AFB₁人工抗原,制备AFB₁的单克隆抗体(AFB₁mAb)。方法采用NHS法将AFB₁分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成W人工抗原AFB₁-BSA和AFB₁-OVA,紫外分光光度法和SDS-PAGE进行鉴定;AFB₁-BSA免疫BALB/C小鼠,通过间接ELISA和阻断ELISA法选择细胞融合备用鼠;用杂交瘤技术制备AFB₁mAb,并对其效价、亲和力、敏感性、特异性、亚型进行鉴定;体内诱生腹水法大量制备单抗。结果 UV图谱和SDS-PAGE图表明结半抗原AFB₁和载体BSA及OVA偶联成功;筛选出2H5-F6、2H5-C9、2H9-C3三株杂交瘤细胞;鉴定单抗亚型均为IgG1;细胞上清效价1:2.0×10²～1:1.28×10³,2H5-F6的腹水效价1:1.28×106,AFB₁mAb亲和常数Ka为2.65×10¹⁰ L/moL,对AFB₁的IC₅₀为2.58 ng/mL;与AFB2的交叉反应率为1.61%,与其他类药物无交叉反应。结论通过试验获得高效价、敏感、特异的AFB₁mAb,可用于各种食品中AFB₁残留的快速免疫学检测试验。     

抗黄曲霉毒素M1抗体制备及检测方法建立

目的制备针对黄曲霉毒素M1的单克隆抗体并建立针对黄曲霉毒素M1的间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。方法利用B细胞杂交瘤技术。建立能分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。结果研制出1株能特异性分泌抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F2。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1，亲和常数为2．8×10^-11mol／L。该抗体与黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2和黄曲霉毒素M2等结构类似物有微弱的交叉反应，具有较高的特异性。在此基础上建立了间接竞争酶联免疫吸附试验检测方法。该方法的最低检出浓度为0．07ng／ml。校正曲线的线性范围为0．02～2ng／ml，线性方程y=-0．4364x＋0．2693（R^2=0．9949）。方法的加标回收率为72．5％～131．3％。结论制备了具有高特异性和亲和力的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，并建立了快速、灵敏的针对黄曲霉毒素M1的酶联免疫吸附试验检测方法。     

黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的制备研究

作者将自制的抗黄曲霉毒素 B_1(AFB_1)抗体偶联到被溴化氰活化的琼脂糖珠4B 上,制成分离、纯化、富集小分子毒物 AFB_1的免疫亲和柱。该柱能定量地将10％甲醇-2％二甲基甲酰胺溶液中的 AFB_1截留,而50％的甲醇又能定量地将截留在柱上的 AFB_1洗脱,所得的洗脱液可直接用于荧光测定。当AFB_1(?)36ng 时,荧光强度与 AFB_1的量之间呈线性关系。重复进行3次截留和洗脱,对亲和柱的活性无明显影响,说明该亲和柱至少可重复使用3次。     

黄曲霉毒素分析方法研究进展

黄曲霉毒素是由某些真菌产毒菌株产生的次生代谢产物。由于其具有极强的毒性、致癌性以及在自然界存在的普遍性 ,许多国家对其进行了限量要求。并且随限量要求的不断提高 ,黄曲霉毒素的检测方法也不断发展。目前已有TLC法、HPLC法、ELISA法、RIA法、CE法、IC法等检测方法。建立快速、无污染、无毒的检测体系将成为今后研究的热点。     

黄曲霉毒素B_1抗体的制备研究

<正> 目前广泛应用于AF B_1的测定方法是薄层层析法,近年来应用免疫学力法测定AF B_1已获成功,其中酶联免疫吸附试验,方法简便、灵敏度高,适于推广应用。为此,我们进行了制备AF B_1抗体的研究,兹将结果报告如下。一、材料及仪器 1.抗原:AFB——1-Oxime-BSA。 2.佐剂:福氏完全佐剂(Difco Laboratories Detrait Michigan USA)。 3.AFB1-酶结合物。     

微囊藻毒素和黄曲霉毒素及伏马菌素联合毒性

目的研究微囊藻毒素、黄曲霉毒素、伏马菌素对Hep G2细胞的半数抑制浓度（IC50）,探讨3种毒素的联合毒性.方法选用3种毒素各自最具代表性的异构体微囊藻毒素LR、黄曲霉毒素B1和伏马菌素B1,用水溶性四氮唑（WST-1）比色法测定3种物质对Hep G2细胞存活率的影响,计算IC50,并根据等效曲面联合毒性分析模型判断联合作用类型.结果染毒24h,微囊藻毒素LR对Hep G2细胞的IC50〉100μmol/L;黄曲霉毒素B1、伏马菌素B1及3毒素混合物的IC50分别为1.0,399.2和172.0μmol/L.根据等效曲面法求得的相互作用指数α为0.95.结论微囊藻毒素LR、黄曲霉毒素B1和伏马菌素B1对Hep G2的联合毒作用类型为相加作用.     

