调肝导浊中药对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖调控的影响

[目的]观察调肝导浊中药对大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC)内Ca²⁺浓度、C_myc表达和SMC增殖的影响。[方法]采用体外SMC技术,免疫组织化学方法测量SMC的增殖核抗原(PCNA)阳性细胞率和C_myc阳性表达率,通过负荷钙离子荧光指示剂Fura₂/AM进行[Ca²⁺]i 测定。[结果]高脂血清培养组SMC的PCNA阳性细胞率和C_myc阳性表达率明显高于正常培养(P<0.01)。调肝导浊中药通过降低胞内[Ca²⁺]i,抑制C_myc表达,使该组的PCNA阳性率明显低于高脂血清组(P<0.01)。[结论]调肝导浊中药对SMC增殖起到良好的调控作用,从而有效地防止动脉粥样硬化 (AS)的发生与发展。     

心脑通络液治疗血管性痴呆的临床观察

[目的] 观察心脑通络液治疗血管性痴呆的临床疗效和安全性。 [方法] 将血管性痴呆患者60例, 采用随机数字表法分为对照组和治疗组。对照组予常规药物治疗, 治疗组除常规药物治疗外给予心脑通络液, 疗程为3个月。观察治疗前后进行简易精神状态量表(MMSE)、长谷川痴呆量表(HDS)及日常生活能力量表(ADL)积分评定。对心脑通络液的安全性进行评价。[结果] 与治疗前相比, 心脑通络液治疗后的MMSE评分和HDS评分明显提高, ADL积分明显降低, 差异有统计学意义(P<0.05).与对照组显效率(23.3%)和有效率(60%)相比, 治疗组的显效率和有效率(60%、86.7%)明显提高。[结论] 心脑通络液能更有效地治疗血管性痴呆, 不良反应少, 安全性佳。     

基于“通肾络、益脾肾”治法研究足细胞凋亡及自噬

[目的] 基于中医"通肾络、益脾肾"治法，探讨通络益肾方对体外高糖培养的小鼠肾小球足细胞自噬和凋亡蛋白SIRT1、BNIP3、P62、Bax表达的调控影响。[方法] 成熟无特定病原体（SPF）级SD雄性大鼠40只，随机分为正常组、中药高、中、低剂量组各10只。按照人与大鼠体表面积折算方法计算出大鼠所需中药灌胃浓度：高剂量浓度4.76 g/mL、中剂量浓度2.38 g/mL、低剂量浓度1.19 g/mL，灌胃10 d取含药血清备用。足细胞分6组，正常组5.6 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、高糖组30mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清、通络益肾方含药血清高、中、低干预组30 mmol/L葡萄糖+10%高、中、低剂量大鼠血清、高渗组甘露醇24.5 mmol/L+10%正常大鼠血清。细胞培养48 h后收集，Hoechst33342荧光染色，观察各组足细胞凋亡状况及形态变化；流式细胞仪检测足细胞凋亡率；Western Blot检测细胞内自噬标志蛋白SIRT1、P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax表达水平。[结果] 流式细胞仪检测结果显示通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率（P<0.01或P<0.05），高剂量组不能改善凋亡情况（P>0.05）；Hoechst33342荧光染色观察结果也证实通络益肾方中、低剂量组可降低高糖诱导的足细胞凋亡率；蛋白印迹结果显示，与高糖组相比，通络益肾方中、低剂量组自噬标志蛋白SIRT1表达升高，自噬标志蛋白P62及促凋亡蛋白BNIP3、Bax蛋白表达下降（P<0.05或P<0.01），高剂量组SIRT1、BNIP3、P62、Bax蛋白表达未见明显改变（P>0.05）。[结论] 中剂量、低剂量通络益肾方能够启动细胞自噬减少高糖刺激下体外培养足细胞凋亡，降低细胞凋亡率及凋亡蛋白的表达。     

