小儿亲体肝移植急性排斥反应临床特点的初步探讨

摘 要 目的：本课题拟通过回顾性分析,结合小儿的生理免疫特征,比较小儿与成人肝移植急性排斥反应的不同临床特点,以期为小儿肝移植术后个体化抗排斥治疗提供一定的理论依据。材料和方法：收集本院2003年1月至2007年12月小儿部分亲体肝移植18例,其中发生急性排斥反应4例;2003年1月至2007年12月成人全肝改良背驮式肝移植56例,其中发生急性排斥反应9例。术后采用糖皮质激素（甲基强的松龙）和FK506进行免疫抑制治疗。术后监测患儿及成人：①肝功能,主要包括血清总胆红素、直接胆红素,ALT和AST;② FK506血浓度。结果：检测肝穿刺日及之前6d亲体肝移植患儿肝功能的主要指标：AR组中,丙氨酸氨基转移酶（ALT）及天冬氨酸氨基转移酶（AST）在穿刺前3d起较非AR组显著升高（P<0.01）;而总胆红素（TBIL）及直接胆红素（DBIL）水平则在穿刺前第5d起出现显著增高（P<0.01）。成人肝移植AR组中,穿刺日及之前8d,患者外周血中ALT、AST,TBIL及DBIL的水平已均显著高于非AR组（P<0.01）。小儿及成人肝移植患者分别于病理确诊AR前5d及8d起,血中FK506谷浓度较非AR组明显下降（P<0.05）。结论：小儿亲体肝移植术后急性排斥反应的发生时间可能较成人肝移植术后急性排斥反应发生时间晚,程度较成人AR轻,这与小儿亲体肝移植受供体血缘关系近、供肝质量好有关。FK506浓度较低时可能诱发急性排斥反应,但血FK506的浓度高低与急性排斥反应的程度并无显著关联。 关键词：小儿肝移植,急性排斥反应,肝功能。     

CD44表达对人肝移植急性排斥反应的诊断价值

目的:探讨移植肝组织中细胞黏附分子CD44的表达对人肝移植急性排斥反应的诊断价值。方法:收集42例肝移植患者移植后肝穿刺活组织检查标本及移植前供肝标本,根据肝移植术后是否发生急性排斥反应分为急性排斥组(30例)及非急性排斥组(12例),采用免疫组织化学(免疫组化)方法检测CD44在两组移植肝组织中的表达并分析其表达与肝移植急性排斥反应的关系。结果:急性排斥组及非急性排斥组移植前供肝的CD44表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);急性排斥组移植后肝穿刺组织门管区及肝窦区的CD44阳性细胞百分数均明显高于非急性排斥组移植后肝穿刺组织(P均<0.05),两者与排斥反应活动指数(RAI)评分呈正相关(r=0.412,P<0.05;r=0.458,P<0.05)。结论:CD44在肝移植术后肝穿刺组织中表达增强可能与肝移植急性排斥反应的发生及其严重程度密切相关,有望成为肝移植急性排斥反应重要的辅助诊断指标。     

