从BDNF/TrkB信号通路探讨乌头汤对神经病理性疼痛模型小鼠脑神经元的保护作用

目的:从脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)信号通路研究乌头汤对神经病理性疼痛模型小鼠的神经元保护作用。方法:40只雄性ICR小鼠随机分为假手术组(Sham),SNL模型组,乌头汤组(126 mg·kg~(-1)),ANA-12+乌头汤组。建立神经病理性疼痛L5脊神经结扎(SNL)小鼠模型,造模成功后,灌胃给药10 d,脑立体定位注射BDNF/TrkB受体拮抗剂ANA-12(50 nmol·L~(-1))7 d,免疫组化法检测小鼠海马BDNF,蛋白激酶B(Akt),环磷酸腺苷(c AMP)反应元件结合蛋白(CREB)蛋白的表达。免疫荧光法观察谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)神经元变化。小鼠海马神经元细胞分离于精准孕18 d的胎鼠脑组织,分为正常组、甘氨酸处理组,ANA-12组(0.5 mmol·L~(-1)),ANA-12+甘氨酸组,ANA-12+乌头汤组,ANA-12+乌头汤+甘氨酸组,细胞免疫荧光法观察原代神经元形态学变化;海马神经元细胞分为正常组、甘氨酸处理组(200 mmol·L~(-1)),肿瘤坏死因子(TNF)-α(5 mg·L~(-1))+甘氨酸组,TNF-α+乌头汤(5 mg·L~(-1))+甘氨酸组,TNF-α+乌头汤+甘氨酸+BDNF-siRNA组,TNF-α+乌头汤+甘氨酸+Akt-siRNA组,TNF-α+乌头汤+甘氨酸+CREB-siRNA组,细胞免疫荧光法检测神经元初、次级树突棘内外的突触后密度蛋白95(PSD95)的表达量。结果:与正常组比较,模型组BDNF,Akt和CREB阳性细胞数显著下降(P0.01),Glu-GABA能神经元失衡(P0.01);与模型组比较,乌头汤组BDNF,Akt和CREB阳性细胞数显著上升(P0.01),Glu-GABA能神经元恢复平衡(P0.01);与乌头汤组比较,ANA-12+乌头汤组BDNF和CREB阳性细胞数又显著下降(P0.05)而Akt组并无显著变化,Glu-GABA能神经元失衡(P0.01)。与正常组比较,甘氨酸处理组神经元初、次级树突棘数量显著上升(P0.01),且突触后密度蛋白95(PSD95)表达量显著上升(P0.01),ANA-12组,ANA-12+甘氨酸组,ANA-12+乌头汤组,ANA-12+乌头汤+甘氨酸组神经元初、次级树突棘数量均无明显变化;与甘氨酸处理组比较,TNF-α+甘氨酸组PSD95表达量显著下降(P0.01);与TNF-α+甘氨酸组比较,TNF-α+乌头汤+甘氨酸组PSD95表达量明显上升(P0.01);与TNF-α+乌头汤+甘氨酸组比较,TNF-α+乌头汤+甘氨酸+BDNF-siRNA组,TNF-α+乌头汤+甘氨酸+Akt-siRNA组,TNF-α+乌头汤+甘氨酸+CREB-siRNA组PSD95表达量均显著下降(P0.01)。结论:乌头汤对SNL小鼠海马谷氨酸能神经元兴奋性及可塑性损伤具有修复作用,这一作用与其对BDNF/TrkB通路的调控有关。     

雷公藤红素对神经病理性疼痛模型小鼠的干预作用

目的:观察雷公藤红素对神经病理性疼痛(NP)模型小鼠疼痛、焦虑及抑郁共病的干预作用以及初步机制探索。方法:将小鼠随机分为假手术组,模型组,普瑞巴林组(25 mg·kg-1),雷公藤红素低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1),以L5脊神经结扎(SNL)的方法制备NP小鼠模型,采用Von Frey法检测小鼠机械痛阈值,旷场和悬尾实验分别检测小鼠焦虑和抑郁症状,免疫组化(IHC)观察各组小鼠海马小胶质细胞形态的变化;选用BV2-TdT小胶质细胞,以1 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导细胞炎症,分为正常组、模型组、雷公藤红素(100 nmol·L-1)组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达,免疫荧光(IF)检测TNF-α的蛋白表达。结果:与假手术组比较,SNL模型组小鼠具有显著的机械痛敏、焦虑和抑郁症状(P0. 05,P0. 01),且海马小胶质细胞胞体面积明显升高(P0. 05),呈阿米巴样;与SNL模型组比较,20 mg·kg-1雷公藤红素能明显升高SNL小鼠50%缩足阈值和旷场中央区停留时间(P0. 05,P0. 01),降低SNL小鼠悬尾不动时间(P0. 05),减少SNL小鼠海马小胶质细胞的胞体面积(P0. 05)。体外实验显示,与正常组比较,LPS诱导BV2小胶质细胞后2～4 h,细胞TNF-α的mRNA和蛋白表达均明显升高(P0. 05,P0. 01);与LPS组比较,100 nmol·L-1雷公藤红素能显著抑制LPS诱导的TNF-α在mRNA和蛋白水平上表达的异常升高(P0. 01)。结论:雷公藤红素能改善NP模型小鼠痛与情绪障碍共病,其机制可能与中枢神经免疫调控有关。     

