麻杏石甘汤及拆方对RSV加重型哮喘气道炎症的保护作用及调控TRPV1的机制研究北大核心CSCD

探讨麻杏石甘汤及拆方干预呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)加重型哮喘气道炎症的效应及对瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid-1, TRPV1)的调控作用。采用卵清蛋白复合RSV复制加重型哮喘小鼠模型(雌性C57BL/6小鼠),麻杏石甘汤及拆方进行干预。观察各组外周血嗜酸性粒细胞(eosinophil, EOS)和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中炎细胞水平、呼吸间歇(Penh)值变化、肺病理损伤,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法测定BALF中白细胞介素(interleukin, IL)-4、IL-13、P物质(substance P,SP)、前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)等水平变化,定量实时聚合酶连锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织中TRPV1 mRNA和蛋白表达。体外以IL-4联合RSV刺激16HBE细胞,观察麻杏石甘汤及拆方含药血清干预后TRPV1表达及经TRPV1激动剂刺激后的胞内Ca2+水平变化。结果显示,与空白组相比,模型组小鼠出现明显的哮喘表型,外周血和BALF中各类炎细胞水平、Penh值显著升高(P<0.05,P<0.01),肺组织损伤严重。与模型组相比,全方组、石膏组及麻杏草组外周血和BALF中EOS水平显著下降(P<0.01,P<0.05);全方组和石膏组可显著降低BALF中白细胞、中性粒细胞水平(P<0.01),麻杏草组可下降中性粒细胞水平(P<0.05);全方对外周血和BALF中炎细胞水平的改善作用优于拆方组(P<0.05,P<0.01);50 mg·mL-1氯化乙酰胆碱激发后,全方组和麻杏草组Penh值显著降低(P<0.01),石膏组Penh值下降(P<0.05);麻杏石甘汤及拆方可不同程度减轻肺组织病理损伤;全方组可显著降低BLAF中IL-4、IL-13、PGE2、SP水平(P<0.05,P<0.01),石膏组可下降BLAF中IL-13、PGE2、SP水平(P<0.05,P<0.01),麻杏草组可下降BALF中IL-13、PGE2水平(P<0.05,P<0.01);全方可下调肺组织中TRPV1的蛋白和mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。麻杏石甘汤及拆方含药血清干预可下调经IL-4联合RSV刺激的16HBE细胞中TRPV1表达,抑制TRPV1激动剂引起的Ca2+内流,全方组显著优于拆方组(P<0.05)。体内、外实验结果表明,麻杏石甘汤及拆方对RSV加重型哮喘气道炎症具有保护作用,全方药物协同增效,干预作用优于拆方部分,不同组方部分在改善气道高反应性、抗过敏、抗炎方面各有贡献,其机制与调控TRPV1通道和相关炎症介质水平有关。     

五拗汤对PM2.5诱导加重哮喘小鼠模型的效应及TRPA1和TRPV1表达的影响

目的观察五拗汤对PM2.5复合卵蛋白(OVA)诱导加重哮喘小鼠模型的效应及TRPA1和TRPV1表达的影响。方法将90只小鼠平均分为空白对照组、OVA+PM2.5组、OVA组、五拗汤低剂量组(2.1 g/kg)、五拗汤高剂量组(4.2 g/kg)、地塞米松组(0.75 mg/kg),每组15只。给药组自造模第29天开始连续灌胃给药14天,空白对照组、OVA+PM2.5组、OVA组同期给予生理盐水灌胃,整个实验周期为42天。末次激发哮喘24 h后检测外周血中嗜酸性粒细胞(EOS)数量、肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞百分比;检测气道阻力(RI)、肺动态顺应性(Cdyn)和肺组织损伤得分(TLIS);测定BALF中IL-13、P物质(SP)、前列腺素D_2(PGD_2)、神经生长因子(NGF)含量变化;实时定量荧光PCR(q-PCR)法检测肺组织TRPA1、TRPV1 mRNA水平;Western Blot法检测肺组织TRPA1、TRPV1蛋白表达。结果与空白对照组比较,OVA组、OVA+PM2.5组EOS计数及百分比、中性粒细胞(NE)百分比,RI、TLIS值,IL-13、SP、PGD_2、NGF水平,TRPA1和TRPV1 mRNA及蛋白表达升高,巨噬细胞(M?)百分比、Cdyn值降低(P0.05,P0.01)。与OVA+PM2.5组比较,OVA组EOS计数和百分比、IL-13、NGF水平降低,M?百分比升高(P0.05,P0.01);五拗汤低剂量组EOS计数和百分比、NE百分比,RI、TLIS值,SP、NGF水平降低,M?百分比升高(P0.05,P0.01);五拗汤高剂量组和地塞米松组EOS计数和百分比、NE百分比,RI、TLIS值,IL-13、SP、PGD_2、NGF水平,TRPA1和TRPV1蛋白表达均降低,M?百分比和Cdyn值升高(P0.05,P0.01),五拗汤高剂量组TRPV1 mRNA降低(P0.05)。结论五拗汤有改善PM2.5复合OVA诱导加重哮喘的作用,并与调控TRPA1和TRPV1通道有关。     