恒河猴肝移植模型急性排斥反应时T细胞亚群的变化

背景：寻找肝移植急性排斥反应的早期诊断指标,可快速而有效的评估移植后排斥反应的风险,而T淋巴细胞在急性排斥反应中发挥主要作用。目的：观察恒河猴肝移植后血液T淋巴细胞亚群的变化与急性排斥反应的关系。方法：采用改良血管袖套＋胆道支撑管＋动脉吻合法建立16例稳定的恒河猴肝移植模型,并将模型随机分为2组：实验组围手术期不给予免疫抑制治疗,对照组围手术期给予免疫抑制治疗,分别在移植后6,12,24,72h共4个时间点收集血标本和肝组织,全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素,用流式细胞仪检测血CD4~／CD8’水平,然后取移植后肝脏组织进行苏木精一伊红染色以观察肝脏组织形态结构的改变,并根据Banff评分系统判断排斥反应程度。结果与结论：实验组匿河猴肝移植后12,24,72h均有急性排斥反应发生,其中实验组丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和总胆红素在移植后24,72h表达水平明显高于对照组（P〈0．05）,实验组和对照组CD4＋／CD8＋的表达在移植后6h即开始增高,实验组增高最明显,实验组移植后24,72hCD4＋／CD8＋的表达明显高于对照组（P〈0．05）,实验组移植后72h肝脏组织形态病理改变程度重于对照组,Banff评分高于对照组（P〈0．05）。说明在肝移植后急性排斥反应早期,CD4＋／CD8＋的表达变化早于肝组织病理学及肝功能的改变。肝移植后血CD4＋／CD8＋水平的升高提示人体细胞免疫功能增强,对肝移植后急性排斥反应的早期诊断具重要意义。     

恒河猴移植肝组织内细胞间黏附分子1与急性排斥反应的关系

背景:在急性排斥反应发生时会伴有移植组织中细胞间黏附分子1表达水平的增高。目的:探讨恒河猴移植肝组织内细胞间黏附分子1与急性排斥反应的关系。方法:建立恒河猴同种异体肝移植模型,随机分为实验组(移植后不给予抗排斥处理)和对照组(移植中及移植后均给予抗排斥处理)。结果与结论:实验组移植后24,72h血清丙氨酸氨基转移酶及血清总胆红素水平明显高于对照组(P<0.05或<0.001)。移植后12h实验组移植肝即表现为轻度急性排斥反应,说明急性排斥反应时肝功能变化滞后于肝组织病理学检查,移植后24,72h表现为中重度急性排斥反应。移植后6h实验组肝组织中血管内皮细胞、肝细胞膜、胆管上皮细胞上细胞间黏附分子1的表达呈持续增强,并显著高于对照组(P<0.05),随细胞间黏附分子1的表达增强,排斥反应加剧,说明在急性排斥反应早期,肝功能、病理学仅有轻微改变时,细胞间黏附分子1水平即显著升高。提示移植肝组织中细胞间黏附分子1表达的检测对肝移植后急性排斥反应的早期诊断具重要意义。     

恒河猴肝移植模型急性排斥反应中白细胞介素6的表达

背景：白细胞介素6是免疫炎症反应中一种重要的细胞因子,它与移植排斥反应具有密切的关系,在移植排斥反应诊断和抗排斥疗效评价中发挥着重要作用。目的：检测白细胞介素6在恒河猴肝移植后急性排斥反应中的表达水平,以评价其作为肝移植后急性排斥反应早期诊断指标的价值。方法：以16只恒河猴为研究对象,将其随机分为实验组（围手术期不给予免疫抑制治疗）和对照组（围手术期给予免疫抑制治疗）,然后建立恒河猴同种异体原位肝移植模型;分别在移植后6,12,24,72h时间点收集血清及肝脏组织,通过检测肝功指标和移植肝组织苏木精-伊红染色Banff评分反映其移植排斥反应情况,并应用酶联免疫吸附法、免疫组织化学技术分别检测白细胞介素6的表达水平。结果与结论：肝移植后12,24,72h实验组均有急性排斥反应发生,其中实验组丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素在24h和72h表达水平明显高于对照组（P〈0.05）;实验组72h组织学表现重于对照组,Banff评分高于对照组（P〈0.05）;实验组中血清、肝组织的白细胞介素6水平在肝移植后12,24,72h明显高于对照组（P〈0.05）,并以72h最为明显。结果表明白细胞介素6可能参与肝移植后排斥反应的发生,其表达可能在恒河猴原位肝移植后急性排斥反应的早期诊断中有一定意义。     

