女贞子对去卵巢大鼠钙代谢及维生素D依赖型基因表达的影响

目的研究补肾中药女贞子对去卵巢大鼠钙代谢及维生素D依赖型基因表达的影响。方法大鼠去卵巢手术处理4周后,ig给药治疗14周。血清、尿液及粪便中钙水平采用比色法测定。RT-PCR技术分析小肠及肾脏基因表达。结果大鼠去卵巢后体内钙流失显著增加,表现在血钙下降,尿钙及粪钙排泄增加。女贞子可以有效防止尿钙及粪钙排泄增加,并恢复血钙水平。RT-PCR分析表明雌二醇和女贞子都可以抑制去卵巢引起的小肠维生素D受体(VDR)mRNA表达下降。女贞子对肾脏25-羟基维生素D 1-羟化酶(1-OH ase)及25-羟基维生素D 24-羟化酶(24-OH ase)mRNA无明显作用,但却可以提高肾脏钙结合蛋白-9k(C aBP-9k)及钙结合蛋白-28 k(C aBP-28k)的基因表达。结论女贞子能够改善雌激素缺乏所引起的钙失衡状态,主要是通过提高小肠对活性维生素D的敏感性及加强肾脏对钙的重吸收而发挥作用的。     

维生素D受体在特发性高钙尿症发病机制中的作用

特发性高钙尿症(idiopathic hypercalciuria,IH)是病因未明的尿钙增多而血清钙正常的钙代谢异常,是尿路结石形成的重要危险因素.患者肠道钙吸收增加、骨再吸收增加及肾尿钙再吸收减少而导致高钙尿.目前利用动物模型对该病发病机制进行了较深入的研究,发现维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)基因多态性、VDR表达增加及其调控蛋白的异常在IH基本的发病机制中起重要作用.     

儿童特发性高钙尿症12例

儿童特发性高钙尿症１２例Ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃｈｙｐｅｒｃａｌｃｉｕｒｉａｉｎ１２ｃｈｉｌｄｒｅｎ￥／／殷琪关键词儿童；高钙尿症儿童特发性高钙尿症（ＩｄｉｏｐａｔｈｉｃＨｙｐｅｒｃａｌｃｉｕｒｉａＩＨ）是一种原因不明的尿钙排泄增多而血钙正常的综合征，是...     

The Expression and Implication of TRPV5,Calbindin-D28k and NCX1 in Idiopathic Hypercalciuria

The expression of calcium epithelium TRPV5, alcium binding protein Calbindin-D28k and Na＋/Ca2＋ exchanger NCX1 was detected in renal distal convoluted tubule, and their effects on urine calcium reabsorption and the possible pathogenic mechanism in idiopathic hypercalciuria （IH） were investigated. Genetic hypercalciuric stone-forming （GHS） rats were chosen as animal models to study urine calcium reabsorption and IH. The cognate female and male rats that had maximal urine calcium were matched to breed next generation. Twelve GHS rats and 12 normal control （NC） SD rats were selected. Western blot and real time quantitative PCR were used to detect the protein and gene expression of TRPV5, Calbindin-D28k and NCX1 respectively. The expression levels of TRPV5 protein and mRNA in GHS rats were significantly lower than in NC rats （P〈0.05）. Western blot revealed that the expression levels of Calbindin-D28k in GHS rats and NC rats were 0.49±0.02 and 0.20±0.01 respectively, with the difference being significant between them （P〈0.05）. By using real time quantitative PCR, it was found that there was no significant difference in Calbindin-28k mRNA expression levels between GHS rats and NC rats （P〉0.05）. There was no significant differ- ence in the NCX1 expression between GHS rats and NC rats （P〉0.05）. It was suggested that TRPV5 and Calbindin-D28k might play an important role in urine calcium reabsorption and IH, but they dif- ferently contributed to the pathogenesis： The down-regulation of TRPV5 decreases urine calcium reabsorption, directly leading to loss of the urine calcium and resulting in hypercalciuria, and the increased Calbindin-D28k expression could relieve, neutralize and decrease intracellular Ca2＋ concentration to maintain calcium balance. NCX1 is not the key protein in urine calcium reabsorption.     

