树突状细胞与永生化EBV转化B淋巴细胞对抗原提呈作用的比较分析

树突状细胞是抗原提呈功能最强的专职性抗原提呈细胞 ,其显著特征是刺激初始性淋巴细胞增殖 ,而EBV转化B淋巴母细胞是提呈作用较B细胞强的永生化细胞 ,可通过对自体淋巴细胞的刺激作用以及负载抗原后刺激活性的变化 ,来比较这两类细胞的生物学特性。本研究比较了二者对肝癌抗原的提呈作用。1　材料与方法1 1　研究对象　健康成年人。1 2　主要试剂　重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF) ,重组人白细胞介素 4 (rhIL 4 )购于TEPROTECH公司 ;人白细胞介素 2 (Interleukin 2 )购于北京医科大学免疫系 ;3 H 标记甲基胸腺嘧啶…     

鼠单克隆抗体人源化

鼠源性单克隆抗体应用于临床由于ＨＡＭＡ反应的存在而受到阻碍。以ＣＤＲ移植为核心，以同源分析及分子模建为辅助设计的人源化方案，已成为克服ＨＡＭＡ反应的主要手段。本文结合单克隆抗体人源化的最新进展对该领域的工作作一综述     

可回复性肝细胞永生化载体pCTGTKIox的构建、鉴定、转染与表达

目的构建可回复性永生化逆转录病毒载体，为肝细胞可回复性永生化奠定基础。方法扩增加强型绿色荧光蛋白（EGFP）及胸腺激酶（TK）并采用重叠延伸拼接法（SOE）连接EGFP和TK，将EGFP-TK（融合基因亚克隆至pBABE-puro-lox，构建成新载体pBGTKlox，再将永生化基因SV40T连接至pBGTKlox，构成新载体pBTGTKlox，最后将雌激素受体与重组酶融合基因（Cm-ER）连接至pBTGTKlox，构成新载体pCTGTKlox。将pCTGTKlox和pPDF15质粒共转染包装细胞PT67，并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。免疫组化染色检测SV40T基因的表达。结果成功构建包含EGFP-TK、SV40T、Cre-ER及重组序列loxP的新载体pCTGTKlox，经酶切鉴定证实为重组阳性体，经测序验证无核苷酸突变。pCTGTKlox转染PT67细胞24h后，荧光显微镜下可见散在多处绿色荧光。免疫组化染色显示细胞胞核呈阳性染色。结论成功构建并表达可回复性永生化逆转录病毒载体pCTGTKlox，为细胞的可回复性永生化提供了一种良好的新型载体。     

免疫缺陷、着丝粒不稳定和面部异常综合征家系永生化淋巴细胞系的建立

目的 探讨建立免疫缺陷、着丝粒不稳定和面部异常(ICF)综合征家系永生化淋巴细胞系的方法,为保存这类罕见病家系完整的基因组进行长期研究提供材料.方法 应用EB病毒转染ICF综合征家系外周血淋巴细胞,光学显微镜下观察B95-8细胞系及永生化淋巴细胞系形态特征,流式细胞仪检测ICF综合征家系B细胞表达水平,用台盼蓝检测冻存...     

抗人活化B淋巴细胞单克隆抗体制备及鉴定

自儿童手术摘除的新鲜扁桃体分离人Ｂ淋巴细胞，经ＰＭＡ（佛波醇）激活后得到人活化Ｂ淋巴细胞，用于免疫ＢＡＢＬ／Ｃ小鼠后，取免疫小鼠之脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，融合后细胞于含ＨＡＴ－ＩＭＤＭ完全培养基的２％甲基纤维素半固体培养基选择生长，经细胞酶联免疫吸附（ＣＥＬＩＳＡ）筛选间接免疫荧光流式细胞仪鉴定，获培养上清对活化Ｂ细胞及３Ｄ５细胞株细胞反应阳性，而Ｊｕｒｋａｔ细胞株细胞反应阴必的杂交     