六味地黄丸对老龄小鼠海马突触可塑性的作用

目的 探讨六味地黄丸对老龄小鼠海马突触可塑性的神经保护作用及其机制。方法 将60只20月龄老龄小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组和六味地黄丸低、中、高剂量组，每组12只，另取12只3月龄小鼠为正常组，连续灌胃给药60 d,通过行为学测试评估小鼠学习记忆能力，透射电镜和电生理学观察小鼠海马区神经元突触形态和功能，高尔基染色法检测小鼠海马神经元树突棘密度，Western blot法检测小鼠海马PI3K/Akt/CREB通路相关蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠学习记忆能力减弱(P<0.01),突触数量减少(P<0.01),突触后膜变薄(P<0.01),突触间隙增宽、分界模糊(P<0.01),树突棘密度降低(P<0.01),突触传递效能减弱，海马SYN、PSD-95、MAP-2、p-Akt、p-CREB、TrkB、BDNF、PI3K、PKA蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较，六味地黄丸中、高剂量组和多奈哌齐组小鼠学习能力提升(P<0.05,P<0.01),突触数量增加(P<0.01),突触后膜变厚(P<...     

乌头汤对大鼠的镇痛作用及初步机制探讨

目的:研究乌头汤的镇痛作用及相关机制。方法:健康SD大鼠,随机分为正常组、模型组、乌头汤高、中、低剂量组以及布洛芬组,除正常组外其余各组建立慢性炎症痛模型,造模时在SD大鼠右踝关节腔部位注入完全弗氏佐剂(CFA)。乌头汤高、中、低剂量组于造模当天分别给予乌头汤4,2,1 g·kg-1,ig,布洛芬组30 mg·kg-1,ig,每日1次,连续6 d。用游标卡尺测量大鼠患足踝关节肿胀度,冷板仪测量患足冷板痛阈值,爪触觉测试仪测量机械痛阈值,热测痛仪测量热辐射痛阈值,酶联免疫法检测血浆中前列腺素E2(PGE2)和5-羟色胺(5-HT)的水平,免疫组织化学检测背根神经节中瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)、瞬时感受器电位作用受体蛋白M8(TRPM8)的水平。结果:CFA致炎后,大鼠踝关节出现明显肿胀,冷板痛阈值、机械痛阈值和热辐射痛阈值明显降低;血浆中PGE2,5-HT含量明显升高;背根神经节中TRPV1的表达量明显升高,TRPM8的表达量明显降低。与模型组相比,乌头汤高、中剂量组能降低大鼠关节肿胀度(P<0.05),乌头汤各剂量组能升高冷板痛阈值(P<0.01或P<0.05)、高、中剂量组能提高机械痛阈值(P<0.01,P<0.05),高剂量组对热辐射痛阈值也有一定的增高作用(P<0.05),同时,能降低血浆中的PGE2,5-HT和背根神经节中的TRPV1表达水平,提高TRPM8表达水平。结论:乌头汤具有镇痛作用,其机制可能与降低血浆中PGE2和5-HT水平以及调节背根神经节中TRPV1和TRPM8的表达有关。     

大补元煎通过上调BDNF/TrkB/CREB信号通路改善APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马突触可塑性