糖肾1号方含药血清对高糖环境下培养的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白水平的影响

[目的]观察糖肾1号方含药血清干预高糖环境下培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）中转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）mRNA和蛋白水平,初步探索糖肾1号方治疗糖尿病肾病可能的作用机制。[方法]选用HK-2细胞,分为空白组、高糖组、空白血清组、糖肾1号方含药血清低剂量组、糖肾1号方含药血清高剂量组。高糖环境下培养24 h后,进行血清干预24 h,培养48 h后收集细胞,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平。[结果]1）与空白组相比,高糖组的TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平明显增多,差异具有统计学意义（P<0.05）。2）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组、糖肾1号方高剂量组TGF-β1、α-SMA、FN mRNA表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。3）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）,糖肾1号方高剂量组α-SMA、FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。4）与糖肾1号方低剂量组相比,糖肾1号方高剂量组TGF-β1、FN mRNA降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]糖肾1号方含药血清可抑制TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和α-SMA、FN蛋白表达水平,糖肾1号方高剂量组效果优于糖肾1号方低剂量组。     

“心脑血脉宁”治疗甲状腺功能减退症的临床观察

[目的]观察张曾譻主任验方“心脑血脉宁”治疗甲状腺功能减退症的干预效果。[方法]纳入符合标准的患者,将其分为心脑血脉宁低剂量组、心脑血脉宁高剂量组、单纯甲状腺素片对照组。每组40例,分别施以相应的药物干预,用统计方法分析在治疗 24、48周后患者的临床疗效、证候积分,及影响甲状腺功能减退症的主要指标：血清促甲状腺激素（TSH）、血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）的变化。[结果]1）中药心脑血脉宁高、低剂量两组在治疗24、48周后均能明显改善患者临床疗效、证候积分,能明显降低TSH,升高FT3、FT4数值,差异有统计学意义。2）中药心脑血脉宁高、低剂量两组在改善临床疗效、证候积分方面均优于单纯甲状腺素片对照组。3）心脑血脉宁高剂量组总体疗效优于心脑血脉宁低剂量组。4）治疗48周总体疗效优于24周。[结论]张曾譻主任验方“心脑血脉宁”治疗甲状腺功能减退疗效肯定。在证候改善、临床疗效方面优于西药,且随着服药时间延长及剂量加倍疗效更佳。     

心脑血脉宁对家兔动脉粥样硬化易损斑块模型MMP-2、TIMP-2表达的影响

[目的]探讨心脑血脉宁对家兔动脉粥样硬化易损斑块模型基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响。[方法]通过喂养高脂饲料和主动脉球囊内皮拉伤术复制动脉粥样硬化易损斑块模型,实验分为模型组,假手术组,心脑血脉宁组,历时15周。处死后,取腹主动脉行苏木精-伊红(HE)染色,观察镜下病变,计数斑块破裂数,免疫组化方法检测MMP-2、TIMP-2蛋白含量。[结果]1)HE观察:假手术组镜下形态结构完整,模型组斑块中心可见大量脂核,斑块表面覆盖纤维帽,在斑块肩部可见残存泡沫细胞和大炎细胞浸润。心脑血脉宁组介于两者之间。2)免疫组化结果:与假手术组相比,模型组MMP-2、TIMP-2蛋白含量明显升高,差异有显著性(P<0.01);心脑血脉宁组MMP-2与模型组比较表达降低,差异有显著性(P<0.01),而TIMP-2含量与模型组相比有降低趋势,但无统计学差异(P>0.05);心脑血脉宁组能够有效降低两者比值,与模型组相比差异有显著性(P<0.01)。[结论]心脑血脉宁干预家兔动脉粥样硬化易损斑块模型,能减少斑块破裂,其机制可能与降低斑块MMP-2含量以及调节MMP-2与TIMP-2比值有关。     

