微板速率法测定血浆游离血红蛋白

血浆游离血红蛋白(Hb)是诊断血管内溶血的一个重 要项目,目前血浆游离Hb测定多用邻 甲联苯胺法[1],试 剂有致突变性、刺激性和不稳定性。我们用酶联免疫吸附 试验(ELISA)广泛采用的显色剂TMB(3,3’,5,5’ 四甲基 联苯胺),建立了定量测定血浆游离Hb的微板速率法。 一、材料和方法 1.仪器　芬兰MultiskanMk2酶标仪 2.原理　Hb中亚铁血红素有类似过氧化物酶的作 用,可以分解H2O2使TMB氧化显色,特定波长下连续监 测吸光度的变化,与Hb标准比较,可知样本中Hb含量。 3.试剂　(1)TMB液:TMB以二甲亚砜溶解并配成 10g/L,再以0…     

测定血清游离血红蛋白的无色孔雀绿法

血清中游离血红蛋白的定量通常用改良联苯胺法。由于联苯胺的致癌性,美国卫生教育福利部已禁止在临床实验室中使用。作者提出了一个以无色孔雀绿(leucomalachite green)氧化为基础的比色法。本法可以满意地代替测定血清游离血红蛋白的联苯胺法,而且,试剂没有致癌性。血红蛋白(Hb)标准液的制备将一份全血标本,用氰化高铁Hb法测得其平均Hb浓度,并稀释     

邻-甲联苯胺法测定血浆游离血红蛋白的基质效应及消除方法

目的研究邻-甲联苯胺法(经典方法)测定血浆游离血红蛋白(Hb)的基质效应及消除方法。方法以用生理盐水1 000倍稀释的Hb储存液(浓度为103.1 g/L)作为标准液,将此Hb标准液再用无Hb血浆分别稀释500、1 000、2 000、4 000倍(游离Hb理论浓度分别为206.20、103.10、51.55、25.78 mg/L),然后用经典方法测定游离Hb浓度,比较与理论值的差异。将Hb储存液分别用生理盐水(经典方法)、无Hb血浆(消除方法 1)、混合血浆(消除方法 2)1 000倍稀释作为标准液。经典方法和消除方法 1的计算公式为血浆游离Hb(mg/L)=测定管吸光度(A)值×标准液浓度÷标准管A值;消除方法 2的计算公式为血浆游离Hb(mg/L)=测定管A值×标准液浓度÷(标准管A值×混合血浆A值);消除方法 3操作同经典方法,计算公式为血浆游离Hb(mg/L)=测定管A值×标准液浓度×2.35÷标准管A值。测定40份标本,比较各消除方法的结果。在血浆中分别加入206.20、103.10、51.55 mg/L Hb,测定各消除方法的回收率。分别取6.25、12.50、25.00、50.00μg/L维生素C溶液4.5 m L,各加1.031 g/L Hb标准液0.5 m L,用经典方法测定回收率。结果采用无Hb血浆500、1 000、2 000、4 000倍稀释的Hb标准液的游离Hb测定结果分别为87.85、43.16、21.90、10.99 mg/L。40份标本采用经典方法、消除方法 1、消除方法 2、消除方法 3测定的游离Hb浓度分别为(7.99±4.90)、(18.61±11.42)、(19.18±11.77)、(18.77±11.52)mg/L;消除方法 1、消除方法 2、消除方法 3的结果均高于经典方法(P均0.01),但3种消除方法之间差异均无统计学意义(P均0.05)。经典方法、消除方法1、消除方法 2、消除方法 3的平均回收率分别为42.54%、98.33%、100.98%、97.56%。采用经典方法检测Hb在6.25、12.50、25.00、50.00μg/L维生素C溶液中的回收率分别为98.57%、98.17%、97.17%、95.16%。结论邻-甲联苯胺法测定血浆游离Hb存在基质效应,3种消除方法均可消除基质效应影响。     

用酚噻嗪定量测定血清和血浆中的血红蛋白

因联苯胺有潜在致癌作用,故对代替联苯胺测定血浆血红蛋白(Hb)的物质作了大量研究。最近,Ahmed和Gowda二氏提出用吩噻嗪进行尿中微量Hb的定性试验。作者对该法作了研究,采用吩噻嗪的衍生物盐酸氯丙嗪(CP)和盐酸异丙嗪(PM)     

