白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌细胞(IHH4)增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制?方法:采用CCK-8法检测白藜芦醇对IHH4细胞增殖的影响;倒置显微镜?透射电镜?DAPI染色观察细胞的形态学变化;细胞免疫荧光和Western blot法检测细胞内cleaved caspase-3蛋白的表达;应用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)观察细胞周期和凋亡的改变?结果:①白藜芦醇可以呈时间和浓度依赖性抑制IHH4细胞增殖;②与正常对照相比,加入白藜芦醇后IHH4细胞皱缩?变圆?脱落,细胞质中出现大小不等的空泡,胞质内容物增多;透射电镜下细胞核的染色质高度凝聚?边缘化;DAPI染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈致密浓染;③细胞免疫荧光和Western blot显示,随着白藜芦醇作用浓度和时间的增加cleaved caspase-3蛋白的表达明显增加;④流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示白藜芦醇呈浓度依赖性诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇可引起细胞S期阻滞?结论:白藜芦醇可抑制人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖,诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇阻滞细胞于S期,可能是抑制IHH4细胞增殖?促使其凋亡的原因之一?     

DNMT3B对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨敲减DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3 beta, DNMT3B)对甲状腺乳头状癌细胞BCPAP增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法 采用Western blot方法检测正常人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1和甲状腺癌细胞株TPC-1、K1和BCPAP中DNMT3B的表达,以DNMT3B高表达的BCPAP细胞作为后续研究对象,实验分为空白对照组(control组)、阴性对照组(si-NC组,转染阴性siRNA)和敲减DNMT3B组(si-DNMT3B组,转染干扰DNMT3B表达的siRNA)。应用RNA敲减(RNAi)技术合成针对DNMT3B的siRNA并转染BCPAP细胞,qRT-PCR和Western blot检测各组中DNMT3B、死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase, DAPK)、细胞凋亡调控因子(Bcl-2-associated X protein, Bax)和Ras相关区域家族1A(Ras-associated domain family 1A, RASSF1A)这4个基因的mRNA和...     

沉默赖氨酸乙酰基转移酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨赖氨酸乙酰基转移酶（Kat5）对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法：RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组（si-Kat5组）。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5 siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PI3K、磷酸化PI3K （p-PI3K）、AKT和磷酸化AKT （p-AKT）蛋白水平。结果：甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞（P<0.05）。各组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（P<0.05）;与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖活性降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低（P<0.05）,P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：甲状腺乳头状癌细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

碘酸钾和双酚A对甲状腺乳头状癌细胞增殖的影响

目的   观察碘酸钾和双酚A对人甲状腺乳头状癌细胞BHP10-3增殖的影响。方法   采用10-3~10-10mol/L碘酸钾和10-3~10-10mol/L双酚A(BPA),10-7mol/L碘酸钾+10-8mol/L双酚A培养BHP10-3细胞后,采用CCK-8细胞增殖活性法测定细胞增殖,采用流式细胞仪分析甲状腺乳头状癌细胞周期,采用western-blot印迹法和RT-PCR法分别检测细胞增殖周期调控基因（Cyclin D1）在蛋白和mRNA水平的表达。结果   与对照组细胞相比,10-7mol/L碘酸钾组、10-8mol/L双酚A组以及10-7mol/L碘酸钾联合10-8mol/L双酚A组,细胞吸光光度值增加（P<0.05）; G0-G1期细胞比例减少,  S期细胞比例增加(P<0.05);CyclinD1蛋白和mRNA的表达量均增加（P<0.05）。结论   碘酸钾和双酚A在一定浓度范围内可以促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖。     

SCD1对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)细胞TPC1增殖、迁移及侵袭的影响.方法:采用Western blot方法检测人甲状腺滤泡上皮正常细胞Nthy-ori 3-1和甲状腺乳头状癌细胞株...     

