长链非编码RNA在胰腺癌吉西他滨耐药研究中的作用

获得性耐药是引起胰腺癌高致死率的主要原因,其中吉西他滨耐药在临床中最为常见。探究胰腺癌吉西他滨耐药的具体分子机制,有助于临床合理使用吉西他滨,提高患者的生活质量和生存率。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)被报道在胰腺癌吉西他滨耐药中发挥着重要作用,并具有肿瘤耐药后特异性表达的特点,可能成为恢复胰腺癌吉西他滨敏感性的理想靶点。本文通过总结各种lncRNA在胰腺癌吉西他滨耐药中的具体作用机制,以期探索基于lncRNA筛选胰腺癌吉西他滨耐药可能的治疗靶点。     

Aurora-A表达与胰腺癌吉西他滨耐药关系的实验研究

目的探讨Aurora-A的表达与胰腺癌吉西他滨耐药之间的关系。方法40只裸鼠采用随机数字表法分为两组,分别采用人胰腺癌细胞株PANC-1和吉西他滨耐药株PANC-1/R2皮下移植再原位移植的方法构建动物模型（PANC-1组、PANC-1/R2组）。采用实时定量基因扩增（qPCR）法测定PANC-1和PANC-1/R2中Aurora-AmRNA的表达。建模后第5周处死裸鼠,测定并比较两组裸鼠体重、肿瘤转移情况、肿瘤质量;采用免疫组化方法测定并比较两组瘤体Aurora-A蛋白的表达。结果PANC-1组、PANC-1/R2组第5周裸鼠体重、肿瘤重量及肿瘤转移率分别为（23.2±1.41）g、（0.453±0.110）g、36.8%及（22.91±1.13）g、（0.564±0.203）g、50.0%,两组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）,两组Aurora-AmRNA表达分别为1.002±0.040及1.845±0.069,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组Aurora-A蛋白阳性表达率分别为83.3%及57.9%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论Aurora-A高表达与胰腺癌细胞株的吉西他滨耐药有关,新方法构建的PANC-1/R2耐药株Aurora-A高表达,可用于胰腺癌吉西他滨耐药研究的载体。     

不同剂量吉西他滨辅助化疗根治术后胰腺癌的随机对照临床研究

目的:比较标准剂量和小剂量吉西他滨对根治术后胰腺癌辅助化疗的疗效及安全性.方法:采用随机双盲平行对照的临床试验方法,以疾病相关症状改善、生存分析及毒副反应为结局终点指标,比较标准剂量(1 000 mg/m2)和小剂量(500 mg/m2)吉西他滨辅助化疗根治术后胰腺癌的疗效及安全性.结果:2005年1月至2007年3月间符合标准的患者共83例,随机分组后患者性别、年龄等具有基线可比性(P>0.05).意向性治疗分析和方案分析均显示标准剂量组和小剂量组疾病相关症状改善及术后生存均相当(P>0.05),而毒副反应,尤其是血液系统毒性在标准剂量组高于小剂量组(P<0.05).结论:小剂量吉西他滨对根治术后胰腺癌辅助化疗的疗效和标准剂量相当,而毒副反应减少.     

阿司匹林引起胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨耐药及其机制研究

目的探讨阿司匹林是否引起胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨耐药及其可能机制。方法通过四氮唑蓝(MTT)和HOCHEST33258染色方法检测药物对人胰腺癌耐药株SW1990细胞的生长情况以及凋亡的影响;并应用蛋白免疫印迹方法检测细胞信号通路PI3K/AKT的变化。结果阿司匹林能明显降低吉西他滨对细胞的抑制率并提高IC50。0.4μmol/L吉西他滨干预细胞后,凋亡率达56%,明显高于吉西他滨与阿司匹林合用时细胞的凋亡率(28%,P<0.01)。磷酸化AKT和PI3K水平明显增高。PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002能明显逆转阿司匹林引起的SW1990细胞耐受吉西他滨的现象。结论阿司匹林通过激活PI3K/AKT信号通路引起胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨耐药。     

hENT-1表达水平对胰腺癌吉西他滨辅助化疗的影响

目的：本研究探讨胰腺癌hENT-1表达水平对吉西他滨辅助化疗的影响。方法：利用胰腺癌组织切片,行hENT-1 免疫组织化学实验,针对其染色强度、范围计算评分。追踪回访对应患者的预后情况后行统计学分析。结果：hENT-1高表达组与低表达组的OS为20个月对10个月,而DFS为15个月对6个月。OS的独立预后因素是hENT-1表达水平、淋巴转移情况和病理分级。而DFS的独立预后因素是hENT-1表达水平和病理分级。病人之间临床资料与hENT-1表达水平无明显差异（p＞0.05）。结论：胰腺癌细胞中hENT-1的表达水平可能影响吉西他滨辅助化疗敏感性,hENT-1高表达者使用吉西他滨辅助化疗后的OS及DFS较低表达者长。     