反向间接血凝技术检测血清(浆)游离Hb的初步报告

血清(浆)游离血红蛋白的多寡是直接反映血管内溶血的重要标志。关于游离Hb 的测定,常用的是联苯胺法,此法因联苯胺致癌作用巳趋于淘汰。本文介绍游离Hb 的免疫学检测方法—反向间接血凝技术,不受检样中其它类过氧化物的物质干扰,现介绍如下。一、材料与方法1.血红蛋白抗原的制备:收集30ml 柠檬酸钠抗     

血浆游离血红蛋白的过氧化氢钼酸铵测定法

血浆游离血红蛋白的过氧化氢钼酸铵测定法张有申，王艳，李静（山东济宁市中区医院，山东济宁２７２１０５）血浆游离血红蛋白测定，联苯胺法试剂有毒性，且联苯胺溶液难以久存。氯丙嗪法［１］显色稳定性差。本文参考文献［２］建立了一个经济准确的分光光度法测定血浆游...     

用无致癌性的TMB测定血清游离Hb

本文参照Standefer(Clin Chen 23:749,1977)的方法,用无致癌性的国产TMB(四甲基联苯胺)检测血清中游离血红蛋白(Hb)。     

过氧化氢醋酸重铬酸钾测定血浆游离血红蛋白

过氧化氢醋酸重铬酸钾测定血浆游离血红蛋白山东肥城矿务局第二医院（２７１６１３）相开幕，陶相光肥城矿务局中心医院刘茂忠血浆游离血红蛋白（ＰＦＨｂ）测定通常使用联苯胺法，邻－甲联苯胺法，但试剂有毒性且不易久存；氯丙嗪法［１］显色稳定性差。本文参考文献［２...     

血浆血红蛋白的ABTS比色测定

近来,有人报道用ABTS [2,2’-Azino-di(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)]测定粪便潜血具有与联苯胺相同的灵敏度。本文作者将其用于血浆血红蛋白(Hb)的测定。Hb的拟过氧化物酶活性,在过氧化氢(H_2O_2)存在下使ABTS氧化产生绿色。〔试剂〕①ABTS液:溶解150mg ABTS于10ml蒸镏水中,加90ml醋酸,混匀,当天使用。②Hb标准液:取1ml压积红细胞用2ml等渗NaCl液     

紫外分光光度法检测血浆游离血红蛋白

在血液采集和血液成分制备的过程中有时会使红细胞破裂而释放血红蛋白。为了准确测定血浆游离血红蛋白的浓度,笔者根据血浆游离血红蛋白在414nm附近有强吸取峰的原理[1],采用紫外分光光度计的方法直接检测血液中游离血红蛋白的浓度,现报告如下。1材料与方法1.1材料基质血浆(取5-10人份新鲜血浆,肉眼观察呈淡黄色的澄清液体,无纤维蛋白析出,无黄疸及乳糜,生理盐水10倍稀释后,在380-500nm内检测吸收值<0.1的血浆作为基质血浆);0.9%的生理盐水(上海输血研究所);Hb储存标准液(用HiCN方法[2]测得标准血红蛋白浓度106g/L);2g/L邻-甲联苯胺溶液(…     

测定血浆游离血红蛋白的新方法

本文参考张庭卿等(临床枪验杂志3(3):123,1985)采用氯化血红素作为Hb一级标准品应用于血浆游离血红蛋门测定。不需要HiCN法标化的Hb次级标准。利用Hb分子中亚铁血红素具有类过氧化物酶活性,催化H_2O_2释出新生态氧,进一步使2.4二     

利用异鲁米诺(4-氨基邻苯二酰一肼)化学发光反应测定血清血红蛋白的一种灵敏方法

血浆Hb浓度的增加,是溶血性疾病或血液体外处理(如血液透析)引起的红胞细破坏的指标。常用联苯胺及其衍生物作为生色原,对Hb分子中血红素的过氧化物酶活性进行比色测定。由于比色法敏感度有限,不能准确测定<5mg/L浓度的血清     

