HO-1诱导对大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制

目的研究诱导HO-1高表达对大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制探讨。方法随机将大鼠分成4组,即正常对照组、四氯化碳染毒组（CCl4）、血晶素（hemin）组、hemin＋CCl4组。采用western blot法测定HO-1蛋白的诱导表达情况：测定各组大鼠血清ALT、AST水平,肝组织MDA浓度和SOD活性以及Caspase-3活性和TNF-α水平变化;HE染色观察肝组织病理形态学改变。结果CCl4成功诱导了大鼠急性肝损伤,表现为染毒24 h后血清ALT、AST水平以及肝组织MDA浓度、Caspase-3活性和TNF-α水平均显著升高,SOD活性下降,和正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;病理学检测结果显示肝脏有严重损伤,大量肝细胞发生凋亡。给予hemin预处理能显著诱导大鼠肝脏HO-1的表达,并对肝脏产生明显的保护作用,表现为大鼠血清ALT、AST水平和MDA浓度明显降低,SOD活性升高,组织TNF-α水平和Caspase-3活性明显低于CCl4组;此外,hemin预处理亦使染毒大鼠的病理学指标得到明显改善。结论HO-1诱导表达对急性肝损伤大鼠产生明显的保护作用,提示HO-1在防治急性肝损伤的病理生理过程中占有重要地位;HO-1的保护机制可能与其减轻脂质过氧化反应,抑制Caspase-3活性和降低TNF-α水平有关。     

松果菊苷对大鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究松果菊苷对大鼠急性肝损伤的保护作用及机制.方法 随机将大鼠分为急性肝损伤组、药物干预组和正常对照组.大鼠经腹腔注射四氯化碳制备急性肝损伤模型;药物干预组大鼠给予松果菊苷连续灌胃7d,然后再进行四氯化碳染毒.染毒24h后测定各组大鼠血清ALT、AST水平,肝组织MDA浓度和SOD活性以及肝组织caspase-3活性和TNF-α水平;HE染色观察肝组织病理形态学改变.结果 急性肝损伤组大鼠血清ALT、AST水平以及组织MDA含量显著升高,伴SOD活性明显下降,与正常对照组相比差异非常显著;同时肝组织caspase-3活性和TNF-α水平亦显著高于对照组.预先给予松果菊苷能显著改善大鼠肝损伤,降低血清ALT、AST、MDA和caspase-3、TNF-α水平,并升高组织SOD活性.结论 松果菊苷对大鼠急性肝损伤有明显保护作用,机制可能与其抗氧化效应和清除自由基的作用有关.     

内质网应激在四氯化碳致大鼠急性肝损伤中的作用探讨

目的研究内质网应激在四氯化碳诱导的大鼠急性肝损伤中的变化规律和作用机制。方法采用四氯化碳制备大鼠急性肝损伤模型，动态测定大鼠肝脏GRP78蛋白和caspase 12酶原表达情况，测定大鼠血清ALT、AST水平、肝组织SOD活性、MDA浓度和caspase 3活性变化；采用HE染色和TUNEL法观察肝组织病理形态学和肝细胞凋亡变化。结果四氯化碳染毒后大鼠肝脏GRP78蛋白表达显著增加，caspase 12酶原表达相应减少，呈一定时间依赖方式。大鼠染毒后出现血清ALT、AST水平以及组织MDA含量显著升高，SOD活性明显下降，与对照组有显著性差异（P〈0．01）；染毒后大鼠肝组织caspase 3活性亦显著升高，病理学及TUNEL法检测结果均显示肝脏有严重损伤，大量肝细胞发生凋亡。结论四氯化碳诱导大鼠肝损伤时GRP78和caspase 12的表达变化表明发生了内质网应激反应，其变化趋势和大鼠肝细胞凋亡、病理损伤一致，这一结果提示内质网应激介导的肝细胞凋亡参与了大鼠肝损伤。     

