小鼠H—2抗原的提取与纯化

This study was designed to purify the mouse major histocompatibility complex antigen (H-2Ag). The detergent was used to extract the crude H-2Ag, and monoclonal antibodies affinity chromatography was applied to purify H-2 antigen. A 45 kd heavy chain and a 12 kd light chain from the purified proteins were shown by electrophoresis. Besides, the pure H-2 antigen was found to have immunological and biological activity. This method should be useful in purifying large quantities of H-2Ag for the researches in transplantation and functional analysis of H-2 antigen.     

实验小鼠H-2抗原单克隆抗体的效价研究

目的　研究实验小鼠H - 2抗原单克隆抗体在初建时和经冷冻保存后的效价变化规律 ,为长期保存小鼠H - 2抗原单抗及规模性推广这一遗传监测方法奠定技术基础。方法　制备 6种抗小鼠H 2抗原的单克隆抗体 ,将具备一定抗体效价 (16 0倍以上 )的细胞株保存在 - 196℃的液氮中 ,数月后将复苏后的部分细胞株培养 4 8h后 ,取其上清液用微量细胞毒试验法测定抗体的效价 ,并与其原有效价进行比较。结果　单抗初建时效价达到 16 0倍以上的细胞株占总株数的 37%～ 5 3% ,H 2K抗体复苏后效价持平的细胞株占 13% ,效价下降的为 74 % ,效价上升的是 13% ;H 2D抗体效价持平的细胞株占 5 3% ,下降的为 31% ,上升的是 16 %。复苏后的抗体效价大部分与原效价持平或略有下降 ,个别的会有所提高。结论　单克隆抗体的效价略低于同种单价特异性抗血清 ;能否使冻存后的抗体保持原有的效价是抗体能否大量生产并推广的关键 ;要长期保存和生产H 2抗原单抗 ,应加强克隆和检测工作 ,建立稳定的制备、保存和检测系统 ,才能为实验动物的遗传监测提供技术服务     

选择P815作为DBA/2小鼠H─2抗原靶细胞

采用ＤＢＡ／２和Ｃ５７ＢＬ／６二组主要组织相容性复合体不相同的近交系小鼠，将ＤＢＡ／２小鼠的淋巴细胞植入Ｃ５７ＢＬ／６体内，分别选用Ｐ８１５和Ｄ８Ａ／２小鼠的淋巴细胞作为靶细胞，应用抗体－补体介导细胞杀伤的免疫学方法，研究Ｐ８１５作为ＤＢＡ／２小鼠Ｈ－２抗原靶细胞的可行性，实验结果显示，Ｐ８１５可以替代ＤＢＡ／２小鼠的淋巴细胞作为靶细胞。     

单克隆抗体F36/22分离和检测小鼠移植性乳腺肿瘤抗原的研究

作者应用免疫印迹法检测到单克隆抗体F36/22能识别小鼠移植性乳腺癌抗原.用SepharoseCL-4BA单克隆抗体F36/22免疫亲和层析法分离纯化了BALB/c小鼠移植性乳腺肿瘤抗原,固相放射免疫法检测纯化188.4倍,SDS-PAGE及免疫印迹检测其分子量为60kd。     

亲和层析法纯化抗大肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体

目的制备和纯化鼠源性抗人大肠肿瘤单克隆抗体(单抗),分析其相应抗原在大肠肿瘤细胞中的表达。方法常规方法免疫BALB/c小鼠制备腹水,应用G蛋白亲和层析柱对小鼠腹水样品进行分离纯化。采用SDS-PAGE、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA检测纯化后抗体的纯度、活性、效价和特异性。用免疫细胞化学、流式细胞术和免疫组织化学技术S-P法检测其相应抗原在大肠肿瘤细胞株和组织中的表达。结果还原性SDS-PAGE显示所获抗体为单一组分。应用间接ELISA检测抗体效价为1∶106,纯化后的抗体对大肠肿瘤细胞株具有特异结合活性,并在高分化大肠腺癌组织中表现出更高选择性(P<0.01)。结论G蛋白亲和层析法操作简便,所得单抗的纯度高,特异性强,生物学活性好。对临床上早期诊断大肠肿瘤将具有较大的意义。     

人类白细胞抗原-Ⅰ类抗原的DNA分型与临床应用

目的采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原Ⅰ（ＨＬＡⅠ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物，组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型，建立一步法ＰＣＲＳＳＰ方法，应用于６２份标准ＤＮＡ和３４５例肾移植供受者的ＨＬＡⅠ类ＤＮＡ分型。结果所有样本ＰＣＲＳＳＰ基因分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，４０份样本的重复率１００％，总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ位点等位基因１９个、Ｂ位点等位基因４１个；实际检出汉族人群Ａ抗原特异性１３个、Ｂ抗原特异性３２个。结论ＰＣＲＳＳＰ技术行ＨＬＡⅠ类Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型，分辨率高、特异性强、重复性好、相对简捷快速，分型结果较血清学方法更加精确可靠，适合于临床应用     

