全反式维甲酸诱导人胃癌细胞凋亡

目的探讨不同分化程度的胃癌细胞凋亡情况和全反式维甲酸对其影响。方法以人胃癌细胞系低分化的ＭＫＮ４５和高分化的ＭＫＮ２８细胞作为研究对象，以不同浓度的全反式维甲酸干预其７２小时后，以原位ＤＮＡ断段切口标记法和ＤＮＡ琼脂糖电泳检测细胞凋亡情况。结果两种细胞系的凋亡率均低于５％，全反式维甲酸干预后凋亡指数上升，且可能与药物浓度有关。结论全反式维甲酸可诱导胃癌细胞凋亡。     

奥曲肽诱导体外培养人胃癌细胞MGC-803凋亡的研究

目的研究不同浓度，不同作用时间奥曲肽（Oct）对体外培养胃癌细胞MGC-803的作用及可能机制．方法采用MTT比色法检测Oct对体外培养胃癌细胞生长的抑制作用．用DNA断片法和流式细胞仪观察了Oct对胃癌细胞凋亡的影响，扫描电镜和透射电镜同时显示了凋亡细胞的形态学特征．结果MTT比色法测得Oct对胃癌细胞增殖有明显的抑制作用，呈剂量相关性Oct能有效地诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡．经Oct处理12h～48h的胃癌细胞，DNA琼脂糖电泳呈现典型的梯形条带（Ladder），电镜和流式细胞仪（FcM）检测出现典型凋亡特征结论Oct对胃癌MGC-803细胞生长增殖有抑制作用；能有效地诱导人胃癌细胞MGC－803凋亡；是潜在的抗癌剂     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的研究紫杉醇诱导人胃癌细胞凋亡及端粒酶活性变化.方法采用0.001～1 μmol·L-1的紫杉醇处理SGC 7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP-银染法测定端粒酶活性变化.结果不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性.光镜及流式细胞术分析表明,0.01μmol·L-1的紫杉醇处理后24 h,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,12 h相对端粒酶活性为96,24 h为58,48 h为28,72 h起变为阴性.结论紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一.     

氟尿嘧啶对肝癌细胞凋亡的诱导

我们观察氟尿嘧啶（５—ＦＵ）是否能够诱导人肝癌细胞凋亡，进一步揭示５－ＦＵ的作用机制，同时寻找提高５—ＦＵ的临床疗效的辅剂。将人肝癌细胞ｂｅｌ ７４０２按常规条件培养于含１０％小牛血清的无Ｌ－精氨酸的ＤＭＥＭ培养液中。在５—ＦＵ作用下，用电镜观察凋亡细胞的形态，流式细胞仪进行凋亡细胞的定量。用免疫组织化学法观察５—ＦＵ诱导诱生型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表达情况，并在其底物Ｌ－精氨酸存在的前提下，用酶法测定硝酸盐、亚硝酸盐，反映一氧化氮（ＮＯ）的生成，并证明其作用。用Ｌ－精氨酸的竞争性拮抗剂Ｌ—…     

TNFα诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡的时间效应

目的探索肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律．方法用细胞体外培养方法，以ＴＮＦα１×１０８Ｕ／Ｌ作用人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞０ｈ～４８ｈ，经ＨＥ染色和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色，光镜观察细胞的形态改变并计算凋亡百分率；ＤＮＡ抽提、琼脂糖凝胶电泳，检测ＤＮＡ断裂情况．结果随作用时间由０，１２，２４，３６延长到４８ｈ，Ｌｏｖｏ细胞渐出现明显的凋亡形态学改变，凋亡百分率分别为２０４％，６５９％，２３８９％，６０４７％，９２６６％（Ｐ＜００１）；作用４８ｈ，ＤＮＡ电泳出现梯形条带．结论ＴＮＦα能够诱导人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞凋亡，并存在时间效应．     