督灸对哮喘小鼠效应及TRPV1相关神经-免疫炎症的影响

目的:观察督灸对哮喘小鼠效应及TRPV1相关神经-免疫炎症的影响。方法:将80只雌性Balb/c小鼠随机分为4组,分别为空白组、模型组、地塞米松组、督灸治疗组,每组20只。复制卵蛋白(OVA)致敏及激发小鼠哮喘模型。检测各组小鼠气道反应性,观察各组小鼠肺组织病理学改变,外周血嗜酸性粒细胞数(EOS),支气管肺泡灌洗液(BALF)中各类炎症细胞百分比的水平。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测BALF中白细胞介素(IL)-4,IL-13,P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)水平及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织TRPV1蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠肺组织病理显示支气管及支气管管壁周围有大量炎症细胞浸润,支气管上皮细胞变性坏死,支气管黏膜水肿、增厚;给予浓度为12.5、25、50 mg/mL乙酰甲胆碱吸入后RI值明显上升(P<0.01);外周血EOS计数及BALF中EOS、淋巴细胞百分比明显升高(P<0.05);BALF中IL-4、IL-13、SP和CGRP表达水平明显升高(P<0.01);肺组织中TRPV1的表达增加。与模型组比较,...     

祛风宣肺方对咳嗽敏感性增高豚鼠TRPV1 通道相关蛋白的影响

目的 探讨祛风宣肺方对咳嗽敏感性增高豚鼠瞬时受体电位香草酸亚型 1（TRPV1）通道相关蛋白的作用，以期探讨其疗效机制。 方法 48 只 SPF 级豚鼠分为正常组（给予生理盐水）、模型组、西药组、中药组，每组 12 只，除正常组外，其余 3 组采用卵蛋白致敏的方法建立咳嗽敏感性增高豚鼠模型，模型组给予生理盐水，西药组给予辣椒平，中药组给予祛风宣肺方，干预 1 周后采用 ELISA 法测定血清中 IL-6、IL-20 水平、支气管肺泡灌洗液（BALF） 中 TRPV1、P 物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP） 蛋白水平，WesternBlot 法测定肺组织中 TRPV1、神经激肽-1 受体（NK-1R）、CGRP 蛋白表达。 结果 与正常组比较，模型组血清 IL-6、IL-20、BALF 中 TRPV1、SP、CGRP 及肺组织中 TRPV1、NK-1R、CGRP 水平升高（P<0.01）；与模型组比较，西药组及中药组血清 IL-6、IL-20、BALF 中 TRPV1、SP、CGRP 水平降低（P<0.01），但中药组SP 水平与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；与西药组比较，中药组 BALF 中 TRPV1、SP、CGRP水平升高（P<0.05， P<0.01）。 与模型组比较，西药组、中药组肺组织中 TRPV1、NK-1R、CGRP 蛋白表达下降（P<0.05， P <0.01）；与西药组比较，中药组肺组织中 TRPV1、NK-1R、CGRP 表达升高（ P <0.01）。结论 抑制 TRPV1 通道进而降低气道神经源性炎症可能是祛风宣肺方的重要疗效机制之一。     