目的:观察大补元煎对APP/PS1痴呆小鼠海马突触可塑性及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的作用,并探讨其改善突触可塑性的可能机制。方法:将APP/PS1小鼠36只分为模型组、多奈哌齐组(6.5×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1))和大补元煎组(13.2 g·kg~(-1)·d~(-1)),野生鼠12只设为正常组,正常组和模型组给予等体积生理盐水,各组连续灌胃30 d。应用Morris水迷宫检测各组小鼠的学习记忆能力,应用尼氏染色和高尔基染色观察海马区神经元和突触的病理形态变化,应用免疫荧光(IF)观察海马突触后致密蛋白95(PSD95)及突触素(SYN)的蛋白表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马中BDNF,TrkB,CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠平台潜伏期和游泳总路程增加(P0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间减少(P0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体减少或消失,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量、树突棘密度减少(P0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平减少(P0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠平台潜伏期和游泳总路程减少(P0.05,P0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间增加(P0.05,P0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体数量增多,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量,树突棘密度增加(P0.05,P0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平增加(P0.05,P0.01)。结论:大补元煎改善APP/PS1双转基因小鼠突触可塑性的机制可能与其上调小鼠海马中BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。     

双氢青蒿素调控神经-小胶质细胞缓解神经病理性疼痛

目的 该研究旨在L5脊神经结扎（SNL）模型及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）海马连续注射模型中,评价双氢青蒿素（DHA）对海马神经损伤的干预效果;在原代培养的小胶质细胞-海马神经元中,确认DHA对小胶质细胞-海马神经元相互作用的调控模式。方法 实验小鼠分为假手术（Sham）组、SNL组、DHA组（16 mg·kg^-1）,每组3只,用腺相关病毒［（连接钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ） dTomato AAV］标记海马CA3谷氨酸能神经元,并以免疫荧光染色追踪其向海马CA1、前额叶皮质（Frc）、前扣带回（ACC）、伏隔核（Nac）及杏仁核（BLA）的投射;实验小鼠分为Sham组、TNF-α海马连续注射模型组、DHA低、中、高剂量（DHA-L、DHA-M、DHA-H）组（4、8、16 mg·kg^-1）及普瑞巴林组（25 mg·kg^-1）,每组4只,以高尔基染色统计海马CA1和CA3区锥体神经元形态;分别诱导海马原代神经元、小胶质细胞的持续激活,并进行细胞共培养给予DHA干预,以免疫荧光法统计细胞胞体面积和神经元初、次级树突棘内外的突触后密度蛋白95（PSD95）的表达量。结果 与Sham组比较,SNL组海马CA3谷氨酸能神经元向CA1区、Frc及ACC的投射减少（P<0.01）,而向Nac及BLA的投射升高（P<0.01）;与SNL组比较,DHA组海马CA3谷氨酸能神经元向CA1区、Frc及ACC的投射升高（P<0.01）,而向Nac及BLA的投射显著降低（P<0.01）。与Sham组比较,TNF-α海马连续注射模型组小鼠CA1锥体神经元树突棘密度及树突分支数量均显著减少（P<0.01）;与TNF-α海马连续注射模型组比较,DHA-M、DHA-H组海马CA1和CA3锥体神经元树突棘密度及树突分支数明显增多（P<0.05,P<0.01）;与DHA-M组比较,DHA-H组海马CA1锥体神经元树突总长度显著增多（P<0.01）,DHA-L组CAI神经元树突总长度和CA3神经元树突基部总长度则显著减少（P<0.01）。与空白组比较,甘氨酸组和谷氨酸组细胞胞体面积显著增大（P<0.01）;与甘氨酸组和谷氨酸组比较,甘氨酸+谷氨酸组细胞胞体面积显著升高（P<0.01）;与谷氨酸组比较,谷氨酸+DHA组细胞胞体面积显著减少（P<0.01）;与甘氨酸+谷氨酸组比较,甘氨酸+谷氨酸+DHA组细胞胞体面积显著减少（P<0.01）;与谷氨酸+DHA组比较,甘氨酸+谷氨酸+DHA组细胞胞体面积减少（P<0.05）。与空白组比较,谷氨酸组细胞胞体面积显著升高（P<0.01）;与谷氨酸组比较,谷氨酸+DHA各剂量组细胞胞体面积显著降低（P<0.01）。与空白组比较,静息原代小胶质细胞+甘氨酸组神经元初、次级树突棘内、外PSD95表达量显著升高（P<0.01）;与静息原代小胶质细胞+甘氨酸组比较,活化原代小胶质细胞+甘氨酸组神经元的初、次级树突棘内、外PSD95表达量显著降低（P<0.01）;与活化原代小胶质细胞+甘氨酸组比较,活化原代小胶质细胞+甘氨酸+DHA组中神经元的初、次级树突棘内、外PSD95表达量显著升高（P<0.01）;与活化原代小胶质细胞+DHA组比较,活化原代小胶质细胞+甘氨酸+DHA组神经元初、次级树突棘内、外PSD95表达量显著升高（P<0.01）。结论 DHA对NP病理状态下,海马小胶质细胞及TNF-α过表达导致的锥体神经元损伤具有显著的修复效果,而该修复与DHA对神经元-小胶质细胞的双重抑制密切相关。     