C-myc反义寡脱氧核苷酸抑制类风湿滑膜细胞增生诱导滑膜细胞凋亡

目的 研究硫代磷酸化修饰的c—myc反义寡脱氧核苷酸(antisens phosphorothioate oligodeoxynucleotides，ASP-ODN)在血清存在条件下对培养的人类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)滑膜B型细胞增生的影响及诱导凋亡的作用。方法 培养RA滑膜B型细胞，合成c—myc AS P-ODN，以阳离子脂质体。lipofectin为载体转染滑膜B型细胞，用显微镜观察和四唑盐(MTT)法检测对细胞增生的抑制作用，用荧光染色、荧光显微镜、流式细胞仪检测诱导细胞凋亡和c—myc蛋白表达的变化。结果c—myc AS P-ODN呈序列特异性抑制滑膜B型细胞增生并下调c—myc蛋白表达，诱导滑膜B型细胞凋亡。结论 c—myc AS P-ODN可能对RA的滑膜增生性炎症具有潜在的治疗作用，c—myc原癌基因可能成为反义核酸技术治疗RA的靶基因。     

线粒体损伤在幽门螺杆菌诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的研究线粒体途径在幽门螺杆菌(Hp)诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用。方法采用Westernblotting检测细胞内线粒体DNA细胞色素氧化酶(COX)Ⅰ蛋白表达的含量;流式细胞术测定细胞凋亡和线粒体膜电位变化。结果Hp培养滤液呈剂量和时间依赖性地直接诱导SGC-7901细胞凋亡,随着其浓度的增加,细胞的凋亡率呈上升的趋势。Hp培养滤液处理SGC-7901细胞4h后,线粒体膜电位开始降低,8h后下降更明显,12h已基本降至最低,24h后无明显变化。Hp培养滤液作用胃癌细胞后,线粒体DNACOXⅠ蛋白表达明显低于对照组(632·8±40·6vs895·1±44·2,P<0·05)。结论线粒体途径可能在Hp诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡过程中起重要作用。     

化疗药物对肺癌细胞凋亡诱导作用的研究

目的探讨化疗药物鬼臼乙叉甙（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ，Ｖｐ１６）及中成药得力生对肺癌细胞凋亡的诱导作用。方法采用电镜、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ原位末端标记和流式细胞术（ＦＣＭ）检测凋亡细胞。结果Ｖｐ１６及得力生在一定的作用时间与剂量下均能诱导小细胞肺癌和腺癌细胞的凋亡，凋亡细胞有典型的形态学改变及ＤＮＡ梯形带形成，ＦＣＭ检测凋亡细胞处于低ＤＮＡ含量位置（ＰｒｅＧ１峰），ＴＵＮＥＬ荧光染色能将凋亡细胞的形态与定量计数结合起来。结论Ｖｐ１６及得力生均能成功诱导肺癌细胞凋亡，此种诱导作用呈药物作用浓度及时间依赖性     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡影响的体外研究

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞的凋亡异常,以及三氧化二砷(As_2O_3)对体外培养RA的滑膜细胞凋亡的诱导作用.方法 用光镜、电镜、流式细胞仪检测As_2O_3对体外培养的RA滑膜细胞凋亡的诱导作用,As_2O_3,作用于RA滑膜后酶联免疫吸附试验(ELISA)检测凋亡过程中细胞色素C的变化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Caspase-3.Bel-2 mRNA表达,采用单因素方差分析和LSD-t检验、Dunnet-t检验进行统计学处理.结果 流式细胞仪检测发现不同浓度的As_2O_3作用后,滑膜细胞的凋亡较空白对照组(NC)增加[NC(0.95±0.87)%,RA(0.21±0.12)%,P<0.05],呈一定的剂量依赖性,尤其以80 μmol/L药物浓度最为明显.凋亡早期(6 h)细胞色素C水平升高80 μmol/L组升高明显[NC(0.34±0.27),80 μmol/L组(32.04±1.62),P<0.05];不同浓度的As_2O_3作用后细胞中Caspase-3 mRNA表达显著增强[NC(0.144±0.022),RA(0.323±0.047),(0.824±0.109),(1.213±0.196),P<0.05],Bcl-2的mRNA表达显著减弱[NC(1.08±0.23),RA(0.94±0.15),(0.46±0.08),(0.22±0.06),P<0.05].结论 RA患者滑膜细胞凋亡较健康埘照减少,As_2O_3通过升高细胞色素c及Caspase-3,抑制Bcl-2诱导RA滑膜细胞凋亡.     

