酵母人工染色体的构建与应用

酵母人工染色体(YAC)是1987年发展起来的DNA大片段克隆载体.插入YAC载体的外源DNA片段大小可达1Mb或更多,并能在酵母中稳定复制。目前,YAC技术已成为构建复杂基因组DNA文库,进行基因组图谱分析的有力工具。并在克隆完整的基因单位,以进行DNA功能研究和遗传病及基因治疗等研究中具有广泛的应用前景。     

酵母人工染色体DNA转基因动物在医学研究中的应用前景

酵母人工染色体ＤＮＡ转基因动物在医学研究中的应用前景戴旭明，胡以平，傅继梁转基因动物体系是研究基因表达调控及表达产物生物学效应的最佳体系之一［１，２］。酵母人工染色体（ｙｅａｓｔａｒｔｉｆｉｃｉａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ＹＡＣ）载体是最近几年才发展起...     

人工染色体的研究

引言人工染色体是用DNA重组技术把染色体的各个功能单位组合而成的。它可作为一种模型,研究天然染色体的复制、分离等各种作用机理,更重要的是亦可能成为高等生物基因工程的有用载体。染色体作为遗传信息的载体至少应该包含四类必需的     

T淋巴细胞克隆技术

现代免疫学的发展越来越表明T淋巴细胞是高度异质性细胞群。Blue等用双色荧光标记检测发现,正常人周围血中有3%的T细胞可同时表达T_4及T_8抗原。Krensky等观察到了有T_4~+表型的细胞毒T淋巴细胞(CTL)。这种细胞的杀伤作用不被OKT_8单克隆抗体(McAb)所阻断。     

细菌人工染色体微球技术在胎儿染色体异常产前诊断中的应用

目的探讨细菌人工染色体微球(bacterial?artificial?chromosomes-on-beads,BoBs)技术对诊断孕妇胎儿染色体异常的应用价值。方法对2017年9月至2018年7月在北京妇产医院产前诊断中心接受羊水穿刺和脐带血穿刺的300例标本的BoBs检测和染色体核型结果进行回顾性分析。结果 300例标本中,共发现异常核型61例,其中染色体核型分析检出60例,BoBs检出56例。染色体核型分析对2例微缺失病例未检测到。另一方面,BoBs对3例染色体结构异常及3例低比例嵌合体未检测到。不同产前诊断指征下,无创DNA产前检测(NIPT)高风险组的染色体异常检出率最高,占该指征的62.86%。结论 BoBs技术具有高通量和快速的特点,联合使用BoBs和染色体核型分析可提高胎儿染色体异常及微缺失/微重复综合征的检出。     

细菌人工染色体微珠联合染色体核型分析在产前诊断中的价值研究

目的探讨细菌人工染色体微珠(BACs-on-Beads,BoBs)联合染色体核型分析在产前诊断中的价值。方法2016年6月至2019年1月在本院接受侵入性产前诊断的2500例单胎妊娠孕妇作为研究对象,均采集羊水。同时进行羊水细胞的BoBs检测和染色体G显带核型分析。结果BoBs技术共检出93例胎儿染色体异常,检出率为3.72%,其中染色体数目异常78例(4例13号染色体三体,19例18号染色体三体,34例21号染色体三体,9例XXX,6例XXY,6例XYY)、染色体结构异常9例(6例未被核型分析检出)、嵌合型染色体6例。在6例染色体结构异常的胎儿中,DiGeorge综合征和Williams-Beuren综合征各1例,其余4例为染色体微缺失/微重复综合征。核型分析对胎儿异常的检出率为4.56%(114/2500),核型分析对染色体数目异常的检出率与BoBs检测相同。核型分析额外检出21例染色体结构异常和6例嵌合型染色体。结论染色体核型分析联合BoBs技术发挥了细胞遗传学和分子遗传学的技术优势,极大提高了染色体异常的检出率,值得在临床应用和推广。     

单细胞显微操作法克隆技术

普通和特殊单克隆细胞株(系)的选择与培育日益重要、广泛和普及。探索不用特殊设备、操作简单、高效并适合任意批量单克隆细胞株(系)的选育技术将有利于这一重要而繁重工作的简化和推广。在实验中作者曾试过多种细胞克隆技术。为了简化技术模式,争取一次性准确获得欲选育量的可靠单克隆细胞株(系)并节省耗材,提高效率,减轻工作量,作者探索了仅利用细胞培养室常规配     

细菌人工染色体微珠技术在产前诊断中的应用

目的探讨细菌人工染色体微珠(BACs-on-Beads,Bo Bs)技术在产前诊断中的应用价值。方法对379例接受侵入性产前诊断的孕妇羊水样本行产前Bo Bs检测和羊水细胞染色体核型分析。结果 379例样本共检出24例异常样本,异常率为6.3%(24/379),其中15例染色体数目异常样本为两种技术共同检出,5例染色体微缺失/微重复样本为Bo Bs技术单独检出,另4例染色体结构异常样本为核型分析单独检出。结论 Bo Bs技术能快速,准确地检测出目标染色体非整倍体以及微缺失/微重复,Bo Bs检测联合染色体核型分析有利于提高染色体异常检出率,具有较高的临床应用价值。     

日本血吸虫细菌人工染色体文库的初步构建

初步构建了一个日本血吸虫细菌人工染色体（BAC）库，该库已包含1000多个基因组DNA插入片段的重组pEcBAC1克隆，平均插入片段为120kb，BAC库将为日本血吸虫基因的结构与功能研究提供新的资源。     