灵芪胶囊对S180荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

[目的]通过实验研究,探讨灵芪胶囊对小鼠肝细胞瘤(S₁₈₀)荷瘤小鼠的抑瘤作用。[方法]采用体内实验法,于无菌条件下抽取传代7d、生长良好的S₁₈₀荷瘤小鼠腹水,用无菌生理盐水1:3稀释(约含瘤细胞2×103/L),按0.2mL/只接种于消毒后的小鼠右前肢腋部皮下,制成肿瘤模型,经口灌胃灵芪胶囊11d后,取瘤体称质量,计算抑瘤率;采用苏木-伊红(HE)染色,于光镜下观察各组肿瘤组织细胞形态学变化。[结果]灵芪胶囊各组与模型组相比肿瘤体积缩小,灵芪胶囊高、中、低剂量对S₁₈₀荷瘤小鼠的抑瘤率分别为22.18%、40.18%、36.40%;实验形态学结果表明,模型组、阳性对照组、灵芪胶囊组之间有一定差异,灵芪胶囊能在一定程度上改善肿瘤组织形态,从而为中药抗癌作用从微观方面提供了有力证据。[结论]灵芪胶囊对S₁₈₀荷瘤小鼠有明显抑瘤作用。     

参芪山腊梅叶汤对慢性肾功能衰竭患者微炎症因子的影响

[目的]观察参芪山腊梅叶汤治疗慢性肾功能衰竭的临床疗效及微炎症因子的影响。[方法]将80例慢性肾功能衰竭患者随机分为观察组40例与对照组40例,对照组给予西医常规治疗。观察组在对照组基础上给予参芪山腊梅叶汤治疗,每日1剂。两组均以3个月为1个疗程。治疗2个疗程后观察两组临床疗效,比较治疗前后中医证候积分、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、肌酐清除率（CCr）、血清白蛋白（ALB）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的变化。[结果]观察组总有效率为82.50%,对照组总有效率为57.50%,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）.治疗后两组Scr、BUN、IL-6、hs-CRP、TNF-α、中医证候积分均下降（P<0.05或P<0.01）,观察组明显低于对照组（P<0.05）.治疗后两组CCr、ALB上升（P<0.05或P<0.01）,观察组明显高于对照组（P<0.05）.[结论]参芪山腊梅叶汤有效改善慢性肾功能衰竭的临床症状、肾功能和营养状况。降低hs-CRP、IL-6和TNF-α是其可能作用机制。     

通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜炎性细胞TLR的影响

[目的] 观察通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜炎性细胞Toll样受体（TLR）的影响。[方法] 取院内行全膝关节置换术患者术中废弃滑膜组织,进行原代培养,取3~4代成纤维细胞进行不同浓度浓度通络止痛方干预,具体分为：高浓度组（2.5 mg/mL）、中浓度组（0.25 mg/mL）、低浓度组（0.025 mg/mL）、对照组（0 mg/mL）。应用real-time PCR检测细胞内TLR4 mRNA表达情况,应用流式细胞术（FCM）检测细胞中TLR2、TLR4表达情况。[结果] 与对照组比较,高、中浓度组通络止痛方人膝骨关节炎滑膜炎症细胞TLR4 mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）。低浓度组通络止痛方对滑膜炎症细胞TLR4 mRNA抑制作用与对照组相近,差异无统计学意义。中、高浓度组抑制作用与浓度呈正比。高、中、低浓度通络止痛方组TLR4表达率与对照组比较都有明显的降低（P<0.05）,且随着浓度升高,TLR4的表达率逐渐降低;高、中、低浓度通络止痛方组TLR2表达率与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。[结论] 高、中、低浓度通络止痛方均可以显著抑制Toll样受体的表达,提示通络止痛方可能通过Toll样受体通路影响或抑制人膝骨关节炎滑膜炎症反应。     

