miR-194对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨microRNA-194(miR-194)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-194的表达差异,并在A549/DDP细胞中转染miR-194-inhibitor后检测miR-194的表达变化;应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性?细胞增殖能力及凋亡变化;Western blot检测转染后A549/DDP细胞中Bax和Bcl-2的表达变化?结果:miR-194在耐药细胞A549/DDP中的表达量显著高于其亲本细胞株A549(P < 0.05),A549/DDP在转染miR-194-inhibitor 24 h后miR-194的表达水平较对照组显著下降(P < 0.05)?抑制miR-194表达后,相对于对照组,DDP对转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞增殖能力减弱,经DDP处理后凋亡细胞增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与对照组相比,转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低?结论:miR-194可能通过抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白表达而增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,抑制miR-194的表达可逆转A549/DDP细胞的耐药性?     

miR-135a/b逆转肺癌A549/CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究

目的:研究miR-135a/b对肺癌耐顺铂细胞株A549/CDDP顺铂耐药的影响?方法:运用实时荧光定量PCR检测miR-135a/b在A549和A549/CDDP 细胞株中的差异表达;MTT法检测转染后A549及A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性;构建MCL1-3′-UTR荧光素酶报告质粒验证miR-135a/b的靶基因;Western blot检测转染前后细胞MCL1蛋白的表达差异;流式细胞术检测转染后耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响?结果:miR-135a/b在A549/CDDP细胞中表达量降低;在耐药株中上调miR-135a/b后显著增加细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶实验证实MCL1是miR-135a/b的靶基因;抗凋亡蛋白MCL1在A549/CDDP细胞中呈高表达,上调miR-135a/b明显抑制耐药细胞中MCL1蛋白的表达;miR-135a/b显著增加A549/CDDP细胞对顺铂诱导的凋亡?结论:miR-135a/b通过靶向调控MCL1蛋白表达增加NSCLC细胞对顺铂的敏感性和凋亡?     

川芎嗪对人非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP的相关ATP结合盒转运体表达水平的影响

目的：观察川芎嗪（四甲基吡嗪）对耐药相关ATP结合盒转运体B1(ABCB1)、C1(ABCC1)和G2(ABCG2)表达水平的影响,揭示其逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP耐药的机制。方法：采用细胞增殖（CCK8）实验,分析人肺腺癌细胞株A549及顺铂耐药株A549/DDP对顺铂的耐受性,计算耐药指数。分析A549/DDP对川芎嗪的耐受性,遴选逆转耐药所需的工作浓度并检测逆转效果。设置空白组接种A549细胞,模型组、实验组和阳性对照组均接种A549/DDP细胞;空白组和模型组均用1640完全培养基孵育,实验组用含工作浓度川芎嗪的1640完全培养基孵育,阳性对照组用含Tariquidar的1640完全培养基孵育。提取各组全部蛋白及mRNA,用免疫印迹法（Western Blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析川芎嗪对ABCB1、ABCC1和ABCG2及其m RNA表达水平的影响。结果：A549细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（28.33±3.19）μM,A549/DDP对顺铂的IC50为（983.43±101.67）μM,A549/DDP的耐药指数为34....     

EGCG对肺癌A549/DDP细胞药物敏感性的影响及机制

目的探讨EGCG对肺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂敏感性的影响及作用机制。方法MTT法检测EGCG对A549/DDP细胞药物敏感性的影响。AO/EB染色法检测EGCG联合顺铂处理A549/DDP细胞前后凋亡的形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot方法观察EGCG作用前后耐药蛋白GST-π、Survivin表达的变化。结果MTT比色法显示20、40、60μg/mL EGCG均可增加细胞对顺铂的敏感性;荧光显微镜下观察到EGCG处理后细胞体积缩小,核固缩,呈典型的凋亡形态学改变;Western Blot方法检测发现,不同浓度的EGCG处理细胞24 h后GST-π、Survivin蛋白表达均下调。流式细胞术显示,20、40、60μg/mL EGCG联合顺铂处理细胞24 h后,凋亡率逐渐增加,说明EGCG联合顺铂能够促进肺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。结论EGCG能够增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与降低GST-π、Survivin蛋白表达从而诱导细胞凋亡有关。     

lncRNAs在非小细胞肺癌顺铂耐药机制中的研究进展

肺癌是中国乃至全球最常见的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC）约占所有肺癌的80%,因NSCLC对化疗药物继发耐药率高,所以其5年生存率仍低于20%。长链非编码RNAs（longnon-codingRNAs,lncRNAs）是一类转录后长度大于200nt的非编码RNAs,越来越多的研究显示lncRNAs和NSCLC顺铂耐药关系密切,本文就目前研究与NSCLC顺铂耐药相关的lncRNAs作一综述。     