首次完成第一条完整染色体(酵母三号染色体)315357bp的制图与测序

国际遗传学界的这项重大成果是1989年欧洲共同体(EC)生物技术部组织并协调17个国家的35个实验室的147位科学家(包括我的硕士毕业生,徐岗)完成的。 1979年Strathern,Nowlon,Herskowitz7和Hicks通过啤酒酵母(Saccharomyces cerevisia)xJ 24-24a三号染色体左臂端的HML与右臂中央的MAT二者重组而成的63μm(～200kb)环形染色体。     

用高分辨G带和人工细菌染色体荧光原位杂交技术分析中国儿童孤独症患者的染色体改变

目的 检测中国儿童孤独症患者的特征性染色体改变。方法 应用高分辨G带和人工细菌染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)荧光原位杂交(flourescence in situ hybridization，FISH)分析68例中国儿童孤独症患者的染色体改变。结果 用G带分析观察到有染色体改变的4例患者，分别为1例t(4；6)(q23-24；p21)、1例21p 和2例9号染色体臂间倒位。BAC FISH进一步证实易位病例，而且更精确[t(4；6)(q25-26；p21-1)]；涉及7号、15号、2号染色体的BAC FISH均未观察到文献中报道的染色体改变；而9号染色体的臂间倒位和21p 因无BAC克隆而无法证实。结论 用G带和BAC FISH发现少数中国孤独症患者有染色体改变，但远没有文献中报道的10％～48％那么高。BAC FISH有助于精确地确定染色体易位断裂点。     

人工染色体载体系统——基因组与基因功能研究的重要工具

以ＹＡＣ为代表的人工染色体载体系统，包括ＢＡＣ、ＰＡＣ，在基因组研究，特别是基因克隆中起到了不可替代的作用。这些载体系统各具优点，但也都有一些局限性，应用时应注意扬长避短，相互补充。目前，ＹＡＣ已用于基因功能和基因治疗的研究。现正在发展更加完善的人工染色体载体系统。     

人工染色体载体系统──基因组与基因功能研究的重要工具

以ＹＡＣ为代表的人工染色体载体系统，包括ＢＡＣ，ＰＡＣ，在基因组研究，特别是基由克隆中起到了不可替代的作用。这些载体系统各具优点，但也都有一些局限性，应用时应注意扬长避短，相互补充。目前，ＹＡＣ已用于基因功能和基因治疗的研究。现正在发展更加完善的人工染色体载体系统。     

克隆技术：生命科学研究的机遇与挑战

自从英国科学家用成年绵羊的体细胞克隆出世界首例“多莉”绵羊的消息被海内外的媒体竞相报道后，近一段时间以来，已引起了世界各地生命科学家、政治家和法律学家们的广泛关注，特别是对这一技术是否会用于克隆“人”以及由此所可能产生的社会学和伦理学上的后果，表示出了期盼、忧虑或否定；我国的许多学者也以各种形式提出了面对中国国情的建议，希望政府职能部门能未雨绸级，对我国的克隆技术研究进行行为规范。本文拟对此作一评述，希望这一技术能在我国得到正常发展而不至于走入歧途。一、克隆动物与无性自孩就在人们议论克隆羊的同时…     

染色体原位抑制杂交鉴别染色体易位和标记染色体

染色体原位抑制杂交鉴别染色体易位和标记染色体朱宝生，章晓梅，任淑平，黄士智，张云霞，祝杏珍，易淑君人类染色体异常纷繁复杂，准确鉴别染色体畸变对研究各种染色体病、产前诊断和对患者的预后作出准确的诊断意见至关重要。迄今为止，一些复杂的染色体畸变难以依靠带...     

电子克隆技术及其在医学领域的应用

基于表达序列标签(ESTs)和基因组数据库的电子克隆(in silico cloning)策略,是近年发展起来的一门基因克隆的新技术.其技术核心是利用生物信息学技术组装延伸ESTs序列,获得基因部分乃至全长cDNA序列.它具有投入低、速度快、技术要求低和针对性强等优点.人类疾病发生与基因的关系已经被广泛证实,因此电子克隆技术必将成为疾病研究的重要手段.旨在阐述电子克隆技术在医学领域的应用进展.     

染色体原位杂交

基本原理 核酸原位杂交技术(in situ hybridization of nucleic acids or in situ nu-cleic acids hybridization)是利用硷基序列已知的带放射性或非放射性标记的核酸探针,依硷基互补配对原理,通过放射自显影或非放射检测体系(免疫酶促显色反应和荧光系统等),在组织切片、细胞、间期核及染色体等标本上对待测核酸进行定性、定位及相对定量分析的一种方法,一般称之为原位杂交。Pardue及Gall首先在细胞学标本上建立了此种方     

染色体疾病研究进展和新的染色体综合征

以染色体分析为主要方法和内容的人体细胞遗传学近二十余年来发展十分迅速,并在临床医学各个领域获得了广泛的应用。现在,临床细胞遗传学已经成为一门内容丰富的医学学科,并为许多疾病的诊断和予后作出了贡献。人体细胞遗传学的发展大体上可分为两个阶段,即在染色体显带技术出现以前,及     

克隆技术在传染病诊断与治疗方面的作用

由于近10年来DNA及抗体克隆技术的飞速发展,不少临床问题正逐步得到解决.在传染病领域中,某些疾病的诊断、治疗和预防措施可望有新的突破,其原因为某些具有特异功能的大分子藉克隆技术可以被合成或分离出来.克隆的含义为由相似的物质中将某种特殊成份分离并加以繁殖;而单克隆抗体(McAb)系将一株特殊B细胞由其它B细胞群中分离后提取其产生的特异抗体;基因克隆系指对微生物基因组中DNA的特殊序列的分离与繁殖.虽然上述两种克隆过程的最终产物不同,但两种克隆过程的原理相似.兹将克隆过程的一般步骤示于图1.