下调microRNA-214表达对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的观察下调microRNA-214(miRNA-214)表达对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法采用脂质体介导方法将miRNA-214抑制剂转染人卵巢癌SKOV-3细胞,分为正常对照组、阴性对照组和miRNA-214下调组,采用实时定量聚合酶链反应方法检测miRNA-214、p21和p53基因mRNA表达,Western blot法检测细胞p21和p53蛋白表达。四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果正常对照组、阴性对照组和miRNA-214下调组人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达分别为11.32±0.47、10.18±0.45和6.52±0.49,细胞增殖率分别为(17.61±1.83)%、(19.14±1.86)%和(11.24±1.89)%,细胞凋亡率分别为(14.47±1.86)%、(13.72±1.89)%和(21.21±1.91)%,p21基因mRNA表达分别为5.96±0.69、5.38±0.74和8.31±0.72,p53基因mRNA表达分别为3.64±0.39、3.17±0.38和5.86±0.37,p21蛋白表达分别为0.47±0.19、0.49±0.21和0.75±0.22,p53蛋白表达分别为0.40±0.14、0.39±0.16和0.66±0.18。与正常对照组和阴性对照组比较,miRNA-214下调组人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达、细胞增殖率降低(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡率、p21基因mRNA表达、p53基因mRNA表达、p21蛋白表达、p53蛋白表达均增加(P<0.05,P<0.01);阴性对照组与正常对照组比较,miRNA-214表达、细胞增殖率、细胞凋亡率、p21基因mRNA表达、p53基因mRNA表达、p21蛋白表达、p53蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论下调人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达可抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,上调p21和p53基因表达可能是其作用机制。     

超声甲状腺乳头状癌和微小乳头状癌结节的鉴别诊断

目的 探讨经病理学确诊为甲状腺乳头状癌（PTC）和甲状腺微小乳头状癌（PTMC）的患者超声（US）、临床特征及其与结节大小的关系。方法 回顾性分析2012年1月～2022年1月在浙江省杭州市临平区第一人民医院经超声检查并经病理组织学确诊为PTC及PTMC的患者350例的临床资料、超声影像学资料。将所有病例分为PTC组和PTMC组,其中将PTMC组分为最长径>5mm组和≤5mm组,观察患者的临床特征、超声影像学表现差异。结果350例共发现412个结节,PTMC组259个,PTC组153个,其中最长径≤5mm为65例。结论 超声检查时PTMC患者和≤5mm患者偶然发生率高,因此在超声检查时应仔细评估结节的超声特征,对于可疑病例应进行超声引导下细针穿刺活检（US-FNAB）以制定正确的治疗策略。     

CYFRA21-1在甲状腺乳头状癌转移中的意义

目的探讨血清CYFRA21—1的检测在甲状腺乳头状癌在诊断转移中的意义。方法选择我院2005年1月～2008年1月本院收治的甲状腺乳头状癌伴转移患者117例,分别测定患者血清中甲状腺球蛋白、CYFRA21—1的含量,并将两种检测的阳性率进行比较。结果甲状腺乳头状癌患者血清CYFRA21—1的阳性率为83．76％（98／117）明显高于甲状腺球蛋白的阳性率61．53％（72／117）,差异有统计学意5C（P〈0．01）。结论血清CYFRA21-1和甲状腺球蛋白均可用于诊断甲状腺乳头状癌的转移,但前者的阳性率要高于后者。     

microRNA-145对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的探讨microRNA-145(miR-145)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖的影响。方法用脂质体法将miR-145转染入ESCC细胞,实验分为正常对照组、随机序列组和miR-145组。在荧光显微镜下观察细胞生长及基本形态,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-145的表达,采用噻唑蓝(MTT)增殖试验检测细胞增殖情况,用伤口愈合实验检测细胞迁移。结果 72h后,MTT增值实验显示,miR-145组[表达值为(0.56+0.04)]的癌细胞增殖速度较正常对照组[表达值为(0.98+0.09)]和随机序列组[表达值为(0.95+0.11)]明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-145对ESCC细胞的增殖可能有抑制作用。     

降糖药二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖及凋亡的作用

目的:研究二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖及凋亡的作用,初步探讨其作用机制?方法:以不同浓度二甲双胍作用于未分化癌SW1736细胞,MTT法检测其增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况?结果:二甲双胍可显著抑制SW1736细胞增殖,其抑制作用呈剂量依赖性,并随着作用时间的延长抑制作用逐渐增强,于72 h达到最大抑制效果?流式细胞检测结果显示二甲双胍可阻滞未分化癌细胞周期至G0/G1期;并可促进肿瘤细胞凋亡,随着二甲双胍作用浓度的递增,肿瘤细胞的凋亡率逐渐增加,20 mmol/L二甲双胍作用48 h后,可使SW1736细胞凋亡率从8.3%增加至13.3%,与对照组相比,有显著统计学差异?结论:二甲双胍可抑制甲状腺未分化癌细胞的增殖活性,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,为甲状腺未分化癌的治疗研究提供了新的方向?     