消痞方对化疗后痞满证大鼠胃排空率及胃肌层Cajal间质细胞的影响

[目的] 观察消痞方对化疗后痞满证大鼠胃排空率及Cajal间质细胞结构及功能的影响,探讨化疗所致痞满证机制。[方法] 以Wistar大鼠（60只）为研究对象,随机分为空白组、模型组、西药组、消痞方高剂量组、消痞方中剂量组、消痞方低剂量组,每组10只大鼠。除空白组外,其余5组采用尾静脉注射化疗药物建立大鼠脾虚证模型。空白组和模型组给予生理盐水灌胃,消痞方低剂量组、中剂量组与高剂量组分别给予浓度100%、150%、200%的煎剂灌胃,西药组给予西沙必利灌胃,共给药7 d。观察各组大鼠日进食量改变,检测胃排空率,采用透射电镜观察胃起搏区Cajal间质细胞（ICC）的形态特征和数量。[结果] 模型组大鼠日进食量及胃排空率较空白组显著降低（P<0.05）,ICC数量减少,结构破坏,细胞器减少,与神经末梢及平滑肌细胞之间连接破坏。消痞方高剂量组大鼠进食量及胃排空明显增加,与模型组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,ICC结构基本恢复正常,新生增多。西药组大鼠进食量及胃排空也可见增加,但部分ICC结构仍可见破坏。消痞方低剂量及中剂量组较模型组差异无统计学意义。[结论] 对ICC结构的影响可能是消痞方治疗化疗后痞满证的机制之一。     

心脑血脉宁减少家兔易损斑块模型斑块内血肿、稳定斑块的研究*

笔者应用新加黄龙汤保留灌肠辅助治疗急腹症术后患者,临床疗效显著。1临床资料40例均为2007—2009年间本院住院的急腹症手术患者,其中急性胆囊炎、胆囊结石行胆囊切除术后12例,急性化脓性阑尾炎行阑尾切除术后19例,急性肠梗阻术后6例;     

“调神通络”针法对颈动脉硬化干预效果的临床观察

[目的]应用颈动脉结构与功能超声指标评价“调神通络”针法对颈动脉硬化的干预效果。[方法]根据纳入标准选择缺血性脑梗死(前循环梗死)急性期合并颈动脉低回声斑块患者,分为“调神通络”针法组和常规针法组,分别治疗28 d,对治疗前后硬化及相关指标进行统计分析。[结果](1)“调神通络”针法组能明显改善脑梗死患者的症状和体征,促进神经功能缺损的恢复。特别是对于改善低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及总胆固醇(TC)具有明显的作用。(P<0.05或P<0.01)。(2)短期应用“调神通络”针法对颈动脉硬化超声指标没有明显改善。(P>0.05)。[结论]“调神通络”针法对颈动脉硬化的干预短期内无明显改善。     

银杏叶提取物EGB761对AS家兔PON-1和ox-LDL的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对动脉粥样硬化家兔对氧磷酶-1(PON-1)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)的影响。[方法]将24只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、EGB761组(n=8)。正常组给予普通饮食,模型组和EGB761组高脂饮食10周。EGB761组从第7周起给予EGB761 50 mg/(kg·d)灌胃4周,正常组和模型组给予等量生理盐水。采用酶免疫吸附法(ELISA法)和生化法检测PON-1的活性和含量,ELISA法检测ox-LDL的含量。[结果]模型组PON-1活性和含量明显降低(P0.05),ox-LDL的含量明显升高,银杏叶提取物组PON-1活性和含量明显升高,ox-LDL明显降低(P0.05)。[结论]银杏叶提取物EGB761降低ox-LDL、抗动脉粥样梗化(AS)的机制可能与其上调PON-1活性和含量有关。     

五苓散含药血清对家兔离体输尿管平滑肌作用的实验研究

[目的]观察五苓散含药血清对正常家兔离体输尿管平滑肌活动的影响,并初步探讨其作用机制。[方法]应用Powerlab生物机能信号采集处理系统,观察不同浓度五苓散含药血清及不同受体阻滞剂对离体输尿管平滑肌的影响。[结果]空白血清组和不同浓度五苓散含药血清组均可增强正常家兔离体输尿管平滑肌的张力和活动力,与空白对照组相比,均有显著性差异(P<0.01)。阿托品组和酚妥拉明组可阻断中浓度血清对输尿管平滑肌的收缩作用(P<0.05)。[结论]五苓散含药血清在离体情况下对正常家兔输尿管平滑肌具有收缩作用,有利于尿液的输送。     