小鼠胰岛细胞MHC－DR抗原的诱导表达

本文报告肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和ｒ－干扰素（ＩＦＮ－ｒ）诱导小鼠胰岛细胞ＭＨＣ－ＤＲ抗原表达对胰岛素分泌的影响。实验结果表明：（１）当ＴＮＦ浓度为５０～１００Ｕ／ｍｌ时未见胰岛细胞表达ＭＨＣ－ＤＲ抗原，而５０Ｕ／ｍｌｒ－ＩＦＮ可诱导少量胰岛细胞（８．５±２．９％）表达ＭＨＣ－ＤＲ抗原；（２）１００Ｕ／ｍｌＴＮＦ和１００Ｕ／ｍｌｒ－ＩＦＮ合并使用，ＭＨＣ－ＤＲ抗原阳性细胞明显增多（８０．２５±４．１１％）；（３）两种因子单独或合并作用均能使体外培养的胰岛细胞的胰岛素分泌量增加（Ｐ＜０．０１）。上述结果提示，胰岛细胞ＭＨＣ－ＤＲ抗原的诱导表达本身并不影响其分泌胰岛素的功能。     

组织因子单克隆抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化组织因子(TF)单克隆抗体及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤8A3和9E10细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化组织因子抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及蛋白浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,TF抗体和对照抗体的最终浓度分别为0.7726mg/ml和0.8592mg/ml。结论应用层析法和凝胶过滤和Protein A亲和分离层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。     

分泌抗活化小鼠T细胞抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用Con A活化的小鼠脾脏细胞免疫同品系动物(BALB/c鼠),取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,选择了一株有分泌抗活化小鼠T细胞抗原抗体的杂交瘤细胞,经有限稀释法连续4次克隆化。采用ELISA法分析,初步证实该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)与Con A 活化的小鼠脾细胞的结合反应明显高于与未经活化的其他细胞(胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞、脾细胞)的反应。用琼脂双扩散法证明该MeAb属于小鼠IgG类。     

Sa抗原的提取和纯化

目的：提取和纯化Ｓａ抗原。方法：应用ＤＥ５２离子层析法。结果：Ｓａ抗原的分子量是５０ＫＤ，存在于０．２０ｍｏｌ／Ｌ Ｎａｃｌ ＴＢＳ洗脱组分中，在－２０℃保存期为１２０天。结论：分离和纯化的Ｓａ抗原可应用于免疫印迹检测抗Ｓａ抗体。     

人白细胞抗原-氨基酸残基配型标准与免疫反应性研究

目的 提出汉族人人白细胞抗原（ＨＬＡ）＿氨基酸残基配型标准，评价其免疫反应性和致敏性。方法 采用基因分型技术，分析大样本ＨＬＡ怕频率分布，提出适合于汉族人的Ⅰ类１０个组、Ⅱ类７个组共１７个组新的ＲｅｓＭ标准。前瞻性应用于首次尸肾移植１６３例。通过混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）、培养上清细胞因子、外周血免疫活性细胞和抗ＨＬＡ－ＩｇＧ抗体检测，并与六抗原配型标准比较，研究接受ＲｅｓＭ标准的免疫反应性和致敏     

ICR小鼠自然感染小鼠肝炎病毒后的抗原抗体变化

【摘要】 目的 了解小鼠肝炎病毒(MHV)污染的设施内,ICR小鼠自然感染后MHV抗原抗体存在情况。方法 选择50只ICR小鼠,通过更换“脏垫料”的方式进行饲养,分别在实验第2,4,8,14,21,28,35,42,56和84天各剖杀动物5只,采集血清、盲肠内容物、粪便、肝脏以及肺脏检测抗原抗体分布情况。结果 实验开始第2天,肺脏中检出小鼠肝炎病毒,检出率为20%（1/5）,第4天开始,肝脏、肺部、盲肠以及粪便中均可检出小鼠肝炎病毒; 84天后,肺脏、盲肠、粪便和肝脏阳性检出率降为0。实验第8天,血清中抗体检出阳性,阳性率为100%（5/5）,直至第84天实验结束,抗体阳性率仍维持在100%（5/5）。结论 血清学方法可作为日常监督主要诊断方法,而抗原检测方法只能应用于早期诊断。 【关键词】小鼠肝炎病毒 自然感染 抗原抗体     

单克隆抗体IA2结合胰岛细胞膜155kD和160kD抗原蛋白的纯化

免疫吸附实验表明87％1型糖尿病人血清自身抗体能替代单克隆抗体IA2与大鼠胰岛β-肿瘤细胞结合^[1]，并且单抗1A2能与人胰岛及大鼠胰腺提取物中的抗原结合。由于抗原含量很低，用亲和沉析、免疫沉淀、HPLC的方法均未得到可检测量的抗原蛋白。我们尝试用凝胶洗脱的办法得到了足够的大鼠胰腺提取物抗原蛋白。银染及Western Blot显示为155kD和160kD两条带。用胰蛋白酶部分消化后N末端氨基酸序列分析得到了12个氨基酸，初步认为该抗原不同于谷氨酸脱羧酶(GAD)、酪氨酸磷酸酶(IA2)等已发现的抗原。本实验为该抗原蛋白的分子克隆及1型糖尿病发病机制的研究打下了基础。     

小鼠树突状细胞过继转移抗原作用的实验研究

用绵羊红细胞免疫小鼠，取其脾脏分离树突状细胞产针这些带有抗原信息的ＤＣＳ经尾静脉注射给小鼠，以观察ＤＣＳ过继转移抗原的作用。结果表明，各试验组小鼠抗体形成细胞及血清中ＳＲＢＣ效价明显高于对照组，Ｐ〈０．０１，再次免疫ＤＣ组抗ＳＲＢＣ效价高于初次免疫ＤＣ组Ｐ〈０．０５，ＤＣＳ具有过断转移抗原的作用。