肌球蛋白轻链激酶抑制剂对急性肺损伤的保护作用

目的 探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML-7对细菌脂多糖(LPS)诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAEC)和急性肺损伤(ALI)的影响.方法 体外培养HPAEC,待4～6代予ML-7(10 μmol/L)孵育60 min后,再给予LPS刺激60 min,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HPAEC活性;荧光显微镜下观察磷酸化肌球蛋白轻链激酶(p-MLCK)免疫反应细胞.20只雌性BALB/c小鼠随机分组,LPS组鼻内注入LPS(1 μg/g);ML-7组在LPS滴鼻前进行ML-7干预.观察小鼠肺湿/于重(W/D)比值、支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性和病理学改变;用免疫组化法检测肺组织MLCK和CD11b阳性免疫反应细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织MLCK mRNA表达,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测肺组织MLCK蛋白表达.结果 与LPS组比较,HPAEC在ML-7孵育下吸光度(A)值增加(P<0.01),p-MLCK免疫反应细胞明显减少(P<0.05).肺W/D比值、肺组织MPO活性、BALF蛋白含量均明显降低(P<0.05或P<0.01).病理结果显示,LPS组小鼠肺部炎症反应明显,以中性粒细胞浸润为主,肺泡充血、水肿;ML-7组肺部炎症及充血明显改善.免疫组化显示位于内皮的MLCK免疫反应细胞和位于炎性细胞的CD11b在ML-7组均较LPS组明显减少.ML-7组肺组织MLCK的mRNA和蛋白表达均较LPS组降低(P均<0.05).结论 MLCK特异性抑制剂ML-7能提高LPS诱导的HPAEC生长活性,降低p-MLCK表达;减轻LPS诱导的中性粒细胞在肺内浸润、肺水肿及MLCK、CD11b蛋白和MLCK mRNA的表达.表明抑制MLCK活性可能通过减弱MLCK磷酸化而达到稳定血管屏障功能,防治ALl的作用.     

非钙依赖性调节肌球蛋白活性对维持平滑肌张力的影响

目的：揭示肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase，MLCK)的一个活性片段对肌球蛋白功能的非钙依赖性调节作用，进一步完善平滑肌收缩的非钙依赖性调节机制研究，并为平滑肌系统疾病的治疗以及新药开发提供理论基础。方法：实验于2004-01／05在大连医科大学生化药理实验室完成。用胰蛋白酶(trypsin)水解MLCK，再经离子交换层析分离纯化而获得MLCK的活性片段(myosin light chain kinase fragment,MLCKF.61 ku)；用western blot检测MLCKF与完整MLCK的同源性：用SDS—PAGE及Scoin lmage扫描软件检测肌球蛋白轻链的磷酸化程度；用分光光度法测定肌球蛋白Mg^2 —ATP酶的活性。结果：在无Ca^2 ／CaM条件下，61 ku MLCKF能轻度磷酸化20ku肌球蛋白轻链，并提高肌球蛋白Mg^2 -ATP酶活性；其磷酸化效力强于无Ca^2 ／CaM时MLCK的磷酸化效力．但弱于有Ca^2 ／CaM时MLCK的磷酸化效力，且持续时间长，较稳定，不易被MLCK抑制剂ML-9抑制结论：MLCKF能以非钙依赖性方式轻度磷酸化肌球蛋白轻链．并提高肌球蛋白Mg^2 -ATP酶活性，对低钙时平滑肌张力的维持可能起一定作用。     

非钙依赖性调节肌球蛋白活性对维持平滑肌张力的影响

目的:揭示肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase,MLCK)的一个活性片段对肌球蛋白功能的非钙依赖性调节作用,进一步完善平滑肌收缩的非钙依赖性调节机制研究,并为平滑肌系统疾病的治疗以及新药开发提供理论基础。方法:实验于2004-01/05在大连医科大学生化药理实验室完成。用胰蛋白酶(trypsin)水解MLCK,再经离子交换层析分离纯化而获得MLCK的活性片段(myosinlightchainkinasefragment,MLCKF,61ku);用west-ernblot检测MLCKF与完整MLCK的同源性;用SDS-PAGE及ScoinImage扫描软件检测肌球蛋白轻链的磷酸化程度;用分光光度法测定肌球蛋白Mg2+-ATP酶的活性。结果:在无Ca2+/CaM条件下,61kuMLCKF能轻度磷酸化20ku肌球蛋白轻链,并提高肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性;其磷酸化效力强于无Ca2+/CaM时MLCK的磷酸化效力,但弱于有Ca2+/CaM时MLCK的磷酸化效力,且持续时间长,较稳定,不易被MLCK抑制剂ML-9抑制。结论:MLCKF能以非钙依赖性方式轻度磷酸化肌球蛋白轻链,并提高肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性,对低钙时平滑肌张力的维持可能起一定作用。     