恒河猴肝移植急性排斥反应中核因子κBp65的表达

背景：核因子κB作为一种重要的核内转录因子,是多种信号转导途径的汇聚点,参与机体免疫细胞的增殖、分化及细胞凋亡等多种反应物质基因的表达调控,在体液和细胞免疫中发挥重要作用。目的：探讨恒河猴移植肝组织内核因子κBP65蛋白表达与急性排斥反应的关系。方法：将恒河猴随机分为2组：急性排斥反应组肝移植后不给予抗排斥处理,对照组肝移植过程中及移植后均给予抗排斥处理。分别在移植后6,12,24和72h4个时间点收集血标本,全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶、总胆红素,取移植肝脏组织行苏木精-伊红染色观察组织形态结构和排斥反应,根据Banff评分系统判断排斥反应程度,采用Western blot法检测肝脏组织中核因子κBp65的表达。结果与结论：肝移植急性排斥反应发生时肝功能变化滞后于肝组织病理学检查。当急性排斥反应发生时,移植肝组织中核因子κBp65表达上调,急性排斥反应程度也随之加剧。并且在急性排斥反应早期,肝功能、病理学仅有轻微改变时,核因子κBp65表达显著升高。因此移植肝组织中核因子κBp65表达水平的检测对移植后急性排斥反应的早期诊断有重要意义,同时核因子κB可能成为控制移植急性排斥反应的新靶点。     

恒河猴移植肝组织内细胞间黏附分子1与急性排斥反应的关系

背景：在急性排斥反应发生时会伴有移植组织中细胞间黏附分子1表达水平的增高。目的：探讨恒河猴移植肝组织内细胞间黏附分子1与急性排斥反应的关系。方法：建立恒河猴同种异体肝移植模型,随机分为实验组（移植后不给予抗排斥处理）和对照组（移植中及移植后均给予抗排斥处理）。结果与结论：实验组移植后24,72h血清丙氨酸氨基转移酶及血清总胆红素水平明显高于对照组（P〈0.05或〈0.001）。移植后12h实验组移植肝即表现为轻度急性排斥反应,说明急性排斥反应时肝功能变化滞后于肝组织病理学检查,移植后24,72h表现为中重度急性排斥反应。移植后6h实验组肝组织中血管内皮细胞、肝细胞膜、胆管上皮细胞上细胞间黏附分子1的表达呈持续增强,并显著高于对照组（P〈0.05）,随细胞间黏附分子1的表达增强,排斥反应加剧,说明在急性排斥反应早期,肝功能、病理学仅有轻微改变时,细胞间黏附分子1水平即显著升高。提示移植肝组织中细胞间黏附分子1表达的检测对肝移植后急性排斥反应的早期诊断具重要意义。     

肝再生增强因子与大鼠肝移植急性排斥反应的相关性分析

目的探讨大鼠肝移植后肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)与移植物急性排斥反应的关系。方法建立急性排斥组及免疫耐受组大鼠肝移植动物模型各12只。术后第1、3、5和7天取大鼠外周血浆及肝脏组织标本。检测外周血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平;检测肝脏移植物组织内ALR、干扰素-γ(INF-γ)和白细胞介素-2(IL-2)的表达;分析ALR与INF-γ和IL-2表达变化关系。结果术后第1天急性排斥组INF-γ明显高于免疫耐受组,第3、5、7天两组大鼠外周血ALT、AST及TBIL均高于术后第1天,且急性排斥组INF-γ、IL-2表达及ALR的表达明显高于免疫耐受组P0.05)。相关性分析发现肝移植急性排斥过程中ALR和INF-γ的表达呈明显的负相关(P0.05),而与IL-2的表达无明显相关性(P0.05)。结论 ALR与大鼠肝移植后急性免疫排斥反应呈明显的负相关,可能参与了这一过程的调控。     

彩色多普勒超声在肝移植术后监测急性排斥反应的意义

目的应用彩色多普勒超声(CDI)检查原位肝移植(OLT)术后移植肝形态学及血流动力学改变,并探讨彩色多普勒超声对急性排斥反应的意义.方法 16例原位肝移植,于术后测量HA-V、HA-RI、ACC、AT、PV-V及描述肝静脉波形等血流动力学参数,其中11例在1个月内行细针穿刺组织学活检.结果 1例出现急性排斥反应,其肝静脉波形呈典型的急性排斥反应特征.结论彩色多普勒超声能很好地提示肝移植术后急性排斥反应的出现和转归.     

