Livin和Survivin在胃癌组织中表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中凋亡抑制蛋白Livin和Survivin表达情况及其与各临床病理因素的关系,以及二者在胃癌组织中表达的相关性。方法采用免疫组化S-P方法检测正常胃黏膜及胃癌组织中Livin和Survivin的表达情况。结果胃癌组织中Livin和Sur-vivin的表达阳性率分别为48.3%,63.8%,与正常胃黏膜中的表达阳性率比较均有显著性差异(P均<0.05);在组织分化差、淋巴结转移者、临床分期高者Livin表达率增高,与对应组比较有显著性差异(P均<0.05);在胃癌组织中Livin表达和Survivin表达呈正相关性(rs=0.530,P<0.01)。结论Livin和Survivin在胃癌组织中表达增高,提示参与胃癌的发生、发展,Livin可作为胃癌的生物学标志物,可能成为胃癌治疗的新分子靶点。     

平滑肌细胞凋亡相关蛋白表达与中药的作用研究进展

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是肌体生长发育、细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡过程。19 72年病理学家Ｋｅｒｒ[1 ] 等通过对不同类型的细胞死亡进行比较 ,发现了另一种区别于坏死的死亡形式 ,即程序性死亡 (Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ)又称细胞凋亡。它是细胞在基因调控下发生的主动死亡过程。细胞死亡 (凋亡 )与增殖过程的动态平衡调节着肌体的生长发育及进化 ,维持着细胞群体数量的自身稳定和内环境的相对恒定。同时对维持血管结构的稳定也具有重要意义。1　平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化血管平滑肌细胞 (Ｖ…     

RKIP和E-cadherin在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨RKIP、E-cadherin在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学染色方法检测77例食管鳞状细胞癌组织、77例癌旁非肿瘤组织中RKIP和E-cadherin的蛋白表达,分析其表达与临床病理学指标的关系以及两者表达的相关性。结果 RKIP和E-cadherin在食管鳞状细胞癌组织中表达明显低于癌旁组织(P均<0.05),在有淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织中表达明显低于无淋巴结转移的组织(P均<0.05),RKIP和E-cadherin在食管鳞状细胞癌组织中的表达具有正相关性(P<0.05)。结论 RKIP、E-cadherin表达的降低能促进食管鳞状细胞癌的淋巴转移。     

肉桂醛诱导食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞凋亡作用及机制研究

目的探究肉桂醛对食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖活性及凋亡的作用,并探讨其机制。方法 MTS实验检测不同质量浓度(1.88、3.75、7.50、15.00、30.00μg/m L)肉桂醛对Eca109细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜观察Eca109细胞形态学变化;流式细胞术检测不同质量浓度肉桂醛对Eca109细胞周期分布和凋亡的影响;Westernblotting检测不同质量浓度肉桂醛作用24h对Eca109细胞凋亡相关蛋白Caspase-3/Caspase-9、促凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平的影响。结果质量浓度为15.00、30.00μg/m L的肉桂醛作用Eca109细胞24 h后,与对照组相比,肉桂醛组细胞增殖活性显著降低(P0.05);经肉桂醛作用后,Eca109细胞呈现明显的凋亡形态学变化;经不同质量浓度肉桂醛处理Eca109细胞24 h后,G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),而G2/M期细胞比例明显增加(P0.05);肉桂醛处理Eca109细胞24h后,细胞凋亡率明显上升(P0.05);与对照组相比,经不同质量浓度肉桂醛处理24 h后,Eca109细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9出现明显的裂解片段(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显上调(P0.05)。结论肉桂醛可抑制食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与上调凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax表达,以及下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达有关。     