氯丙嗪测定PFHb的实验研究

测定血浆游离血红蛋白(PFHb)含量,对于诊断溶血性疾病及判断物理化学因素等引起的血管内红细胞损坏程度,具有重要的临床意义。联苯胺法测定PFHb,试剂有毒性,且联苯胺溶液难以长期保存,为此,本文建立了氯丙嗪测定 PFHb,试剂易保存,无毒     

改良TMB比色法替代~(51)Cr释放法检测抗体依赖细胞细胞毒效应研究

目的建立一种无致癌性、无放射性、灵敏的33,’,55,’-四甲基联苯胺(TMB)检测ADCC实验中靶红细胞自然释放的微量Hb含量的改进方法。方法利用Hb类似过氧化物酶效应催化双氧水氧化33,’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB),使其发生显色反应,改进吸光度在600 nm处的检测体系。采用Nycodenz密度渗透压介质分离单核细胞作为ADCC的效应细胞。比较2种情况的灵敏度,并与51Cr释放法进行方法学对照。在ADCC实验中,分别用51Cr释放法和改良TMB法测定Hb自然释放率。结果显色反应结束后加硫酸酸终止测定最大吸收波长移至450 nm,不加酸终止测定波长为600 nm。不加硫酸终止的TMB法检测Hb低检出限是0.0075 g/L,显色时间20min,TMB最优浓度是0.62 g/L,空白吸收始终稳定的维持在<0.003的较低值。而加酸终止的TMB法低检出限仅为0.5 g/L。显然不加酸终止的改良TMB法的灵敏度非常显著地高于加酸终止的TMB法。在测定ADCC靶红细胞自然释放率试验中,不加酸终止的改良TMB法仅需4 h孵育时间以及2.5×106 cell/ml红细胞浓度即可测定出释放Hb含量,而加酸后孵育时间要长达14 h并且需要更高浓度的红细胞才能测出自然释放Hb含量。用不加硫酸终止的TMB法检测ADCC活性与51Cr释放法相关性良好(r=0.999)。结论改良TMB比色法可以代替51Cr释放法检测ADCC的靶红细胞细胞毒效应。加酸终止、测定波长为450 nm的TMB比色法的灵敏度与51Cr释放法的灵敏度有显著差距,不适用低活性ADCC效应检测。     

非联苯胺法测定溶血程度

已往多用联苯胺法测定病人血浆中游离的血红蛋白,鉴于联苯胺是致癌物,作者建议改用偶氮氨基比林法。其是具有两种色素原的染料试剂,反应的触酶是血红蛋白。加入苯胺,能形成确认蛋白质存在的颜色,用分光光度计测定,其颜色强度与基质中血红蛋白的量成正相关。工作液:(1)0.1M磷酸盐缓冲液(pH 6.0),(2)0.3%过氧化氢,(3)0.1%联苯胺,(4)偶氮氨基比林液(氨基比林200g,盐酸苯胺50g,加96%乙醇至1升),(5)血红蛋白应用标准液-基质(50-800mg/L),用人血或1.5g/L牛血红蛋白水溶液制备。     

用ELISA试剂盒的剩余A、B液作游离Hb测定

全国临床检验操作规程推荐用邻 -甲联苯胺法测定血浆、体液及血液制品中的游离血红蛋白含量 [1] ,该法较过去的联苯胺法简捷、敏感 ,且试剂无致癌作用 ,环境污染少。笔者根据四甲基联苯胺( TMB)的呈色原理 [2 ] ,用以 TMB为色原的酶联免疫吸附试验 ( ELISA)试剂盒的剩余 A、B液作为显色剂 ,检材易得 ,试剂稳定 ,获得满意效果 ,现报告如下。材料与方法1　试剂1 .1　色原 A、B液 :收集厦门新创公司生产 ,用于检测 HCV、HIV抗体的 ELISA试剂盒剩余 A、B液各 5 0 ml;南京军区医学研究所测定 HBs Ag的EL ISA试剂盒 A、B液各 5 0 …     