脑缺血损伤大鼠海马区钙结合蛋白Calbindin-D28k蛋白表达的变化及针刺对其影响

[目的]观察针刺对脑缺血损伤大鼠大脑海马区钙结合蛋白Calbindin-D28k蛋白表达及神经行为学的影响.[方法]选用雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、脑缺血模型组、针刺治疗组,每组10只,采用化学刺激诱导血栓性闭塞大脑中动脉手术复制大鼠局灶性脑缺血模型;针刺组采用针刺百会、水沟穴,每天1次,治疗7 d;治疗结束后,采用免疫组化方法观察针刺前后大鼠海马区Calbindin-D28k蛋白表达的变化,造模后1～2 h及治疗结束后分别对各组大鼠进行神经行为学评分.[结果]大鼠局灶性脑缺血后Calhindin-D28k阳性细胞表达显著减少(与空白对照组比较,P＜0.05),针刺后大鼠大脑海马区Calbindin-D28k阳性细胞表达显著增加(与脑缺血模型组比较,P＜0.01).大鼠在造模后1～2 h的神经症状行为评分均有阳性反应,与空白对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.01),针刺治疗组大鼠在治疗前后的神经症状行为评分差异也有显著性意义(P＜0.01).[结论]针刺可上调Calbindin-D28k蛋白的表达,减轻细胞内Ca2+超载,可能是针刺保护脑缺血损伤的机制之一.     

儿童特发性高钙尿症与血尿

高钙尿症是指尿中有较多钙排出超过了正常范围,分为特发性和继发性高钙尿症.特发性高钙尿症(idiopathic hypercalciuria,IH)是1953年由Albright等首先提出的,是指一组病因不明、血钙正常而尿钙排出增加的疾病.而继发性高钙尿症均可以找到明确的病因,多与内分泌及代谢异常有关.本文着重探讨的是特发性高钙尿症.IH可发生于任何年龄阶段的儿童,在普通人群中的发病率是5%～10%,通常是通过肾脏结石、血尿和骨质疏松症等疾病而被发现的.     

小儿特发性高钙尿与血尿（附36例分析）

36例间歇性或持续性镜下和 /或发作性肉眼血尿患儿 ,男 2 1例 ,女 15例 ,年龄均小于12岁 ,除 1例肾穿刺提示肾小球轻微病变外 ,余各项实验室检查包括血清钙、磷、碱性磷酸酶均正常。 36例中 2 4小时尿钙 >4 m g/ kg者 9例 ,均排除继发性高钙尿症 ,占单纯血尿的 2 5% ,其中肾漏型 4例 (尿钙 /尿肌酐比值 0 .2 1± 0 .0 3) ,吸收型 5例 (尿钙 /尿肌酐比值 0 .17± 0 .0 4 ) ,提示特发性高钙尿症与血尿有关。原因可能与小肠与肾小管上皮钙泵失衡有关。治疗上宜大量饮水 ,避免高钙饮食 ,肾漏型者可试用噻嗪类利尿剂     

特发性高钙尿症患者维生素D受体基因多态性研究及其临床意义

目的：探讨维生素D受体(VDR)等位基因多态性与特发性高钙尿症的关系，并分析其临床意义。方法：筛选36例特发性高钙尿症患者，采用PCR—RFLP法检测其VDR基因的Taql、Apal、FokI多态性，并分析其与特发性高钙尿症的相关性。结果：特发性高钙尿症组与健康组之间，启动于FokI等位基因各基因型频率存在显著性差异(P＜0、05)，基因型为ff型者24h尿钙含量显著高于同组的其它基因型(P＜0．05)。Apal、Taql基因多态性在两组之间并无显著差异。结论：特发性高钙尿症与VDR基因启动于Fokl等位基因多态性有关，而与VDR基因Apal和Taql多态性无关，ff型等位基因有可能成为特发性高钙尿症的遗传标志集因。     

骨桥蛋白、CD44在遗传高钙尿结石大鼠肾组织中的表达及其与肾间质钙化的关系

目的 检测骨桥蛋白(OPN)及其受体CD44在遗传性高钙尿结石(GHS)大鼠肾组织中的表达,探讨OPN及CD44与肾间质钙化的关系.方法 GHS大鼠和正常对照组SD大鼠各10只,应用Von-Kossa钙染色法检测肾组织钙化情况,免疫组织化学染色法观察肾组织OPN和CD44表达情况.结果 GHS大鼠肾间质存在明显钙化,肾组织OPN及受体CD44表达增加,两组间比较差异均具有统计学意义(均P<0.01).结论 GHS大鼠肾间质存在钙化,OPN及其受体CD44分子可能参与调节GHS大鼠肾间质钙化,从而在尿石形成中起一定作用.     

