缺氧诱导因子HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的表达及相关性研究

目的:研究缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)与缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF-2α)在宫颈癌组织中的表达和相关性.方法:免疫组织化学染色方法检测宫颈癌组织中HIF-1α与HIF-2α的表达.用SPSS统计软件分析HIF-1α与HIF-2α在宫颈癌组织中的相关性.结果:原位癌组、浸润癌组HIF-1α蛋白阳性表达率分别为57.7％、78.6％;HIF-2α蛋白阳性表达率分别为65.4％、85.7％,宫颈癌组织中HIF-1α阳性表达得分为1.56±1.60,HIF-2α阳性表达得分为4.51±1.04,HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达呈显著正相关(rs=0.855,P＜0.05).结论:宫颈原发癌、浸润癌中,HIF-1α、HIF-2α表达与宫颈癌临床病理特征有密切关系,且两者表达呈显著正相关,两者在宫颈癌的发生发展及浸润转移过程中可能起协同作用.     

金雀异黄素对氯化钴诱导的白血病K562细胞缺氧诱导因子-1α表达抑制作用的研究

为探讨金雀异黄素（genistein,gen）对氯化钴（CoCl2）诱导的人白血病细胞K562缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达的影响,本研究采用低氧模拟剂CoCl2模拟低氧环境。实验分为量-效关系组和时-效关系组,前者CoCl2取0、50、100及150μmol/L4个浓度点,培养72小时进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72小时4个时间点进行检测。gen干预实验分为：①正常对照组;②CoCl2150μmol/L组;③CoCl2150μmol/L加gen50μmol/L组;④CoCl2150μmol/L加gen100μmol/L;组⑤CoCl2150μmol/L加gen200μmol/L组,培养72小时检测。采用RT-PCR及Western blot的方法分别检测HIF-1α mRNA及蛋白表达水平。结果发现：CoCl2诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,并呈明显的浓度和时间依赖性关系（p〈0.01）;而对HIF-1α mRNA的表达无显著影响（p〉0.05）;gen呈明显浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达（p〈0.01）,对K562细胞HIF-1α mRNA表达无显著影响（p〉0.05）。结论：CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是在CoCl2诱导下,HIF-1α mRNA呈组成型表达;gen可抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α的表达,这种抑制作用与mRNA水平无关,主要在蛋白水平。     

缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及其在脑肿瘤中表达

肿瘤细胞无法调控地增殖是其最主要特征 ,而不断增多的细胞数导致细胞耗氧量不断增加 ,造成肿瘤处于缺氧状态 ,晚近的研究已表明许多人类肿瘤内都有显著的缺氧区域〔1〕。处于缺氧状态的肿瘤细胞仍能不断增殖、浸润。肿瘤在适应缺氧时 ,主要有两种方式 :①肿瘤血管生成。肿瘤生长超过几立方毫米 ,就必须生成血管 ,而血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)在肿瘤血管形成调控方面起着重要作用。②Ｗａｒｂｕｒｇ效应。即肿瘤在缺氧甚至有氧状态下增加糖酵解酶活性而加速糖酵解来获取能量。近年的研究表明正是ＨＩＦ -1α对ＶＥＧＦ及多种糖酵解酶起着…     

乳腺癌组织中缺氧诱导因子-1α的表达

目的:探讨乳腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)的表达及其与雌孕激素受体、微血管密度(microvessel density,MVD)等生物学指标及临床病理因素的关系。方法:采用免疫组化SP法检测乳腺纤维腺瘤、普通乳腺增生组织和乳腺癌中HIF-1α蛋白的表达,用CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞并记数MVD。结果:HIF-1α蛋白在乳腺纤维腺瘤、乳腺普通增生组织中不表达;乳腺导管内癌中阳性率55%(11/20),浸润性乳腺中85%(51/60)。HIF-1α表达与原位癌中MVD呈正相关(r=0.682,P<0.05),与浸润性癌中MVD无相关关系。结论:HIF-1α在乳腺癌组织中明显上调,与肿瘤新生血管密切相关;HIF-1α表达与淋巴结转移、雌激素受体状态及组织学分级相关,提示HIF-1α对乳腺癌的发生发展起重要作用。     

缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤的调节作用

目的 观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)的活性与靶基因表达的变化,探讨其对体外培养的心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia- reoxygenation,H/R)损伤的调节作用.方法 取SD新生大鼠(1～3日龄)分离培养心肌细胞;在培养的第3天将心肌细胞随机分为3组(每组重复6 次):正常对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、甲基乙二酰基甘氨酸组(DMOG+H/R组);建立缺氧/复氧损伤模型,以脯氨酸羟化酶的抑制剂DMOG进行干预;观察各组心肌细胞的搏动频率;应用酶免疫法检测各组心肌细胞培养上清中的肌钙蛋白I(cTnI)含量;采用RT-PCR法检测各组HIF-1α及下游因子血红素氧合酶-1(HO-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)mRNA水平.结果 与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组心肌细胞的搏动频率均明显减少(P﹤0.01),而DMOG+ H/R组心肌细胞的搏动频率又较H/R组明显升高(P﹤0.01);与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组的cTnI含量明显增高(P﹤0.01),且HIF-1α、HO-1、VEGF、GLUT-1 mRNA水平亦明显增高(P﹤0.01或P﹤0.05);与H/R组相比,DMOG+H/R组心肌细胞HIF-1α、HO-1、VEGF、GLUT-1 mRNA水平明显增高,而cTnI含量则明显降低(P﹤0.05).结论 HIF-1的稳定表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用.     

缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:观察缺氧诱导因子-1对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:取SD新生大鼠(1～3 d)分离培养成心肌细胞;在培养的第3 d将心肌细胞随机分为3组(每组重复6次):正常对照组、H/R组、DMOG+H/R组;建立缺氧/复氧损伤模型,以脯氨酸羟化酶的抑制剂甲基异二酰基甘氨酸进行干预;采用酶免疫法检测各组心肌细胞培养上清液中的肌钙蛋白I含量,采用RT-PCR法检测各组缺氧诱导因子-1α及下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1 mRNA水平。结果:培养4～6 h的乳鼠心肌细胞开始贴壁生长,12～24 h明显增殖,3～4 d后细胞融合成片;心肌细胞由圆形变为梭形、星形、多角形,并出现自发性节律性搏动;与正常对照组相比,H/R组、DMOG+H/R组的肌钙蛋白I含量明显增高(P<0.01),且缺氧诱导因子-1α、下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1水平明显增高(P<0.01,P<0.05);与H/R组相比,DMOG+H/R组心肌细胞缺氧诱导因子-1α、下游因子血红素氧合酶-1、血管内皮生长因子、葡萄糖转运蛋白1水平明显增高而肌钙蛋白I含量明显降低(P<0.05)。结论:本...     

缺氧诱导因子-1α在失血性大鼠心肌中的表达

目的 探讨不同程度失血大鼠心肌细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1ɑ,HIF-1α)蛋白和mRNA的表达及意义.方法 选用清洁级SD大鼠,建立不同程度的失血模型,随机分为假手术对照组(CON)、失血10%(10-BL)组、失血20%(20-BL)组和失血30%(30-BL)组,利用Powerlab八道生理记录仪监测心功能指标,采用RT-PCR检测HIF-1α mRNA在失血后30 min、1 h大鼠心肌组织中的表达情况,并用免疫组化染色检测HIF-1α在心肌细胞中的分布.结果 不同程度失血后,心功能均降低,1 h比30 min降低明显(P<0.05);RT-PCR半定量结果 显示,与CON组相比,10-BL、20-BL、30-BL组HIF-1α mRNA表达逐渐增高(P<0.05);免疫组化结果 表明,HIF-1α主要分布在心肌细胞细胞质中,在细胞核内也有分布.结论 随失血程度增加,时间延长,HIF-1α表达增加,HIF-1α可能参与失血导致的低氧状态下心肌代谢的适应性调节.     

