泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其IL-1β表达的影响

目的:观察泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及IL-1β表达的影响。方法:采用Ox-LDL(50 mg/L)处理大鼠腹腔巨噬细胞24 h,采用20%泽泻汤血清干预后,油红O染色观察细胞内脂质沉积情况;酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组细IL-1β表达情况。结果:成功建立巨噬细胞泡沫化模型;相比于空白组的巨噬细胞,模型组巨噬细胞内脂质沉积增加明显,实验组巨噬细胞内脂质沉积显著减少,IL-1β呈低水平表达,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:Ox-LDL(50 mg/L)处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞泡沫化模型。泽泻汤能改善巨噬细胞泡沫化过程的脂质沉积,其作用机制可能是通过下调IL-1β的表达来实现的。     

桑抹茶对THP-1源性泡沫细胞脂质沉积的作用研究

目的 明确桑抹茶对THP-1泡沫细胞脂质沉积的改善作用。方法 实验分为正常对照组：佛波酯诱导的THP-1源性巨噬细胞,模型对照组：佛波酯+Ox-LDL诱导的THP-1源性泡沫细胞,药物干预组：THP-1源性泡沫细胞+不同浓度（10、20、40、80、160、320、640 μg/ml）桑抹茶提取物,同时设RPMI 1640培养基为空白对照。MTT法检测各组细胞活力;油红O染色观察细胞内脂质沉积;荧光显微镜观察THP-1巨噬细胞内吞Dil-Ox-LDL情况;Western blotting检测各组细胞介导细胞内胆固醇流出蛋白ABCA1及PPARγ蛋白表达水平。结果 桑抹茶提取物能浓度依赖地抑制THP-1源性泡沫细胞对Ox-LDL的摄取,减少THP-1泡沫细胞内脂质沉积;与对照组比较,模型组泡沫细胞内脂质水平显著升高[(0.974±0.033)比(0.794±0.030),P<0.01],ABCA1蛋白表达量增加[(0.702±0.005)比(0.575±0.014),P<0.01],PPARγ表达量降低[(0.099±0.004)比(0.875±0.019),P<0.01]。与模型组比较,93、186、372 μg/mL桑抹茶提取物能显著降低泡沫细胞内脂质水平[(0.876±0.032)、(0.835±0.019)、(0.815±0.028)比(0.974±0.033),P<0.01],增加PPARγ蛋白表达量[(0.270±0.006)、(0.328±0.014)、(0.706±0.020)比(0.099±0.004),P<0.01],93、372 μg/mL桑抹茶能提高ABCA1蛋白表达量[(0.823±0.041)、(1.411±0.048)比(0.702±0.005),P<0.01]。结论 桑抹茶可能通过减少Ox-LDL摄取,促进细胞内胆固醇流出,减少细胞内脂质沉积。     

姜黄素通过LXRα-ABCA1通路抑制小鼠巨噬细胞脂质聚集

目的:探讨姜黄素(curcumine,CUR)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致小鼠巨噬细胞泡沫化过程中脂质聚集的影响及其机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分别采用oxLDL(50 mg/L)和Dil(Dioctadecyl)-ox-LDL(10 mg/L)处理细胞24 h,将细胞培养于含不同浓度CUR(0.1~50.0μmol/L)的培养基,MTT法筛选合适的实验浓度;荧光共聚焦显微镜观察Dil-ox-LDL处理后脂质聚集情况;酶学终点法定量细胞内总胆固醇和游离胆固醇的变化;蛋白免疫印迹法检测细胞LXRα和ABCA1的表达水平。结果:与泡沫化组相比,CUR治疗组脂质聚集显著下降;总胆固醇和游离胆固醇的含量均明显下调;另外CUR可以在蛋白水平上引起LXRα和ABCA1的高表达。结论:CUR具有抑制ox-LDL氧化小鼠巨噬细胞脂质聚集的作用,且该作用可能与其上调LXRα-ABCA1表达从而调节细胞内胆固醇的含量有关。     

小檗碱对OX-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的作用

目的:观察小檗碱对巨噬细胞泡沫化的保护作用.方法:利用ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7泡沫化,并在此过程中加入不同浓度小檗碱,通过油红O染色及胆固醇酯与总胆固醇的测定判断细胞泡沫化程度,评价小檗碱的作用效果.结果:与ox-LDL诱导的泡沫细胞组相比,小檗碱加入后细胞内脂质累积明显减少,而且泡沫化程度也降低了.结论:小檗碱能够降低ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化程度.     