实验性肝损伤大鼠肝脏HO-1的表达及CO水平变化

目的研究急性肝损伤时大鼠肝脏HO-1的表达情况和CO水平,探讨HO-1和内源性CO在大鼠急性肝损伤中的作用.方法制备急性四氯化碳肝损伤模型,采用RT-PCR和免疫组化法测定不同时间点大鼠肝脏HO-1 mRNA和蛋白的表达情况;测定各时间点肝组织SOD、MDA含量变化,同时测定股静脉血中HbCO水平和ALT、AST肝功能指标.结果HO-1mRNA在正常大鼠有弱表达,染毒3 h后表达显著增强,于24 h时间点表达最强,与对照组相比差异非常显著(P＜0.01);免疫组化结果显示;HO-1蛋白在正常大鼠表达较低或无,染毒3h后即有明显表达,16至48h的时间点内表达均显著增强,主要定位于肝实质细胞、库普细胞的胞浆内.对照组HbCO水平极低,给予四氯化碳3 h后HbCO水平开始升高,此后各时间点均明显高于对照组,差异有显著性,这与HO-1表达情况相一致.此外,染毒后大鼠血清ALT、AST和MDA明显升高,SOD活性则显著降低,和对照组相比差异均十分显著.结论大鼠急性肝损伤后出现HO-1表达持续上调和血中CO水平迅速增高,提示HO/CO系统参与急性肝损伤的病理生理过程,其表达增加可能对机体有重要调节作用.     

急性肝损伤大鼠肝脏血红素加氧酶-1/一氧化碳系统的变化及意义

目的:研究急性肝损伤时大鼠肝脏HO-1/CO系统的变化规律,探讨HO-1和内源性CO的作用机制及其病理生理意义.方法:采用D-氨基半乳糖(GalN)和脂多糖(LPS)联合腹腔注射制备大鼠急性肝损伤模型,动态测定各时间点(3,6,12,24,36 h)大鼠肝脏HO-1活性和蛋白表达情况,测定肝脏CO浓度以及血清ALT,AST水平和肝组织SOD活性、MDA含量变化.结果:Ga1N和LPS联合注射成功诱导了大鼠急性肝损伤,表现为染毒24 h时大鼠血清ALT,AST水平以及肝组织MDA浓度显著升高(10872.5±708.5 nkat/L,9246.8±814.7 nkat/L,5.06±1.21 μmol/g vs 1043.5±247.4 nkat/L,1278.6±273.8 nkat/L,2.03±0.59 μmol/g,均P＜0.01),SOD活性明显下降(813.7±168.3nkat/mg vs 1248.2±84.9 nkat/mg,P＜0.01),HE染色显示肝细胞出现严重损伤.染毒3-24 h大鼠肝脏HO-1活性明显增强,6-24 h呈现一定的时间依赖方式(4.02±0.74,5.97±1.51,6.13±1.18 μmol/g vs 2.86±0.41 μmol/g);Westernblot测定结果亦显示,HO-1蛋白表达显著增强,24 h时明显高于正常对照组(1.87±0.39 vs0.37±0.09,P＜0.01).正常大鼠肝脏的CO浓度极低,染毒后以时间依赖方式开始升高,并显著高于正常对照组(0.373±0.112,0.474±0.152,0.513±0.193 μmol/g vs 0.172±0.041 μmol/g,P＜0.01),这与HO-1表达情况相一致.结论:大鼠急性肝损伤时出现HO-1活性增加和蛋白表达持续上调以及CO浓度迅速增高,提示HO-1/CO系统参与急性肝损伤的病理生理过程,其表达增加可能对机体有重要调节作用.     

柴胡疏肝散对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的防治作用

观察柴胡疏肝散对四氯化碳(CCl4)所致大鼠急性肝损伤的防治作用.方法:用CCl4造成大鼠急性实验性肝损伤模型,检测大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量,同时检测肝组织中MDA和GSH的含量.结果:该方能显著降低CCl4所致急性肝损伤大鼠血清中ALT、AST含量,升高其SOD水平,并可显著降低该模型大鼠血清及肝组织中MDA的含量,而升高GSH水平.结论:柴胡疏肝散对此模型大鼠的肝损伤具有显著的防治作用,其机制可能与降低、抑制脂质过氧化反应以及抗自由基损伤有关.     