MT1X siRNA对肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨金属硫蛋白1X（MT1X）在肺癌耐药细胞株（A549／DDP）顺铂耐药中的作用。方法通过化学合成针对MT1X的siRNA段抑制其在A549／DDP中的表达,实时定量聚合酶链反应（PCR）及WB检测干扰效果,M1Tr及平板克隆形成实验检测干扰前后细胞对顺铂的药物敏感性变化;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果针对MT1X的siRNA片段能在RNA及蛋白水平有效抑制其在A549／DDP中的表达;与对照组相比,MT1X表达被抑制后,肿瘤细胞对顺铂的敏感性明显升高;增殖被抑制,平板克隆形成率明显降低（P〈O．05）,细胞凋亡率显著增高（P〈0．05）。结论针对MT1X的siRNA片段可部分逆转肺癌细胞（A549／DDP）对顺铂的耐受,为提高肺癌的化疗效率提供了一种新方法。     

转染Smac增强非小细胞肺癌细胞株A549对顺铂的化疗敏感性

[摘要] 目的 探讨转染Smac对非小细胞肺癌细胞株A549化疗敏感性的影响。方法 利用脂质体将PcDNA3.1/Smac重组体转染到非小细胞肺癌细胞株A549,并联合顺铂作用于A549,western blot检测转染后细胞内Smac 蛋白表达。Annexin V/PI 双染经流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 （1）western blot检测结果：可见转染PcDNA3.1/Smac重组体后细胞内Smac蛋白表达明显高于未转染组（P＜0.05）。（2） 单独转染PcDNA 3.1/Smac仅能诱导较少细胞凋亡,但与空载体PcDNA3.1转染组及未处理组比较有显著差异（P＜0.05）。（3）转染PcDNA 3.1/Smac并顺铂（5ug/mL）联合作用,细胞凋亡率明显较单独使用顺铂组升高（P＜0.05）。结论 转染Smac能增强非小细胞肺癌细胞株A549对顺铂的化疗敏感性。 [关键词] Smac;非小细胞肺癌;转染;凋亡;顺铂     

microRNA-21对肺癌A549细胞增殖和Smad7表达的影响

目的 探讨微小RNA-21 ( miR-21 )对肺癌A549细胞中Smad7表达的调控和对肺癌A549 细胞增殖的影响. 方法 常规培养肺癌细胞系A549,经脂质体转染miR-21模拟物和抑制物及阴性对照片段48 h后,采用Western blot、qRT-PCR法检测 Smad7 基因及蛋白的表达水平, MTT 法检测A549细胞增殖情况. 结果 转染miR-21 模拟物后Smad7的mRNA和蛋白表达量降低( P<0. 05 ) ,而转染miR-21 抑制物后Smad7的mRNA和蛋白表达量升高( P<0. 05 );MTT结果显示转染 miR-21 模拟物后细胞的增殖能力明显增强(P<0. 05),而转染miR-21 抑制物后细胞增殖能力明显减弱( P<0. 05 ). 结论 通过下调 miR-21 可提高 Smad7 的mRNA和蛋白表达,进而抑制A549细胞的增殖.     

拓扑替康联合顺铂治疗晚期肺鳞癌的初步临床研究

目的：观察拓扑替康联合顺铂治疗晚期肺鳞癌的疗效和毒副反应。方法：经病理组织学或细胞学证实的46例肺鳞癌患者给予拓扑替康1．0－1.2mg/m^2静滴，第1－5天，顺铂60－80mg/m^2静滴，第六天，21d为一周期。结果：全组无CR，PR23例，SD15例，PD8例，31例初治者和15例复治者近期有效率分别为54．8％，40．0％，总有效率50．0％。中位生存期10个月（4－15个月），1年生存率为32．6％。毒副反应主要有骨髓抑制、胃肠道反应及轻度脱发。结论：拓扑替康联合顺铂治疗肺鳞癌具有较好的疗效，不良反应均可耐受。     

AEG-1表达下调对非小细胞肺癌A549细胞增殖和对顺铂敏感性的影响

目的探讨下调AEG-1表达对非小细胞肺癌A549细胞增殖以及其对顺铂敏感性的影响。方法采用siRNA技术,下调非小细胞肺癌A549细胞AEG-1基因的表达,反转录PCR和免疫细胞化学检测AEG-1表达抑制程度。通过MTT增殖实验、平板克隆形成实验检测AEG-1表达下调对细胞增殖的影响。将转染后的细胞暴露于不同浓度的顺铂中作用48h,通过MTT实验检测AEG-1表达下调后细胞对顺铂敏感性变化。结果 AEG-1表达下调后,细胞增殖受到抑制,48h和72h的抑制率分别达到54.6%和59.7%;细胞克隆形成能力下降,AEG-1表达下调组克隆形成数较阴性对照组降低60.2%;实验组和对照组的IC50分别为4.8μmol/L和20.4μmol/L。结论下调AEG-1基因表达可明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性。     

miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响。方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达。结果 miR-424在肺癌细胞NCIH460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P0.01)。与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P0.01)。结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭。     

aaptamine 与顺铂联合用药对人肺腺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用

探讨aaptamine与顺铂（DDP）联合用药对肺癌DDP耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用,并阐明其可能的分子机制。     