甲氧滴滴涕对小鼠着床期子宫钙结合蛋白D9k基因表达的影响

目的：研究甲氧滴滴涕（MXC）对小鼠着床期子宫钙结合蛋白D9k（Calbindin-D9k）基因表达的影响。方法：将真孕及假孕小鼠于孕1-3d（发现阴栓为孕0日）每日给予不同剂量的MXC（0,100,250,500mg／kg）灌胃,对照组（MXC 0mg／kg）只给芝麻油溶剂。采用RT-PCR检测各组孕鼠子宫Calbindin-D9k基因mRNA的表达;免疫组化染色和图像分析技术检测Calbindin-D9k蛋白表达。结果：①孕鼠经MXC染毒3d后,250,500mg／kg MXC组孕鼠子宫Calbindin-D9k mRNA的表达量与对照组相比有显著降低（P〈0.05）,然而,100mg／kg MXC组Calbindin-D9k mRNA的表达与对照组相比虽有所减低,但无统计学意义（P〉0.05）;②Calbindin-D9k蛋白在孕5日主要表达在子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞。与mRNA的表达水平一致,250,500mg／kgMXC组孕鼠子宫Calbindin-D9k蛋白的表达量与对照组相比显著降低（P〈0.05）,而100mg／kg MXC组Calbindin-D9k蛋白的表达与对照组相比无明显差异（P〉0.05）。结论：MXC可以降低小鼠着床期子宫Calbindin-D9k基因的表达,这可能是其干扰胚胎着床的一个毒性机制。     

利胆退黄法对肝内胆汁淤积湿热证大鼠BSEP表达的影响

目的：通过研究利胆退黄法对肝内胆汁淤积湿热证大鼠肝组织中BSEP基因表达的影响,以期进一步从分子水平探讨利胆退黄法的作用靶点及机制。方法：45只雄性SD大鼠随机分为3组：正常组、模型对照组和治疗组。检测治疗后大鼠血清生化指标、肝脏组织病理的变化和肝脏BSEP的表达。结果：治疗后治疗组大鼠体重增加（31.39士3.72 g）明显高于模型对照组大鼠（22.36±3.32 g）,P〈0.05。治疗组大鼠血清TB、DB、ALT、AST、ALP、TBA分别为13.90±2.88μmol/L,7.47±2.70μmol/L,75.33±9.42 U/L,216.64±31.20 U/L,226.40±32.86 U/L,19.73±2.10μmol/L）,低于模型对照组（34.72±3.65μmol/L,19.33±3.27μmol/L,123.73±18.51 U/L,353.78±63.08 U/L,355.49±63.08 U/L,36.15±6.77μmol/L）,P〈0.05;HE染色显示治疗组大鼠肝脏的病理损害轻于模型对照组。免疫组织化学染色显示治疗组大鼠比模型对照组表达更多BSEP阳性细胞。荧光定量RT-PCR法显示模型对照组大鼠肝组织中BSEP mRNA表达（2-△△CT值1.49±0.49）明显低于治疗组（2-△△CT值1.96±0.66）,P〈0.05。结论：利胆退黄法能有效改善肝内胆汁淤积湿热证大鼠的肝功能、减轻病理损害,并能上调肝脏BSEP的表达。     

瞬时受体电位通道C与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征大鼠心脏和肾脏损害的关系

目的: 探究经典瞬时受体电位通道C（TRPC）相关蛋白在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）大鼠心脏和肾脏损害中的作用。方法: 18只SD雄性大鼠随机分为实验组和对照组,每组9只。实验组大鼠在间歇性低氧舱中,每天暴露于间歇性低氧环境8 h（10:00—18:00）。此后通过实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测大鼠心脏和肾脏组织中TRPC mRNA和相关蛋白的表达。结果: 实验组心脏组织中TRPC3、TRPC4、TRPC5的mRNA表达较对照组升高（均P < 0.05）,而肾脏组织TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC5、TRPC6、TRPC7的mRNA表达在两组之间差异无统计学意义（均P>0.05）;实验组肾脏组织中TRPC4、TRPC5、TRPC6的mRNA表达低于心脏组织（均P < 0.05）,对照组肾脏组织TRPC7的mRNA表达高于心脏组织（P < 0.05）。实验组心脏组织中的TRPC5蛋白表达较对照组升高（P < 0.05）,而肾脏组织TRPC5、TRPC6、TRPC7相关蛋白的表达在两组之间差异无统计学意义（均P>0.05）。结论: TRPC5可能参与OSAHS心脏损害的病理生理过程,有望成为治疗OSAHS所致心脏损害的药物新靶点。     