基于TRPV1探讨调气止咳方改善感染后咳嗽大鼠气道神经源性炎症的机制

目的 基于TRPV1探讨调气止咳方改善感染后咳嗽大鼠气道神经源性炎症的机制。方法 取60只SPF级SD大鼠建立PIC模型后分为模型(MC)组、TQZKP低、中、高剂量组、西药(复方甲氧那明)组。第18天开始,每天1次连续10 d给药。应用HE法观察肺组织的病理形态学改变,ELISA法检测血清IL-5、IL-6、SP及BALF中SP、TRPV1、CGRP水平,RTq PCR检测肺组织TRPV1、CGRP、NK-1R m RNA含量,Western Blot法检测肺组织TRPV1、CGRP、NK-1R蛋白水平。结果 与NC组比较,MC组咳嗽次数增多、咳嗽时间延长、潜伏期缩短,血清IL-5、IL-6、SP及BALF中SP、CGRP、TRPV1含量增高(P<0.01),肺组织CGRP、TRPV1、NK-1R蛋白水平及其mRNA表达明显升高(P<0.01);与MC组相比,各治疗组大鼠咳嗽次数减少(P<0.01),TQZKP高、中剂量组及西药组较TQZKP低剂量组更能延长咳嗽发作潜伏期(P<0.05);血清IL-5、IL-6、SP及BALF中SP、CGRP、TRPV1含量明...     

三拗汤对OVA诱导哮喘小鼠模型的效应及TRPV2表达的影响

探讨三拗汤对卵蛋白(ovalbumin,OVA)诱导哮喘小鼠的效应及对瞬时感受器电位离子通道蛋白V2(transient receptor potential V2,TRPV2)表达的影响,通过复制OVA诱导小鼠哮喘模型,观察三拗汤干预后的气道炎症、气道高反应性、肺组织病理学等的变化,检测肺组织TRPV2 mRNA和蛋白表达、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-10、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、前列腺素D_2(prostaglandin D_2,PGD_2)的水平。结果显示,与空白组相比,模型组表现出典型的哮喘表型,外周血及BALF中嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)水平显著升高(P0.01),气道高反应性增强(P0.01),肺组织损伤严重;小鼠肺组织中TRPV2的mRNA和蛋白表达显著上调,BALF中IL-4,IL-10,NGF,PGD_2水平显著增加(P0.05,P0.01)。与模型组比较,三拗汤可以降低外周血、BALF中EOS的水平(P0.05,P0.01)及气道阻力(RI)(P0.05,P0.01),改善小鼠肺组织损伤,下调小鼠肺组织中TRPV2的mRNA和蛋白表达,降低BALF中IL-4,IL-10,NGF,PGD_2水平(P0.05,P0.01)。上述三拗汤干预哮喘模型的研究表明,该方能够降低哮喘小鼠的炎症水平,改善肺功能,减轻肺损伤,其机制可能与调节肺组织中TRPV2表达、降低相关Th2细胞因子及神经递质水平有关,为其治疗哮喘提供了科学依据。     

祛风止痉胶囊对支气管哮喘大鼠气道炎症及TRPV1通路的影响

目的:观察祛风止痉胶囊对支气管哮喘大鼠气道平滑肌瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)表达以及外周血白介素(IL)-4、IL-13、IL-15、IL-17水平的影响。方法:将60只健康雄性大鼠随机分为正常组、阳性对照组、模型组与低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠于实验的第1、15天给予10%OVA腹腔注射1 ml以致敏,第15天将致敏的大鼠给予1%OVA溶液进行超声雾化建立哮喘模型。连续干预10 d。采用ELISA法测定大鼠外周血IL-4、IL-13、IL-5、IL-17水平,采用荧光定量PCR及Western blot测定大鼠肺组织TRPV1 mRNA和蛋白的表达。结果:低剂量、中剂量组、高剂量组IL-4、IL-13、IL-5、IL-17水平低于模型组(均P<0.05),高剂量组IL-4、IL-13、IL-5、IL-17水平低于阳性对照组(均P<0.05)。模型组及阳性对照组的TRPV1 mRNA和蛋白表达高于正常组(均P<0.05),模型组的TRPV1 mRNA和蛋白表达高于阳性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组(均P<0....     