miRNA在喉鳞癌及癌旁正常组织的相关表达分析

目的:利用基因芯片技术,研究miRNA在喉鳞癌和癌旁正常组织中的表达水平差异,寻找可能的分子生物学指标。方法:8例经手术的喉鳞癌及其周边(1cm)的正常组织,以Trizol法提取总RNA,经Cy3荧光标记后与含有人723条miRNA探针的芯片进行杂交,筛选在喉鳞癌及周边正常组织中差异表达的miRNA。结果:共有132个miRNA在8例喉鳞癌中均有表达。喉鳞癌和癌旁正常组织中差异表达的miRNA有53个,其中22个出现上调,31个出现下调,差异表达5倍以上的miRNA共有8个,分别为miR-196b、miR-196a、miR-375、miR-139-5p、miR-7、miR-338-3p、miR-183和miR-370。其中,miR-196b、miR-196a和miR-375差异表达8倍以上。结论:通过基因芯片的方法,发现了喉鳞癌中53个异常表达的miRNA,其中8个miRNA有明显差异的表达,在这些差异表达的miRNA中寻找可能存在的靶基因,为进一步探索喉鳞癌发病机制奠定基础。     

RKIP和VEGF在喉鳞癌及喉鳞状上皮不典型增生组织中的表达及临床意义

目的通过检测Raf-1激酶抑制蛋白(RKIP)、血管内皮生长因子(VEGF)在喉鳞癌及喉鳞状上皮不典型增生组织中的表达情况,分析二者在喉鳞癌发生、发展及转移中的作用及可能分子机制。方法采用免疫组化方法检测43例喉鳞癌组织、20例喉鳞状上皮不典型增生组织及9例正常喉黏膜组织中RKIP、VEGF的表达情况,分析其临床意义及二者之间的相关性。结果正常喉黏膜组织、喉鳞状上皮不典型增生组织及喉鳞癌组织中RKIP表达阳性率逐渐降低,VEGF表达阳性率逐渐上升,喉鳞癌组织中RKIP表达阳性率显著低于正常喉黏膜组织及喉鳞状上皮不典型增生组织(P均<0.05);有转移的喉鳞癌组织中RKIP表达阳性率低于无转移的喉鳞癌组织(P<0.05),VEGF表达阳性率高于无转移的喉鳞癌组织(P<0.05)。在正常喉黏膜组织、喉鳞状上皮不典型增生组织及喉鳞癌组织中,RKIP与VEGF的表达呈显著负相关(r=-0.324,P=0.006)。结论 RKIP具有抑制喉鳞癌发展及转移的作用,这可能是通过下调VEGF表达来实现的。     

食管鳞癌中Livin及相关蛋白的表达及意义

目的探讨食管鳞癌组织中Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA的表达及其与临床病理指标和预后的关系。方法采用原位杂交方法和微波EliVisionTM免疫组织化学法检测78例食管鳞癌组织中Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA蛋白的表达情况,并与38例癌旁正常食管黏膜组织进行比较。结果在食管鳞癌组织中Livin和Ki-67分别表达定位于细胞浆和细胞核,Livin mRNA阳性反应主要定位于细胞浆,其表达明显高于正常食管黏膜组织(P<0.05)。Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA的表达与淋巴结转移、分化程度及病理分期有关(P均<0.05),三者之间表达呈正相关(P均<0.05)。结论 Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA在食管鳞癌呈高表达,且与食管鳞癌的发生、发展及浸润转移有关,可作为判断食管鳞癌生物学行为和预后的重要指标。     