AS-miR-21对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及对PTEN/PI3K/Akt信号通路的作用

目的 探讨miR-21的反义寡核苷酸(AS-miR-21)对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞增殖和迁移能力的影响及对PTEN/PI3K/Akt信号通路的调控作用机制.方法 将NSCLC A549细胞分为3组,分别为AS-miR-21组、miR-NC组和Blank组,前两组分别应用阳离子脂质体LipofectamineTM 2000瞬时转染AS-miR-21及阴性对照miRNA(miR-NC),后者未进行任何干预.应用qRT-PCR检测AS-miR-21对NSCLCA549细胞中miR-21表达的影响;应用MTT检测NSCLC A549细胞增殖抑制率;Giemsa染色检测NSCLCA549细胞克隆形成;细胞划痕实验检测NSCLCA549细胞迁移潜能;qRT-PCR检测AS-miR-21对NSCLC A549细胞中PTEN mRNA表达水平的影响;蛋白质免疫印迹法检测AS-miR-21对NSCLC A549细胞中PTEN、PI3K、Akt蛋白表达水平的影响.结果 与miR-NC组和Blank组比较,AS-miR-21组miR-21表达水平下调(P ＜0.05);AS-miR-21显著抑制NSCLCA549细胞增殖能力(P＜0.05),显著减少NSCLCA549细胞克隆形成(P＜0.01)和迁移率(P＜0.01);AS-miR-21显著上调NSCLC A549细胞中PTEN蛋白表达水平(P＜0.01),而显著下调PI3K和Akt蛋白表达水平(P＜0.01).结论 AS-miR-21能抑制NSCLCA549细胞增殖及迁移,此外,AS-miR-21通过负调控PTEN/PI3K/Akt信号通路有可能成为NSCLC治疗新靶点.     

健择+顺铂方案治疗晚期非小细胞肺癌临床疗效观察

目的观察健择联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效和毒副作用.方法对30例Ⅲ期及Ⅳ期的非小细胞肺癌患者,于第1天和第8天给予健择(gemcitabine, GEM) 1 200 mg/m2,静脉输注;第1天顺铂(cis-dichlorodiamine platinum, DDP)100 mg/m2,静脉输注;第1天和第8天或为DDP 30 mg/m2,静脉输注.28 d为1个周期.结果全组完全缓解(complete response, CR) 2例,部分缓解(partial response, PR) 12例,无变化(no change, NC) 11例,进展(progression disease, PD) 5例,总有效率为46.67%.初治有效率为52.38%,复治为33.33%.两组经统计学比较,差异有显著性(P<0.05).毒性反应为白细胞减少和血小板减少.结论健择联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效较高,毒性可耐受.     

贝伐单抗对荷耐顺铂人肺腺癌A549/DDP裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的 探讨贝伐单抗联合或不联合顺铂对耐顺铂肺腺癌A549/DDP移植瘤生长的抑制作用.方法 建立裸鼠移植瘤模型,随机分成空白对照组(A组)、单药贝伐单抗组(B组)、单药顺铂组(C组)、联合用药组(D组)和联合半剂量组(E组)5组,连续用药4周.观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率;免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度(MVD);RT-PCR分析各组经治疗后凋亡基因bcl-2及耐药基因(LRP、GST-Π)mRNA表达情况.结果 与空白对照组比较,经贝伐单抗治疗组(B、D、E组)抑瘤率分别为20.96%、51.67%、50.95%,联合用药组(D、E组)效果最佳.经贝伐单抗治疗组微血管密度分别为18.6±1.14、13.6±1.14、14.4±0.55,联合用药组最为显著,而单药顺铂组与对照组在抑瘤率和微血管密度表达上均无差异(P=0.632).经贝伐单抗治疗组bcl-2 mRNA表达较对照组有显著差异(P＜0.001),但三组之间无差异(P＞0.05);五组之间在LRP、GST-Π mRNA表达上无明显差异(P＞0.05).结论 贝伐单抗对荷A549/DDP裸鼠移植瘤有抑制作用,联合顺铂用药有显著协同作用,同时提高A549/DDP耐药细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与抑制肿瘤微血管形成、诱导细胞凋亡增加有关.