复方中药抑制非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450ⅡE1表达的实验研究

目的:研究复方中药对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450ⅡE1表达的影响。方法:用高脂饲料诱导大鼠脂肪肝模型,同时给于复方中药干预,观察肝组织病理形态的变化和肝细胞色素P450ⅡE1的表达,测定肝MDA和SOD、GSH、Vit E以及TG含量的变化,并与对照组比较。结果:中药组的肝组织脂肪变性基本恢复正常.免疫组化证明复方中药能显著抑制脂肪肝肝细胞色素P450ⅡE1的表达,同时肝内MDA和SOD、GSH、Vit E及TG的含量回复到接近正常,结论:该复方中药能显著抑制脂肪肝肝细胞色素P450ⅡE1表达.因而具有防止脂肪肝的作用     

虎眼万年青对四氯化碳致大鼠急性肝损伤防治作用的实验研究

目的研究虎眼万年青对大鼠急性肝损伤的防治作用。方法将实验大鼠随机分为正常对照组、四氯化碳（CCl4）急性肝损伤组、甘草酸二胺防治组和虎眼万年青防治组。观察各组大鼠肝功能和肝组织的变化。结果造模2周后，急性肝损伤组大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、前白蛋白（PA）分别为1012．5±443．74U／L、955．10±436．89U／L、14．7±2．58mg／L，虎眼万年青防治组分别为359．70±385．04U／L、451．50±297．84U／L、26．2±4．21mg／L，说明虎眼万年青能显著降低急性肝损伤大鼠血清ALT、AST的活性（P〈0．05），提高大鼠血清PA水平（P〈0．05），并改善肝组织炎性反应，作用与甘草酸二胺防治组无显著性差异（P〉0．05）。结论虎眼万年青对四氯化碳致大鼠急性肝损伤有明显的防治作用。     

慢性肝损伤致肝纤维化过程中微小RNA200家族的表达

目的观察肝组织中微小RNA200(miR-200)家族成员在慢性肝损伤致肝纤维化过程中表达变化并探讨其机制。方法雄性Wistar大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)制备肝纤维化模型,分别在2、4、6、8周处死大鼠测定肝脏指数、血清ALT、AST含量,观察肝组织病理改变,Real-time PCR检测肝组织miR-200a、b、c、141、429mRNA表达变化。结果模型各组大鼠肝脏指数、血清ALT、AST含量显著高于正常对照组(P<0.01),8周模型组肝纤维化明显,8周模型组肝组织中miR-200a、b、c、141、429mRNA表达较正常组显著增加(P<0.05)。结论 miR-200s在慢性肝损伤致肝纤维化过程中的表达变化,提示其参与慢性肝损伤及肝纤维化的发生发展。     

内质网及氧化应激在大鼠慢性肝损伤中的变化

目的研究内质网应激相关基因、氧化应激指标在四氯化碳诱导的大鼠慢性肝损伤中的变化。方法四氯化碳制备大鼠慢性肝损伤模型,通过测定大鼠血清ALT、AST水平,采用HE染色和TUNEL法观察肝组织病理形态和肝细胞凋亡改变,评价成模效果。检测大鼠肝脏葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、GRP94、血红素加氧酶（HO）-1 mRNA表达及超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）变化。结果四氯化碳成功诱导了大鼠慢性肝损伤,与对照组相比,大鼠肝脏GRP78、GRP94、HO—1的表达量、MDA含量均明显增加,SOD活性、还原型GSH显著降低。结论四氯化碳诱导大鼠慢性肝损伤时,内质网应激相关基因的表达增加,氧化应激指标亦发生改变,表明内质网应激、氧化应激共同参与了大鼠慢性肝损伤过程。     

甲氰咪呱对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响

目的研究甲氰咪呱对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响。方法通过高脂饮食制作非酒精性指肪性肝炎（NASH）动物模型，给予甲氰咪呱灌胃治疗，观察肝组织病理形态变化，进行炎症活动计分，同时测定细胞色素P450（CYP450）和细胞色素2E1（CYP2EI）含量及ALT、AST，并与对照组比较。结果与正常组比较，模型组大鼠ALT、AST及CYP450和CYP2EI含量明显升高；与模型组比较，甲氰咪呱治疗组CYP450和CYP2EI含量均明显下降，（P〈0．05），ALT、AST及炎症活动计分明显低于模型组（P〈0．05）。结论甲氰咪呱能显著改善NASH大鼠肝脏功能及形态损伤，可能通过抑制肝细胞微粒体CYP450和同功酶CYP2EI的表达发挥作用。     