藻红蛋白诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡与细胞周期的关系

目的 研究藻红蛋白 (PE) 对人乳腺癌 MCF-7 细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法 采用 MTT 法和 SRB 法检测 PE 对人乳腺癌 MCF-7 细胞增殖的抑制作用。采用倒置显微镜、荧光显微镜 Hoechst 33258 染色观察 MCF-7 细胞凋亡细胞形态。Annexin V-FITC/PI 双荧光染色观察细胞凋亡过程中特异的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻情况确定凋亡的出现。流式细胞仪观察 PE 对 MCF-7 细胞周期的影响。结果 PE 对 MCF-7 细胞有较强的生长抑制作用,并且呈一定的剂量依赖性,其 72 h 的 IC₅₀ 值为 147.82 μg/mL,GI₅₀ 值为 109.76 μg/mL。倒置显微镜下与基本贴壁的饱满、边沿清晰的对照组细胞比较,给药组细胞有明显的细胞变粗糙,贴壁细胞减少的现象,而且浓度越高,作用时间越长,悬浮细胞越多。荧光显微镜下可见各给药组 MCF-7 细胞出现不同程度深染亮点的细胞核质,染色质浓集固缩并伴有凋亡小体形成。激光共聚焦显微镜下可见给药组细胞膜被染成绿色,细胞核被染成红色。流式细胞仪显示 PE 可阻滞 MCF-7 细胞从 S 期进入 G₂/M 期,促使细胞凋亡。结论 PE 对 MCF-7 细胞有较强的抑制作用,可使其凋亡,其作用机制与周期阻滞有关。     

齐墩果酸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:通过研究齐墩果酸在H22荷瘤小鼠肿瘤组织中细胞凋亡相关蛋白的表达的影响,探讨其在肿瘤发生、发展过程中的可能作用及意义。方法:建立H22荷瘤小鼠实体瘤模型进行体内试验,将50只已接种H22细胞株的小鼠随机分为模型组,环磷酰胺40 mg·kg-1组,齐墩果酸低、中、高剂量组(1.25,2.50,5.00 mg·kg-1),连续灌胃给药10 d;处死小鼠,检测肝/体比及脾脏指数;采用免疫组化法检测瘤体内凋亡抑制基因生存素(survivin)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达水平;利用原位末端标记法检测凋亡指数。结果:齐墩果酸可改善H22荷瘤小鼠的肝/体比和脾指数,齐墩果酸低、中、高剂量组对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中survivin蛋白表达水平比模型组均显著降低(P0.01);齐墩果酸高、中剂量组对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达水平与模型组比较显著降低(P0.01,P0.05);细胞经齐墩果酸处理后,survivin,Bcl-2表达下调,齐墩果酸各组细胞凋亡指数与模型组比较均显著升高,差异显著(P0.01)。结论:齐墩果酸可通过抑制H22荷瘤小鼠肿瘤细胞中survivin及Bcl-2蛋白的表达,提高凋亡率,诱导肿瘤细胞凋亡,还可改善荷瘤小鼠机体免疫力。survivin,Bcl-2异常表达与肿瘤的发生密切相关,通过共同调节凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

葛根素调节血管平滑肌细胞凋亡相关基因在斑块组织中表达的研究

 目的差异筛选葛根素促进VSMC凋亡相关基因，观察其在动脉粥样硬化组织中的表达，探讨葛根素防治动脉粥样硬化的可能机制。方法葛根素诱导培养的兔血管平滑肌细胞凋亡，提取总RNA,荧光标记差异显示反转录-PCR法筛选差异基因片段，克隆测序及同源性分析，Northern印记杂交鉴定，组织原位杂交观察该基因在兔斑块组织中的表达水平。结果 差异筛选出全长733 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白94基因高度同源，Northern印记杂交显示该基因表达量随着葛根素浓度而增加；兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高。结论①证实葡萄糖调节蛋白94基因在葛根素促进增殖血管平滑肌细胞凋亡过程中表达增高,可能是葛根素作用靶点之一；②证实该基因片段在动脉斑块细胞质中表达增高，提示如能上调该基因促进需管平滑肌细胞凋亡，将有可能对动脉粥样硬化治疗产生一定作用。     