用单克隆抗体检测人IL-2分泌细胞

<正> IL-2在免疫应答的发生、发展中起重要的调节作用。IL-2活性的异常与一些疾病的发生、发展有关。因而,测定生理状态下IL-2的水平有助于了解机体的免疫状态,但它在体液内(如血浆)含量极微,很难用     

可回复性肝细胞永生化载体pCTGTKlox的构建、鉴定、转染与表达

目的构建可回复性永生化逆转录病毒载体,为肝细胞可回复性永生化奠定基础。方法扩增加强型绿色荧光蛋白(EGFP)及胸腺激酶(TK)并采用重叠延伸拼接法(SOE)连接EGFP和TK,将EGFP-TK融合基因亚克隆至pBABE-puro-lox,构建成新载体pBGTKlox,再将永生化基因SV40T连接至pBGTKlox,构成新载体pBTGTKlox,最后将雌激素受体与重组酶融合基因(Cre-ER)连接至pBTGTKlox,构成新载体pCTGTKlox。将pCTGTKlox和pPDF15质粒共转染包装细胞PT67,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。免疫组化染色检测SV40T基因的表达。结果成功构建包含EGFP-TK、SV40T、Cre-ER及重组序列loxP的新载体pCTGTKlox,经酶切鉴定证实为重组阳性体,经测序验证无核苷酸突变。pCTGTKlox转染PT67细胞24h后,荧光显微镜下可见散在多处绿色荧光。免疫组化染色显示细胞胞核呈阳性染色。结论成功构建并表达可回复性永生化逆转录病毒载体pCTGTKlox,为细胞的可回复性永生化提供了一种良好的新型载体。     

舌癌永生化细胞系细胞淋巴道转移裸鼠模型的建立

目的:建立人舌癌细胞Tca8113-Ml裸鼠淋巴结转移模型,研究分析其转移的特性,为舌癌转移的研究提供动物模型.方法:4～6周龄裸鼠随机分为生理盐水对照组、TcaS113-Ml组、Tca8113组,通过足垫注射舌癌细胞,建立淋巴道转移模型.观察各组裸鼠淋巴结转移情况,进行H-E染色、上皮膜抗原(EMA)免疫组织化学显色及淋巴结舌癌细胞纯化培养.结果;淋巴结有散在或灶性鳞状上皮细胞转移,体外纯化培养的癌细胞呈上皮样生长.Tca8113-Ml组淋巴结转移率为88％,Tca8113组仅为60％.结论:足垫注射舌癌永生化细胞系Tca8113-Ml细胞系细胞建立淋巴道转移模型具有简单、稳定、转移率高等特点,为舌癌淋巴道转移的机制研究提供了一个良好动物模型.     

DNA－转染体细胞系产生单克隆抗体

本文研究淋巴细胞转染体的产生和转染体单克隆抗体的抗原结合特性。以小鼠宫颈癌细胞系Ｕ１４为抗原免疫小鼠。将制备的Ｕ１４和小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０ＤＮＡ分别转染经免疫的小鼠原代脾细胞。将所形成的转染体细胞进行克隆，建成２株淋巴细胞转染体细胞系ＵＤ和ＳＤ，它们能连续生长于含血清和无血清培养液中，但不能在同基因小鼠体内生长。ＵＤ和ＳＤ细胞系所产生的单克隆抗体不仅能与小鼠宫颈癌细胞表面抗原及其可溶性抗原发生特异反应，且能识别人宫颈癌组织和宫颈癌病人血清中的肿瘤抗原决定簇。本实验结果进一步证明了我们提出的肿瘤“进化抗原”理论，并提示，瘤细胞ＤＮＡ转染造成淋巴细胞永生化，可能是产生人源性单克隆抗体具有前景的途径。     