Fibulin-1在女性压力性尿失禁患者盆底组织中的表达及意义

目的 探讨压力性尿失禁( SUI)患者阴道前壁中Fibulin-1与SUI发生的关系.方法 采用实时荧光定量-PCR、免疫蛋白印迹方法测定25例压力性尿失禁患者(SUI组)阴道前壁组织中Fibulin-1的蛋白及mRNA表达水平,择同期27例非卵巢功能性肿瘤和宫颈病变患者作为对照(对照组).结果 RT-PCR结果显示Fibulin-1mRNA表达水平△Ct值在SUI组织(0.456 5±0.220 6)明显低于对照组组织(0.246 8±0.5017) (F =0.241,P＜0.001);Fibulin-1 mRNA表达水平△Ct值在SUI绝经前组组织(0.373 2±0.158 2)明显低于绝经前对照组组织(1.157 5±0.1542)(F=0.212,P＜0.001);Fibulin-1 mRNA表达水平△Ct值在SUI绝经后组组织(0.557 3±0.2219)与绝经后对照组组织(0.5326±0.2221)都很微弱,(F=1.099,P＞0.05).结论 SUI患者的盆底支持结构的退行性病变与组织中的Fibulin-I低下有关.     

哮喘大鼠肺组织白血病抑制因子的表达及地塞米松干预研究

目的探讨哮喘大鼠肺组织中白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的表达及其意义.方法制作卵蛋白致敏大鼠哮喘模型,采用RT-PCR和Western-blot方法观察LIF在致敏大鼠肺组织中的表达.结果LIF蛋白表达量在哮喘组为(40832±12964),均较地塞米松组(16160±2108)和对照组(23110±8018)升高,差异有显著性(P＜0.01),地塞米松组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).LIFmRNA的相对表达量哮喘组为(0.51±0.13),均较地塞米松组(0.18±0.05)和对照组(0.24±0.02)明显增高,差异有显.著性(P＜0.01),地塞米松组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).结论LIF在致敏哮喘大鼠模型肺组织中表达显著增高,LIF作为神经免疫调节因子,可能参与了哮喘的发病机制.     

帕金森病小鼠黑质calbindin-D28k mRNA的表达

目的　研究钙结合素D28k（CaBP）在帕金森病（PD）发病机制中的作用.方法　给C57BL小鼠ip 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶 (MPTP),30 mg*kg-1MPTP每24 h注射1次,连续应用3 d以建立PD鼠模型.用原位杂交法检测CaBP mRNA在PD鼠和对照鼠黑质神经元中的表达变化.结果　CaBP mRNA阳性神经元主要分布于黑质致密部（SNC）.在MPTP处理鼠的SNC神经元,CaBP mRNA的表达水平明显降低.模型鼠和对照鼠的SNC中CaBP mRNA阳性神经元的数量有差异(144±15) vs (88±10),(P<0.05).与对照相比,MPTP处理组小鼠SNC中表达CaBP mRNA神经元的杂交信号强度也有降低.结论　CaBP可能通过对黑质多巴胺能神经元的保护作用来抵御PD的发生.     

慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌组织泛素系统基因及蛋白表达的变化

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌组织内蛋白降解的信号分子泛素-蛋白酶体系统基因和蛋白表达的变化及意义。方法采用单纯熏香烟法复制COPD大鼠动物模型。Western印迹法测定大鼠伸趾长肌内蛋白酶体C2亚基蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测伸趾长肌内泛素和E2-14kmRNA表达变化。结果RT-PCR分析结果显示,伸趾长肌组织中泛素、E2-14k mRNA表达(积分光密度值)较对照组显著增加(P值均<0.05)。Western印迹法分析结果显示,伸趾长肌组织中蛋白酶体C2亚基蛋白的表达较对照组显著增强(P<0.05)。结论COPD大鼠骨骼肌泛素系统基因表达和蛋白表达显著增强,提示骨骼肌内泛素-蛋白酶体途径活性上调,是蛋白降解增强的原因之一。     