喉鳞癌中组织蛋白酶D和MMP-7表达的研究

目的观察喉鳞癌组织中组织蛋白酶D和MMP-7蛋白的表达情况,探讨其关系及临床意义。方法收集86例喉鳞癌标本作为观察组,收集68例正常喉黏膜组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测2组中组织蛋白酶D和MMP-7的表达,分析其在不同临床特征中的表达差别及相关性。结果喉鳞癌中组织蛋白酶D和MMP-7表达的阳性率明显高于正常喉黏膜组织。观察组中组织蛋白酶D和MMP-7的表达与肿瘤体积、淋巴结转移、淋巴结转移数量及Ki67的表达密切相关;线性相关分析显示2者具有正相关性;生存分析显示组织蛋白酶D和MMP-7的表达与患者的预后相关。结论组织蛋白酶D和MMP-7高表达在喉鳞癌的发生发展中具有重要作用,2者可能具有协同作用,联合检测组织蛋白酶D和MMP-7可能评估喉鳞癌的预后。     

白藜芦醇与紫杉醇联合用药对人喉癌Hep-2细胞凋亡机制的研究

喉癌是呼吸道肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一,在呼吸道肿瘤中高居第二位。白藜芦醇(resveratrol,Res)是一种多酚类物质,可通过抑制细胞内核苷酸还原酶抑制肝癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞等肿瘤细胞生长。紫杉醇(taxol,Tax)是红豆杉属植物中一种次生代谢物,可抑制细胞内微管的解聚,对乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌等肿瘤有良好的抗肿瘤活性。目前有关白藜芦醇联合紫杉醇用药针对人喉癌细胞株Hep-2的作用及其相关分子机制研究还鲜见报道。用白藜芦醇(Res)、紫杉醇(Tax)处理人喉癌细胞株Hep-2,采用CCK-8法检测2种药物对Hep-2细胞增殖的影响,AO/PI染色和JC-1检测Hep-2细胞凋亡,实时定量PCR检测Bax,Bcl-2,PARP,TRIB3,XIAP基因的表达,荧光定量法检测caspase-3,caspase-8活性。结果表明,与Tax,Res单独用药相比,联合组显著增强对Hep-2细胞的抑制作用,且明显减少Tax的用药剂量,增加Bax,PARP,TRIB3的表达,降低Bcl-2,XIAP的表达,促进caspase-3,caspase-8活性。这表明Res,Tax以及其联合药物通过线粒体途径诱导喉癌细胞Hep-2的细胞凋亡。这为进一步研究Res,Tax联合用药治疗喉癌奠定理论基础,且扩大Res,Tax联合用药范围。     

大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及细胞周期的影响

[目的]研究大蒜素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡以及细胞周期的影响并初探其机制。[方法]取对数生长期Tca8113细胞设空白对照组、大蒜素(50、25、12.5μg/m L)组和顺铂(40μg/m L)组,给药48 h后流式细胞术分析细胞周期的改变并检测细胞凋亡状况,逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)m RNA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期相关调控蛋白周期蛋白(cyclin B1、cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶(CDK1、CDK2)表达。[结果]与空白对照组比较,大蒜素(50、25μg/m L)组细胞周期G2/M期比例显著提高(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bcl-2 m RNA表达显著下调且Bax m RNA表达显著上调(P0.05或P0.01),Bax/Bcl-2值显著提高(P0.01),cyclin B1蛋白和CDK1蛋白显著上调、cyclin D1蛋白和CDK2蛋白显著下调(P0.05或P0.01)。[结论]大蒜素具有促进人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡、阻滞细胞有丝分裂的作用,其机制可能与大蒜素影响凋亡相关调控基因及细胞周期相关调控蛋白表达有关。     