甲氰咪胍影响非酒精性脂肪性肝炎大鼠血糖、胰岛素等指标的实验研究

探讨非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠经甲氰咪胍治疗后肝微粒体CYP450、CYP2E1含量、血糖、胰岛素等指标的变化.将30只雄性SD大鼠随机分为对照组（n=10）、模型组（n=10）和治疗组（n=10）,治疗组给予甲氰咪胍200 mg·kg^-1·d^-1灌胃,饲养12周,分别于实验第4、6、8、10、12周采用剪尾取血法取血,前四次取血测定血糖、AST、ALT含量,最后一次处死大鼠后取血测定血糖、胰岛素、肝功、血脂、CYP450及CYP2E1含量,观察肝组织学特点.观察到模型组大鼠肝功、血糖指标升高,并随实验进展更加明显;治疗组CYP450、CYP2E1、ALT、AST含量均低于模型组（P＜0.05）,且大鼠的肝细胞损害明显减轻,但其余指标无显著差异.可见甲氰咪胍能够减轻NASH大鼠肝细胞损害,抑制CYP450、CYP2E1表达,改善肝功水平,不能改善胰岛素抵抗,及降低血糖、血脂.     

Hepatoprotective evaluation of Anogeissus latifolia： In vitro and in vivo studies

AIM： To evaluate the hepatoprotective activity of a hydroalcoholic extract of the bark of Anogeissus latifolia; in vitro in primary rat hepatocyte monolayer culture and in vivo in the liver of Wistar rats intoxicated by carbon tetrachloride （CCl4）. METHODS： In the in vitro study, a primary hepatocyte monolayer culture was treated with CCh and extract of Anogeissus latifolia. Hepatoprotective activity was demonstrated in the CCh damaged primary monolayer culture. In the in vivo study, the hepatoprotective activity of a hydroalcoholic extract ofAnogeissus latifolia was analyzed in liver injured CCh-treated rats. Biochemical parameters including serum transaminases [aspartate aminotransferase （AST） and alanine aminotransferase （ALT）] and alkaline phosphatase （ALP） in serum wereanalyzed. The biochemical findings were supplemented with histopathological examination of rat liver sections. RESULTS： In vitro： primary hepatocyte monolayer cultures were treated with CCh and extract of Anogeissus latifolia. A protective activity could be demonstrated in the CCh damaged primary monolayer cultUre. In vivo： Hydroalcoholic extract of Anogeissus latifolia （300 mg/kg） was found to have protective activity in rats with CCh-induced liver damage as judged from serum marker enzyme activity. CONCLUSION： The above findings lead to the conclusion that the hydroalcoholic extract of Anogeissus latifol/a is hepatoprotective. Hence, we suggest that the inclusion of this plant in the management of liver disorders is justified.     

胡黄连苦苷Ⅱ抗大鼠肝纤维化的作用研究

背景：胡黄连苦苷Ⅱ可治疗急性肝损伤,但对肝纤维化的作用尚不明。目的：探讨胡黄连苦苷Ⅱ对CCl4致大鼠肝纤维化的治疗作用及其机制。方法：采用CCl4腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,56只大鼠分为正常对照组、模型组、胡黄连苦苷Ⅱ治疗组和胡黄连苦苷Ⅱ对照组。造模第8周,处死大鼠：以HE染色和Masson染色观察肝组织改变和肝纤维化程度,以电子显微镜观察超微结构变化,检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、白蛋白（ALB）以及组织丙二醛（MDA）水平,以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组化法分别检测肝组织转化生长因子（TGF）-β1、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达。结果：与正常对照组相比,模型组肝组织炎症和纤维化程度、血清ALT、AST以及肝组织MDA水平、TGF—β1和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达显著增高,血清ALB水平显著降低,超微结构发生显著改变。经胡黄连苦苷Ⅱ治疗后,上述指标均显著改善,但与正常对照组相比差异仍有统计学意义。胡黄连苦苷Ⅱ对照组上述各项指标与正常对照组无明显差异：结论：胡黄连苦苷Ⅱ可通过改善肝功能、抑制脂质过氧化反应、下调TGF-β1和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达而抑制肝纤维化的形成。     