电针刺激耳甲区改善急性应激障碍诱发认知损害行为的机制研究

目的：观察电针对急性应激障碍诱发认知损害的行为学变化和突触相关蛋白的表达,探讨电针改善认知损害的可能机制。方法：24只2月龄雄性C57BL/6J小鼠,随机数字表法分为3组：对照组(Control)、模型组(ASD)和电针组(EA),每组8只。采用斯金纳箱足底电击无固定周期电击10 min,中间间隔10 min,连续5个循环建立急性应激障碍小鼠模型,急性应激3 d后,电针刺激耳甲区(1 mA,2/15 Hz, 30 min/次),1次/d,持续3 d治疗。利用旷场、水迷宫实验等评估小鼠行为学变化;采用Wes-tern blotting检测各组小鼠前额叶和海马组织中的BDNF、Syn-1的表达水平;高尔基染色法检测海马树突棘密度。结果：与对照组比较,模型组小鼠旷场的中心停留时间减少,差异具有统计学意义(P<0.01),运动总距离差异无统计学意义(P>0.05);海马及前额叶中模型组小鼠BDNF、Syn-1表达均下降,差异具有统计学意义(P<0.01);海马中树突棘密度减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,电针组小鼠在旷场中心停留时间增加,差异具有统...     

电针调控CASP-1/GSDMD细胞焦亡信号通路对抑郁症小鼠干预机制

目的:观察电针干预对抑郁症模型小鼠行为学、CASP-1/GSDMD细胞焦亡信号通路相关蛋白及海马突触可塑性的影响,探讨早期电针干预抑郁症的效应及其机制。方法:健康C57BL/6小鼠随机分成四组:空白组、模型组、氟西汀、电针组,每组8只。除空白组外,其余各组均腹腔注射利血平构建急性抑郁小鼠模型。电针组取百会、内关给予电针干预,每次20 min,1次/d,连续7 d。通过悬尾实验、强迫游泳实验对各组小鼠进行行为学评价,蛋白印迹法(Western blot)、高尔基染色(Golgi-Cox staining)、免疫荧光(IF)法检测各组小鼠海马CASP-1/GSDMD细胞焦亡信号通路相关蛋白及海马突触可塑性的变化。结果:与空白组相比,模型组小鼠悬尾和强迫游泳实验中不动时间明显增加(P<0.001),小鼠海马CA1区树突棘密度显著减少(P<0.001),小鼠海马组织中CASP-1/GSDMD信号通路相关蛋白NLRP3、CASP-1、IL-1β表达水平显著增加(P<0.001),小鼠海马区小胶质细胞标志物Iba-1表达显著增加(P<0.001)。与模型组比较,电针组小鼠悬尾和强迫游泳实验中不动时间明显缩短(P<0.001),小鼠海马CA1 区树突棘密度明显增加(P<0.001),小鼠海马组织中CASP-1/GSDMD信号通路相关蛋白NLRP3、CASP-1、IL-1β表达水平显著下降(P<0.001),小鼠海马区小胶质细胞标志物Iba-1表达显著减少(P<0.001)。结论:电针干预可缓解利血平诱导的抑郁样行为,其机制可能与电针干预抑制CASP-1/GSDMD细胞焦亡信号通路及改善突触可塑性有关。     