不同间歇低氧频率对大鼠血压以及血管内皮功能的影响

目的观察不同频率间歇低氧对大鼠血压的影响及其血管内皮功能的变化。方法将40只Wistar雄性大鼠随机分为常氧对照组(NC组)及4个间歇低氧组(IH1,IH2,IH3,IH4),其低氧频率分别为10次/h、20次/h、30次/h、40次/h。测定实验前后大鼠动脉收缩压、血清内皮素-1、一氧化氮水平。结果 (1)各组大鼠实验前SBP比较差异无统计学意义。6周实验结束后,各IH组SBP较实验前和NC组均显著升高(P0.05或P0.01);随着间歇低氧频率的增加,各IH组大鼠血压逐渐升高,但IH4组较IH3组比较差异无统计学意义。NC组SBP较实验前差异无统计学意义。(2)各IH组血清ET-1水平较NC组相比明显增高(P0.05),血清NO水平显著降低(P均0.01)。随着间歇低氧频率的增加,血清ET-1水平升高,NO水平显著降低(P0.05或P0.01)。IH4组与IH3组相比,各指标差异无统计学意义。结论血管内皮功能障碍在慢性间歇低氧致高血压过程中起着重要的作用。随着间歇低氧频率增高,血压升高及内皮损伤加重,但并非频率越高,损伤越重。     

二甲双胍对甲状腺功能减退大鼠甲状腺激素的影响

目的 探讨二甲双胍对甲状腺功能减退大鼠甲状腺激素水平的影响及其机制.方法 取3个月龄雄性SD大鼠36只,随机分为正常对照(NC)组、甲状腺功能减退(HT)组、二甲双胍(Met)组.HT组和Met组以含0.01％氨基三唑的饮用水喂养大鼠4周制备甲状腺功能减退大鼠模型,NC组大鼠喂养普通饮用水.造模成功后,Met组用200 mg/kg二甲双胍灌胃,HT组和NC组用等体积0.05％羟甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃.于灌胃第8周时对3组大鼠甲状腺组织行H-E染色,采用qPCR检测下丘脑促甲状腺激素释放激素前体(proTRH) mRNA的表达;于灌胃第8、12周时采用电化学发光法检测3组大鼠血清T3、T4水平,采用qPCR和蛋白质印迹法检测甲状腺组织钠碘同向转运体(NIS) mRNA和蛋白表达.结果 在灌胃8、12周时,HT组大鼠血清T3、T4水平均低于NC组,而Met组T3、T4水平均高于HT组(P＜0.05).灌胃8周时,H-E染色结果显示NC组滤泡大小不等,内见大量胶质及吸收空泡;HT组大鼠甲状腺滤泡缩小,滤泡上皮成柱状,滤泡周围吸收空泡减少;Met组滤泡上皮增生较HT组稍改善.灌胃8周时,qPCR结果显示HT组大鼠下丘脑proTRH和甲状腺组织NIS mRNA表达均高于NC组,而Met组均低于HT组(P＜0.05);蛋白质印迹法检测结果显示Met组NIS蛋白表达低于HT组(P＜0.05),而HT组和NC组NIS蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).灌胃12周时,HT组和Met组甲状腺组织NIS mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),Met组NIS蛋白表达高于HT组(P＜0.05).结论 二甲双胍能升高甲状腺功能减退大鼠的甲状腺激素水平,但短期内并不是由甲状腺NIS表达升高所致.     

罗格列酮对实验性2型糖尿病大鼠肝脏组织IRS-2表达的调节

目的观察罗格列酮对实验性2型糖尿病大鼠肝脏组织中IRS-2表达的调节,进一步探讨其可能的作用机制.方法采用低剂量链脲佐菌素尾静脉注射联合高脂饲料喂养建立2型糖尿病大鼠模型.未予上述处理的大鼠作为正常对照组(NC组),成模大鼠随机分为糖尿病对照组(UD组)和罗格列酮干预组(RI组).药物干预4周后,称重,检测血清葡萄糖、胰岛素、甘油三酯和胆固醇,检测大鼠肝脏组织中IRS-2蛋白及mRNA的表达.结果(1)RI组大鼠空腹血糖、胰岛素、甘油三酯水平均低于UD组(P＜0.05),高于NC组(P＜0.05);RJ组血清胆固醇高于NC组(P＜0.05),与UD组差异无显著性(P=0.318);(2)免疫印记法示:UD组与NC组相比,肝脏IRS-2蛋白表达明显减少,RI组肝脏IRS-2蛋白表达增加,介于前两者之间,差异均有显著性(P＜0.05).RT-PCR示,UD组较NC组肝脏IRS-2mRNA表达下调,而RI组IRS-2mRNA表达水平介于二者之间.结论IRS-2的继发性减少可能是2型糖尿病的发病机制之一;罗格列酮能够上调IRS-2mRNA及蛋白的表达,这可能是其改善胰岛素抵抗、保护胰岛β细胞的另一作用机制.