祛风宣肺汤治疗感染后咳嗽动物模型的疗效及相关机制研究

目的:观察祛风宣肺汤对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的感染后咳嗽(postin-fectious cough,PIC)小鼠动物模型咳嗽反射敏感性性和神经源性炎症的治疗作用,并探索可能的机制。方法:雄性的ICR小鼠24只,按数字随机法随机分成空白组、LPS组和中药组。每组8只,通过腹腔注射一定浓度LPS造成小鼠感染后咳嗽的气道高反应性模型,其中中药组并给予中药组祛风宣肺汤灌胃。氨水刺激后人工数小鼠咳嗽次数,肺功能仪测定气道反应性,免疫组化检测小鼠肺中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)表达位置和半定量,蛋白质印迹法(Western Blot,WB)方法检测肺组织中辣椒素受体TRPV1蛋白表达,实时定量PCR(real-time PCR)方法检测肺组织中TRPV1、P物质受体神经肽受体1(NKl)的mRNA、神经生长因子(NGF)/神经生长因子受体络氨酸激酶(trKa)的mRNA表达,Elisa方法检测肺组织中P物质(Sbstance P,SP)表达含量。结果:LPS组小鼠咳嗽次数及气道反应性明显高于空白组小鼠,提示LPS模型小鼠造模成功,并且祛风宣肺方能明显降低模型小鼠咳嗽次数、气道反应性和小鼠肺部炎症,相关数据具有统计学意义;祛风宣肺汤可以显著的减少LPS升高的TRPV1的表达和神经源性炎症,包括上游调控轴NGF/trKa的表达。结论:结合目前对于感染后气道高反应性的认识,考虑祛风宣肺汤可能是通过减少NGF/trKa来降低TRPV1的表达和神经源性炎症,并以此来降低气道高反应性。     

地塞米松对变应性哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

 目的探讨地塞米松对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其mRNA表达的影响。方法30只清洁级雄性BALB/C小鼠分为3组:正常对照组、哮喘组和地塞米松组。以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行嗜酸性粒细胞(EOS)计数及分类;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测BALF中TARC和IL-4水平;免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测TARC蛋白和TARC mRNA在肺组织中的表达。结果①哮喘组BALF中细胞总数,EOS绝对数和EOS占细胞总数的百分数(EOS%)均显著高于正常对照组,地塞米松组上述指标均显著低于哮喘组(均P<0.01);②哮喘组BALF中TARC,IL-4浓度均显著高于对照组,地塞米松干预后BALF中TARC,IL-4浓度均显著低于哮喘组(均P<0.01)。③免疫组化及RT-PCR结果显示,肺组织中TARC蛋白及其mR-NA的表达,哮喘组显著高于对照组,地塞米松组较哮喘组显著减弱(均P<0.01),免疫组化显示,TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞。④相关性分析显示,小鼠BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度均呈显著正相关(均P<0.01)。结论糖皮质激素(地塞米松)可抑制TARC在哮喘小鼠气道上皮中的表达,可能是其治疗哮喘气道炎症的部分作用机制。     

补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症TRPV1及其致敏因子NGF的影响

目的研究补肾温阳化瘀方对实验性子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)简称内异症,瞬时受体电位辣椒素亚型Ⅰ(transientreceptor potential vanilloid receptor 1,TRPV1)及致敏因子神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的影响,以探讨补肾温阳化瘀方治疗EMT疼痛的作用机制。方法将近交系BALB/c雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、孕三烯酮组,每组15只。观察各组扭体反应,并采用酶联免疫法(ELISA)检测血清NGF的含量,采用免疫组化SP法及Western blot法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白的表达,采用Real-time PCR方法检测子宫和异位灶NGF、TRPV1 mRNA的表达。结果模型组血清NGF含量显著高于假手术组(P0.01),且与小鼠扭体次数呈正相关(r=0.574,P0.01);与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组血清NGF含量显著下降(P0.05);模型组子宫NGF、TRPV1蛋白及NGF、TRPV1 mRNA表达均高于假手术组(P0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组、孕三烯酮组子宫和异位灶NGF、TRPV1蛋白表达均显著降低(P0.01),NGF、TRPV1 mRNA以中药高剂量组下降最为明显(P0.01)。子宫及异位灶NGF与TRPV1蛋白及mRNA表达均呈正相关(P0.01)。结论 TRPV1及致敏因子NGF共同参与了EMT疼痛的发生;补肾温阳化瘀方可通过降低NGF对TRPV1的上调作用从而发挥抑制EMT疼痛的作用。     