两种分泌抗PrP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步鉴定

目的 制备具有广谱种属反应性的PrP单克隆抗体(McAb)，用于可传播性海绵样脑病(TSE)的诊断及致病机制研究。方法 分别将对应于牛PrP29-48(BoP1)、PrP89-108(BoP2)的两种多肽与匙孔碱血蓝蛋白(KLH)偶联，免疫BALB／c小鼠，经细胞融合后获得分泌针对上述两种多肽的杂交瘤细胞株，用Western-blot方法检测这些细胞株分泌的McAb与牛(Bo)、人(Hu)和仓鼠(Ha)PrP蛋白的反应性。结果 通过细胞融合和2-3轮克隆化，用ELISA筛选出分泌抗BoPl和BoP2抗体的杂交瘤细胞株D11和D8。Western blot显示，获得的McAb均能分别与重组BoPrP(25-242)、重组HuPrP(23-231)和HaPrP(23-231)反应。结论 获得了可与牛、人和仓鼠PrP反应的两种McAb，可用于哺乳类PrP检测及TSE致病机制研究。     

抗人淋巴细胞再循环受体单克隆抗体的制备与鉴定

用人外周血高纯度的淋巴细胞做抗原，通过杂交瘤技术，获得一鼠抗人单克隆抗体（ＭｃＡｂ）－ＱＭ５（ＩｇＧ１，ｋ轻链）。ＭｃＡｂＱＭ５能特异地与９８％的淋巴细胞、５２％的单核细胞和１０％左右的胸腺细胞反应，而不与红细胞、血小板和多核白细胞反应，与ＯＫＴ３和ＯＫＴ８抗原亦不相关。     

LFA—1类单克隆抗体的产生与鉴定

我们用细胞融合技术建立了白细胞粘附蛋白ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）的单克隆抗体。活细胞间接免疫荧光染色实验表明，此类单抗主要与除红细胞、血小板之外的人外周血各类白细胞反应，与骨髓、胸腺、扁桃体细胞、某些肿瘤细胞反应。此类单抗对ＮＫ细胞杀伤、ＮＫ细胞与Ｋ５６２细胞结合，ＰＭＡ诱导的Ｔ淋巴细胞粘附聚集及淋巴细胞的增殖均有明显的抑制作用，且随单抗浓度的增加而加强。免疫电泳证明，单抗识别的抗原分子量     

抗PR,抗ER单克隆抗体的制备及鉴定

目的自行研制抗人孕激素受体（ＰＲ）和抗人雌激素受体（ＥＲ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,以期达到可替代国外ＭｃＡｂ之目的。方法以ＰＲ氨基端基因表达蛋白产物及ＥＲＤ合成肽为抗原,制备小鼠抗ＰＲ、抗ＥＲＭｃＡｂ,采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ,免疫组化ＳＰ法,免疫荧光技术和流式细胞仪鉴定自制ＭｃＡｂ的性质。结果（１）抗ＰＲＭｃＡｂ与ＰＲ阳性乳腺癌细胞Ｔ４７Ｄ的提取物,抗ＥＲＭｃＡｂ与ＥＲ阳性之ＭＣＦ７细胞的提取物转移于硝酸纤维膜上的蛋白显示特异反应带;（２）抗ＰＲ、抗ＥＲＭｃＡｂ分别检测４０和３５例乳腺癌组织石蜡切片,染色效果与Ｚｙｍｅｄ公司生产的ＰＲ、ＥＲＭｃＡｂ相当,阴、阳性符合率均为１００％。免疫组化与ＤＣＣ法一一对应比较,符合率分别为８５０％、９１４％。（３）荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜观察荧光标记阳性反应物主要位于胞核。（４）流式细胞仪检测,荧光指数（Ｆ１）＞１．０,阴性对照Ｆ１＜１．０。结论自制抗ＰＲ、抗ＥＲＭｃＡｂ特异性强,灵敏度高,结果与Ｚｙｍｅｄ公司产品相同,操作简便,适于临床应用     