LOX与VEGF蛋白在人喉鳞癌中的表达及其相关性研究

目的检测赖氨酰氧化酶（LOX）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白在人喉鳞癌中的表达,探讨其对喉鳞癌转移及预后的影响及意义。方法采用免疫组织化学方法检测14例有淋巴结转移的喉鳞癌及24例未见淋巴结转移的原位癌组织中LOX及VEGF的表达情况,并分析其表达的相关性。结果①LOX、VEGF在喉鳞癌组织中表达显著高于癌旁正常组织（P均〈0．05）。②VEGF在淋巴结转移组与无转移组表达阳性率分别为100％和71％,具有显著性差异（P〈0．05）;LOX在淋巴结转移组与无转移组表达无显著性差异（P〉0．05）。③LOX、VEGF的表达与患者的年龄、性别、临床分型及临床分期等临床病理因素无关。④LOX与VEGF在人喉鳞癌组织中表达呈正相关。结论LOX与VEGF存在正相关性,可作为喉癌治疗的一个新靶点。VEGF的高表达可能是造成LOX表达变化的重要影响因素之一。     

Lapachol is a novel ribosomal protein S6 kinase 2 inhibitor that suppresses growth and induces intrinsic apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma cells

Lapachol is a 1,4‐naphthoquinone that is isolated from the Bignoniaceae family. It has been reported to exert anti‐inflammatory, antibacterial, and anticancer activities. However, the anticancer activity of lapachol and its molecular mechanisms against esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) cells have not been fully investigated. Herein, we report that lapachol is a novel ribosomal protein S6 kinase 2 (RSK2) inhibitor that suppresses growth and induces intrinsic apoptosis in ESCC cells. We found that lapachol strongly attenuates downstream signaling molecules of RSK2 in ESCC cells and also directly inhibits RSK2 activity in vitro. The RSK protein is highly activated in ESCC cells and knockdown of RSK2 significantly suppresses anchorage‐dependent and anchorage‐independent growth of ESCC cells. Additionally, lapachol inhibits anchorage‐dependent and anchorage‐independent growth of ESCC cells, and the inhibition of cell growth by lapachol is dependent on the expression of RSK2. We also found that lapachol induces mitochondria‐mediated cellular apoptosis by activating caspases‐3, ‐7, and PARP, inducing the expression of cytochrome c and BAX by inhibiting downstream molecules of RSK2. Overall, lapachol is a potent RSK2 inhibitor that might be used for chemotherapy against ESCC.     

Acacetin‐induced cell apoptosis in head and neck squamous cell carcinoma cells: Evidence for the role of muscarinic M3 receptor

Aacacetin, a plant flavone has shown antitumor efficacy recently. However, its associated mechanisms are poorly known. We hypothesized that the muscarinic M3 receptor (M₃R), which is highly expressed in some cancer tissue, is related to the antitumor effect of acacetin in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) cells. Our results showed that 12.5‐ to 200‐μM acacetin inhibited cell viability in dose‐ and time‐dependent manners in HNSCC cells, but a relative higher concentration was needed for oral adenoid cystic carcinoma cells. M₃R expression level was higher in HNSCC cells than that in adenoid cystic carcinoma cells. Flow cytometry and electron microscopy confirmed acacetin‐induced cell apoptosis in 22B cells, a HNSCC cell line. Acacetin promoted mitochondrial cytochrome c release and caspase 9, 3 processing. Knocking down of M₃R expression by specific siRNA significantly prevented the acacetin‐induced cell viability damage, cell apoptosis, and caspase 3 activation. Besides, M₃R was also involved in acacetin‐induced elevation of reactive oxygen species and intracellular calcium ([Ca²⁺]_i). These data indicate that acacetin‐induced cell apoptosis in HNSCC cells may through M₃R related calcium signaling and caspase 3 activation. Acacetin is a potent natural antitumor reagent especially for the tumor cells, which highly expressed M₃R.     

药对肺癌细胞凋亡信号转导影响的研究进展

诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤治疗的新途径，在治疗肺癌方面尤其引人注目。中药单方或复方可以通过影响肺癌细胞Fas、Bcl-2、TNF等的表达和肺癌细胞内cAMP的浓度，激活相应的细胞凋亡信号转导途径，诱导肺癌细胞凋亡。