厚朴三物汤对术后肠梗阻大鼠小肠Cajal细胞及iNOS表达的影响

目的:以Cajal间质细胞(ICC)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达为切入点,观察厚朴三物汤对术后肠梗阻大鼠小肠炎症反应与神经反馈的影响,并探讨其对胃肠道运动作用的相关机制。方法:健康成年雄性SD大鼠87只,随机分为假手术组、模型组、厚朴三物汤低、中、高剂量组。采用手术方法造模,造模后分别给予生理盐水或不同剂量的厚朴三物汤灌胃,低、中、高剂量组给药量分别为2. 25,4. 5,9 g·kg-1。给药后观察各组大鼠术后不同时间的小肠推进率及小肠形态学变化,免疫组织化学法检测ICC细胞及iNOS的表达情况。结果:与假手术组比较,造模后大鼠小肠推进率明显下降(P 0. 01),造模后可见小肠肠管明显扩张、胀气,苏木素-伊红(HE)染色可见小肠绒毛破裂,结构不完整,黏膜下可见血管充血水肿。与盐水组比较,厚朴三物汤中、高剂量组大鼠24,48 h小肠推进率显著提高(P 0. 01),而且厚朴三物汤治疗后3组在48 h内大鼠小肠推进率均随时间延长而增加(P 0. 01)。HE染色可见大鼠肠黏膜绒毛脱落及组织水肿程度较盐水组明显减轻。免疫组化显示造模后大鼠小肠Cajal间质细胞表达下降,iNOS阳性表达显著升高;而厚朴三物汤治疗后3组Cajal间质细胞在24,48 h均显著升高,中、低剂量组12,24 h iNOS阳性表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01)。结论:厚朴三物汤能够显著提高术后肠梗阻模型大鼠的小肠推进率,促进大鼠术后胃肠动力的恢复,其作用机制与抑制iNOS的产生,减轻炎症反应,同时增加ICC数量,保证其正常功能,从而改善肠动力障碍有关。     

加味芎蝎散对CVA大鼠肺组织MMP-9和TIMP-1mRNA表达的影响

目的:观察加味芎蝎散对咳嗽变异性哮喘模型鼠肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9),基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法:将4月龄的SPF级Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,顺尔宁组(1.2 mg·kg-1),加味芎蝎散高、中、低剂量组(8.64,4.32,2.16 g·kg-1)。除正常组外,从第1天开始,各组im 4%卵清蛋白(OVA)溶液0.5 m L,同时ip 2%Al(OH)30.2 m L,每日1次。除正常组外,从第14天开始,各组CSWH 1%OVA溶液攻击2 min,隔日1次,共7次制备模型。造模后第14天起连续ig 15 d,测定咳嗽次数后取材;HE染色观察肺组织病理学改变,瑞氏染色观察肺泡灌洗液炎性细胞变化,RT-q PCR检测肺组织MMP-9,TIMP-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组肺部病理组织损伤和炎性细胞浸润较明显,咳嗽次数明显增加,肺组织MMP-9,TIMP-1 mRNA表达明显升高,均具有统计学差异(P0.01);与模型组比较,加味芎蝎散高、中、低剂量均可改善模型鼠肺部病理损伤及炎性细胞浸润,其中高剂量组最为明显(P0.01),可降低模型鼠咳嗽次数(P0.05,P0.01),下调模型鼠肺组织MMP-9,TIMP-1 mRNA表达(P0.05,P0.01)。结论:加味芎蝎散对咳嗽变异性哮喘气道重塑有一定的抑制作用,其机制可能与下调肺组织MMP-9,TIMP-1 mRNA的表达有关。     

黄芪对卵蛋白致敏大鼠肺组织中信号转导子和转录激活子6及mRNA表达的影响

 目的观察黄芪(Radix Astragali,RA)对支气管哮喘大鼠支气管信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA表达的影响。方法用卵清白蛋白建立哮喘模型,SD大鼠随机分成4组:正常对照组、模型组、低剂量RA组和高剂量RA组。留取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞(EOS)和分类计数;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达。结果①模型组BALF中EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS％)均显著高于正常对照组(P<0.01), 黄芪组上述指标均显著低于模型组(P<0.01);②免疫组化和原位杂交显示,模型组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA表达均显著高于正常对照组,黄芪组较模型组均明显减弱(均为P<0.01),其主要表达细胞是上皮细胞;③支气管STAT6蛋白、STAT6 mRNA分别与BALF中的EOS绝对值呈显著正相关。结论黄芪有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,其机制可能与其下调 STAT6及其mRNA的表达有关。     

