抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721 PI3K/AKT信号通路的影响

目的:研究抗癌扶正方(KFP)对肝癌抑制作用的分子机制.方法:体外培养人肝癌细胞5MMC-7721,分别予以9.72,19.44,38.88 g·L-1的3个质量浓度的KFP作用于细胞,采用MTT法检测KFP对人肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响,并通过Western Blot法检测KFP对人肝癌细胞SMMC-7721 PI3K/AKT通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:KFP以浓度及时间依赖的方式抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖;Western Blot显示KFP作用于人肝癌细胞SMMC-7721后,人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN),caspase-9的活性增强,p-AKT的表达降低,且呈剂量依赖性.结论:KFP能增加入肝癌细胞SMMC-7721 PTEN的表达,进而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,继之激活下游caspase-9促凋亡分子的表达,诱导人肝癌SMMC-7721发生凋亡.该研究表明PI3K/AKT信号通路在KFP诱导的人肝癌细胞SMMC-7721凋亡中起了重要作用.     

高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的:观察高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通的影响。方法:采用MTT法检测高良姜素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western印迹法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白及Caspase-9蛋白表达情况。结果:高良姜素抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用明显,且呈浓度和时间依赖性,顺铂和高良姜素(5.4、10.8、21.6、43.2、86.4μg/ml),72 h抑制率分别为69.4%、34.3%、44.9%、60.8%、73.9%、79.1%。流式细胞术检测结果显示高良姜素(10.8、21.6、43.2μg/ml)可使细胞周期阻滞于G1期。高良姜素(10.8、21.6、43.2μg/ml)处理24h凋亡率分别为9.8%、15.3%、18.6%。Western印迹法检测相关蛋白,药物处理组PI3K、AKT、P-AKT的表达受抑制,PTEN,Caspase-9蛋白的表达率随着药物浓度的增加而增加。结论:高良姜素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导人肝癌SMMC-772细胞凋亡。     

没食子酸体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的机制研究

目的 研究没食子酸(gallic acid,GA)体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其作用机制。方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖;Hoechst-33258、AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法研究凋亡抑制基因Survivin mRNA的变化。结果 6.25～50 μmol·L-1 GA可抑制SMMC-7721细胞的生长,并呈剂量依赖性;不同剂量的GA作用48 h后,SMMC-7721细胞出现明显的凋亡形态,细胞凋亡率有显著的剂量依赖性。RT-PCR法检测结果显示,GA能明显抑制肝癌细胞中Survivin mRNA的表达。结论 GA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,这可能与下调凋亡抑制基因Survivin有关。     

槲皮素对SMMC-7721肝癌细胞PI3K/AKT信号通路影响的探讨

目的:观察槲皮素( quercetin)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与细胞凋亡的影响,探讨其对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路的影响.方法:采用MTT法检测槲皮素对SMMC-7721细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测槲皮素对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:槲皮素抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖作用明显,且呈浓度和时间依赖性.顺铂和槲皮素40,80,160,320 μmol·L-148 h抑制率分别为62.19％,25.47％,27.18％,36.96％,51.28％.流式细胞术结果提示,槲皮素80,160,320μmol ·L -可使SMMC-7721肝癌细胞周期阻滞于G0/G1期.Western blot凋亡相关蛋白表达检测表明,药物组AKT的表达受抑制,PTEN,Caspase-9蛋白的表达率随着药物浓度的增加而增加.结论:槲皮素能诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡,其机制可能是使肝癌细胞SMMC-7721周期阻滞于G0/G1期,PTEN的过表达抑制AKT活化,激活Caspase-9从而促进细胞凋亡.     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及机制研究

目的:研究氯化两面针碱在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用与机制。方法:通过MTT法测定氯化两面针碱细胞毒作用,通过酶解可见光底物DEVD-pNp法测Caspase-3的活性;免疫组化技术研究氯化两面针碱对SMMC-7721细胞中p53、bax和bcl-2三种细胞凋亡相关蛋白表达的影响,透射电镜观察细胞的超微结构。结果:氯化两面针碱作用SMMC-7721细胞48h后的IC50值为3.8μg/ml;药物处理后的细胞中p53、Bax蛋白水平表达显著增强,Bcl-2蛋白水平表达减弱,与对照组比较,差异有统计学意义,典型的凋亡形态学特征表现出细胞核裂解、染色质聚集、细胞膜皱缩、有空泡形成,出现凋亡小体。结论:氯化两面针碱对SMMC-7721细胞有明显抑制作用,其机理可能与恢复p53的功能,激活Caspase-3的活性,Bcl-2/Bax的表达进行性下调,诱导细胞凋亡有关。     