刺五加皂甙保护PC12细胞活性与缺氧诱导因子1α的表达

目的：观察刺五加皂甙对正常培养和缺氧条件下PC12细胞的活性和缺氧诱导因子1α表达的影响，探讨刺五加皂甙抗神经元缺氧损伤的可能机制。 方法：实验于2004—09／2005—05在南通大学医学院航海医学研究所进行。培养大鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞株，加入终浓度为0．05mg／L的神经生长因子和终浓度为12.5mmol／L的氯化钻分别建立神经生长因子诱导PC12细胞分化的神经元模型和氯化钴诱导缺氧的模型；四甲基偶氮唑法检测12．5，25，50，100，150mg／L的刺五加皂甙对正常培养的和氯化钴诱导缺氧的PC12细胞活性的影响；蛋白免疫印迹检测刺五加皂甙对正常培养和氯化钴诱导缺氧的PC12细胞中缺氧诱导因子1α表达的影响，以上实验均以神经生长因子作为阳性对照。 结果：①正常培养的PC12细胞为圆形，呈簇状生长。50mg／L神经生长因子诱导3d后，细胞停止增殖，部分PC12细胞开始呈现出神经元样的形态，产生类似于神经元的突起。随着诱导时间延长神经元样的细胞逐渐增多。至第7天，PC12细胞的突起形成网络。②12.5～100mg／L的刺五加皂甙可增加正常培养PC12细胞的活性，其中50mg／L刺五加皂甙作用最强。50mg／L刺五加皂甙的预处理可降低因缺氧引起的细胞活性的下降（P〈0．01），其作用与50mg／L神经生长因子相当（P〉0.05）。③正常培养的PC12细胞不表达缺氧诱导因子1α，氯化钴引起的缺氧可诱导PC12细胞表达缺氧诱导因子1α，刺五加皂甙、神经生长因子也可诱导缺氧诱导因子14表达；刺五加皂甙和神经生长因子的预处理可以进一步增强缺氧PC12细胞中缺氧诱导因子1α的表达（P〈0．01），刺五加皂甙和神经生长因子的作用差异无显著性（P〉0．05）。 结论：50mg／L的刺五加皂甙对PC12具有明显的缺氧保护作用，其抗缺氧损伤的作用与促进缺氧诱导因子1α的表达有关。     

HIF-1α在晚期NSCLC中的表达研究

目的缺氧诱导因子-1α(Hypoxia Inducible Factor-1 alpha,HIF-1α)是缺氧条件下产生的转录因子,在恶性实体瘤中广泛表达。本研究探讨HIF-1α在晚期非小细胞肺癌中表达的意义。方法选择60例经病理确诊的晚期非小细胞肺癌患者(鳞癌31例,腺癌24例,大细胞癌5例),应用免疫组织化学法检测HIF-1α蛋白的表达。同时应用含紫杉醇和或顺铂方案化疗,紫杉醇175 mg/m2加生理盐水500 ml匀速缓慢静脉滴注3小时,d 1;顺铂:25 mg/m2,d2-4。按照RECIST1.1标准评价,2周期后判定疗效。观察HIF-1α表达与化疗疗效相关性。结果 60例非小细胞肺癌组织中HIF-1α表达阳性率为60%(36/60)。化疗疗效:CR 2例、PR 13例、SD 14例、PD 7例,有效率(RR)41.6%,疾病控制率(DCR)80.5%。HIF-1α阴性表达为40%(24/60),化疗疗效:CR 1例、PR 10例、SD 7例、PD 6例,有效率(RR)45.8%,疾病控制率(DCR)75%。二者之间无显著性差异(P0.05)。结论 HIF-1α在晚期非小细胞肺癌中的表达与含紫杉类加铂类方案的治疗疗效无明显相关性,若想作为预后的预测因子尚需进一步的研究探讨。     

