雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。     

重楼含药血清对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨重楼治疗肾小球疾病的作用机制。 方法 以脂多糖诱导MC增殖。提取大鼠的含药血清作用于体外培养的大鼠系膜细胞(MC)，观察重楼对MC增殖、凋亡的影响。用活细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖。以Hoechst染色及流式细胞仪检测细胞凋亡。用RT-PCR检测bcl-2 mRNA水平。 结果 重楼含药血清可抑制MC异常增殖、诱导MC凋亡，呈剂量依赖性。重楼各剂量组MC凋亡率[低、中、高剂量组分别为（11.72±0.32）％、（19.76±0.35）％、（18.71±0.41）％]较脂多糖组[（4.68±0.25）%]均显著增高(P均< 0.01)，重楼中剂量组与低剂量组间差异有统计学意义(P < 0.01)。重楼各剂量组MC bcl-2 mRNA表达[低、中、高剂量组分别为（51.06±0.77）％、（44.06±0.66）%、（35.68±0.67）％]较脂多糖组[（59.62±1.12）％]显著减少(P < 0.01)。重楼呈剂量依赖性降低MC bcl-2 mRNA表达水平(P < 0.01)。 结论 重楼含药血清可抑制MC增生和诱导MC凋亡，其机制可能与抑制抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达有关。     

保肾片对人系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 :探讨对慢性肾衰竭治疗有效的中药复方保肾片对人系膜细胞生物学行为的影响。方法 :以健康志愿者服用保肾片 ,取不同浓度含药人血清加入系膜细胞培养体系中。应用MTT法和流式细胞仪检测系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果 :含中药保肾片的血清组 ,与正常人血清对照组相比 ,显著抑制人系膜细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,并且使大量系膜细胞阻滞在G0 /G1期 ,能诱导人系膜细胞发生凋亡。结论 :保肾片延缓慢性肾衰竭进展的作用机理之一是抑制系膜细胞增殖和促其凋亡。     

甲状旁腺素对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的观察甲状旁腺素(PTH)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及凋亡的影响,并探讨其作用的可能机制。方法体外培养的大鼠系膜细胞经不同浓度的PTH作用后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡,吖啶橙荧光活体染色观察细胞凋亡形态,免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测c-jun、c-fos表达。结果PTH持续刺激GMC6h、12h时,10-11～10-9mol/L浓度范围内,促进细胞增殖(P<0.05);10-9mol/L在12h达高峰,并可使G0～G1期细胞减少,S G2M期细胞增多,并能明显促进c-jun、c-fos的表达(P<0.01),而10-8mol/L无明显作用;刺激24h时各浓度均无作用;刺激48h各浓度明显抑制大鼠系膜细胞增殖(P<0.01),且使细胞阻滞在G0～G1期,不能进入S期,并能明显抑制c-jun、c-fos的表达(P<0.01)。PTH不诱导GMC凋亡。结论PTH体外刺激GMC增殖与作用时间及剂量相关,低浓度短时间作用刺激GMC增殖,持续作用抑制GMC增殖,其作用与c-jun、c-fos的表达有关,并影响细胞周期。PTH对体外培养的大鼠GMC凋亡无诱导作用。甲状旁腺机能亢进可能参与了慢性肾病残余肾功能进一步恶化的病理过程。     

褪黑素对高糖条件下培养的大鼠系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

糖尿病肾病（DN）晚期肾脏细胞凋亡与肾功能恶化程度成正比，抑制凋亡则可延缓肾小球硬化。褪黑素（MT）是松果体分泌的神经内分泌激素，肾脏是其靶器官之一。研究显示MT对DN肾脏有明显的保护作用，但MT对DN晚期肾小球系膜细胞（MC）凋亡的影响尚未检索到有关报道。本试验选用大鼠MC为研究对象，来观察MT对高糖诱导的MC凋亡的影响。     

细胞间粘附分子对肾小球系膜细胞增殖的影响

近年来免疫病理学研究已证实细胞间粘附分子-1(ICAM-1)作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一,通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成粘附,在免疫监督、炎症反应和动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用。因此,有关ICAM-1与肾小球系膜细胞增殖的相关研究对进一步阐明肾小球炎性疾病的发病机理及治疗的进展具有重大意义。 一、材料与方法 1.按经典方法培养、鉴定C57BL/6小鼠肾小球系膜细胞及巨噬细胞,选取第4～6代细胞用于本实验。 2.取系膜细胞,胰酶消化后,将制成的浓度为1.0×10~4/L细胞悬液加入24孔培养板内,正常对照组和     

性激素对系膜细胞增殖的影响

由肾小球肾炎和高血压性肾小球硬化所致的终末期肾功能衰竭中男性发病率高于女性。多种肾脏病发展男性快于女性［１］。肾小球硬化包括细胞增殖和细胞外基质合成，我们实验观察性激素对体外培养大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）增殖和基质合成的直接影响。一、材料和方法１．ＭＣ的培养与鉴定：雄性ＳＤ大白鼠４只，６～８周龄，１５０～２００ｇ，由河南医科大学动物实验中心提供。ＭＣ的培养与鉴定按谌贻璞等建立的方法进行［２］。２．性激素对ＭＣ增殖的影响：（１）对活细胞计数的影响：将亚培养第五代ＭＣ种于２４孔（１００００个／孔）培…     