妇痛宁对子宫内膜异位症COX2-PGE2作用途径的影响

[目的] 通过研究化瘀散结中药妇痛宁对子宫内膜异位症（EMs）病灶中环氧化酶2（COX2）-前列腺素E2（PGE2）作用途径中相关分子基因和蛋白的表达,探讨妇痛宁对EMs中血管生成、侵袭和转移方面的影响。[方法] 收集EMs患者的异位病灶组织,原代消化培养子宫内膜细胞,将25×10⁶/mL浓度混合培养的异位子宫内膜细胞注射到裸鼠腹部皮下,成功建立模型后,将成模裸鼠分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组,分别予无菌生理盐水、低剂量中药、中剂量中药、高剂量中药和孕三烯酮灌胃,3周后处死裸鼠,取病灶,测量病灶体积,免疫组化法检测各组病灶中血管内皮生长因子（VEGF）的表达和微血管密度（MVD）,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail和E-cadherin mRNA的表达,Western-blot法检测病灶中Snail和E-cadherin蛋白的表达。[结果] 中剂量及高剂量妇痛宁治疗组裸鼠异位病灶体积减小、VEGF表达及MVD均降低,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。各剂量治疗组裸鼠异位病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail mRNA表达降低,E-cadherin mRNA表达升高,且Snail蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 妇痛宁可影响COX2-PGE2作用途径中与血管生成、侵袭和转移相关分子的表达,通过抑制异位病灶的血管生成、侵袭和转移能力而抑制病灶的生长。     

复原通络方治疗下肢血栓性浅静脉炎的临床观察

[目的]观察复原通络方治疗瘀血阻络型下肢血栓性浅静脉炎的临床疗效。[方法]选取72例瘀血阻络型下肢血栓性浅静脉炎患者,随机分为对照组和治疗组各36例,对照组服用阿司匹林肠溶片每次1片,每日1次;治疗组同时加用复原通络方,每日1剂。观察时间为8周,比较用药前后两组患者的红肿、疼痛、色素沉着、条索状物等恢复情况及血液流变学相关指标的改变。[结果]治疗组的总有效率明显高于对照组,治疗组肿痛症状及血液流变学指标的改善也很明显(P0.05)。[结论]复原通络方在治疗瘀血阻络型下肢血栓性浅静脉炎时,具有良好的疗效。     

通络醒神针法联合缪刺法治疗脑卒中后运动性失语症临床研究

[目的]探讨通络醒神针法联合缪刺法治疗脑卒中后运动性失语症临床疗效。[方法]将70例脑卒中后运动性失语症患者按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组35例。两组均接受Schuell刺激疗法进行语言训练,对照组接受通络醒神针法,观察组在对照组治疗基础上采用缪刺法（取穴通里、神堂、神门）。比较两组治疗前后汉语言标准失语症检查量表评分、失语商、失语症严重程度分级、脑卒中失语症患者生活质量量表（SAQOL-39）评分、美国国立卫生研讨院卒中量表（NIHSS）评分及蒙特利尔认知评估评定（MoCA）评分。比较两组治疗总有效率。[结果]治疗后观察组语言功能各项评分、失语商、生活质量评分、Mo CA评分均高于对照组（P<0.05）,NIHSS评分低于对照组（P<0.05）。治疗后观察组与对照组在失语程度分级方面比较,差异有统计学意义（P<0.05）。观察组临床疗效总有效率为91.43%,高于对照组的74.43%(P<0.05)。[结论]通络醒神针法联合缪刺法可以改善脑卒中后运动性失语症患者的语言表达、理解及沟通能力,改善其神经功能缺损、认知功能及日常生活能力。