沙丁胺醇在诱导培养人气管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的 研究沙丁胺醇（商品名：舒喘灵）对于诱导培养人气管平滑肌细胞凋亡的作用。 方法 分离人气管平滑肌细胞并且在含有10％胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔（DMEM）培养基中培养,4－6代的细胞用于实验。细胞用沙丁胺醇或色满卡林（cromakalim)或8－溴－环磷酸腺苷（Br-Camp)培养24h或48h ,光镜和电镜观察形态学改变。琼脂糖电泳分析DNA碎片。链亲和素－过氧化物酶（SP）免疫组化染色监测p53、Bcl－2和Bax基因表达的改变。通过破碎DNA的原位末端标记技术（TUNEL）检测凋亡细胞的百分数。结果 （1）沙丁胺醇或8－Br-cAMP降低存活细胞的数目。在48h、300μmol/L的浓度,存活的细胞数量最低;（2）人气管平滑肌细胞用沙丁胺醇（100μmol/L、300μmol/L)孵化48h显示出凋亡的形态学特征（细胞皱缩、染色质浓聚）;（3）琼脂糖电泳显示,核酸DNA断裂片呈典型的梯状条带（大约180－200bp);（4）沙丁胺醇或8－Br-cAMP组p53或Bax基因表达显著高于对照组,但Bcl－2组基因表达低于对照组;（5）TUNEL显示,人气管平滑肌细胞的凋亡阳必用100、300μmol沙丁胺醇或100μmol8-Br-cAMP处理组与对照组比较差异有显著性（q分别为24．04、58．47、27．28,P均＜0．001）。但cromakalim组和先用普萘洛尔（商品名：心得安）后与沙丁胺醇组与对照组比较,差异无显著性（q分别为0．12、0．53;P分别为0．932、0．717）,不影响凋亡细胞的基本水平。结论 （1）在体外,沙丁胺醇以时间和浓度依赖的方式诱导人气管平滑肌细胞凋亡。（2）cAMP蛋白激酶A通路对于沙丁胺醇诱导的凋亡是必须的和充分的。     

FasL基因转染诱导类风湿关节炎患者滑膜细胞凋亡的实验研究

目的通过构建FasL重组质粒并转染原代培养的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞,研究FasL基因对体外培养的RA滑膜细胞的凋亡诱导作用,寻找针对RA关节腔内基因治疗的有效靶基因.方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增FasL cDNA全长片段,经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,将FasL基因导入真核表达载体pcDNA3.1-neo;体外原代培养RA患者及正常人的滑膜细胞:脂质体包裹真核表达质粒pcDNA3.1-FasL及空质粒pcDNA3.1-neo,分别转染处于指数生长期的RA患者及正常人的滑膜细胞;经G418筛选,采用形态学、TUNEL法及Annexin Ⅴ/碘化丙啶(PI)染色等方法检测各组滑膜细胞的凋亡情况.结果FasL基因原核及真核重组质粒载体顺利构建,基因序列检测结果与国外报道完全一致;RA患者及正常人的滑膜细胞原代培养、传代顺利完成;RA患者滑膜细胞转染FasL重组质粒(rhFasL)15 h后,光镜下可见大量细胞体积缩小、扭曲、变形,胞核中出现颗粒样物质,少数细胞脱落底壁,G418筛选2周后仅有1～2个/低倍视野细胞存活,且生长相对静止;RA患者滑膜细胞在转染空质粒及正常人滑膜细胞在转染pcDNA3.1-FasL及空质粒后仅有少数细胞变形、反光度下降,很少脱离底壁,G41 8筛选2～4周后细胞再次生长并形成克隆;经TUNEL方法检测可见大量转染rhFasL的RA滑膜细胞的细胞核呈棕黄或棕褐色,胞核浓缩,呈环行、小圆形或颗粒状,而其他3组对照组滑膜细胞的细胞核呈蓝色或浅黄色,未见明显凋亡标记阳性细胞;基因转染后的各组滑膜细胞予Annexin Ⅴ/PI染色、流式细胞仪检测后均查到少量早期的凋亡细胞,但各组间差异无统计学意义.结论pcDNA3.1-FasL基因可诱导体外培养的RA滑膜细胞间的凋亡增加.     