胰腺癌组织中缺氧诱导因子-2α的表达及临床意义

目的探讨胰腺癌中缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)的表达,并观察HIF-2α的表达对患者预后生存的影响。方法选取62例胰腺癌标本,采用免疫组织化学方法对胰腺癌组织中的HIF-2α表达进行检测,分析其与临床病理特征及预后生存的关系。结果32例胰腺癌组织HIF-2α表达阳性,阳性表达率51.6%(32/62)。10例正常胰腺组织HIF-2α表达均阴性。HIF-2α阳性表达于细胞质。HIF-2α在胰腺癌组织中的表达与肿瘤TNM分期、血管侵犯有关,差异具有统计学意义(χ2=6.452,4.089;P均<0.05),而HIF-2α在胰腺癌组织中的表达与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级无关,差异无统计学意义(χ2=0.008,0.001,0.518,1.004,2.325,1.617;P均>0.05)。胰腺癌中HIF-2α阴性组病例3年生存率为30%,而HIF-2α阳性组病例3年生存率为6.25%,两组之间差异具有统计学意义(χ2=5.984,P<0.05)。结论HIF-2α在胰腺癌组织中高表达可能与肿瘤发生、发展密切相关,HIF-2α有望成为胰腺癌新的治疗靶点和预后标志物。     

缺氧诱导因子-1α在膀胱癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在膀胱癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术对30例新鲜的膀胱癌患者的肿瘤组织和15例正常膀胱组织检测HIF-1α的表达情况,比较两组之间的差异。结果 30例膀胱癌组织中23例（76.7%）呈阳性表达,而15例正常膀胱组织中仅1例阳性表达,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 HIF-1α蛋白的高表达可能与膀胱癌的发生、发展和复发有关。     

HIF-1α及其在视网膜缺氧相关疾病中的研究进展

HIF-1是Semenza GL等1992年发现的一种氧依赖转录激活因子，HIF-1的发现使人们对缺氧缺血状态下机体的各种应答反应机制的研究更加深入。HIF-1是细胞中调节血管生成主要缺氧反应信号蛋白，它能诱导多达70多种转录因子瞳一，包括促红细胞生成素（EPO）、糖酵解酶、诱导型一氧化氮合酶（INOS）和血管内皮生长因子（VEGF）等，这些基因涉及血管发生、红细胞生成、能量代谢、细胞凋亡和增殖等多方面，在细胞和机体的生理病理反应中至关重要。通过纯化证实HIF-1由120000的a亚单位和91～94000的8亚单位组成，其中HIF-1α则为HIF-1所特有，其活性和表达决定HIF-1的生理活性。HIF-1特别是HIF-1α在缺氧相关疾病中的作用越来越受到人们的重视。故本文对HIF-1α及其在视网膜相关疾病中的研究进展作一综述。     

HIF-1α在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在上皮性卵巢癌中的表达及意义。方法采用免疫组化方法,检测了101例上皮性卵巢癌组织中和18例正常卵巢组织中HIF-1α的表达。结果卵巢癌组织中HIF-1α表达率较正常卵巢组织明显增高,P<0.05。在手术-病理分期的各期卵巢癌组织中HIF-1α均有阳性表达,各组间无统计学差异,P>0.05。在浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、子宫内膜样癌和透明细胞癌中HIF-1α均有阳性表达,各组间无统计学差异,P>0.05。结论HIF-1α在上皮性卵巢癌组织中表达明显增高,提示HIF-1α可能成为一种新的上皮性卵巢癌的肿瘤标记物。     