肝移植术后急性排斥反应的彩超监测

目的观察彩超在肝移植术后急性排斥反应的临床价值。方法对4例肝移植患者行床边超声检查，从术后第1天开始至出院前的时间里视病情而定，大约每2～4天1次，按常规二维超声检查肝脾大小、实质回声、肝内胆管、胸腹腔积液。彩色多普勒显像观察肝动脉、门静脉、肝静脉及下腔静脉吻合口的频谱形态，测量静脉的最大流速(Vmax)、肝动脉的收缩期峰值最大速度(Vm／s)、阻力指数(RI)、加速度时间(△T)。有3例患者分别在1周左右行超声引导下肝组织穿刺活检。结果4例肝移植患者中3例未发现明显的急性排斥反应，仅1例患者在第6～8天超声出现小范围欠均匀的低回声区，高度可疑急性排斥反应。临床及实验室证实，肝穿活检报告符合急性细胞性排斥性反应。结论彩超在肝移植术后是一种较好的无创检查，可为临床提供急性排斥反应的参考依据。     

异位辅助肝移植治疗急性肝功能衰竭的实验研究

目的：探讨异位辅助性部分肝移植治疗急性肝功能衰竭的可行性。方法；制作息性肝功能衰竭犬动物模型26只。分为两组：移植组20只，对照组6只。移植组切除脾脏后，于脾窝处移植同系异体60％部分肝脏，手术成功17只。观察两组实验动物的存活时间、血液生化、残肝磁共振（MRI）检查、残肝和移植肝的组织细胞形态改变。结果：对照组和移植组实验动物72h存活率分别为16．7％和82．7％。移植术后2周残肝细胞明显增生，肝功能恢复近正常，而辅助肝渐萎缩，术后5周辅助肝完全纤维化。结论：急性肝功能衰竭时，异位辅助性部分肝脏移植可为病肝提供暂时性功能支持，为残肝细胞再生、功能恢复提供机会，同时移植肝渐萎缩、纤维化。     

Changes in the expression of endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1 in grafts during acute rejection following liver transplantation in rats

This study investigated changes in expression of endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1 (EOLA1) in grafts following liver transplantation in rats. Thirty Lewis rats received liver transplants from Lewis rats (tolerance group); 30 received liver transplants from dark Agouti rats (acute rejection group). Changes in serum biochemical indexes (alanine aminotransferase and total bilirubin), graft histology and EOLA1 expression were measured on days 1, 3, 5, 7 and 10 post-operatively. Mean survival time was >100 days in the tolerance group and 16.2 +/- 1.4 days in the acute rejection group. Pathological evidence of acute rejection in grafts was seen after day 5 in the acute rejection group. Serum biochemical indexes were significantly higher in the acute rejection group than in the tolerance group from day 5 post-operatively, whereas EOLA1 expression in the liver graft was significantly higher in the tolerance group than in the acute rejection group. EOLA1 expression seems to be negatively correlated with severity of rejection after liver transplantation.     

Functional and morphological graft monitoring after liver transplantation

The development of effective immunosuppressive drugs and the refinement of surgical procedures have led to remarkable improvements in the long-term success of liver transplantation. This procedure is now widely recognised as an effective, preferable therapeutic option for the treatment of end-stage liver disease. The early diagnosis of dysfunction is an indispensable tool for the successful management of the hepatic allograft recipient. Liver function is usually assessed by biochemical and morphological examinations, usually based on coagulation factors (fibrinogen, fibrinogen degradation peptide, factor V, prothrombin time and prolonged thromboplastin time), transaminases, gamma-GT, ALP, bilirubin and lactic acid, and histology. Liver biopsy is usually performed before the implantation of the graft to assess the viability of the liver and following liver transplantation, whenever clinical events warrant it or as part of a routine biopsy schedule.     