镰形棘豆诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及初步的机制研究

目的:观察镰形棘豆总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及初步的机制探讨.方法:不同剂量的镰形棘豆总黄酮处理SMMC-7721细胞24 h后,MTT法观察总黄酮对细胞增殖的抑制作用;应用光学和荧光显微镜观察总黄酮对SMMC-7721细胞形态的影响;应用流式细胞仪检测SMMC-7721细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测总黄酮对SMMC-7721细胞凋亡的影响.结果:MTT实验结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现出一定的浓度依赖性.Hoechst33258染色结果显示,经镰形棘豆总黄酮处理的细胞出现了多种凋亡特征和超微结构的变化.镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到G1期细胞明显增多,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性.结论:镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,与其诱导细胞周期阻滞和使细胞形态发生变化而引起细胞凋亡的活性有关.值得进一步深入研究和阐述镰形棘豆抗肿瘤的作用机制.     

β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的研究β-谷甾醇、豆甾醇诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡作用。方法 MTT法观察β-谷甾醇、豆甾醇对细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率、细胞内活性氧ROS、钙离子Ca2+含量、线粒体膜电位ΔΨm变化。结果β-谷甾醇、豆甾醇均明显抑制SMMC-7721细胞增殖,使细胞形态发生典型凋亡变化,凋亡率和细胞内Ca2+、ROS的含量均显著增加,线粒体膜电位降低。β-谷甾醇使细胞周期阻滞在G2/M期,而豆甾醇则同时阻滞在S期和G2/M期。结论β-谷甾醇、豆甾醇具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及作用机制的研究

氯化两面针碱(Nitidine chloride)属于苯菲啶型生物碱,为黄治勋等[1]从芸香科花椒属植物两面针的干燥根提取的一种生物碱.     

华蟾素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素诱导人肝癌细胞凋亡及作用机理。方法:采用 MTT 法、AO/EB 荧光染色法、流式细胞仪及免疫组化等方法,观察华蟾素对人肝癌 SMMC-7721细胞株的作用。结果:华蟾素可显著抑制SMMC-7721细胞的生长;经药物处理后,AO/EB 染色时,肝癌细胞在显微镜下呈现出典型的凋亡形态学改变;在流式细胞仪上可见华蟾素能将细胞周期阻断在 S 期;对抗凋亡基因 bcl-2表达有一定的抑制作用。结论:华蟾素能抑制人肝癌 SMMC-7721细胞生长;能诱导人肝癌细胞凋亡;其诱导细胞凋亡的机理与其能阻断细胞周期、抑制 bcl-2基因表达有关。     

健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

[目的]探讨健脾化瘀方对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制率及药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响,以及IC_(50)药物浓度下对SMMC-7721凋亡的影响。[方法]采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及与药物作用时间之间的关系。用AnnexinV/PI双染色法,用流式细胞仪检测健脾化瘀方对肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。[结果]健脾化瘀方浓度在5mg/mL时,对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应关系。健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h后,肝癌细胞凋亡率升高,并有一定的浓度依赖性。[结论]健脾化瘀方有抑制SMMC-7721细胞的增殖,能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡。     

半枝莲提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbata D.Don extract,SBE)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Survivin和Caspase-3表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,以2.5,5和10 mg.L-1SBE处理48 h,并以2.5 mg.L-1顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Bcl-2,Survivin和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,SBE各浓度组细胞抑制率显著升高(P(0.001),细胞凋亡率明显上升(P(0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论SBE具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspase-3蛋白表达以及下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。     

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。     

白英乙醇提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨白英乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法:用MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果:与正常对照组相比,白英提取物各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3 mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA表达显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:白英乙醇提取物通过上调caspase-3和下调survivin基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。     

复方斑蝥胶囊抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究

复方斑蝥胶囊是以斑蝥为君药,内含多种中药组分,根据部颁标准(第17册)生产的纯中药胶囊制剂,临床上用于治疗多种癌症,以原发性肝癌为主,显示出了较好的疗效。其抗肝癌作用的机制目前在国内外尚未见报道。本课题采用血清药理学方法,观察复方斑蝥胶囊对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和细胞周期、细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的影响,探讨复方斑蝥胶囊抗肝癌的作用以及可能的机制,以期为临床应用提供理论依据。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株和实验动物人肝癌细胞SMMC-7721由本校基础医学院病理生理教研室惠赠。新西兰大耳白兔6只,体重为(2.5±0.2…     

熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

消癌解毒方诱导人肝癌SMMC-7721细胞miRNA表达变化

目的:探讨消癌解毒方对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及微小核糖核酸(microRNA,miR)-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p,miR-182-5p表达谱的影响。方法:将12只雄性大耳白兔随机分为4组,分别为消癌解毒方高、中、低剂量(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)组和空白组,各组分别给予消癌解毒方及生理盐水灌胃4 d。4 d后于颈动脉中取血清并配制培养基。用消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清及空白血清的培养基处理人肝癌细胞株SMMC-7721,噻唑蓝(MTT)比色法检测肿瘤细胞增殖活性、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)法验证人肝癌细胞SMMC-7721中miR-25-3p,miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p和miR-182-5p的表达水平。结果:经过12,24,48 h后,消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖均存在抑制作用。随着消癌解毒方含药血清浓度的增加,其对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制率也相应增加。其中高剂量组含药血清的抑制效果最好,其干预12,48 h的吸光度A较同期空白组明显降低(P0.05)。高剂量组干预24 h A比同期空白组显著降低(P0.01),该组抑制率为42.86%。Real-time PCR证实消癌解毒方(15.12,7.56,3.78 g·kg-1)含药血清的培养基能诱导miR-25-3p,miR-182-5p表达下调,诱导miR-29a-5p,miR-122-3p,miR-124-3p表达上调。且高剂量组的调控作用较空白组更显著(P0.01)。结论:消癌解毒方可能通过诱导miRNA表达谱的改变而参与抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖作用,但其具体机制仍有待进一步研究。     

积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:观察积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:用不同浓度的积雪草酸处理人肝癌SMMC-7721细胞;MTT法检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测积雪草酸对肝癌细胞迁移的影响;Western blot法检测积雪草酸对凋亡相关基因Bcl-2和Bax及上皮间质转化标志基因E-cadherin表达的影响。结果:与对照组比较,25、50、100μmol/L的积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用,差异均有统计学意义(P0.01)。流式细胞术结果显示,50μmol/L的积雪草酸处理后,肝癌细胞凋亡率显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell小室法检测结果发现,TGF-β能显著促进人肝癌SMMC-7721细胞迁移,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。1、10μmol/L的积雪草酸处理能够显著抑制TGF-β诱导的肝癌细胞迁移。积雪草酸处理后,人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白水平显著下降,Bax蛋白水平显著上调。TGF-β处理24 h后,SMMC-7721细胞E-cadherin表达水平显著降低,而不同浓度的积雪草酸均能抑制TGF-β诱导的E-cadherin表达水平下调。结论:积雪草酸能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响

目的研究薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721增值的影响及作用机制初探。方法采用MTT法考察不同给药剂量,不同给药时间下薏苡仁脂肪酸类成分对SMMC-7721细胞的增值抑制作用及其与时间、剂量的关系;碘化丙啶PI单染色法检测薏苡仁脂肪酸作用后,SMMC-7721细胞周期DNA水平变化;Annexin V-EGFP/PI双染法研究薏苡仁脂肪酸对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸作用SMMC-7721细胞24、48、72 h后,均呈现出较好的细胞增殖抑制作用,且具有明显的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P<0.05);不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸处理SMMC-7721细胞22 h后可显著增加肝癌细胞凋亡率,(P<0.001);作用36 h后,可显著降低G2/M期细胞比例,(P<0.001)。结论薏苡仁脂肪酸对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用并可诱导其凋亡,其作用是通过抑制G2/M细胞周期实现的。     

牛樟芝提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:研究牛樟芝提取物(ANCA-E-D)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其可能机制。方法:取对数生长期人肝癌细胞SMMC-7721,以6×104/m L接种于96孔板,每孔100μL,随机分为调零组、空白对照组、溶剂对照组以及20,40,60 mg·L-1ANCA-E-D药物组,每组设5个复孔,分别作用24,48,72 h,采用MTT比色法检测ANCA-E-D对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过瑞氏染色观察以上浓度的ANCA-E-D对肝癌细胞SMMC-7721形态学的影响;通过流式细胞仪检测以上浓度的ANCA-E-D对SMMC-7721细胞周期和早期凋亡的影响。结果:MTT实验结果表明,20,40,60 mg·L-1的ANCA-E-D对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有显著的抑制作用(P0.05),呈时间和剂量依赖性,其半数致死率(IC50)分别为31.21,24.12,21.48 mg·L-1;形态学观测结果提示,ANCA-E-D药物组的细胞核碎裂、凋亡小体形成;流式细胞仪检测发现,不同浓度的ANCA-E-D作用后,SMMC-7721细胞凋亡以晚期凋亡为主,并呈剂量依赖性。结论:ANCA-E-D可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,可能与其诱导SMMC-7721细胞凋亡有关。