刺五加皂甙保护PC12细胞活性与缺氧诱导因子1α的表达

目的:观察刺五加皂甙对正常培养和缺氧条件下PC12细胞的活性和缺氧诱导因子1α表达的影响,探讨刺五加皂甙抗神经元缺氧损伤的可能机制。方法:实验于2004-09/2005-05在南通大学医学院航海医学研究所进行。培养大鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞株,加入终浓度为0.05mg/L的神经生长因子和终浓度为125mmol/L的氯化钴分别建立神经生长因子诱导PC12细胞分化的神经元模型和氯化钴诱导缺氧的模型;四甲基偶氮唑法检测12.5,25,50,100,150mg/L的刺五加皂甙对正常培养的和氯化钴诱导缺氧的PC12细胞活性的影响;蛋白免疫印迹检测刺五加皂甙对正常培养和氯化钴诱导缺氧的PC12细胞中缺氧诱导因子1α表达的影响,以上实验均以神经生长因子作为阳性对照。结果:①正常培养的PC12细胞为圆形,呈簇状生长。50mg/L神经生长因子诱导3d后,细胞停止增殖,部分PC12细胞开始呈现出神经元样的形态,产生类似于神经元的突起。随着诱导时间延长神经元样的细胞逐渐增多,至第7天,PC12细胞的突起形成网络。②12.5～100mg/L的刺五加皂甙可增加正常培养PC12细胞的活性,其中50mg/L刺五加皂甙作用最强。50mg/L刺五加皂甙的预处理可降低因缺氧引起的细胞活性的下降(P<0.01),其作用与50mg/L神经生长因子相当(P>0.05)。③正常培养的PC12细胞不表达缺氧诱导因子1α,氯化钴引起的缺氧可诱导PC12细胞表达缺氧诱导因子1α,刺五加皂甙、神经生长因子也可诱导缺氧诱导因子1α表达;刺五加皂甙和神经生长因子的预处理可以进一步增强缺氧PC12细胞中缺氧诱导因子1α的表达(P<0.01),刺五加皂甙和神经生长因子的作用差异无显著性(P>0.05)。结论:50mg/L的刺五加皂甙对PC12具有明显的缺氧保护作用,其抗缺氧损伤的作用与促进缺氧诱导因子1α的表达有关。     

缺氧诱导因子-1α在创伤性脑损伤中的作用

创伤性脑损伤(TBI)是近几十年来全球范围内致死率和致残率最高的疾病之一。TBI导致损伤区的脑血流量下降,使损伤区神经元发生缺血缺氧性改变,从而激活缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)。HIF-1α作为一种氧敏感性转录调控因子,通过调节其下游一系列蛋白的表达,在TBI的发生发展过程中发挥关键作用。然而,关于HIF-1α在TBI中的作用在目前研究中仍存在争议。本篇综述主要围绕HIF-1α的作用机制、在TBI中的作用以及与TBI的关系展开讨论。     

缺氧诱导因子HIF-1α、3α在血管瘤不同时期的表达和意义

目的 探讨缺氧在血管瘤不同时期的表达和作用.方法 采用免疫组化SP法测定24例增生期血管瘤和18例消退期血管瘤中缺氧染色阳性率,HIF-1α、HIF-3α、VEGF、Ki-67和细胞凋亡表达情况.结果 24例增生期血管瘤中缺氧染色阳性率为80%(19/24),HIF-1α阳性指数为(23.40±4.73)、HIF-3α为(7.90±2.15)、VEGF为(16.90±3.34)、Ki-67为(57.60±11.33)、细胞凋亡指数为(4.50±1.51);而消退期血管瘤中缺氧染色阳性率为90%(16/18),HIF-1α为(9.50±2.67)、HIF-3α为(19.80±2.43)、VEGF为(2.70±0.32)、Ki-67为(11.20±2.65)、细胞凋亡指数为(11.40±2.67).不同时期血管瘤表达的HIF-1α、HIF-3α、VEGF、Ki-67、细胞凋亡指数均有显著性差别(P＜0.05).结论 缺氧是血管瘤不同时期的普遍现象,但对增殖期血管瘤的作用是通过HIF-1α促进内皮细胞繁殖,而对消退期血管瘤是通过HIF-3α促进其凋亡.     

缺氧诱导因子-1α在食管鳞癌中的表达及意义

目的:探讨食管鳞癌组织中缺氧诱导因子-!(HIF-1α)的表达及其与肿瘤临床病理特征之间的关系。方法:应用免疫组化方法分别检测62例不同期别食管鳞癌和52例正常食管上皮组织中HIF-1α的表达,比较食管鳞癌和正常食管上皮及不同类型、期别食管鳞癌中HIF-1α表达的差异。结果:食管鳞癌组织中HIF-1α的表达较正常食管上皮组织显著增加(P<0.01),且HIF-1α的表达在不同食管癌组织分级、浸润深度、淋巴结转移间差异有显著性(均P<0.05)。结论:HIF-1α可能与食管鳞癌的发生、侵袭和转移相关。HIF-1α有可能作为判定食管鳞癌临床病理特征的重要指标。     