血管生成素-1,2经p38丝裂原活化蛋白激酶调节失血性休克血管低反应性

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)调节失血性休克大鼠血管反应性双相变化中的作用.方法 观察失血性休克后不同时间点肠系膜上动脉(SMA)中p38MAPK蛋白表达和磷酸化变化,p38MAPK抑制剂对Ang-1和Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性作用的影响,以及给予Ang-1、Ang-2和Tie-1抑制剂后缺氧血管内皮细胞(VEC)和血管平滑肌细胞(VSMC)混合细胞中p38MAPK蛋白表达和磷酸化变化.结果 失血性休克后p38MAPK磷酸化水平显著增高;p38MAPK抑制剂可显著改善缺氧4 h血管低反应性并拮抗Ang-2进一步降低缺氧4 h血管低反应性的作用;Ang-1和Tie-2抑制剂可显著抑制缺氧4 h的p38MAPK磷酸化增高(P<0.01).结论 p38MAPK参与了Ang-1和Ang-2对休克晚期血管低反应性的调节,但不是休克早期血管高反应性的主要调节分子.     

Rho激酶抑制剂对血管平滑肌细胞核因子κB活性的影响

目的 探讨Rho激酶抑制剂对血管平滑肌细胞核因子κB的作用,为动脉粥样硬化的治疗提供新的思路.方法 体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,传代3～5代后给予抗平滑肌细胞特异性蛋白α-肌动蛋白(α-SMC)进行鉴定;分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)组及白细胞介素1(IL-1)组,其中Ang-Ⅱ组及IL-1组又分为直接刺激组及Rho激酶抑制剂Y-27632干预组,分别按组别给予相应的药物干预,然后提取核蛋白,再行化学发光法(EMSA)检测核因子-κB(NF-κB)的表达.结果 对照组血管平滑肌细胞未检出NF-κB活性,给予Ang-Ⅱ及IL-1β刺激后,NF-κB活性明显增高.在加用Y27632预处理后再给予Ang-Ⅱ及IL-1β刺激,NF-κB活性较直接刺激组有下降.条带密度分析显示,给予Ang-Ⅱ及IL-1β刺激后,NF-κB活性的相对密度值为1.31±0.21和1.09±0.07,加用Y27632预处理后再给予Ang-Ⅱ及IL-1β刺激,条带相对密度值分别为0.58±0.23和0.54±0.11,较直接刺激组有明显下降(P＜0.05或＜0.01).结论 Ang-Ⅱ及IL-1具有刺激NF-κB表达的作用,Rho激酶抑制剂 Y-27632能下调上述的刺激作用,并可能通过此机制起到抗动脉粥样硬化的作用.     

Ca~(2+)-CaM系统在调节血管平滑肌收缩中的地位与作用

Ca~(2+)是血管平滑肌兴奋收缩的重要偶联因子.当血管平滑肌细胞兴奋,导致细胞内游离Ca~(2+)浓度增高时,Ca~(2+)与CaM形成复合物,活化MLCK,从而使肌球蛋白轻链发生磷酸化,触发血管平滑肌收缩.     

Rho蛋白激酶在脑血管痉挛中的作用

蛛网膜下腔出血（SAN）诱发脑血管痉挛（CVS）一直是神经外科领域的热门科题之一。脑血管痉挛的特征为血管平滑肌异常收缩。Rho激酶是一类丝氨酸P苏氨酸蛋白激酶，它主要通过磷酸化抑制肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）的活性来增加肌球蛋白轻链（HLC）的磷酸化水平．从而增强平滑肌的收缩力，参与CVS发生。有效抑制Rho激酶活性有可能为CVS的预防开辟一条新途径.     

凝血酶信号传导过程中P13-K与MLCK激酶的作用

本研究比较凝血酶受体活化过程中不同浓度的wortmannin对血小板聚集率以及血小板膜表面活化标记物糖蛋白GPIb表达的影响,探讨脂酰肌醇-3-激酶（P13-K）与肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在凝血酶信号传递机制中的作用。分别以凝血酶受体活化肽PAR1-AP（SFLLRN）与PAR4-AP（AYPGKF）诱导血小板活化。检测100nmol／Lwortmannin（抑制P13-K）与10μmol／Lwortmannin（抑制MLCK）作用过程中血小板聚集与血小板膜表面糖蛋白GPIb的改变。结果显示：wortmannin作用对两类凝血酶受体诱导血小板活化的过程均有不同程度的影响。100nmol／L的wortmannin部分抑制PAR1-AP引起的血小板聚集,对PAR4-AP诱导的聚集过程没有影响;10μmol／Lwortmannin明显抑制两类PAR肽引起的血小板活化,抑制程度达到60％-80％,仅出现少部分聚集。流式细胞仪检测显示,GPIba的动态分布过程中100nmot／Lwortmannin能部份抑制GPIbα向胞内移动,PAR1—AP刺激后5分钟内wortmannjn起效明显（1、2、5分钟P〈0．05）,对PAR4-AP的反应则稍延迟,在2到10分钟有意义（2、5、10分钟P〈0．05）。10μmol／Lwortmannin对整个PAR活化过程中的GPIba逆转没有任何影响,只对PAR1刺激过程中GPIbcL的恢复起作用,延缓GPIbα重返血小板膜表面的进程;而PAR4-AP作用后各时间段GPIba的动态分布不受10μmol／Lwortmannin任何影响。结论：P13-K与MLCK在凝血酶受体的活化过程中作用不同,P13-K在GPIbat内转的短暂过程中起着重要作用;而MLCK磷酸化仅仅对PAR1受体介导的GPIbα回复起促进作用。     