抗c-erbB-2p185蛋白胞内区多肽单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的 研制抗c-erbB-2胞内区多肽单克隆抗体,用于乳腺癌等c-erbB-2过量表达的诊断及指导治疗。方法 合成p185蛋白胞内区多肽作为抗原,免疫BALB／C小鼠建立了一组分泌抗该多肽的特异性高亲和力单克隆抗体杂交瘤细胞系,并对该单抗的生化特性及其免疫学反应性进行了研究和测定,并与美国食品药品管理局（FDA）批准的抗c-erbB-2多克隆抗体进行了比较。结果 共获得3株稳定分泌抗p185胞内区单抗的杂交瘤细胞株。其中035－E61株单抗经过39例（T1－2N0M0）乳腺癌患者组织病理切片进行免疫组织化学染色,c-erbB2-2过量表达阳性率为26％,而乳腺纤维腺瘤组织切片没有非特异染色;流产正常胎儿器官组织切片除甲状腺、肾上腺和肾小管上皮表达外,其余均不表达。与FDA批准的DAKO公司多抗的阳性染色符合率为74％。结论 035－E61单抗可特异识别乳腺癌细胞内p185胞内区抗原。对判断乳腺癌预后及指导治疗可能具有应用价值。     

Hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies against equine infectious anemia virus

A monoclonal anti-equine infectious anemia virus (anti-EIAV) antibody (1B15) has been generated by fusion of X63 Ag 8.653 myeloma cells and spleen cells from mice hypersensitized with viral antigen p29. Ouchterlony double-diffusion analysis indicated that antibody 1B15 is of the IgG class. The specificity of the immune reaction for p29 was confirmed by cross-over immunoelectrophoresis and disc-gel electrophoresis. MAb 1B15 was used to devise a solid-phase 'capture' RIA for EIAV-p29 antigen. The antigen, bound by 1B15 adsorbed onto wells of flexible microtitre plates, was detected using a rabbit anti-p29 serum followed by a 125I-labelled tracer. The assay was applied to detected using a of virus in horse serum and infected cell culture fluids.     

鼠抗人血管抑素单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人血管抑素(angiostatin)的单克隆抗体,为进一步研究血管抑素的抗肿瘤作用和临床应用打下基础。方法:利用杂交瘤技术以血管抑素免疫BALB/C小鼠制备3株能够稳定分泌抗血管抑素抗体的杂交瘤,并对上清进行ELISA、双向免疫扩散等鉴定。结果:该抗体的类别为IgG₁,并能特异性识别血管抑素,与细胞因子rhIL-2、rhTNF-α、rhIFN-α及血清蛋白无交叉反应。结论:经初步鉴定获得3株分泌特异性抗血管抑素抗体的杂交瘤。     

单克隆抗-D细胞株的建立及抗-D抗体Fab段的基因序列分析

目的:建立分泌抗-D抗体的人B淋巴细胞株,分析编码一株人单克隆抗-D抗体Fab段的基因序列。方法:以EB病毒(EBV)转化分泌抗-D抗体的人B淋巴细胞,建立分泌抗-D抗体的淋巴细胞株。设计扩增人lgM重链Fd段及κ轻链的引物,以聚合酶链反应进行扩增,对扩增产物进行分子克隆及测序。结果:分别用轻链引物和重链引物从一分泌lgM抗-D的单克隆细胞株扩增出一约650bp和700bp的特异带。序列分析表明,其核苷酸及其所推导的氨基酸(AA)序列符合人lgFab段的序列特征。结论:获得了抗-D抗体Fab段基因,为基因工程抗-D的研制及Rh新生儿溶血病的预防提供物质基础。     

Establishment of hybridomas secreting monoclonal antibodies to Chlamydia psittaci

Eleven stable anti-Chlamydia hybrid clones by fusions between X63-Ag8653 myelomas and immune splenocytes from Chlamydia psittaci immunized F1 (C57BL6×BALB/c) mice have been established which react with the 12 reference Chlamydia strains (seven C. trachomatis and five C. psittaci. Ten of these monoclonal antibodies are directed against the genera-specific epitope (40,000 MW component) for which prolonged immunization seems to be responsible.