生慧汤对APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路的影响

目的?观察生慧汤对APP/PS1痴呆小鼠海马酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）/信号传导及转录激活因子3（STAT3）/细胞因子信号抑制物1（SOCS-1）信号通路的影响，并探讨其改善阿尔茨海默病（AD）突触可塑性的机制。方法?将36只APP/PS1小鼠随机分为APP/PS1组、多奈哌齐（donepezil）组和生慧汤（SHD）组，另将12只C57BL/6JNju小鼠设为空白（WT）组。Donepezil组按0.92 mg / （kg·d）的剂量灌胃多奈哌齐配置的混悬液，SHD组按13.5 g / （kg·d）的剂量灌胃生慧汤水煎液，WT组和APP/PS1组灌胃等体积的纯水。各组连续治疗4周，采用Morris水迷宫实验和跳台实验评价小鼠的认知功能。尼氏染色观察小鼠海马区神经元病理形态；高尔基染色观察小鼠海马区神经元树突棘的变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）和实时聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测小鼠海马中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的含量及其mRNA表达水平；采用蛋白免疫印迹（Western Blot）检测小鼠海马离子钙结合蛋白（IBA1）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、JAK2、p-JAK2-Tyr1007、STAT3、p-STAT3-Tyr705、SOCS-1的蛋白表达水平。结果?与WT组比较，APP/PS1组小鼠平台潜伏期、游泳总路程和出错次数增加（P<0.01），穿越平台次数、目标象限停留时间和潜伏期减少（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠平台潜伏期、游泳总路程和出错次数减少（P<0.05，P<0.01），穿越平台次数、目标停留象限时间和潜伏期增加（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马CA3和DG区神经元数量及树突棘密度显著减少（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马CA3和DG区神经元数量及树突棘密度增加（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马中TNF-α和IL-1β的含量及mRNA水平增加（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马中TNF-α和IL-1β的含量及mRNA水平减少（P<0.05，P<0.01）。与WT组比较，APP/PS1组小鼠海马中IBA1、GFAP、p-JAK2-Tyr1007/JAK2、p-STAT3-Tyr705/STAT3和SOCS-1的蛋白表达水平升高（P<0.01）。与APP/PS1组比较，Donepezil组和SHD组小鼠海马中IBA1、GFAP、p-JAK2-Tyr1007/JAK2、p-STAT3-Tyr705/STAT3和SOCS-1的蛋白表达水平减少（P<0.05，P<0.01）。结论?生慧汤可通过抑制神经炎症改善APP/PS1小鼠海马突触可塑性，其机制可能与其抑制JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路有关。     

基于BDNF/TrkB/ERK/CREB信号通路探究温笑散通过促进神经发生抗抑郁的作用机制

目的：探讨温笑散改善皮质酮诱导的小鼠抑郁样行为的作用机制。方法：雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、帕罗西汀组(20 mg·kg^-1)、温笑散低、高剂量组(3.27、6.54 g·kg^-1),正常组和模型组给予等体积的生理盐水,除正常组外其他各组在灌胃0.5 h后皮下注射皮质酮诱导抑郁模型。给药结束后检测小鼠抑郁样行为;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清皮质酮含量;尼氏染色观察海马神经元损伤情况;免疫荧光检测海马齿状回(DG)中双皮质素(DCX)表达;蛋白免疫印迹法检测海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路相关蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组小鼠糖水偏好率显著降低、悬尾不动时间显著增加(P<0.01),旷场中心区域的停留时间和运动总距离明显减少(P<0.05,P<0.01),血清皮质酮水平显著升高(P<0.01),海马DG区神经元体积明显缩小、细胞核染色加深,DG区的DCX表达减少,海马中BDNF、磷...     

乌头汤改善下行抑制系统损伤以缓解神经病理性疼痛的作用机制

目的:明确乌头汤(Wutoutang,WTT)对神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)小鼠的镇痛药效,并探索其对下行抑制系统的影响机制。方法:ICR小鼠随机分为假手术组,模型组,普瑞巴林(pregabalin,PGB)组,WTT高(WTT-H),中(WTT-M),低(WTT-L)剂量组。除假手术组只剥离但不结扎外,其余各组均对L5脊神经进行结扎,随后分别以生理盐水,12.60,6.30,3.15 g·kg-1WTT及0.025 g·kg-1PGB对各组小鼠进行灌胃,持续21 d。采用Von Frey法检测WTT的镇痛药效;酶联免疫吸附法(ELISA)检测下行抑制系统关键脑区前扣带回皮质(anterior cingulate cortex,ACC)及延髓头端腹内侧核(rostral ventromedial medulla,RVM)中的脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和5-羟色胺(5-hydroxytryptarnjne,5-HT)的蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylatedextracellular signal-regulated kinase,p-ERK)和突触后致密蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)的蛋白表达量。结果:给药第21天,与假手术组比较,模型组小鼠机械痛敏阈值明显降低(P0.01),且其RVM和ACC核团内5-HT和BDNF的表达水平也明显下降(P0.05),而p-ERK和PSD-95蛋白表达却明显升高(P0.05);与模型组比较,WTT组小鼠机械痛敏阈值显著回升(P0.01),5-HT和BDNF表达量明显提高(P0.05),同时p-ERK和PSD-95蛋白表达有所抑制。结论:WTT能缓解小鼠NP,且可能是通过调节下行抑制系统中RVM和ACC内5-HT,BDNF,p-ERK和PSD-95的蛋白表达水平而发挥作用。     