人衰老成纤维细胞凋亡的可诱导性

目的 研究体外培养的人成纤维细胞衰老时可诱发凋亡的能力。方法 用于酸钠和去血清两种方法诱导人衰老和年轻或纤维细胞生存曲线、细胞形态和超微结构、ＤＮＡ断裂电科 、流式细胞仪分析凋亡等手段检测凋亡的发生情况。结果 ５０ｍｍｏｌ／Ｌ的丁酸钠诱导年轻细胞４８ｈ即发生凋亡,而老细胞耐９６ｈ,去血清诱导年轻细胞１５ｄ左右发生凋亡,而衰老细胞此时未出现凋亡现象。结论 人老成纤维细胞可凋亡的能力明显低于年轻细胞。     

雷公藤甲素诱导胶原诱导的关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的初步观察

目的 以胶原诱导的关节炎(CIA)为动物模型,探讨雷公藤甲素(triptolide)能否诱导CIA大鼠滑膜细胞凋亡。方法 选用雄性Wistar大鼠造模,将造模成功的大鼠随机分为模型组和雷公藤组。雷公藤甲素按4滋g/100g体重,肌肉注射给药,每3d1次。凋亡检测:给药31d后处死,取膝关节滑膜。作苏木素-伊红染色(HE)、电镜、缺口末端标记法(TUNEL)标记及流式细胞仪检测。结果 电镜下可见早期阶段的滑膜凋亡细胞。流式细胞仪检测结果显示正常组、模型组、雷公藤组的凋亡细胞分别为(0.87±0.24)%、(1.83±0.82)%和(3.98±1.16)%。正常组、模型组、雷公藤组的S期细胞分别为(3.4±0.7)%、(8.0±1.4)%和(3.3±1.2)%。雷公藤组与模型组比较差异均具有显著性(P<0.01)。TUNEL标记结果显示正常组、模型组、雷公藤组的凋亡细胞分别为(1.0±0.4)%、(2.2±1.0)%和(4.5±0.9)%。雷公藤组与模型组比较差异具有显著性(P<0.01)。结论 本次实验首次阐明雷公藤甲素可诱导CIA大鼠滑膜细胞的凋亡。     

氯化甲基汞诱导NCI-H446细胞凋亡的体外实验研究

目的 探讨氯化甲基汞(MMC)诱导NCI-H446细胞凋亡发生的可能机制.方法 通过分子生物学方法,检测调控细胞凋亡的关键基因Bcl-2、Bax和caspase-3在mRNA水平的表达情况.结果 MMC组细胞Bcl-2 mRNA水平低于对照组,并存在着时间依赖性降低趋势,至24 h达到最低;Bax及caspase-3 mRNA水平高于对照组,并存在着时间依赖性增高趋势,至24 h达到最高.结论 MMC能够在体外诱导NCI-H446细胞发生凋亡.     

布洛芬与氨基葡萄糖对膝骨关节炎患者滑膜细胞增殖及软骨寡聚基质蛋白表达影响的比较

目的 探讨布洛芬与氨基葡萄糖对膝骨关节炎(OA)滑膜细胞增殖及软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响.方法 布洛芬与氨基葡萄糖含药血清培养早期和晚期滑膜细胞,四唑氮化合物/黄嘌呤氧化酶(MTS/PMS)法测定吸光度(A)值,hCOMP定量试剂盒测定COMP含量.采用等方差假设双侧t检验进行统计学处理.结果 通过MTS/PMS法观察确定布洛芬与氨基葡萄糖含药血清培养滑膜细胞观察点在第5～7天;氨基葡萄糖含药血清培养滑膜细胞A值[晚期组(0.054±0.021),早期组(0.777±0.034)]低于正常血清对照组(P＜0.05).布洛芬[晚期组(35.4±1.9),早期组(46.0±2.2)]与氨基葡萄糖含药血清[晚期组(36.6±1.3),早期组(48.8±1.3)]对软骨寡聚基质蛋白的表达也有明显降低作用(P＜0.05).结论 氨基葡萄糖可以抑制体外培养早期和晚期膝OA患者滑膜细胞增殖,而布洛芬与氨基葡萄糖皆可抑制体外培养滑膜细胞分泌COMP.     