柴胡皂甙d对人肝癌细胞COX-2表达及细胞内钙离子的影响

目的 观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌SMMC-7721细胞环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达和细胞内Ca2+变化的影响,探讨其抗癌作用机制.方法 肝癌SMMC-7721细胞株经不同终浓度的SSd(2.5、5.0、10.0和20.0 mg/L)作用48 h后,MTT比色法检测细胞增殖抑制率,荧光染色法观察其凋亡状况,Western blotting检测COX-2表达,放射免疫法检测前列腺素E2含量,免疫荧光分光光度计法检测细胞内钙离子浓度.结果 SSd对肝癌SMMC-7721细胞生长、增殖有明显抑制作用,并诱导其凋亡.同时,SSd可以降低肝癌细胞COX-2蛋白表达和前列腺素E2含量水平,提高胞内钙离子浓度.在2.5～10.0 mg/L作用终浓度范围内,上述作用呈现一定的量效关系.结论 提高细胞内钙离子浓度,可能是SSd抑制COX-2活性,诱导人肝癌细胞凋亡的机制之一.     

丹参体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的初步研究

目的观察不同浓度丹参血清对HepG2细胞Caspase-3蛋白表达的影响,探讨该药诱导HepG2细胞凋亡的可能机制。方法不同浓度的丹参含药血清作用低分化人肝癌HepG2细胞,运用蛋白免疫印迹方法(Western Blot)检测各组HepG2细胞Caspase-3表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞TGF-β1分泌水平;钙影像(Calcium Imaging)技术检测各组细胞内Ca2+浓度变化。结果与正常对照组比较,10倍浓度组能明显增加HepG2细胞Caspase-3蛋白表达(P0.05),同时,ELISA检测也显示10倍浓度组HepG2细胞TGF-β1分泌减少(P0.05),且细胞内Ca2+浓度明显降低(P0.05)。结论丹参能够诱导体外培养的HepG2细胞凋亡,Caspase-3蛋白表达明显增加,其促凋亡作用可能是通过降低细胞内Ca2+浓度从而阻断TGF-β1信号通路实现的。     

穿心莲内酯对HepG2细胞SREBP表达及脂质代谢的影响

目的?研究穿心莲内酯对人肝癌细胞株HepG2中固醇调节元件结合蛋白（SREBP）表达及脂质代谢的影响,并探讨其作用机制。方法?应用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒检测细胞活力;双荧光素酶报告基因实验检测穿心莲内酯对SREBP转录活性的抑制作用;实时定量PCR（RT-qPCR）法检测SREBP及其靶基因mRNA的表达;甘油三酯、总胆固醇（TG、TC）测定试剂盒检测HepG2细胞中TG、TC的含量。结果?CCK-8法结果显示穿心莲内酯在0~80?μmol/L浓度范围内对HepG2细胞活力无明显影响;穿心莲内酯能够剂量依赖性的抑制HepG2细胞中SREBP的转录活性,同时浓度在20?μmol/L条件下能显著下调SREBP靶基因mRNA的表达水平;此外,经穿心莲内酯体外干预后,HepG2细胞内TG、TC的含量明显减少。结论?穿心莲内酯可能通过抑制SREBP的转录活性及其靶基因mRNA的表达,进而减少细胞内TG、TC的含量,起到改善肝细胞的脂质代谢作用。      

姜黄素对HepG2细胞脂质沉积的改善作用及机制研究

目的:探讨姜黄素对油酸诱导的HepG2细胞脂质沉积的影响及其作用机制。方法:将HepG2细胞分为对照组、模型组及姜黄素低、高剂量组。除对照组外,其他3组给予0.3 mmol/L油酸干预24 h,诱导细胞脂质沉积模型。造模后,姜黄素干预组分别予以50、100μmol/L姜黄素干预9 h。油红O染色观察各组细胞内脂质沉积情况,试剂盒检测细胞内三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)含量,PCR检测各组细胞固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP1C)、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)的mRNA表达。结果:与对照组相比,模型组细胞内脂滴明显增多,TG、TC水平显著升高(P0.05,P0.01),SREBP1C及其下游基因FAS、ACCα的mRNA表达水平均显著升高(P0.01)。与模型组相比,姜黄素干预组细胞内的红色脂滴明显减少,TG水平显著降低(P0.01),SREBP1C、FAS、ACCα的mRNA表达水平均显著下调(P0.05,P0.01)。姜黄素低剂量(50μmol/L)对脂质沉积的改善作用更为显著。结论:姜黄素或通过下调SREBP1C、FAS、ACCα的表达,抑制脂质的合成,进而改善HepG2细胞的脂质沉积。     