地黄饮子加减方对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元损伤的影响

目的:观察地黄饮子加减方对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元的影响。方法:将84只SD雄性大鼠,按随机原则选出12只大鼠作为假手术组,其余72只大鼠采用两血管阻断法制备血管性痴呆模型,筛选60只模型大鼠,每组12只,随机分为模型组,尼莫地平组(0. 011 g·kg~(-1)),地黄饮子加减方高、中、低(4. 54,2. 27,1. 14 g·kg~(-1))剂量组。连续灌胃30 d后,Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)观察海马CA1区神经元形态结构改变,透射电镜观察海马CA1区神经元超微结构变化,原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测海马CA1区细胞凋亡水平,免疫组化(IHC)检测海马CA1区组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越原平台次数显著减少(P 0. 01),海马CA1区神经元形态均有不同程度地损伤,凋亡率显著增加(P 0. 01),PI3K,Akt的积分吸光度和平均积分吸光度明显降低(P 0. 01),Caspase-3的积分吸光度和平均积分吸光度显著增高(P 0. 01);与模型组比较,各给药组大鼠逃避潜伏期缩短(P 0. 05,P 0. 01),穿越原平台次数增加(P 0. 05,P 0. 01),PI3K,Akt的积分吸光度和平均积分吸光度值显著增高(P 0. 01),Caspase-3的积分光密度和平均积分吸光度不同程度降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:地黄饮子加减方可改善血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力和海马CA1区神经元损伤,潜在机制可能与PI3K/Akt信号转导途径的激活,抑制大鼠海马CA1区神经细胞的凋亡有关。     

补阳还五汤对慢性不可预知性温和应激抑郁模型小鼠行为及脑海马CA3区病理形态学影响

目的:探讨补阳还五汤神经保护作用及抗抑郁机制。方法:清洁级昆明小鼠随机分为正常组,模型组,氟西汀组(3.0 mg·kg-1,ig),补阳还五汤低、中、高剂量组(9.0,18.0,27.0 g·kg-1,ig),每组10只。各给药组于每日应激前1 h ig给药,其余各组给予等体积生理盐水,共计21 d。采用慢性不可预知性温和应激法(CUMS)建立小鼠抑郁症模型,采用旷场实验(OFT),悬尾实验(TST)及体重测试(BWM)观察动物抑郁样行为;采用尼氏体染色检测海马CA3区神经元形态学变化;采用透射电镜观察海马区超微结构变化;采用TUNEL法检测海马CA3区神经元凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠出现抑郁样行为,表现为体重减少,OFT水平及垂直运动得分减少及TST不动时间延长(P0.05,P0.01);尼氏染色及透射电镜显示海马CA3区神经元损伤及早期凋亡变化;TUNEL法显示海马CA3区神经元凋亡数量增加(P0.01)。与模型组比较,氟西汀组及补阳还五汤各剂量组小鼠抑郁样行为均有改善,表现为体重增加,OFT水平及垂直运动得分增加,TST不动时间减少(P0.05,P0.01);尼氏染色及透射电镜显示海马CA3区神经元细胞损伤减轻;TUNEL法显示海马CA3区神经元凋亡数量减少,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补阳还五汤可能通过减轻海马CA3区神经元损伤及抑制神经元凋亡而改善小鼠抑郁样行为,具有神经保护及抗抑郁症作用。     

大黄-黄芩配伍应用对脑损伤早期癫痫易感性的影响

目的:研究大黄-黄芩配伍应用对小鼠脑损伤早期癫痫易感性的影响,探讨该药对抗脑损伤后癫痫的机制。方法:将SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组,模型组,大黄-黄芩药对低(1 g·kg~(-1)),高剂量组(4 g·kg~(-1))及阳性组(2.6 g·kg~(-1)丙戊酸钠)。除空白组外,其余各组采用自由落体法建立小鼠封闭性颅脑损伤模型,于脑损伤后给予相应药物灌胃治疗,连续7 d。于末次给药后给予戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)亚惊厥剂量刺激,通过行为学观察各组小鼠的癫痫发作潜伏期及平均发作强度,脑电图(electroencephalogram,EEG)分析小鼠的脑部放电图谱,统计0~20 Hz的放电总和;免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)计数海马CA1,CA3区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的阳性细胞数;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测神经元Na~+-K~+-2Cl~-共转运体-1(NKCC1)的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组的小鼠癫痫发作潜伏期明显缩短,脑部异常高频放电明显增多,海马CA1,CA3区的GFAP阳性细胞计数显著增加(P0.05),且神经元NKCC1的表达也较高(P0.05);与模型组比较,药对低、高剂量均可延长癫痫发作的潜伏期,减少脑部异常放电,降低海马区GFAP阳性细胞数以及神经元NKCC1蛋白的表达,且药对高剂量组与模型组比较具有显著性差异(P0.05)。结论:大黄-黄芩配伍应用可降低脑损伤早期癫痫的易感性,作用机制可能与星形胶质细胞的调控作用有关。     