区域动脉内灌注吉西他滨加5-Fu治疗晚期胰腺癌的临床观察

目的探讨区域动脉内灌注吉西他滨和5-氟尿嘧啶治疗晚期胰腺癌的临床疗效。方法对50例晚期胰腺癌患者采用改良Seldinger法行动脉插管并置管于胰腺癌的供血动脉内,灌注吉西他滨和5-Fu,观察患者的临床受益反应、肿瘤变化、毒副作用和患者生存时间。结果 50例患者临床受益率为40%,肿瘤缓解率为12%。结论区域动脉内灌注吉西他滨加5-Fu具有良好的抑制肿瘤作用并可获得较好的临床受益反应,可作为不能手术晚期胰腺癌的首选方法。     

吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌的疗效观察

目的 探讨吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌的临床疗效.方法 选取2017年8月至2018年7月本院收治的100例晚期胰腺癌患者作为研究对象,根据治疗方案不同分为参照组与研究组,每组50例.参照组采用吉西他滨治疗,研究组在参照组基础上联合化疗治疗.比较两组治疗效果、生存率及不良反应发生率.结果 研究组治疗总有效率高于参照组,差异具有统计学意义(P<0.05);研究组3、6、12个月生存率均高于参照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较差异无统计学意义.结论 采用吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌效果显著,可提高患者的生命质量,且安全性较高,值得临床推广应用.     

吉西他滨联合化疗在晚期胰腺癌中的疗效观察

目的 探讨吉西他滨联合化疗在晚期胰腺癌中的疗效.方法 资料选自2010年1月-2012年12月该院收治的80例晚期胰腺癌患者,将其分为两组,各40例,研究组行吉西他滨联合化疗治疗,对照组行吉西他滨单药治疗,观察两组患者治疗后的疗效情况、临床受益反应情况、生存情况以及不良反应情况.结果 治疗后对两组进行比较,研究组的疾病控制率为75％,临床受益反应率为70％,治疗后半年的生存率为80％、治疗后1年的生存率为45％、治疗后1年半的生存率为35％,不良反应率为100％,而对照组的疾病控制率为45％,临床受益反应率为42％,治疗后半年的生存率为70％、治疗后1年的生存率为20％、治疗后1年半的生存率为15％,不良反应率为62.5％,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌,尽管会引起某些不良反应,但是能提升患者的疾病控制率和临床受益反应率,也能延长患者的生存时间,疗效十分显著,值得在临床上推广使用.     

吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌临床观察

目的:观察吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌的疗效及不良反应.方法:41例晚期胰腺癌患者,采用吉西他滨1000mg/m2,静滴30分钟,d1,d8;卡培他滨1250mg/ m2,2次/日,口服d1～14.21天为1疗程,治疗2疗程后评价疗效及不良反应.结果:41例均可评价疗效,共完成周期数为126个,完全缓解(CR)0例,部分缓解(PR)9例,稳定(SD)13例,进展(PD)19例,总有效率(CR+PR)21.95%,疾病控制率(CR+PR+SD)53.66%,中位疾病进展时间4.1个月,中位生存期为7.3个月(1.5～19.7个月)常见不良反应为中性粒细胞减少、迟发性腹泻、恶心、呕吐和手足综合征等,多为Ⅰ～Ⅱ度.结论:吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌疗效肯定,不良反应轻,耐受性好,是晚期胰腺癌的有效治疗方案.     