oxLDL通过PPARγ-ABCG1通路促进血管平滑肌细胞泡沫化

目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox LDL)促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)泡沫化是否与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)-三磷酸腺苷结合盒转运子G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)通路调节相关。方法组织贴块法培养原代VSMCs;细胞免疫荧光染色鉴定原代VSMCs;BODIPY染色定性检测细胞内脂质沉积,酶促比色法定量检测细胞内总胆固醇沉积的量;Western blot检测VSMCs中PPARγ、ABCG1蛋白表达情况。结果 1Ox LDL作用VSMCs 48 h后脂质沉积增加;2Ox LDL作用VSMCs PPARγ蛋白表达量下降约53%(P<0.01),ABCG1蛋白表达量下降约48%(P<0.05);3罗格列酮激动PPARγ后,ABCG1蛋白表达量较单独的ox LDL组增加约147%(P<0.05),VSMCs中脂质沉积明显减少。结论ox LDL通过PPARγ-ABCG1通路促进血管平滑肌细胞泡沫化。     

NS398对宫颈癌Hela细胞bcl-2表达的影响

目的 探讨NS398对宫颈癌Hela细胞生长及bcl-2基因和蛋白表达的影响.方法 用不同浓度的NS398(0、25、50、75和100μmol/L)处理宫颈癌Hela细胞不同时间,采用MTT比色法分析细胞生长抑制卒.用不同浓度NS398处理Hela细胞24h,RT-PCR检测COX-2和bcl-2 mRNA表达的变化,Western blot检测COX-2和bcl-2蛋白表达的变化.结果 随着NS398浓度及处理时间的增加.宫颈癌Hela细胞生长抑制率升高;随着NS398剂量的增加,COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平逐渐减少.结论 NS398可呈剂量和时间依赖性抑制Hela细胞的生长,呈浓度依赖性减少COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达.NS398可能通过抑制COX-2和bcl-2的表达,抑制宫颈癌Hela细胞的生长.     

KIR2DS2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA(short hairin RNA,shRNA)的RNAi慢病毒载体.方法针对已经筛选确定的KIR2DS2基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shKIR2DS2慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV-shKIR2DS2及Packaging system质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果PCR和测序证实,成功构建KIR2DS2shRNA的慢病毒载体LV-shKIR2DS2.293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml.结论成功构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA的RNAi慢病毒载体.     

评价房颤CHADS2评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值

目的：探讨房颤评分系统CHADS2(欧洲)评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值。方法纳入2013年1月1日-2013年12月1日就诊于本院心血管内科怀疑冠心病并行冠状动脉造影检查的连续病例429例,根据其造影结果分为对照组(n=51)及冠心病组(n=378)。根据患者的临床资料计算其CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分,根据其冠状动脉造影结果计算Gensini积分评价其病变严重程度,并对3种评分的冠心病预测能力进行评价。结果 CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分与病变支数(r=0.317,P＜0.01;r=0.332,P＜0.01;r=0.330,P＜0.01)及Gensini积分均有一定相关性(r=0.240,P＜0.01;r=0.274,P＜0.01;r=0.295,P＜0.01)。截断点分析显示, CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病的预测价值最高,其灵敏度、特异度、曲线下面积分别为0.860、0.804、0.832(95%CI：0.766~0.898)。结论 CHADS2及其衍生评分对冠心病有一定的预测价值,尤其是CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病有较高的预测价值。     