乙型肝炎病毒感染者肾移植前肝穿刺活检与预后分析

背景:乙肝病毒感染者肾移植手术国内有较多报道,但乙肝病毒感染者肾移植前肝穿刺活检观察有限.目的:对慢性肾功能衰竭合并不同程度慢性乙型病毒性肝炎患者进行肾移植前肝穿刺活检,移植后2年随访观察转归情况.方法:对接受肾移植的21例乙型肝炎病毒感染的尿毒症患者进行肝穿刺活检.根据肝活检组织病理学改变,分为轻度(n=9)、中度(n=7)、重度(n=5)3组.肾移植后随访观察2年.3组中各有2例进行重复肝活检组织病理学检查.结果与结论:轻度慢性乙型肝炎组在随访2年中各项观察指标均无明显变化.中度慢性乙型肝炎组从移植后3个月开始谷氨酰转肽酶活性明显高于正常水平,随访至终点时,2例重复肝活检病理显示已处于重度病变.重度慢性乙型肝炎组从移植后3个月开始谷氨酰转肽酶活性持续高于正常水平;18个月开始,血清白蛋白水平低于正常值,球蛋白水平高于正常值;随访至终点时,有4例呈肝硬化改变.提示不同程度的慢性乙型病毒性肝炎患者肾移植后预后不同,肝活检是评价肝脏病变程度的重要手段,具有指导肾移植选择的作用.     

彩色多普勒超声对肝移植术后并发症的诊断价值

目的评价彩色多普勒超声对肝移植术后并发症的诊断价值。方法回顾性分析和总结26例肝移植术后并发症的彩色多普勒超声检查资料,检测指标包括肝动脉及左右分支的峰值速度（HAPV）、阻力指数（RI）、加速度及加速时间,门静脉平均流速,肝实质及胆管回声。结果6例经手术或造影证实为血管并发症（肝动脉血栓形成1例,肝动脉狭窄2例,肝动脉痉挛1例,门静脉狭窄2例）,彩色多普勒超声表现有肝动脉狭窄处的高速高阻血流并伴有湍流,而狭窄远端峰值速度〈40cm／s,RI〈0．5,加速时间〉0．08s,加速度〈300cm／s^2,1例肝动脉血栓形成肝门部无动脉血流信号;6例急性排斥反应,3例胆管结石并扩张。结论彩色多普勒超声对肝移植术后血管并发症的诊断具有重要的指导意义。     

肝移植后肝脏病理学及功能变化的实验研究

目的研究同基因大鼠肝移植后移植物的组织学和功能变化规律。方法将51只受体随机分为A、B、C 3组,每组17只,分别在术后第2、7、14天处死,取肝脏标本显微镜下观察;取血检测TB、ALT、GGT。结果A组肝细胞变性、坏死及汇管区炎细胞浸润轻;B组达高峰;C组病变明显减轻,并可见增生的肝组织。各组大鼠的各项血清生化检测值均有显著性差异(P<0.05)。结论移植肝在术后第2天病理损伤程度均较轻,第7天相对严重,第14天明显减轻。肝功能生化指标的变化与病理学变化基本一致。     