奥美拉唑致胃上皮凋亡及其机制的研究

目的：探讨奥美拉唑唑致胃上皮凋亡及其作用机制。方法：采用流式细胞仪,测定奥美拉唑对SGC－7901细胞株细胞周期、细胞凋亡发生的影响,并检测p53、GADD45、p15,16,18,19和bcl-2的表达改变和ATP合酶活性。同时用TUNEL法检测奥美拉唑作用原胃上皮细胞的凋亡情况。结果：奥美拉唑作用24h引起SGC－790细胞周期发生显著改变,G期百分比减少,G2期百分比增加,以后者改变明显,然无细胞凋亡峰出现,作用72h出现细胞凋亡峰。p53、GADD45、p15,16,18,19和bcl-2的表达均无显著改变,奥美拉唑作用前胞内ATP合酶活性为0．326－0．387,奥美拉唑作用72h后显著下降为0．054－0．103。奥拉拉唑致胃黏膜细胞凋亡发生显著高于对照组（P＜0．01）。结论：奥美拉唑通过线粒体途径导致胃上皮细胞凋亡,对治疗更新速率较快的伴DNA氧化性损伤胃上皮有重要意义。     

针刺血清对体外培养破骨细胞凋亡的影响

目的观察正常大鼠及去卵巢模型大鼠针刺血清对体外培养新生大鼠破骨细胞凋亡的影响。方法将60只12月龄雌性SD大鼠随机分为正常针刺组、正常对照组、假手术组、模型组、针刺预防组和针刺治疗组,制备针刺血清和对照血清。自新生SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞,加含10%针刺血清或对照血清的DMEM培养液培养48h后,流式细胞术检测破骨细胞凋亡情况。结果与正常对照组大鼠血清比较,正常针刺组血清使破骨细胞凋亡率提高0.6%。模型组与假手术组比较,破骨细胞凋亡率降低4.0%,针刺预防组和针刺治疗组与模型组比较,破骨细胞凋亡率分别提高了5.4%和1.5%。结论针刺具有促进破骨细胞凋亡的作用。     

碘对人甲状腺细胞凋亡的影响

目的：研究碘对人甲状腺细胞亡的影响,探讨其在甲状腺疾病发病机制中的作用和意义。方法：分别以不同浓度Nal刺激单层培养的人正常甲状腺上皮细胞,采用流式细胞术,Western印迹和半定量RT－PCR等方法分别检测刺激前后细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Fas,Bcl-2和Bak以及Fas,可溶性Fas(sFas)mRNA表达的变化。并以ELISA法检测细胞培养液中sFas的含量。结果：（1）低浓度NaI(10^-8mol/L)明显抑制细胞凋亡（P＜0．05）,中,高浓度（10^-6-10^-4mol/L)时显著增加细胞凋亡（P＜0．05）;（2）低浓度NaI显著促进sFas蛋白及mRNA的表达（P＜．05）,不影响Fas蛋白及mRNA的表达;（3）中、高浓度NaI则明显增加Fas蛋白及mRNA表达,但抑制sFas蛋白及mRNA表达（P＜0．05）;（4）在10^-8-10^-4mol/L浓度范围内,NaI剂量依赖性地抑制甲状腺上皮细胞表达Bcl-2蛋白,但显著增加Bak蛋白的表达（P＜0．05）,结论：碘可通过调节Fas,sFas,Bcl-2及Bak的表达,影响甲状腺细胞凋亡的发生,其中低浓度碘可抑制凋亡,而中,高浓度碘则促进细胞凋亡。