FHL2调控Id2功能活性的研究

目的：探讨FHL2对Id2蛋白功能的调控效应。方法：将E47、5xE-Box-Luc、pRL-SV40、Id2以及FHL2表达载体分别共转染MCF-7、293T以及SH-SY5Y细胞,双荧光素酶报告基因方法检测不同转染组细胞中的相对荧光素酶活性。结果：三个细胞系中E47均显著上调了报告基因的表达,Id2抑制了E47的转录激活活性,而FHL2通过与Id2相互作用显著消弱了Id2对FA7功能的抑制效应。结论：通过相互作用FHL2抑制了Id2蛋白的功能活性,FHL2是一个新的Id2蛋白功能抑制子;     

pD_2和pA_2的测定

本文采用大鼠肛尾肌分别介绍测定苯肾上腺素ｐＤ＿２和其拮抗剂哌唑嗪ｐＡ＿２的方法。同时讨论了ｐＤ＿２和ｐＡ＿２的意义和推导过程。     

CDX2和MUC2在胃癌组织中的表达

目的探讨CDX2与MUC2在胃癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测胃癌组织及正常胃粘膜中CDX2与MUC2的表达。结果在正常胃粘膜组织中CDX2和MUC2均无阳性表达。CDX2与MUC2在胃癌组织中阳性表达率分别为51.92%和55.77%。CDX2在肠型胃癌中阳性表达率为65.62%（21/32）,在弥漫型胃癌中阳性表达率为30.0%（6/20）,两型胃癌中CDX2阳性表达率有显著性差异（P〈0.05）。MUC2在肠型胃癌中阳性表达率为68.75%（22/32）,在弥漫型胃癌中阳性表达率为35.0%（7/20）,两型胃癌中MUC2阳性表达率有显著性差异（P〈0.05）。CDX2和MUC2的表达与胃癌分化程度有关（P〈0.05）,与有无淋巴结转移无关（P〉0.05）。CDX2的表达和肿瘤浸润的深度有关（P〈0.01）,MUC2表达与肿瘤浸润的深度也有关（P〈0.05）。结论CDX2与MUC2在胃癌尤其是肠型胃癌中高表达,提示CDX2和MUC2与肠型胃癌的发生更密切。     

2型糖尿病患者血浆TXA2和PGI2失衡及PLA2活性变化

目的：探讨2型糖尿病（DM）患者血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）失衡及PLA2活性变化。方法：以放免法测定血栓素B2和6－酮－前列腺素含量,以改良Zieve法测定血浆PLA2活性,同时观察空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、甘油三酯（TG）等的变化。结果：①2型DM患者存在TXA2和PGI2合成异常,且Ⅱ组（有微血管病变组）较I组（无微血管病变组）更为严重;②2型DM患者组血浆PLA2显著低于正常对照组,但I组与Ⅱ组之间无显著差异;③2型DM患者组TXB2与FBG、TG显著正相关,6－K－PGF1a与FINS显著负相关,TXB2与6－K－PGF1a均与血浆PLA2无显著相关性。结论：①TXA2和PGI2失衡在2型糖尿病及微血管病变的发生发展中起重要作用;②血浆分泌型PLA2活性变化与2型糖尿病密切相关,但在糖尿病患者TXA2和PGI2失衡及微血管病变中可能不起直接作用;③糖脂代谢紊乱以及高胰岛素血症在TXA2和PGI2失衡及DM微血管病变中起重要作用。     

小儿FetCO2与PaCO2相关关系的分析

目的探讨小儿呼气末二氧化碳浓度(FetCO2)与动脉血二氧化碳分压(PaCO2)的关系以及不同年龄组间是否存在差异.方法用德国Siemens 930型二氧化碳分析仪和丹麦BME-33型血气分析仪,同步测量119例全麻患儿的FetCO2和PaCO2.按照年龄将病人分成甲组(0～1岁)、乙组(1～4岁)和丙组(4～9岁),分别比较其相关关系.结果全年龄组119例FetCO2与PaCO2呈正相关,r=0.6142(P<0.05).甲组(30例)二者虽呈正相关,但不够显著,r=0.4629(P>0.05);乙组(48例)和丙组(41例)二者呈显著正相关,r分别为0.7436和0.7968(P均<0.01).结论 FetCO2与PaCO2有较好的相关关系;患儿年龄可影响FetCO2的准确性,在使用中需结合临床,综合判断通气是否适当.     