深圳地区人群粮油食品中黄曲霉毒素膳食暴露评估

目的开展深圳地区人群主要摄入的粮食及其制品和食用油中黄曲霉毒素B1和总黄曲霉毒素的暴露评估。方法免疫亲和层析超高效液相法测定样本中黄曲霉毒素。通过深圳地区市售粮油食品中黄曲霉毒素污染水平和人群膳食消费量估算人群黄曲霉毒素B1和总黄曲霉毒素暴露量。结果深圳地区人群2~6岁组、7~14岁组、15~50岁组、50岁组平均消费水平黄曲霉毒素B1的每日膳食暴露量分别为男性0.320、0.385、0.401、0.398 ng/kg BW);女性0.282、0.222、0.367和0.470 ng/kg BW)。高消费水平各年龄组黄曲霉毒素B1暴露水平分别为男性83.4、203、106、112 ng/kg BW);女性78.4、167、113和103 ng/kg BW)。深圳地区粮油食品平均消费水平黄曲霉毒素B1危险度各年龄组男性依次为0.012、0.015、0.016和0.016癌症例/10万人;高消费水平依次为3.0、8.2、4.1和4.4癌症例/10万人。平均消费水平黄曲霉毒素B1危险度各年龄组女性为0.010、0.009、0.014和0.018癌症例/10万人;高消费水平依次为2.9、6.7、4.4和4.0癌症例/10万人。结论深圳地区人群中7~14岁组少年儿童组黄曲霉暴露风险较成人组高。大米和花生油是深圳地区人群最主要的粮油食品黄曲霉膳食暴露来源。     

分泌抗重组葡激酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的 建立分泌抗重组葡激酶（r-SAK)单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法 采用3种方法以r-SAK免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞做细胞融合。结果 经筛选和克隆化后获得10株抗r-SAK单克隆抗体杂交瘤细胞。结论 建立的分泌抗r-SAK单克隆抗体杂交瘤细胞株具有高度特异性，在r-SAK的研制中有很高的应用价值。     

分泌抗霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和应用

霍乱是一种严重危害人民健康的肠道传染病,发病急,传播快。长期来,人们对本病的控制作了大量工作。     

2型登革病毒NS1蛋白单克隆抗体的生物学特性研究

目的制备抗2型登革病毒NSl蛋白的单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法以重组NS1蛋白免疫Balb／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗M蛋白的mAb，采用间接ELISA方法和Westernblot进行mAb特异性鉴定；同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得9株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞Ⅲ1A6andU13D2；相对亲和力均在10^6以上。Westernblot显示9株mAb能特异识别重组NS1蛋白。结论成功地制备出抗登革病毒2型病毒NS1蛋白的9株mAb，为建立快速特异检测登革病毒的实验方法提供了有力的工具。     

应用抗恙虫立克次体的单抗检测恙虫立克次体抗原

应用斑点ELISA技术,以辣根过氧化物酶标记的抗恙虫立克次体Karp毒株的单抗分别检测了恙虫病患者血清、恙虫立克次体保种传代的小鼠血清、恙虫病流行地区的野鼠血清以及恙螨中的恙虫立克次体抗原,结果表明本法是早期诊断恙虫病和进行该病流行病学调查的一种简便而有效的手段。     

