加巴喷丁对大鼠背根神经节神经元高电压激活钙电流的影响

目的 探讨加巴喷丁对正常大鼠与神经病理性痛大鼠不同损伤部位的背根神经节神经元高电压激活(HVA)钙电流的影响及其原因.方法 雄性SD大鼠,周龄4～6周,采用左侧L5脊神经结扎(SNL)术制备大鼠神经病理性痛模型.于结扎后第14天时采用酶消化法急性分离结扎侧L4背根神经节神经元(SNL-L4组)、L5背根神经节神经元(SNL-L5组),另取正常大鼠L4,5背根神经节神经元作为对照组.采用全细胞膜片钳技术记录加巴喷丁对3组神经元HVA钙电流的作用.结果 在10、100、300 μmol/L浓度下,加巴喷丁对SNL-L5组峰值钙电流的抑制率[(18.5±1.7)%、(32.0±2.6)%、(32.7±2.8)%]高于SNL-L4组[(16.0±1.9)%、(26.9±2.0)%、(27.4±2.3)%]和对照组(均P<0.05).加巴喷丁作用后,SNL-L5组钙通道稳态失活曲线向超级化方向移动幅度较其他两组明显.与其他两组比较,SNL-L5组加巴喷丁敏感性钙电流中N型钙电流比例升高(均P<0.05).结论 加巴喷丁对神经病理性痛大鼠L5背根神经节神经元HVA钙电流的抑制作用增强,其可能与神经损伤后钙通道激活特性的改变以及N型钙电流比例的升高有关.

Abstract：

Objective To compare the effects of gabapentin on high-voltage-activated calcium (HVA) current in dorsal root ganglion (DRG) neurons in normal and nerve-injured rats and understand the reasons of their differences. Methods Pathogen-free male SD rats(weight 180-220 mg)aged 4-6 weeks were used. The animals were anesthetized with intraperitoneal pentobarbital sodium 50 mg/kg. L5 spinal nerve was ligated between DRG and sciatic nerve and cut distal to the ligature. The animals were decapitated at Day 14 post-operation. L5 (SNL-L5 group) and L4 DRGs (SNL-L4 group) were respectively isolated and the ganglionic neurons enzymatically dissociated. The control group of rats was not operated. The lumbar DRG neurons of normal rats were treated similarly. The HVA-Ca2+ current was recorded by the technique of whole cell patch clamp. Results Compared with the SNL-L4 group [(16.0±1.9)%, (26.9±2.0)%, (27.4±2.3)%] and the control group, gabapentin inhibited the peak calcium current highlier at 10, 100 and 300 μmol/L in the SNL-L5 group [(18.5±1.7)%, (32.0±2.6)%, (32.7±2.8)%] (P<0.05). The steady-state inactivation curves shifted to more hyperpolarized potentials in the SNL-L5 group. The N-type relative contribution to the gabapentin-sensitive HVA-Ca2+ current was markedly elevated in the SNL-L5 group compared with that in other two groups (P<0.05). Conclusion Gabapentin enhances the inhibition of HVA-Ca2+ current in injured DRG neurons following spinal nerve ligation in rats. The alteration in the activation of electrophysiological properties and the increase of N-type relative contribution to the total HVA-Ca2+ current may be involved in the mechanism.     

自噬调节在脉冲射频治疗神经病理性疼痛中的作用

目的：观察腰5(L5)脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)致慢性疼痛大鼠接受背根神经节脉冲射频(pulse radiofrequency,PRF)治疗后痛觉行为学的变化,检测脊髓背角自噬相关基因LC3和自噬受体蛋白P62的表达情况,研 究PRF是否能通过调节脊髓背角神经元自噬水平发挥镇痛作用。方法：36只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、SNL 组(行左侧L5脊神经的暴露和结扎)和SNL+PRF组(建立SNL模型后即刻给予1次同侧背根神经节PRF治疗)。分别于手 术前1 d及术后1,3,7,14,28 d观察各组大鼠机械刺激缩足反应阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)改 变,Western印迹检测自噬相关基因LC3和细胞自噬受体蛋白P62在大鼠损伤侧相应节段脊髓背角的表达改变。结果： 与Sham组相比,SNL组大鼠在术后各时点PWMT均明显下降(P<0.05);与SNL组相比,SNL+PRF组大鼠在PRF治疗术 后第1天即出现PWMT的升高,并持续28 d(P<0.05);与Sham组相比,SNL组大鼠在术后7 d脊髓背角LC3-II和P62蛋白 表达明显升高(P<0.05);与SNL组相比,SNL+PRF组大鼠在术后7 d脊髓背角LC3-II和P62蛋白表达明显下调(P<0.05)。 结论：SNL慢性疼痛大鼠接受背根神经节PRF治疗后出现疼痛行为学改善,PRF治疗可能通过上调脊髓背角神经元自 噬水平发挥镇痛作用。     