血液质量控制检测项目试剂盒的选择及室内质量控制方法的建立

目的评估血液制品中甘油、上清蛋白、血浆蛋白、游离Hb以及亚甲蓝检测试剂盒的可行性并建立室内质量控制。方法选择市售生化试剂盒,自制室内质控品并制定质量控制范围,分别用分光光度计和生化仪器同时对血液制品中的甘油、上清蛋白、血浆蛋白、游离Hb以及亚甲蓝检测进行检测,甘油检测采用GPO-PAP酶比色法,上清蛋白采用邻笨三酚红比色法,血浆蛋白采用双缩脲比色法,游离Hb采用Trinder比色法,亚甲蓝采用萃取比色法。结果选出5种试剂盒并建立了室内质控范围;甘油、上清蛋白、血浆蛋白、游离Hb以及亚甲蓝2种仪器比对检测结果均相近(P0.05);甘油、上清蛋白、血浆蛋白、游离Hb以及亚甲蓝用分光度计各检测48人份,其最高值分别为2.12 g/L、2.40 g/L、63.8 g/L、1.09 g/L、0.31μmol/L。结论血液质量控制项目可采用试剂盒可在分光光度计上进行检测,简单可行,建立室内质控,确保结果准确性。     

胶体金法溶血测试条在检测血液制品中游离血红蛋白的应用

目的评价胶体金法溶血测试条在血液制品中游离血红蛋白检测的应用可行性。方法按照GB18469-2001《全血及成分血质量要求》,全血保养液为ACD-B时血浆中游离血红蛋白浓度≤0.29 g/L、全血保养液为CPDA-1时血浆中血红蛋白≤0.72 g/L和解冻红细胞游离血红蛋白含量≤1.00 g/L的标准,用邻联甲苯胺和胶体金溶血测试条2种方法同时对50份标本中游离血红蛋白含量检测。结果在50份标本中:25份含CPDA-1保养液的标本,邻-甲联苯胺法检测有4份标本血红蛋白含量>0.72 g/L,以血红蛋白≤0.72 g/L为标准,该4份标本的胶体金测试条检测均呈阳性反应,其余21份标本的胶体金测试条检测结果均呈阴性反应;25份含ACD-B保养液的标本,邻-甲联苯胺法检测有15份标本血红蛋白含量>0.29 g/L,以血红蛋白浓度≤0.29 g/L为标准,该15份标本的胶体金测试条检测结果均呈阳性反应,其余10份标本的胶体金测试条检测结果均呈阴性反应;在50份标本中邻-甲联苯胺法血红蛋白含量>1.00 g/L的3份标本,以血红蛋白1.00 g/L为标准,胶体金试纸法检测结果均呈阳性反应。结论该法适合血站对血液制品中游离血红蛋白含量的快速筛查。     

两种粪便隐血试验的方法学比较

目的对单克隆抗体法、联苯胺法检测粪便潜血的敏感性和特异性及抗干扰性进行比较。方法采取单克隆抗体法与联苯胺法,对随机抽取100份患者的粪便进行隐血检测。结果①联苯胺法粪潜血实验阳性占34.0%,在联苯胺法阴性标本中加5种动物血红蛋白,则均为阳性。②单克隆抗体法粪便潜血实验阳性占19.0%,在单克隆抗体法阴性标本中加5种动物血红蛋白,则均为阴性。③含不同浓度的维生素C加入约含血红蛋白（Hb）3.5μg/ml的粪便中,结果单抗法仍为阳性,而联苯胺法测得结果为阴性,再用铁剂及含过氧化物酶的蔬菜汁加入含Hb 3.5μg/ml粪便中做同样的隐血试验,单克隆抗体法所做的结果始终不变,而联苯胺法测得的结果为阴性。结论单克隆抗体法对粪便潜血实验有不可比拟的特异性、灵敏度和准确率,是一种实用且临床上值得推广应用的粪便潜血方法。     

适用于流动采血站的血红蛋白测定新方法

《献血者健康检查要求》(GB18467—2001)中规定献血者在献血时要检查其血液中的血红蛋白(Hb)含量，要求男性≥120g／L；女性≥110g／L。检测Hb含量的方法有硫酸铜比重法或比色法(氰化高铁法或联苯胺法)。虽然比色法灵敏度高、准确性好，但由于需要仪器设备，在流动采血环境中使用不便，因此，目前国内采供血机构在对献血者进行健康检查时均使用硫酸铜比重法。硫酸铜比重法简单、快速，但是，