清金化痰颗粒对COPD急性期(痰热郁肺型)大鼠肺组织STAT1,STAT3的调控作用

目的:研究清金化痰颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性期(痰热郁肺型)大鼠肺组织中信号转导与转录激活因子1,3(STAT1,STAT3)的调控作用。方法:采用烟熏+脂多糖(LPS)气管注射方法建立COPD痰热郁肺证大鼠模型(正常组除外),随机分为正常组,模型组,罗红霉素组(0.031 5 g·kg~(-1)),清金化痰颗粒低、高剂量组(9.4,37.6 g·kg-1),每组8只。每日ig给药1次,连续给药2周。观察各组大鼠的一般行为活动和病理学变化特点,采用大鼠肺功能检测仪测定各组大鼠相关肺功能指标:0.3 s用力肺活量(FEV0.3),用力肺活量(FVC),FEV0.3/FVC,肺活量(VC),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法测定肺组织白细胞介素-6(IL-6),STAT1及STAT3 mRNA表达,免疫组化法检测肺组织IL-6,STAT1及STAT3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肺组织中IL-6,STAT1及STAT3 mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,罗红霉素组、清金化痰颗粒低、高剂量组均能显著降低大鼠肺组织IL-6,STAT1及STAT3 mRNA表达(P0.01),罗红霉素组和清金化痰高剂量组减低更明显,二者之间无明显差异。各组大鼠肺组织中IL-6,STAT1及STAT3蛋白的表达中,与正常组比较,模型大鼠肺组织中的IL-6,STAT1及STAT3平均积分吸光度IA值显著升高(P0.01);与正常组比较,模型组大鼠肺功能参数FEV0.3,FVC,FEV0.3/FVC,VC值均降低(P0.01);与模型组比较,各给药组肺功能参数FEV0.3,FVC,VC值均有升高(P0.01,P0.05);与模型组比较,罗红霉素组、清金化痰颗粒低、高剂量组能显著降低大鼠肺组织IL-6,STAT1及STAT3平均IA值(P0.01),罗红霉素组和清金化痰颗粒高剂量组减低更明显,二者之间差异无统计学意义。结论:清金化痰颗粒可下调JAK/STAT信号通路中STAT1,STAT3的过度表达和持续活化,来抑制IL-6的水平的升高,减轻气道炎症,抑制COPD急性发作与加重。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠VEGF，VEGFR2，IL-4，ET-1的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR2),白细胞介素(IL)-4,内皮素-1(ET-1)及核转录因子-κB(NF-κB)的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为5组,每组10只,组别为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(10,20,40 g·kg~(-1)·d~(-1))。以烟熏合并脂多糖(LPS)气管滴注的方法制备COPD大鼠模型。成功造模后,治疗组灌胃给药,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水。光镜观察大鼠肺血管的病理变化,并测定肺血管壁厚度。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆液中IL-4的含量,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测ET-1 mRNA表达;免疫组化检测肺组织VEGF,ET-1及VEGFR2的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清,BALF及肺组织匀浆液中IL-4含量均显著降低(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组IL-4含量均有程度不等的上升(P0.01)。与正常组比较,模型组肺组织ET-1 mRNA表达量显著升高(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组肺组织ET-1 mRNA表达量均显著降低(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠肺组织中的VEGF,VEGFR2表达增多,ET-1蛋白表达显著上升(P0.01),与模型组比较,二陈汤加味低、中、高剂量组VEGF,VEGFR2表达降低,ET-1蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:二陈汤加味可能通过提升IL-4的含量,抑制VEGF,VEGFR2及ET-1的蛋白表达,从而减轻COPD大鼠肺组织炎症及肺血管重构的进程,减缓COPD及其并发症的进展。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织Toll样受体4及其负性调控因子IRAK-M表达的影响