肌球蛋白监管轻链基因在非小细胞肺癌研究新进展

<正>20KD人类肌球蛋白监管轻链基因(MYL9),位于人类染色体20q11.23上,由其表达的肌球蛋白监管轻链是肌球蛋白的重要组成部分。肌球蛋白轻链激酶(MLCK)等多种调节因子通过调节MYL9的磷酸化和去磷酸化使得肌球蛋白参与了几乎所有细胞生理病理过程,如细胞迁移、黏附、胞质分裂、囊泡转移、细胞吞饮和基因转录等。最新研究表明MYL9基因在非小细胞肺癌癌细胞的增殖、侵袭和迁移中发     

TNF-α对肺微血管内皮细胞ERM蛋白表达的研究

目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)表达埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ezrin-radixin-moesin,ERM)及磷酸化ERM蛋白(p-ERM)的影响,并初步探讨Rho激酶(ROCK)与ERM蛋白磷酸化的关系.方法 体外培养大鼠PMVEC,随机(随机数字法)分为TNF-α量效组(0、0.1、1、10 μg/L TNF-α与PMVEC孵育60 min)、TNF-α时效组(10 μg/LTNF-α分别与PMVEC孵育0、15、30、60、90、120、180 min)和ROCK抑制剂(Y-27632)干预组:分别以10μg/L的TNF-α和30 μmol/L Y-27632+ 10 μg/LTNF-α与PMVEC孵育60min.Western印迹检测ERM蛋白及p-ERM相对表达量.采用SPSS 16.0软件进行分析,多组变量间比较采用单因素方差分析,以P＜ 0.05为差异具有统计学意义.结果 Western印迹检测到大鼠PMVEC均表达ERM蛋白和p-ERM,量效组p-ERM表达量随TNF-α浓度(0、0.1、1、10 μg/L)增加逐渐升高,分别为0.648±0.102、0.728±0.082、0.926±0.121、1.245±0.134(均P=0.000).时效组p-ERM相对表达量于15 min开始上升(0.777±0.151),90 min达高峰(1.295±0.176),之后渐下降,120 min (0.802±0.139),180 min仍维持较高水平(0.769±0.128),分别与未刺激0 min组(0.631±0.123)比较,P=0.004,0.000,0.001,0.016.ROCK抑制剂预处理PMVEC后再给予TNF-α刺激,p-ERM相对表达量(0.634±0.112)较单独TNF-α刺激组(0.875±0.164)显著减少(P =0.002),而较单独ROCK抑制剂组(0.661±0.108)和未处理组(0.654±0.125)差异无统计学意义(分别为P=0.973,P=0.900).结论 TNF-α诱导大鼠PMVEC中的ERM蛋白磷酸化表达增加,ROCK参与其磷酸化调控.     

临床护士心理压力源与工作满意度调查分析

目的了解临床护士面临的主要心理压力源,为护理管理者有效地帮助护士减轻和消除心理压力提供依据。方法采用自评式问卷调查的方法 ,对内江市2所三级乙等医院287名从事临床护理工作的护士进行问卷调查。结果临床护士的心理压力源依次来源于工作强度、职业需求、工作环境、人际关系、家庭经济收入等方面。其中来源于工作强度、人际关系及家庭方面的压力源,不同年龄组护理人员在其压力程度上差异有统计学意义(P0.05)。结论从事临床护理工作的护士存在着多种心理压力源,这些压力源是导致护士工作不满意的主要原因,也是护理的安全隐患之一,护理管理者应予以足够的重视,并定期针对不同的人群进行心理健康知识培训,建立有效的支持系统,及时帮助他们调整心理状态,减轻和消除压力,从而提高护士对本职工作的满意度和患者对护理服务的满意度。     

精神疾病患者家属教育的情况分析

目的：通过对精神疾病患者家属教育的调查，探讨家属教育的内容和教育方式。方法：采用自拟问卷对参加系列教育的家属进行调查分析。结果：患者和家属接受教育次数越多，对疾病知识了解越多；在患者的亲属中患者的父母参加教育比率较大。结论：家属教育对治疗疾病起着积极的作用，应更具有针对性，同时还应该注意教育方式。