miR-144对甲状腺乳头状癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究甲状腺乳头状癌（PTC）细胞株中miR-144的表达水平,探讨miR-144不同表达水平对甲状腺癌细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法：通过qPCR检测人PTC细胞K1、TPC-1和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-144的表达水平。K1细胞分别转染miR-144 mimics、miR-144 inhibitor及阴性对照（NC）。应用MTT增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术分别检测miR-144不同表达水平对K1细胞生物学功能的影响。Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1的表达情况。结果：PTC细胞中miR-144相对表达量与正常甲状腺细胞相比显著降低（P＜0.05）,其中K1细胞中miR-144的表达量最低。在K1细胞株中过表达miR-144后,细胞的增殖能力、单克隆形成能力显著下降,并且Cyclin D1表达水平降低,细胞被阻滞在G0/G1期（P＜0.05）。而miR-144表达下调则得到相反的结果。结论：miR-144在PTC细胞中低表达。通过抑制PTC细胞增殖、阻滞细胞周期,miR-144可能在PTC的发生发展中扮演抑癌基因的角色。     

siRNA干扰CTHRC1可体外抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖并诱导凋亡

目的 探讨胶原三股螺旋重复蛋白1（CTHRC1）甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、凋亡的影响。方法 成功筛选干扰甲状腺乳头状癌TPC-1细胞CTHRC1表达的siRNA,以脂质体转染法将siRNA转染甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,采用real-time PCR和Western blot检测转染后TCP-1细胞中CTHRC1mRNA和蛋白表达的变化。实验分组：将筛选的干扰序列转染TPC-1细胞作为干扰组（si-CTHRC1组）,将随机阴性对照序列转染的TPC-1细胞作为阴性对照组（si-NC组）,以不做任何处理TPC-1细胞为空白组（WT组）。采用CCK-8实验检测细胞增殖;流式细胞术AV/PI双染观察各组TCP-1细胞凋亡的变化;采用Western blot法检测各组 TPC-1 细胞中含剪切型半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（c-Caspase-3）蛋白、剪切型多聚 ADP 核糖聚合酶 1 （c-PARP1）蛋白表达水平以及磷酸化细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)表达水平。结果 将筛选出明显抑制 TPC-1 细胞CTHCR1表达的siRNA转染细胞后,TPC-1细胞中CTHRC1 的mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。与WT组和si-NC组相比,si-CTHRC1组的细胞活降低（P<0.05）;与对照组相比,si-CTHRC1组的TPC-1细胞细胞凋亡率升高,Western blot实验发现：si-CTHRC1组的c-caspase-3、c-PARP1蛋白表达水平均升高（P<0.05）;si-CTHRC1组ERK1/2蛋白的磷酸化水平增加。结论 干扰CTHRC1能够抑制TPC-1细胞的增殖并诱导凋亡,此过程可能通过激活ERK1/2信号通路介导。     

茶多酚诱导人甲状腺乳头状癌细胞凋亡作用的研究

目的研究茶多酚对人甲状腺乳头状癌细胞的凋亡作用.方法实验组(含茶多酚100μg/ml,200μg/ml,400μg/ml),对照组(含10.00?S的RPMI1640)分别培养48 h,采用碘化吡啶染色,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,并于电镜下观察凋亡细胞的形态.结果经茶多酚作用48 h后CGTH W-3细胞凋亡百分比明显增加,对照组凋亡百分比为3.51%,茶多酚100μg/ml组为12.61%,茶多酚200μg/ml组为52.90%,茶多酚400μg/ml组为70.79%(P＜0.01).电镜下可见细胞浆空泡变性,染色质浓集,核膜皱缩.结论茶多酚具有诱导人甲状腺乳头癌细胞(CGTH W-3)凋亡的作用,并呈浓度依赖关系.     

RNAi 介导 ObR基因沉默对人乳头状甲状腺癌 K1细胞增殖与侵袭能力的影响

目的：探讨用RNAi介导瘦素受体基因（ObR）沉默人乳头状甲状腺癌K1细胞（K1细胞）增殖与侵袭能力的影响。方法使用 siRNA 干扰技术瞬时转染构建 siRNA‐ObR。瞬时转染后,Real‐time PCR和Western blotting在mRNA水平和蛋白水平检测siRNA‐ObR是否有效抑制K1细胞内靶基因的表达;MTT 实验研究ObR沉默后K1细胞的增殖能力;Transwell实验检测ObR沉默后K1细胞的侵袭能力。结果 Real‐time PCR实验结果显示,ObR基因沉默后K1细胞ObR mRNA表达显著降低;Western blotting实验结果显示, ObR基因沉默后K1细胞ObR蛋白表达显著降低;M T T实验结果显示ObR对K1细胞的增殖没有意义;T ran‐swell实验结果显示ObR沉默后K1细胞侵袭能力显著下降。结论 ObR基因沉默能有效抑制K1细胞ObR基因的表达,降低K1细胞的侵袭能力。     