目的:观察Toll样受体4(TLR4)及其负性调控因子白细胞介素-1受体相关激酶M(IRAK-M)在实验性溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠黏膜中的表达,并探讨四神丸干预UC的作用机制。方法:将90只Wistar大鼠随机分成6组,即空白组,模型组,柳氮磺胺嘧啶组(0. 36 g·kg~(-1)),四神丸低、中、高剂量组(2. 5,5,10 g·kg~(-1)),每组15只。以三硝基苯磺酸/乙醇溶液法制备UC大鼠模型,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠结肠组织病理学改变;采用放射免疫法测定血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3),血清游离甲状腺素(FT4),免疫球蛋白(Ig) E,白细胞介素(IL)-2的含量;采用黄嘌呤氧化法测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定大鼠血清丙二醛(MDA)的活性。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测TLR4,IRAK-M的mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠肠黏膜损伤评分显著增高(P 0. 01),大鼠血清Ig E,MDA含量显著升高(P 0. 01),FT3,FT4,IL-2,SOD表达水平显著下降(P 0. 01),TLR4 mRNA和蛋白表达显著升高(P 0. 01),IRAK-M mRNA和蛋白表达显著降低(P 0. 01);与模型组比较,各治疗组鼠肠黏膜损伤评分均显著降低(P 0. 01),Ig E,MDA含量明显下降(P 0. 05,P 0. 01),FT3,FT4,IL-2,SOD水平明显升高(P 0. 05,P 0. 01),TLR4 mRNA和蛋白表达明显降低(P 0. 05,P 0. 01),IRAK-M mRNA和蛋白表达水平显著升高(P 0. 01)。结论:UC的发病机制与TLR4及其负性调控因子IRAK-M的表达失衡有关,且四神丸可能通过抑制TLR4mRNA和蛋白的表达,促进其负性调控因子IRAK-M的表达,起到有效治疗UC的作用。     

喘可治注射液对甲型H1N1流感病毒FM1株致小鼠肺炎的影响

目的:评价喘可治注射液对甲型H1N1流感病毒FM1株致小鼠肺炎模型的药效作用。方法:将ICR小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组(27.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))、喘可治注射液组(1.5 m L·kg~(-1)·d~(-1))。除正常组外,其余各组采用甲型H1N1流感病毒FM1株滴鼻感染ICR小鼠造成病毒性肺炎模型,分别进行死亡保护实验、治疗性给药实验和预防性给药实验。死亡保护实验中每组20只小鼠,以2倍半数致死量(LD_(50))流感病毒液滴鼻感染,感染后当天开始给药,每天1次,连续4 d,观察感染后14 d内动物的死亡情况,并计算死亡率、死亡保护率;治疗性给药实验中每组10只小鼠,以0.8倍LD_(50)流感病毒液滴鼻感染,感染后当天开始给药,每天1次,连续4 d,于实验第5天处死小鼠,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织中白细胞介素-8(IL-8)含量及脑组织内发热介质前列腺素E_2(PGE_2),精氨酸加压素(AVP)的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织内相对病毒载量;预防性给药实验中每组10只小鼠,分组当天开始给药,每天1次,连续5 d,末次给药1 h后,除正常组外,其余各组以0.8倍LD_(50)流感病毒滴鼻感染ICR小鼠,感染后第4天称重后处死小鼠,计算各组肺指数、脾指数、胸腺指数及肺指数抑制率,Real-time PCR检测肺组织内相对病毒载量。结果:与正常组比较,模型组小鼠IL-8,PGE2含量,肺指数及肺组织内流感病毒株病毒载量均显著升高(P0.01);与模型组比较,治疗性给予喘可治注射液可明显降低感染后小鼠的死亡率、肺组织内IL-8含量、脑组织内PGE_2含量及肺组织中流感病毒病毒载量(P0.05,P0.01);预防性给予喘可治注射液可显著提高感染小鼠的胸腺指数(P0.01),明显降低感染小鼠肺指数及肺组织中流感病毒病毒载量(P0.05);两种给药方式均可明显减轻支气管、血管周围及肺泡间质等组织炎性细胞浸润,减少管腔内红细胞渗出。结论:喘可治注射液对甲型H1N1流感病毒感染所致病毒性肺炎小鼠模型有较好的治疗和预防作用,其作用机制可能与减轻炎症反应和抑制病毒复制有关。     