蓝莓预防大鼠肝损伤实验研究

目的探讨蓝莓对四氯化碳（CCl4）所致大鼠急性肝损伤的预防保护作用。方法SD大鼠随机分为蓝莓汁低、高两个剂量预防组、齐墩果酸阳性药对照组、正常对照组及模型组,采用CCl4致大鼠急性肝损伤模型。测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）以及肝组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）及丙二醛（MDA）,光镜下观察肝脏病理变化。结果蓝莓各剂量组及阳性对照组血清ALT及AST均明显低于模型组（P〈0．01）。与模型组比较,齐墩果酸组、蓝莓汁高剂量组肝匀浆GSH、SOD、CAT明显升高,MDA明显降低（P〈0．01或P〈0．05）;蓝莓汁低剂量组肝匀浆GSH升高不明显,肝匀浆SOD、CAT升高,MDA降低（P〈0．05）。结论蓝莓对CCl4所致大鼠急性肝损伤具有良好的预防保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化作用有关。     

Pre-endurance training prevents acute alcoholic liver injury in rats through the regulation of damaged mitochondria accumulation and mitophagy balance

Aim

The aim of this study is to investigate the effect of pre-endurance training on the prevention of alcohol-induced acute hepatic injury and on hepatic mitophagy.

Methods

Forty-eight male Sprague–Dawley rats were randomly divided into four groups: (1) control group, (2) 12-week exercise training group, (3) 5-day alcohol intake group, and (4) 12-week exercise training plus 5-day alcohol intake group. The rats were examined to determine the following: BCL2/adenovirus E1B 19 kDa protein-interacting protein 3 (BNIP3), hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α), cytochrome P450 2E1 (CYP2E1), alcohol dehydrogenase (ADH), microtubule-associated protein 1 light chain 3 (LC3II), Beclin1 mRNA and protein expressions, mitochondrial reactive oxygen species (ROS) production, mitochondrial thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS) level, aconitase and ATP synthase activities, mitochondrial inner membrane potential, NADH/NAD⁺ ratio, triglyceride (TG), the number of mtDNA and mitochondrial respiration functions in liver tissue, and serum ALT and AST.

Results

Pre-endurance training attenuated acute alcohol treatment-induced increase in mitochondrial TBARS, ROS production, NADH/NAD⁺ ratio, state 4 respiration rate, TG, serum ALT and AST, as well as BNIP3, HIF-1α, LC3II, and Beclin 1 mRNA and protein levels, however, CYP2E1 and ADH mRNA and protein levels unchanged. Meanwhile, it attenuated the acute alcohol intake-induced decrease in aconitase activity, inner mitochondrial membrane potential (Δψ), ATP synthase activity, state 3 respiration rate, respiratory control ratio, and the number of mtDNA.

Conclusion

Pre-endurance training can decrease acute alcohol intake-induced damaged mitochondria accumulation and reduced acute alcohol intake-induced mitophagy, which built a new balance between mitophagy and damaged mitochondria accumulation.     

Protective effects of BML-111, a lipoxin A4 receptor agonist, on carbon tetrachloride-induced liver injury in mice

Background: Lipoxins (LX) are trihydroxytetraene-containing eicosanoids that display unique anti-inflammatory and pro-resolving actions during various inflammatory conditions, but the pathophysiological significance of LX in liver disorders remains unknown. Methods: In the present study, we used a murine model of carbon tetrachloride (CCl(4))-induced acute liver injury to investigate the effects of LX on the progression of acute liver injury. Results: The results indicated that the lipoxin A(4) receptor (ALX) was upregulated after giving CCl(4). BML-111, a commercially available ALX agonist, effectively protected the liver from CCl(4)-induced injury as evidenced by decreased serum aminotransferase (ALT, AST) levels and improved histological damage. The dampened liver injury was accompanied byreduced malondialdehyde (MDA) content in liver homogenates and decreased concentration of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) in the serum. Most interestingly, BML-111 markedly upregulated hepatic heme oxygenase-1 (HO-1) expression in CCl(4)-treated mice, which might provide antioxidative activities in the liver. Conclusion: These data indicate that ALX agonist BML-111 plays a critical protective role in CCl(4)-induced acute liver injury through limiting the inflammatory response and promoting antioxidative protein expression.