新生大鼠缺氧缺血性脑病时HIF-1α基因表达的变化

目的 了解新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)时低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达的变化,以期寻找更为有效治疗手段.方法 24只7日龄新生SD大鼠,随机分成2组,假手术组和缺氧缺血组,根据处死时间点每组分成1 d和3 d两个小组,每组6只.缺氧缺血组结扎左颈总动脉后休息1 h,再置于8%氧浓度的低氧环境中2 h,分别于实验1 d、3 d乙醚麻醉下处死动物,留取脑组织,半数中性甲醛溶液固定,半数液氮保存,采用HE染色、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化,在蛋白和mRNA水平检测新生大鼠HIE时HIF-1α基因的表达.结果 缺氧缺血组大鼠相继表现为烦躁不安、全身发绀,呼吸加深加快、站立不稳、嗜睡、激惹或间断发作的痉挛和抽搐;HE染色显示:左侧大脑皮层出现局灶性神经元核固缩、核碎裂、核仁偏位、不清或消失、基质疏松;脑组织HIF-1αmRNA表达较对照组增加,尤其是缺氧缺血3 d组,但差异无统计学意义;免疫组化显示:缺氧缺血组1 d组和3 d组各时间点、各大鼠大脑皮层和海马区均可见不同程度的HIF-1α表达,明显高于假手术组(P=0.00),阳性表达主要在血管内皮细胞,海马和皮层的锥体细胞亦有HIF-1α阳性细胞分布.结论 新生大鼠缺氧缺血性脑病时HIF-1基因表达增强,主要表现在大脑血管内皮细胞.     

心肺复苏大鼠脑红蛋白缺氧诱导因子-1α的表达变化

目的 研究大鼠心肺复苏后不同时间点脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在mRNA水平表达中的变化规律,探讨Ngb在心脏骤停后脑缺血缺氧损伤病理变化中的作用机制及其诱导表达途径.方法 SD雄性大鼠40只随机分为五组(n=8):假手术组及复苏后1 h、6 h、12 h、24 h组.窒息法致大鼠心脏骤停后予以心肺复苏,复苏后不同时间点处死大鼠,应用RT-PCR法观察脑组织Ngb mRNA、HIF-1α mRNA表达情况.结果 复苏组脑组织Ngb mRNA表达高于假手术组(P<0.05),并于损伤后12 h达高峰;与假手术组比较,复苏组脑组织HIF-1α mRNA表达增加(P<0.05),且于复苏后1 h、6 h、12 h、24 h呈持续上升趋势.结论 大鼠心脏骤停后早期脑组织Ngb mRNA、HIF-1α mRNA表达增加,且呈时相性改变.     

Uqcrc1的 RNA 干扰片段筛选及其对 H9C2心肌细胞耐受缺氧/复氧损伤的影响

目的：筛选泛醇-细胞色素c还原酶核心蛋白（Ubiquinol-cytochrome c reductase core protein 1, Uqcrc1）高效的 RNA 干扰片段,探讨 Uqcrc1基因沉默对大鼠 H9C2心肌细胞耐受缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤的影响。方法制备三种针对Uqcrc1的RNA干扰片段,采用RT-PCR和Western blot检测Uqcrc1 RNA干扰片段转染后Uqcrc1基因和蛋白的表达,从中筛选出最有效的RNA干扰片段及转染浓度,采用MTT法和LDH试剂盒分别检测H/R损伤后H9C2心肌细胞的存活率和LDH漏出率。结果靶序列为CCGUUGCUGUAGCUAACAAdTdT的siUqcrc1片段对Uqcrc1 mRNA的抑制作用最明显,在转染浓度为200 nmol/L时对Uqcrc1蛋白表达抑制最明显。靶向Uqcrc1的RNA干扰片段转染降低了H9C2心肌细胞耐受H/R损伤的能力。与阴性对照组相比,Uqcrc1基因沉默组H9C2心肌细胞H/R损伤后的存活率显著降低,LDH漏出率升高（P＜0.01）。结论 Uqcrc1在心肌细胞耐受H/R损伤中起了重要作用,它可能是心肌保护的又一个关键靶点。