辛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖、凋亡及细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响

目的 观察辛伐他汀(simvastatin)诱导大鼠系膜细胞增殖、凋亡及可能参与其中的凋亡信号通路，探讨他汀类药物非降脂依赖性肾保护作用的相关机制。方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定系膜细胞的增殖状况。透射电子显微镜、碘化丙啶染色(PI)流式细胞仪(FCM)分析检测系膜细胞的凋亡。活化半胱氨酸检测试剂盒定性及定量检测细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达。结果 (1)MTT检测显示辛伐他汀可显著抑制大鼠系膜细胞的增殖(P < 0.05)。(2)辛伐他汀处理细胞24 h后，电镜下可见细胞体积缩小、染色质浓染、致密、边移和凋亡小体形成；FCM检测均可见亚二倍体凋亡峰。定量分析发现，系膜细胞数量与辛伐他汀浓度呈剂量依赖性(P < 0.05)。(3)活化半胱氨酸检测到辛伐他汀组细胞内caspase-3的表达，并且随药物浓度和作用时间的增加而增加。结论 辛伐他汀非降脂依赖的肾保护作用的作用机制之一是诱导系膜细胞凋亡，从而抑制其增殖，其机制可能与激活caspase-3有关。     

金水清对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的:通过观察中药复方金水清对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MC)增殖及凋亡的影响,探讨其治疗小儿血尿的作用机制.方法:以噻唑蓝法检测MC的增殖,荧光显微镜下观察MC的凋亡形态,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果:在1 000～62.5 μg/L浓度范围内,金水清能抑制MC增殖,可使G0～G1期细胞增高,S、G2-M期细胞减少,且呈浓度依赖关系,并能明显诱导MC凋亡.结论:MC是金水清发挥作用的重要靶细胞,金水清可能通过:(1)减少细胞有丝分裂,干扰细胞周期,抑制系膜细胞的增殖及代谢活性;(2)诱导系膜细胞的凋亡等环节发挥抑制MC增殖的作用,从而减少炎性因子的合成与释放,减少细胞外基质的聚积,达到治疗小儿血尿,延缓慢性肾脏病理进程的目的.     

洛伐他丁对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：研究他丁类降脂药物对肾小球系膜细胞增殖的影响。方法：应用羟甲基戊二酰辅酶A（HMG－CoA)还原酶抑制剂洛伐他丁来观察其对培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。用含有或没有洛伐他丁和甲羟戊酸及其代谢产物的10％胎牛血清或血小板源生长因子（PDGF）刺激培养的大鼠肾小球系膜细胞，然后用测定溴化脱氧尿嘧啶核苷（BrdU)的整合来评估DNA的合成并测定细胞的数量，结果：洛伐他丁对10％的胎牛血清刺激系膜细胞DNA的合成抑制是剂量依赖性，并且能够抑制细胞的生长，甲羟戊酸，焦磷酸牛儿基牛儿酯能够显著地逆转洛伐他丁的抑制作用。结论：洛伐他丁通过影响甲羟戊酸的合成抑制鼠肾小球第膜细胞的增殖，这可能为治疗系膜增殖性肾小球疾病提供一个新的方法。     

洛伐他汀对系膜细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的 观察洛伐他汀对系膜细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因表达的影响。并探讨其作用的可能机制。方法 用不同浓度的洛伐他汀处理大鼠系膜细胞，用流式细胞仪观察细胞凋亡指数，吖啶橙荧光活体染色观察细胞凋亡率，电镜观察凋亡细胞形态，免疫印迹法及细胞免疫结合图文分析观察洛伐他汀对系膜细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响。结果 洛伐他汀对系膜细胞凋亡有明显诱导作用，呈一定剂量依赖性；并能明显抑制Bcl-2基因表达，促进Bax基因表达，致使两者比例明显下降。结论 洛伐他汀可剂量依赖性地诱导大鼠系膜细胞凋亡，其机制可能通过对凋亡抑制或促进基因的调控，改变Bcl-2/Bax比值而诱导MC的凋亡。     