Apg-2对H_2O_2诱导的BaF3-P210细胞损伤的影响

目的 探讨Apg-2对H2O2诱导的Bcr/Abl阳性BaF3-P210细胞损伤的影响.方法 以H2O2诱导的pMIGR1 空载体感染细胞BaF3-MIGR1和稳定表达Bcr/Abl的BaF3-P210细胞为损伤模型,Western blot和RT-PCR检测H2O2损伤后2组细胞Apg-2表达;建立过表达Apg-2的BaF3-MIGR1细胞(BaF3-MIGR1-Apg2)和BaF3-P210细胞(BaF3-P210-Apg2)H2O2诱导的损伤模型,Western blot检测磷酸化组蛋白(γ-H2AX)的表达,免疫荧光法检测γ-H2AX焦点数.结果 H2O2作用后的BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞的Apg-2蛋白和mRNA水平表达均升高(P<0.05).H2O2作用BaF3-MIGR1和BaF3-MIGR1-Apg2细胞后其γ-H2AX蛋白表达升高,γ-H2AX焦点数亦增加;BaF3-P210和BaF3-P210-Apg2细胞H2O2损伤后γ-H2AX蛋白表达和焦点数均无明显变化.结论 Apg-2可减少H2O2诱导的BaF3-P210细胞γ-H2AX表达,从而可能降低其细胞损伤.     

运用酵母双杂交技术筛选LRRK2相互作用蛋白

目的:使用酵母双杂交来筛选LRRK2基因的相互作用蛋白,以研究其功能.方法:使用的诱饵片段包含MAPKKK和ROC功能域的一部分与COR功能域的全长.诱饵片段由聚合酶链式反应(PCR)扩增后连入酵母表达质粒pGBKT7,pGBKT7-bait质粒经测序验证后转化酵母茵株AH109,用免疫印迹来检验该质粒在酵母中的表达,人类胎脑cDNA文库被转化到能稳定表达诱饵蛋白的酵母菌株中,并铺到含有x-a-gal的四缺(SD/-Trp/-ku/-His/-Ade)的培养皿上.分别使用含有pGBKT7或pGBKT7-bait的AH109酵母菌株进行回交检测,进一步确证从初步筛选中获得的阳性克隆,并用生物信息学来分析其中的文库质粒.结果:获得9个真阳性的克隆,经生物信息学分析其中有3个克隆中的序列不在已知基因的开放阅读框内.其余6个克隆中的序列在以下几个已知基因的开放阅读框中:STRBP,BAGS,PTPN23,L3 MBTL3,RALYL,KIAA1783.结论:经酵母双杂交后成功地获得了真阳性克隆.这些相互作用蛋白将为研究LRRK2的功能、帕金森病发病机制和其他神经性疾病提供一些新的线索.     

IGF-2及IGFBP-2与脑神经胶质瘤侵袭能力的相关性分析

目的 探讨IGF-2及IGFBP-2与反映脑神经胶质瘤侵袭能力的MMP-2、TIMP-2相关性.方法 选择到咸阳市中心医院神经外科就诊的86例胶质细胞瘤患者,Ⅰ级30例,Ⅱ级患者25例,Ⅲ级患者20例,Ⅳ级患者11例,对各级患者血清IGF-2、IGFBP-2、MMP-2、TIMP-2进行检测.结果 Ⅱ级患者IGF-2、IGFBP-2较Ⅰ级出现升高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅲ级患者IGF-2、IGFBP-2较Ⅰ级、Ⅱ级均出现升高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅳ级患者IGF-2、IGFBP-2较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级均出现升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Ⅱ级患者MMP-2/TIMP-2较Ⅰ级呈升高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅲ级患者MMP-2及TIMP-2较Ⅰ级均差异有统计学意义(P＜0.05),MMP-2/TIMP-2较Ⅰ级、Ⅱ级患者均出现升高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅳ级患者MMP-2及TIMP-2及MMP-2/TIMP-2较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级均,差异有统计学意义(P＜0.05).IGF-2与TIMP-2、MMP-2/TIMP-2相关 (P＜0.05),IGFBP-2与TIMP-2、MMP-2/TIMP-2相关(P＜0.05).结论 随着神经胶质瘤分级的进展,IGF-2及IGFBP-2水平与脑神经胶质瘤侵袭能力密切相关,是反映神经胶质瘤侵袭能力的重要因子.