覆盆子有效部位改善肾阳虚型痴呆大鼠 学习记忆作用机制研究

目的: 考察覆盆子有效部位对D-半乳糖联合氢化可的松造成肾阳虚型痴呆大鼠的影响,初步阐明覆盆子有效部位改善肾阳虚型痴呆大鼠学习记忆的作用机制。方法: 大鼠ip D-半乳糖125 mg·kg^-1,连续6周,后2周im 氢化可的松混悬液25 mg·kg^-1,造成肾阳虚痴呆模型,空白组和模型组灌胃生理盐水,其余各组每天均预防性灌胃覆盆子氯仿部位或乙酸乙酯部位高、低剂量(均按生药量计为24,12 g·kg^-1),连续4周。进行历时5 d的Morris水迷宫实验后,取大鼠皮层进行乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AchE)和胆碱乙酰化转移酶(choline acyltransferase, ChAT)活性检测、取海马CA1区进行HE染色和tau蛋白免疫组织化学检测。结果: 与空白组相比,模型组学习记忆能力下降,皮层AchE活性显著升高,ChAT活性显著降低,海马CA1区Pser404-tau阳性细胞明显增加;与模型组比较,覆盆子氯仿部位高、低剂量组、覆盆子乙酸乙酯部位高、低剂量组均能不同程度改善痴呆大鼠学习记忆能力,降低皮层AchE活性,升高ChAT活性;增加海马CA1区细胞总数,减少坏死细胞数,降低细胞坏死率;减少海马CA1区Pser404-tau阳性细胞数。结论: 覆盆子有效部位可能通过降低AchE活性,升高ChAT活性,保护海马CA1区神经元,减少tau蛋白表达而起到改善肾阳虚型痴呆大鼠学习记忆。     

合欢花总黄酮的抗抑郁作用及其机制研究

目的:研究合欢花总黄酮的抗抑郁作用,并初步探讨其抗抑郁作用机制.方法:将90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸文拉法辛组(0.012 5 g·kg-1)、合欢花总黄酮(0.10,0.05,0.025 g·kg-1)剂量组.应用孤养加慢性不可预见性应激建立抑郁症模型,造模同时ig给药,每天1次,连续给药21 d,正常组、模型组ig等体积蒸馏水.用旷场实验法测定各组大鼠行为变化,TUNEL原位杂交检测海马CA3区神经元细胞凋亡.结果:与正常组比较:模型组大鼠旷场实验3 min内水平运动、垂直运动得分均明显降低(P ＜0.05或P＜0.01),海马CA3区神经元凋亡细胞数、阳性细胞率均显著增加(P＜0.01);与模型组比较:盐酸文拉法辛组、合欢花总黄酮(0.10,0.05,0.025 g·kg-1)剂量组旷场实验3 min内水平运动、垂直运动得分均明显增高(P ＜0.05或P＜0.01),海马CA3区神经元凋亡细胞数及阳性细胞率均明显减少(P＜0.05).结论:合欢花总黄酮具有抗抑郁作用,其机制可能与拮抗CA3区海马神经元细胞凋亡有关.     

半夏泻心汤抗抑郁作用实验研究

目的:探讨中药经方半夏泻心汤(BXT)抗抑郁作用.方法:补给药途径、天数及与检测的时间关系120只成年雄性昆明种小鼠随机分为空白组(Control;n=24),阳性药氟西汀组(FLU,10 mg·kg-1,ig,n=24),BXT低、中、高剂量组(50,100,200 mg· kg-1;n=24),分别进行旷场实验(open field test,OFT;n =8)、悬尾实验(tail suspension test,TST;n =8)和强迫游泳实验(forced swimming test,FST;n=8);OFT实验参数包括水平运动得分、垂直运动得分和总得分,TST和FST实验参数是不动状态持续时间.结果:OFT结果提示,与Control比较,FLU和BXT低、中、高剂量对OFT水平运动得分、垂直运动得分及总得分影响差异均无统计学意义;TST结果提示,与Control比较,FLU和BXT低、中、高剂量可明显缩短TST不动状态持续时间(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01);FST结果提示,与Control比较,FLU和BXT低、中、高剂量可明显缩短FST不动状态持续时间(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).结论:半夏泻心汤具有明显抗抑郁作用,但其具体作用机制尚未明确.     