醛固酮对肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的 研究醛固酮（Ald）对大鼠肾小球系膜细胞（MC）凋亡的影响并探讨其可能机制。 方法 24只SPF级SD大鼠,腹腔埋置渗透性微泵,随机分为对照组（Con组,生理盐水代替Ald处理28 d;n=8）、Ald输注组（Ald组,1.5 μg/h,28 d;n=8）、依普利酮干预组（Epl组,Ald 1.5 μg/h+依普利酮 100 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1,28 d;n=8）。药物处理0 d、7 d、14 d、21 d、28 d时,分别测量大鼠尾动脉收缩压并收集24 h尿液,测定尿白蛋白排泄率（UAER）;于28 d时心脏采血并分离大鼠双侧肾脏,检测血肌酐、血钾及血Ald水平;PAS染色观察肾小球病理改变;TUNEL法检测MC凋亡。体外培养大鼠MC,Annexin V-PI双染流式细胞仪检测MC凋亡;实时定量PCR检测Bcl-2、Bax mRNA表达,Western印迹检测Bad磷酸化水平。 结果 Ald组大鼠血压及UAER自7 d时起显著高于同期Con组（P < 0.05）,28 d时Ald组大鼠血浆Ald水平约为Con组的6倍（P < 0.05）,血钾显著低于Con组（P < 0.05）,血肌酐与Con组差异无统计学意义（P > 0.05）。PAS染色显示Ald组大鼠肾小球系膜区增宽,基质增多,部分出现节段硬化。TUNEL检测发现,Ald组大鼠MC凋亡显著高于Con组及Epl组（均P < 0.05）。体外实验发现,随着Ald作用时间的延长,MC凋亡数明显增加（P < 0.05）;Ald组Bcl-2 mRNA表达下降（P < 0.05）,Bax mRNA表达升高（P < 0.05）;Ald组Bad蛋白磷酸化水平显著低于Con组（P < 0.05）。依普利酮能显著逆转Ald诱导的上述作用。 结论 Ald能促进大鼠MC凋亡,依普利酮干预可以明显降低Ald的促凋亡效应。Bad蛋白的去磷酸化作用可能是Ald致MC凋亡过程中的重要环节。     

尿激酶型纤溶酶原激活物对高糖诱导大鼠系膜细胞增殖及表型转化的影响及其机制

目的 通过体外培养大鼠系膜细胞（MC）,观察尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）对高糖环境下MC增殖及表型转化的影响及其可能的信号转导机制。 方法 体外培养大鼠MC,分为4组：对照组、高糖组、高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组。MTT法检测各组MC增殖情况。流式细胞仪分析各组MC细胞周期改变。Western印迹法检测各组MC表达CDK2与p27Kip1变化,并测定MC中信号蛋白Akt的活性。激光共聚焦显微镜检测各组MC中α-SMA表达方式及表达量变化。 结果 培养24 h后高糖组MC增殖程度较对照组显著增加（P < 0.01）,渥曼青霉素与uPA组可明显抑制细胞增殖（P < 0.01）。高糖刺激Akt活性,渥曼青霉素与uPA组Akt活性均较高糖组显著降低（均P < 0.01）。高糖组MC培养24 h后, p27Kip1蛋白表达较对照组显著减少（P < 0.01）;高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组p27Kip1蛋白表达均较高糖组显著增加（均P < 0.01）;各组CDK2蛋白表达无明显变化。高糖组MC培养24 h后,胞质中α-SMA表达较对照组显著增加（P < 0.01）,并在核周出现聚集;高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组α-SMA表达量均较高糖组显著减少（均P < 0.01）,其分布与对照组无显著差异。 结论 uPA可能通过抑制Akt信号分子活性,上调p27Kip1表达,拮抗高糖所致MC增殖与表型转化。     

苯肾上腺素对体外培养人前列腺平滑肌细胞增殖及凋亡的作用

目的探讨苯肾上腺素（PE）对体外培养人前列腺平滑肌细胞增殖及凋亡的作用。方法将原代培养得到的3—5代人前列腺平滑肌细胞随机分组，各组加入浓度为0．1μmol／L～100μmol／L的PE和／或10μmol／L a1受体阻滞剂酚妥拉明（Ph），以噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖情况．原位凋亡法（TUNEL）检测细胞凋亡情况。结果PE浓度大于1μmol／L时对前列腺平滑肌细胞有诱导增殖和抗凋亡作用（P均〈0.05），并且存在浓度依赖性。r分别为0．90和-0．893（P均〈0．05）；10μmol／L Ph能够拮抗PE的诱导增殖和抗凋亡作用（P〈0．01）。结论PE可以通过a1受体信号传导途径诱导体外前列腺平滑肌细胞增殖增加和凋亡减少。     

咪唑立宾对大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨咪唑立宾（MZ）对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其对细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物p27^kip1表达的影响。方法大鼠系膜细胞同步后分为无血清组、20％FCS刺激组、20％FCS＋MZ组。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞数。BrdU标记法检测S期细胞。流式细胞仪检测细胞周期。Western印迹检测p27^kip1蛋白的表达。结果MZ可抑制20％FCS刺激所致的系膜细胞增殖，呈剂量依赖性。与20％FCS刺激组比较，20％FCS＋MZ组S期细胞的百分比显著降低[（10．28±1．26）％比（21．04±5．38）％，P〈0．05]。MZ可改善由20％FCS刺激诱导的GO／G1期细胞减少[（83．53±2．50）％比（71．15±1．25）％]和S期细胞增加[（12．22±1．22）％比（23．19±0．38）％，P〈0．051。20％FCS刺激后p27^kip1蛋白表达显著下降，MZ上调p27^kip1蛋白表达。结论MZ能够有效抑制系膜细胞增殖，作用时相在G1／S期转化，其抑制系膜细胞增殖的作用部分是通过上调p27^kip1蛋白表达实现的。