胰腺癌术后吉西他滨单药与卡培他滨联合辅助化疗临床效果评价

目的：比较胰腺癌患者术后吉西他滨单药与吉西他滨联合卡培他滨化疗的临床疗效和毒副反应。方法：胰腺癌根治术后患者40例,随机分为单药组和联合用药组各20例。单药组给予吉西他滨单药化疗,联合用药组采用吉西他滨联合卡培他滨化疗,分析两组患者的无病生存期（DFS）以及毒副反应发生情况。结果：40例胰腺癌术后患者中有3例失访,吉西他滨单药组患者全部完成6个疗程治疗,联合化疗组有2例患者不能耐受,主要为血小板减少,4周期后终止治疗。单药组中位无病生存时间为9.7个月,联合用药组为12.3个月,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。联合用药组手足综合征、白细胞减少、血小板减少发生率高于单药组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：胰腺癌术后采用吉西他滨单药或吉西他滨联合卡培他滨化疗,患者无病生存期无明显差异,联合化疗手足综合征、白细胞减少、血小板减少发生率较高。     

吉西他滨耐药的胰腺癌SW1990细胞株的建立及相关特性检测

目的：探讨对吉西他滨( GEM )耐药的胰腺癌SW1990细胞诱导方法,以期进一步认识胰腺癌耐药的发生机制,并对诱导的GEM耐药的胰腺癌细胞与其亲本细胞的生物学特性进行比较。方法采用逐步浓度递增法诱导对GEM耐药的细胞株 SW1990-GZ。 MTT 法检测 SW1990和SW1990-GZ 的半数致死量(IC50)、耐药系数(R),并观察其生长差异。采用高效液相色谱法( HPLC)检测不同时间点SW1990和 SW1990-GZ 对 GEM 药物的摄取情况。结果SW1990和SW1990-GZ的IC50为(0．07±0．0021)、(87．50±3．2400)μg/ml,R=1250;在不同浓度GEM作用下,诱导后耐药的SW1990-GZ对GEM的敏感性明显降低。细胞生长曲线显示耐药细胞 SW1990-GZ相对于 SW1990生长缓慢。不同时间点GEM孵育后,SW1990-GZ细胞对GEM药物的摄取较SW1990细胞降低。结论成功诱导了耐GEM药物的SW1990-GZ细胞株,耐药性能稳定、明显。 SW1990-GZ细胞可能存在着一定的机制使得细胞摄取GEM降低。     

吉西他滨为基础的化疗方案治疗进展期胰腺癌的临床疗效分析

目的 分析吉西他滨为基础的化疗方案治疗进展期胰腺癌的临床疗效.方法 选取在2014年1月至2015年6月期间到我院接受化疗的进展期胰腺癌患者54例,其中21例患者接受吉西他滨单药化疗,将其作为对照组;33例患者接受吉西他滨联合其他药物化疗,将其作为观察组.比较两组患者的临床疗效、生存情况及不良反应.结果 观察组患者临床有效率为42.4％,疾病控制率为81.8％,对照组临床有效率为19.0％,疾病控制率为52.4％,两组差异有统计学意义(P＜0.05).两组中位生存时间分别为11.7个月和7.1个月,中位无进展生存时间分别为4.6个月和2.8个月,6个月生存率分别为69.7％和57.1％,两组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);观察组对CA199水平的影响优于对照组(P＜0.05);两组不良反应比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 以吉西他滨为基础的化疗方案治疗进展期胰腺癌,较单药治疗效果更佳,可显著提高患者生存率.     

MicroRNA-10b overexpression promotes non-small cell lung cancer cell proliferation and invasion

Background

miRNAs are a class of small non-coding RNA molecules that play an important role in the pathogenesis of human diseases through negative regulation of gene expression. Although miRNA-10b (miR-10b) has been implicated in other tumors, its role in non-small cell lung cancer (NSCLC) is still unknown. The aim of the present study was to investigate the role of miR-10b in NSCLC.

Methods

Expression of miR-10b was analyzed in NSCLC cell line A549 by qRT-PCR. Cell viability was evaluated using Cell Counting Kit (CCK)-8. Cell migration and invasion were evaluated by wound healing assay and transwell assays. Cell cycle and apoptosis analyses were performed. Western blotting was used to predicate the target of miR-10b.

Results

The A549 cell line transfected with the miR-10b exhibited significantly increased proliferation, migration, and invasion capacities when compared with the control cells (P < 0.05). Krüppel-like factor 4 (KLF4) may be indirectly targeted by miR-10b during the proliferation increasing of A549 cells.

Conclusion

In this study, we found that miR-10b is a tumor enhancer in NSCLC. Thus, miR-10b may represent a potential therapeutic target for NSCLC intervention.     