应用系列呼吸道病毒单克隆抗体快速检测分泌物中的病毒抗原

应用系列主要时吸道病毒［呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ），甲型流感（ＦｌｕＡ）、乙型流感（ＦｌｕＢ）、副流感１、３型（ＰＩＶ１．３）、副流感２型（ＰＩＶ２）病毒共６种］单克隆抗体（ＭｃＡｂ），联接ＡＰＡＡＰ桥联技术，深入部队对２６０例呼吸道感染青年战士的鼻咽部脱落细胞中的抗原进行检测。检出ＦｌｕＡ抗原１８例，ＰＩＶ２抗原１０例，ＦｌｕＢ和ＲＳＶ各１例。以上结果经间接免疫荧光（ＩＦＡ）以及阻断和替代试验，证实系列单克隆抗体检出抗原结果是特异的。笔者认为本方法是临床快速诊断以及流行病学调查的有效手段。     

胶体金标记单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体的制备

目的制备胶体金标记单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体（McAb）,用于检测食品中的致病性单核细胞增生李斯特菌。方法以纯化的单核细胞增生李斯特菌（标准菌株号54001、54002）为抗原,免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,建立胶体金标记的单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体的制备方法。结果筛选出2株单抗杂交瘤细胞株F5、F9,并获得免疫球蛋白,测定免疫球蛋白亚类为IgM。通过选用柠檬酸钠法制备胶体金标记单核细胞增生李斯特菌抗体,测定其最适蛋白结合浓度为12 g/ml。结论成功制备了胶体金标记的单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体,为建立食品中病原性单核细胞增生李斯特菌检测技术奠定基础。     

中和性单克隆抗体检测陕西省70株脊髓灰质炎病毒抗原结果分析

我们应用中和性McAb对陕西省1979～1988年从病人分离的70株Polio病毒进行型内抗原分析,将32株Ⅰ型病毒分为PI—2(28株)、P1—3(3株)和P1—5(1株)3个类型。27株Ⅱ型病毒分为P2—1(19株)和P2—2(8株)2个类型,11株Ⅲ型病毒分为P3—1(5株)、P3—2(3株)、P3—3(1株)和具有新抗原特征的陕P3—1(2株)4个类型。结果反映了陕西省近10年Polio病毒型内抗原特征类型的分布、变迁及其与疾病流行的关系。     

国际单克隆抗体研究文献分析

目的通过比较分析1999—2008年单克隆抗体主要研究国家和机构的科研产出及单克隆抗体的研究领域、热点等,为科研工作者和科研管理者提供参考。方法利用文献计量学方法,对WebofScience（SCIE）收录的单克隆抗体论文的时间、国家、机构、期刊进行分析;同时结合共词分析、聚类分析和可视化分析方法,对单克隆抗体研究有关的论文开展主题分析。结果SCIE收录单克隆研究文献50357篇,美国在文献数量和质量上遥遥领先,中国与美国等发达国家差距较大;单克隆抗体研究属多学科交叉领域,CD40分子、EGFR等是当前研究的热点。结论中国应加大单克隆抗体资金投入,加强与顶级科研院所的交流合作,紧跟研究热点,提高自主创新能力。     

单抗早孕胶乳凝集抑制试验试剂的研制及初步应用

通过细胞融合技术筛选了一株抗HCG的单克隆抗体1F_7。其小鼠腹水效价为10000(胶乳凝集法),免疫球蛋白分类为IgGl,亲和性为2.2×108M~(-1),其主要针对β-HCG上的某一决定簇。用该单抗和高效价的HCG致敏的羧化聚苯乙烯胶乳制成了单抗旱孕胶乳凝集抑制试验的试剂盒。该试剂盒的敏感度为0.63IU/ml左右,和促黄体激素(LH)、促滤泡激素(FSH)无交叉反应,该试剂的稳定性相当好,在室温避光处可保存一年。通过临床355例标本考核,其阳性率为99.2％,其阴性率为100％。     

甲型肝炎病毒H2株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 为甲型肝炎病毒(HAV)的诊断和相关研究提供高效价的抗体来源. 方法 用细胞培养获得的H_2株HAV免疫BALB/C小鼠,经细胞融合技术,ELISA筛选和有限稀释克隆化培养. 结果 获得3株能稳定分泌抗HAV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,命名为6-A8、6-F2和1-H3.经鉴定,其上清和腹水的抗体效价分别为1∶(2048～16 824)和1∶(65 536～524 288).6-A8和6-F2属IgG2a亚型,1-H3属IgG1亚型.染色体数分布在92～98之间.3株细胞株McAb分别能与HAV不同抗原位点结合. 结论 3株能稳定分泌抗HAV McAb的杂交瘤细胞株成功建立,并获得高效价的抗HAV McAb.