止哮平喘方对哮喘大鼠肺组织EOS凋亡及Fas,Bcl-2基因表达的影响

目的:观察止哮平喘方对哮喘大鼠肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡及Fas,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bc1-2)mRNA表达的影响,探讨止哮平喘方影响哮喘大鼠肺组织EOS凋亡的机制.方法:SD大鼠60只,随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组(1 mg·kg-1·d-1)、止哮平喘方低、中、高剂量组(11,22,44 g·kg-1·d-1),每组10只.采用卵蛋白(OVA)致敏和激发复制哮喘大鼠模型,共治疗14 d.取右中肺组织4％多聚甲醛固定,石蜡切片,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肺组织EOS凋亡,原位杂交检测Fas,Bcl-2 mRNA的表达.结果:与正常组比较,哮喘模型组大鼠肺组织中EOS的数量较多,EOS凋亡减少,同时FasmRNA表达明显降低、Bcl-2 mRNA的表达明显增加(P＜0.01).药物干预后,各治疗组EOS凋亡增加,Fas mRNA表达增加、Bcl-2 mRNA表达降低(P＜0.01或P＜0.05).Fas mRNA表达与EOS凋亡呈正相关(P＜0.01),Bcl-2 mRNA表达与EOS凋亡呈负相关(P＜0.01).结论:止哮平喘方可促进肺组织Fas mRNA表达、抑制Bcl-2 mRNA的表达,促进肺组织EOS凋亡,减轻气道炎症,从而发挥平喘作用.     

肝肺同治祛风方治疗咳嗽变异性哮喘模型大鼠的疗效观察

[目的]观察肝肺同治祛风法对咳嗽变异性哮喘(CVA)大鼠模型的疗效。[方法]将72只大鼠分为正常对照组、模型对照组、激素吸入组、清肺祛风组、清肝熄风组、肝肺同治组,制备咳嗽变异性哮喘肝郁肺虚病证结合大鼠模型,观察各组大鼠一般状态、肺支气管病理组织形态、支气管肺泡灌洗液(BALF)嗜酸性粒细胞计数及测定血清Ig E水平的变化。[结果]与正常对照组比较,模型对照组CVA大鼠支气管管腔狭窄,黏膜增厚,支气管壁及可见大量嗜酸性粒细胞浸润,BALF涂片EOS计数显著升高,血清中Ig E的含量显著升高,与正常对照组比较均有显著性差异(P0.01)。激素治疗组及各中药治疗组,各项指标均有显著改善,与模型组比较有显著性差异(P0.01),以激素治疗组及肝肺同治组指标改善最为显著。[结论]肝肺同治法可改善肝郁肺虚的中医证候,降低CVA模型大鼠慢性气道炎症反应,调整免疫异常。     

芒果苷抑制哮喘小鼠气道炎症的机制

目的:观察芒果苷对哮喘小鼠气道炎症的影响,探讨芒果苷平喘的作用机制.方法:将72只4～5周SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松阳性对照组(0.001 25 g·kg-1)、芒果苷高、中、低剂量组(0.4,0.2,0.1 g·kg-1).采用卵白蛋白(OVA)致敏和激发构建小鼠哮喘模型,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类;肺组织病理切片HE染色观察炎性细胞浸润情况;采用ELISA法检测小鼠血清中OVA特异性IgE( OVA-sIgE)和BALF中白三烯C4(LTC4),前列腺素D2(PGD2)的含量.结果:芒果苷高、中、低剂量组BALF中嗜酸性粒细胞(EOS)比例由模型组(6.57±1.44)％降低为(1.63±0.43,2.72±0.83,4.11 ±1.08)％(P＜0.01～P＜0.05);芒果苷高、中剂量组BALF中白细胞总数由模型组( 83.25±10.19)×105/mL减少为(25.66±6.16,53.38±9.19)×105/mL(P ＜0.01);芒果苷各剂量均可不同程度的改善肺组织的病理学改变,减轻气道炎症;芒果苷高、中、低剂量组血清中OVA-sIgE含量由模型组(0.26±0.04) ng·mL-1降低为(0.10±0.04,0.12 ±0.02,0.18 ±0.03) ng·mL-1(P＜0.01);芒果苷高剂量组BALF中PGD2水平由模型组(74.36±22.72) ng·mL-1降低为(60.30±12.19)ng·mL-1(P＜0.05),而芒果苷中、低剂量组对PGD2的降低无统计学差异;芒果苷各剂量对LTC4水平有降低趋势.结论:芒果苷可通过减少EOS浸润、小鼠体内OVA-sIgE和PGDz含量,抑制哮喘小鼠的气道炎症,在治疗哮喘方面有潜在的应用前景.