过表达Cyr61对胰腺癌细胞化疗耐药性的影响

目的:研究富半胱氨酸61(cysteine-rich 61,Cyr61)在胰腺癌细胞中对吉西他滨化疗耐药性的影响.方法:培养人胰腺癌细胞株MIA PaCa2,分别感染空白对照病毒,表达Cyr61的病毒或shRNA,用吉西他滨(10 μg/ml)处理.细胞克隆形成试验检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测胰腺癌细胞凋亡;蛋白质...     

Relationship between single nucleotide polymorphisms in the deoxycytidine kinase gene and chemosensitivity of gemcitabine in six pancreatic cancer cell lines

Background  Single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the deoxycytidine kinase (dCK) gene are associated with chemosensitivity to nucleoside analogs. 2′,2′-Difluoro 2′-deoxycytidine (gemcitabine) is a first-line nucleoside analog drug in the treatment of pancreatic cancer. However, the association between SNPs in the dCK gene and chemosensitivity to gemcitabine has not been fully established. Therefore, the present study aimed to investigate the relationship between SNPs in the dCK gene and chemosensitivity to gemcitabine in human pancreatic cancer cell lines.

Methods  Seven SNPs in the dCK gene were sequenced in six human pancreatic cancer cell lines. The chemosensitivity of these six cell lines to gemcitabine were evaluated in vitro with a Cell Counting Kit-8 (CCK-8) test. Inhibition rates were used to express the chemosensitivity of pancreatic cancer cell lines to gemcitabine.

Results  The genotype of the A9846G SNP in the dCK gene was determined in six human pancreatic cancer cell lines. The cell lines BxPC-3 and T3M4 carried the A9846G SNP genotype AG, whereas cell lines AsPC-1, Mia PaCa2, SW1990 and SU86.86 carried the GG genotype. Cell lines with the AG genotype (BxPC-3 and T3M4) were more sensitive to gemcitabine compared with cell lines with the GG genotype (AsPC-1, Mia PaCa2, SW1990 and SU86.86) and significantly different inhibition rates were observed between cell lines carrying the AG and GG genotypes (P <0.01).

Conclusions  Variants in the A9846G SNP of the dCK gene were associated with sensitivity to gemcitabine in pancreatic cancer cell lines. The dCK A9846G SNP may act as a genetic marker to predict chemotherapy efficacy of gemcitabine in pancreatic cancer.

     

微小RNA-125b及其靶基因信号素分子4C在乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)-125b及其靶基因信号素分子(SEMA)4C在乳腺癌组织(BRCR)及其癌旁正常组织(NCT)中的表达情况,并分析其与临床病理学特征的关联性及意义.方法:采用荧光定量PCR检测24 例BRCR及其NCT中miR-125b的表达,采用免疫组织化学方法检测40例BRCR及其NCT中SEMA4C的表达.统计分析两者表达水平与患者的年龄、组织学分级、临床分期、淋巴结转移,雌、孕激素受体和人表皮生长因子受体-2(cerbB-2)等临床病理学特征间的关联性.结果:SEMA4C表达在BRCR中高于NCT,SEMA4C表达在淋巴结转移和cerbB-2表达间差异均有统计学意义(P<0.01和P<0.05),而在患者年龄,组织学分级,肿瘤临床分期及雌、孕激素受体表达间差异均无统计学意义(P>0.05).miR-125b表达在BRCR中低于NCT(P<0.05),其表达在SEMA4C、淋巴结转移以及cerbB-2差异均有统计学意义(P=0.034 ~P=0.022).结论:在乳腺浸润性导管癌中SEMA4C表达升高,miR-125b表达降低,两者均与cerbB-2过表达以及淋巴结转移均有一定关系,提示SEMA4C为miR-125b靶基因之一,miR-125b可能是一个新的乳腺癌标志物.     

miR-145、miR-375在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的 探讨miR-145、miR-375在乳腺浸润性导管癌患者中的表达情况,并做出相应的临床分析.方法 取经病理证实的乳腺浸润性导管癌患者的乳腺癌组织标本及其正常组织各41例,行荧光定量PCR检测其中miR-145、miR-375的表达量,结合临床资料,用SPSS软件分析其阳性表达对临床指导的意义.结果 乳腺癌患者乳腺癌组织中miR-145及miR-375表达明显低于正常组织(P＜0.01),miR-145在乳腺癌中的表达异常与病理分期、淋巴结转移、肿瘤大小相关(P＜0.01),miR-145的表达与ER、PR无明显相关性,而miR-375的表达与病理分期、肿瘤大小相关(P＜0.01),淋巴结转移、PR相关(P＜0.05),与ER无明显相关性.结论 miR-145、miR-375在乳腺癌患者中异常表达,癌组织中的表达低于正常组织,这可能是miR-375肿瘤发生过程中担任了抑癌基因的角色,一定程度上可以衡量肿瘤的恶性程度.     