甲状腺系膜切除术在老年甲状腺乳头状癌病人中央区淋巴结清扫中的应用效果

目的:探讨甲状腺系膜切除术在老年甲状腺乳头状癌病人中央区淋巴结清扫中的效果.方法:甲状腺乳头状癌病人134例,随机分为观察组和对照组各67例,对照组行常规中央区淋巴结清扫,观察组行甲状腺系膜切除术清扫中央区淋巴结.术后观察2组淋巴结转移情况、呛咳、声带麻痹、手足麻木及血肿等并发症发生情况,测定术后甲状腺旁水平及血钙水平.结果:观察组淋巴结复发转移率为5.97%,对照组为16.42%,2组淋巴结复发转移率差异无统计学意义(P>0.05);观察组术后并发症总发生率为10.93%,对照组为22.39%,2组术后并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,2组治疗后甲状旁腺水平及血钙水平均显著降低(P<0.01),与观察组比较,对照组甲状旁腺水平及血钙水平下降更明显(P<0.01).结论:甲状腺系膜切除术在甲状腺乳头状癌者中央区淋巴清扫中应用效果良好,淋巴结复发转移率低,并发症少,无明显的甲状旁腺损伤及低血钙症,值得临床推广应用.     

妊娠糖尿病患者血清microRNA-21调节Bcl-2/Caspase-9对滋养层细胞生物学行为的影响

目的 探讨妊娠糖尿病（GDM）患者血清microRNA-21（miR-21）表达变化及其对滋养层细胞生物学行为的作用机制。方法 选取2019年1月—2020年10月三亚市妇幼保健院收治的66例GDM孕妇及同期体检且孕周相近的38例健康孕妇作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血清miR-21 mRNA表达水平,microRNA转染JAR细胞系构建Control、miR-21 NC、miR-21、miR-21 inhibitor NC和miR-21 inhibitor组细胞。采用CCK-8法检测细胞活力,Brdu检测细胞增殖,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭,TUNEL法检测细胞凋亡;采用Western blotting检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase 9、E-cadherin及Vimentin蛋白表达。结果 研究组患者miR-21 mRNA相对表达量及FPG、HbA1c水平较对照组高（P <0.05）。miR-21组细胞miR-21 mRNA相对表达量高于Control组（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞 mRNA相对表达量低于Control组（P <0.05）。CCK-8法检测结果显示,miR-21组细胞活力较Control组下调（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞活力较Control组上升（P <0.05）。miR-21组细胞增殖能力较Control组减弱（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞增殖能力较Control组增强（P <0.05）。miR-21组细胞凋亡率较Control组升高（P <0.05）,miR-21 inhibitor组细胞凋亡率较Control组降低（P <0.05）。miR-21组的穿膜细胞数低于Control组（P <0.05）,miR-21 inhibitor组的穿膜细胞数高于Control组（P <0.05）。相较于Control组,miR-21组E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调（P <0.05）,miR-21 inhibitor组E-cadherin表达下调,Vimentin表达上调（P <0.05）。相较于Control组,miR-21组Cleaved Caspased-9、Bax蛋白相对表达量上升,Bcl-2蛋白相对表达量下降（P <0.05）;miR-21 inhibitor组Caspased-9、Bax蛋白相对表达量下降,Bcl-2蛋白相对表达量上升（P <0.05）。结论 GDM孕妇存在miR-21高表达,miR-21可通过调节Bcl-2/Caspase-9介导对滋养层细胞增殖、侵袭的抑制作用,继而促进细胞凋亡。     

血清microRNA-21在食管鳞状细胞癌中表达的临床意义

目的 探讨食管鳞状细胞癌（ESCC）患者血清中外核体microRNA-21（miRNA-21）表达水平的临床意义.方法 从51例ESCC患者（ESCC组）血清中分离出外核体,提取总RNA,通过实时定量PCR技术检测miRNA-21的表达情况.以良性病变且无全身性炎性反应的41例患者作为对照组.结果 ESCC组患者血清中外核体miRNA-21表达水平明显高于对照组患者（P〈0.01）,而在已去除外核体的剩余血清中检测不到miRNA-21.ESCC患者血清外核体能在体外诱导食管鳞状细胞癌细胞增殖.外核体miRNA-21高表达亚组中年龄≥68岁患者比例、T3/T4型比例、III/IV期患者比例明显高于低表达亚组,而发生癌症转移患者的比例明显降低（P〈0.05,P〈0.01）.结论 ESCC患者血清中外核体miRNA-21表达明显上调,外核体miRNA-21表达水平与肿瘤进展和侵袭性密切相关,提示外核体miRNA-21可能是肿瘤治疗的一个有效靶标.