灰阶超声造影对移植肝肿瘤复发的诊断价值

目的评价灰阶超声造影对移植肝肿瘤复发的诊断价值。方法对11例肝移植术后肿瘤复发的患者,采用SonoVue行灰阶超声造影检查,并与术前灰阶超声造影相比较,回顾性分析其病史。所有病例均经手术或超声引导下穿刺活检病理证实。结果11例患者术后肿瘤复发的超声造影表现为快速增强、快速消退型,与术前超声造影表现一致,统计学无显著性差异。11例患者多在术后9月内复发,且复发与术前肿瘤大小,门静脉癌栓有无有关。结论肝移植术后患者及早密切定期超声检查,尤其超声造影检查,对肿瘤较大、门静脉癌栓者密切随访,有助于早期发现肿瘤复发。     

输注同基因骨髓间充质干细胞联合脾组织移植诱导肝移植大鼠的免疫耐受

背景:有研究显示在免疫抑制剂的作用下,同种脾脏细胞移植可诱导免疫耐受,使移植物长期存活.另有研究还显示异种骨髓间充质干细胞移植可延长移植肝存活时间.目的:观察输注与受体同基因骨髓间充质干细胞联合脾组织移植对诱导大鼠肝移植后免疫耐受的作用.方法:将受体Lewis大鼠以数字表法随机分为4组:急性排斥组行DA-Lewis大鼠原位肝移植;环孢素A组行DA-Lewis大鼠原位肝移植后灌胃给予环孢素A;干细胞组行DA-Lewis大鼠原位肝移植,同期输注异体Lewis大鼠骨髓间充质干细胞;脾组织移植组在干细胞移植组的基础上同期移植DA大鼠脾组织.观察各组生存期,肝功能情况,血清细胞因子水平,嵌合体的形成情况及肝脏病理变化.结果与结论:与其他各组相比,脾组织移植组大鼠存活时间明显延长,术后血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红索、白细胞介素2、干扰素Y水平明显降低(P<0.05),白细胞介素6、白细胞介素10明显升高(P<0.05),30 d后受体脾脏中供体阳性细胞明显升高(P<0.05).肝脏病理显示,环孢素A组和于细胞组移植肝仅呈急性轻度排斥反应,急性排斥组呈急性重度排斥反应,脾组织移植组未见明显排斥反应.说明大鼠肝脏、脾组织移植后输注同基因骨髓间充质干细胞町减轻移植肝的排斥作用,甚至诱导免疫耐受.     

多参数系统生物传感器Neurotrend-7监测移植早期肝细胞的代谢

背景:目前,各种监测设备已经用于移植肝的早期监测,但没有一种方法能够持续不断的监测移植肝细胞的代谢变化来反映移植肝内部环境的变化情况。目的:探讨应用多参数系统生物传感器Neurotrend-7持续监测肝细胞代谢,为早期发现移植后肝脏功能不良提供依据。方法:健康成年雄性日本大耳白兔24只分为3组,对照组(n=4):开腹仅行肝组织埋入氧代谢监测传感器及标本取材后关腹。两个实验组完成兔肝移植后肝内置入多参数监测仪传感器探针,实验1组(n=10)供肝保存时间<2h;实验2组(n=4)供肝保存时间>4h。移植前及移植后1,3,5d连续监测肝组织的pH、氧分压、二氧化碳分压变化并测量动脉血PaO2、PaCO2、动脉血气pH值。同时,切取同位点的肝组织行光镜和电镜检查。结果与结论:实验2组肝组织氧分压显著低于实验1组(P<0.05),且随时间逐渐下降;肝组织二氧化碳分压各时段高于实验1组(P<0.05),并且随时间逐渐增高;肝组织pH值较实验1组各时间段更低(P<0.05),提示肝功能严重不良或移植肝无功能。肝组织氧分压与动脉血PaO2呈正相关,肝组织二氧化碳分压与动脉血PaCO2无明显相关性;肝组织pH与动脉血气pH值也无明显相关性。变化与组织学检查相似。提示,多参数系统生物传感器Neurotrend-7可为早期发现移植后肝脏功能不良,观察其演变规律,指导临床早期预防和治疗,为其在肝脏外科和器官移植领域临床应用提供准确的数据支持。