下调hENT1可抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的跨膜转运

目的:明确下调hENT1后对胰腺癌细胞株Sw1990跨膜转运吉西他滨的影响。方法:将能特异性下调hENT1的pSilence-hENT14.1-CMV neo的重组质粒以及对照质粒转染至胰腺癌Sw1990细胞内。采用G418筛选阳性克隆细胞,RT-PCR检测hENT1mRNA表达情况。培养Sw1990细胞、pSilence-hENT1Si-Sw1990、pSilence-Control-Sw1990细胞,3组细胞培养基中吉西他滨质量浓度均为100μg/mL,温育0,15,30min,1,2,4h后收集细胞。取等量细胞悬液两份各100μL,一份作为检测样本用毛细管区带电泳测定吉西他滨总量,另一份用作平行样本测定总蛋白含量。根据蛋白-细胞数量标准曲线来确定平行样本中细胞数,再用血细胞分析仪确定细胞体积,最后,计算单细胞内药物总量及浓度。结果:pSilence-hENT1Si-Sw1990细胞的hENT1mRNA表达水平下调50。Sw1990组用含吉西他滨(100μg/mL)的DMEM培养基温育后,细胞内药物质量浓度在30min达(55.1±10.4)μg/mL,60min达(70.2±7.8)μg/mL,120min后处于平台期(90.1±6.0)μg/mL。相比之下,pSilence-hENT1Si-Sw1990组细胞内质量药物浓度30min达(41.3±4.9)μg/mL,60min达平台期(51.3±11.8)μg/mL,与对照组相比,细胞内浓度处于较低水平(P0.05)。结论:下调hENT1可以抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的摄取,hENT1是吉西他滨跨膜转运的重要通道。     

MicroRNA-206、microRNA-29b、microRNA-133a的表达及对骨折患者延迟愈合的预测价值

目的 分析microRNA-206(miR-206)、microRNA-29b(miR-29b)、microRNA-133a(miR-133a)的表达及对骨折患者延迟愈合的预测价值,为临床应用提供依据。方法 选取2020年1月—2020年12月四川省医学科学院·四川省人民医院收治的123例骨折延迟愈合患者作为观察组,另取该院100例骨折愈合正常患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测患者血清miR-206、miR-29b、miR-133a的表达;绘制受试者工作特征（ROC）曲线,分析各指标单独及联合预测骨折延迟愈合的价值。结果 观察组血清miR-206、miR-29b、miR-133a相对表达量高于对照组（P <0.05）。miR-206、miR-29b、miR-133a预测骨折延迟愈合的准确性分别为82.79%、83.90%和86.67%,较3者联合预测准确性（96.72%）低。3者联合预测骨折延迟愈合的敏感性和特异性分别为95.94%(95%CI:0.922,0.986)、96.00%(95%CI:0.937,0.993),高于单独预测。结论 骨折延迟愈合患者血清mi...     

病毒性脑炎患儿血清microRNA-125b与病情严重程度及预后的关系

目的 探究病毒性脑炎（VE）患儿血清microRNA-125b(miR-125b)与病情严重程度和预后的关系。方法 选取2018年1月—2020年3月在舟山市妇女儿童医院儿科就诊的118例VE患儿（重度组55例,轻度组63例）,另取同期该院40例健康体检儿童作为对照组。收集研究对象的一般资料、临床检测结果等。提取血浆RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-125b相对表达量。分析miR-125b相对表达量与VE患儿临床特征及预后的关系。采用受试者工作特征曲线下面积评价miR-125b对VE患儿预后的诊断价值,并对VE患儿预后的危险因素进行逐步多因素Logistic回归分析。结果 对照组miR-125b相对表达量低于轻度组和重度组（P <0.05）;重度组miR-125b相对表达量高于轻度组（P <0.05）。VE患儿血清miR-125b相对表达量与惊厥、偏瘫、多器官损伤和应激性高血糖呈正相关（rs=0.034、0.017、0.205和0.160,均P <0.05）,与年龄、患者发热、意识障碍、低钠血症无相关性（P>0.05）。血清miR-125b预测VE...