舒郁宁心方对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及海马BDNF,TrkB表达的影响

目的:分析中药舒郁宁心方对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及海马脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF),酪氨酸激酶B(tyrosine kinase B,TrkB)表达的影响。方法:选取60只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、西药组(氟西汀)、舒郁宁心方低、中、高剂量组,每组各10只,除正常组外,均建立为期21 d的慢性应激抑郁模型。建模2周后起,进行为期21 d的给药。其中正常组不给药,模型组ig生理盐水,西药组ig氟西汀药液12 mg·kg^-1,中药低、中、高剂量组分别ig舒郁宁心方药液2.5,7.5, 25.0 g·kg^-1。对比各组大鼠在第1天(造模前)和第56天(给药结束后)的体重、糖水摄入量、水平运动格数、垂直运动次数。对比实验结束后各组大鼠海马组织中BDNF和TrkB的表达水平。结果:第56天与正常组比较,模型组的体重、糖水摄入量、水平运动格数、垂直运动次数及CA1区和CA3区的BDNF和TrkB阳性表达的积分吸光度(IA)显著降低(P<0.05);与模型组比较,氟西汀组和舒郁宁心方各剂量组上述指标显著升高(P<0.05)。结论:舒郁宁心方可以改变海马组织中的BDNF和TrkB表达水平,进而起到一定的抗抑郁疗效。     

毛蕊花糖苷改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑损伤的作用

目的 研究毛蕊花糖苷对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑损伤的改善作用。方法 建立D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型,以其学习、记忆成绩,免疫器官指数,脑中胆碱乙酰转移酶（ChAT）和乙酰胆碱酯酶（AchE）活性,小鼠海马CA1区细胞形态为指标,对毛蕊花糖苷改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑损伤的作用进行研究。结果 与模型组比较,毛蕊花糖苷可恢复D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的学习记忆损伤;拮抗脑组织和免疫器官萎缩;提高脑中ChAT活性,降低AChE活性;改善脑组织海马CA1区椎体细胞的数量和排列。结论 毛蕊花糖苷能明显改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的学习记忆能力障碍,可以调节脑组织ChAT和AchE活性,保护脑组织海马CA1区神经元细胞,提高脑组织和免疫器官指数,改善模型小鼠的脑损伤,提示毛蕊花糖苷的作用可能与其增强中枢胆碱能功能和保护神经元细胞有关。     

金芪降糖片对糖尿病引发的认知功能障碍的影响及机制

目的:探讨金芪降糖片对糖尿病引发的认知功能障碍的影响,并初步探讨其作用机制。方法:选用C57BL/6J小鼠,采用ip链脲佐菌素(STZ,120 mg·kg-1)复合高脂饮食的方法诱导复制2型糖尿病模型。利用Morris水迷宫试验筛选出存在糖尿病认知功能障碍的小鼠,并随机将其分为4组,每组14只,分别为模型组,阳性药组(盐酸二甲双胍0.45 g·kg-1),金芪降糖片高(2倍临床等效剂量1.31 g·kg-1)及低(临床等效剂量0.655 g·kg-1)剂量组。正常组和模型组均给予等量蒸馏水,连续ig给药10周。在给药前及给药10周后,各测一次小鼠的空腹血糖(FBG)和体重。10周后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习忆能力;尼式染色观察海马CA1区形态学变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清脑源性神经营养因子(BDNF)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测小鼠海马组织突触素(SYN)mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组糖尿病小鼠FBG明显升高,记忆能力下降,海马神经损伤明显,血清BDNF水平明显降低,海马SYN mRNA表达水平明显降低,体重明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,金芪降糖片高剂量组可降低糖尿病小鼠FBG,改善学习记忆能力,改善海马神经损伤状况,显著升高血清BDNF水平,显著增加海马SYN mRNA表达水平,各治疗组小鼠体重较稳定,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:金芪降糖片可以改善糖尿病小鼠的学习记忆能力,可能是通过上调BDNF含量对海马神经细胞保护及营养修复,并促进海马SYN mRNA表达上调调节海马神经突触可塑性实现的。