γ-氨基丁酸及其受体在慢性神经病理痛大鼠背根神经节中的表达及意义

目的:探讨大鼠脊髓背根神经节(DRG)γ-氨基丁酸(GABA)及其受体在慢性神经病理痛中的表达及意义。方法:20只SD大鼠行L5脊神经结扎(SNL)制备慢性神经病理疼痛模型,SABC法检测脊髓背根神经节GABA及其受体GABAAα1的表达,另取10只行假手术对照。结果:SNL组背根神经节大中神经元GABA及受体GABAA表达水平均明显下降(P<0.05)。结论:神经痛发生可能与DRG上GABA能神经元减少、GABAA受体表达下调致GABA能传递减弱有关。     

依达拉奉通过降低脊神经结扎大鼠背根神经节和脊髓pJNK抑制痛敏

目的:观察依达拉奉对脊神经结扎(SNL)大鼠痛敏的影响及其作用机制。方法:将SD雄性大鼠随机分为假手术(Sham)组、SNL模型组和依达拉奉(Eda)组,观察脊神经结扎大鼠术前及术后7 d机械痛反应阈值(PWMT)的变化;在术后相应时间点取各组大鼠手术侧L5和L4及对侧L5背根神经节(DRG)和脊髓,观察pJNK在DRG和脊髓中的表达分布及依达拉奉对pJNK表达的影响。结果:依达拉奉可以减轻脊神经结扎引起的痛敏现象;SNL组术后24 h手术侧L5DRG中pJNK阳性神经元的表达增加,术后3 d免疫双荧光显示脊髓中 pJNK在星型胶质细胞中存在高表达现象;依达拉奉可以降低相应时间点DRG和脊髓中pJNK表达的含量。结论:依达拉奉能抑制脊神经结扎引起的痛敏现象,其机制可能是通过降低脊髓和DRG中pJNK的含量而产生镇痛作用的。     

神经病理性痛大鼠背根神经节神经元钠电流的变化

目的 钠通道在神经病理性疼痛中的作用尚不十分明确,仍有许多疑题待研究.文中研究神经病理性痛模型大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元钠电流的变化. 方法 SD雄性大鼠,周龄4～6周,采用结扎L5脊神经的方法建立神经病理性痛模型.于术后14d时采用酶消化法急性分离模型组损伤侧组(SNL组)以及假手术组(Sham组)L5 DRG神经元,采用全细胞膜片钳技术记录神经元钠电流. 结果 SNL-L5组 DRG神经元河豚毒素敏感型钠电流(TTX-S INa)密度峰值较Sham组增高(P＜0.05),河豚毒素非敏感型钠电流(TTX-R INa)密度峰值较Sham组降低(P＜0.05).与Sham组比较,SNL组TTX-S INa的激活曲线向超极化移动了8.5mY(P＜0.05),稳态失活曲线变化没有统计学意义(P＞0.05);TTX-R INa激活向超极化移动7.4mV(P ＜0.05),稳态失活曲线向去极化方向移动9.6mV(P ＜0.05). 结论 神经病理性疼痛模型大鼠损伤DRG神经元2种钠电流发生了不同的变化,提示损伤神经元不同类型的钠通道在神经病理性痛过程中发挥着不同的作用.     

钙离子致神经细胞损伤中钙激活钾通道的应用研究

目的:采用膜片钳单通道记录法,对新生SD大鼠的皮层神经元中,钙激活钾通道(KCa)特征,及胞内不同游离钙水平,开放动力学的调节。结果:培养SD大鼠皮层神经元中,KCa以大电导活动占优势,胞内游离钙为10-8 mol/L时,通道几乎不开放,在10-6 mol/L时达最大激活。结论:神经元上KCa通道开放概率,依赖于胞浆中钙离子膜电位,KCa对胞内钙离子浓度敏感。钾通道的开放剂,有一定神经细胞保护作用。     

CD147参与大鼠神经病理性疼痛发生与发展中的作用

目的 探讨CD047在大鼠神经损伤后痛觉敏化形成中的作用.方法 分别采用免疫荧光染色法和Western blotting法检测大鼠脊神经结扎(SNL)后脊髓与背根神经节CD147的表达,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠背根神经节内CD147 mRNA的表达.大鼠背根神经节内注射CD147过表达RNA或干涉RNA后,观察机械性缩足反应阈值(MWT)的变化.结果 正常大鼠脊髓几乎不表达CD147,且SNL后脊髓CD147表达几乎无变化;正常大鼠背根神经节有少量CD147表达,SNL后CD147和mRNA表达均升高;大鼠背根神经节内注射对照RNA或过表达RNA后,对照组大鼠MWT未见明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05),RNA过表达组大鼠的痛域降低,差异有统计学意义(P＜0.05).大鼠背根神经节内注射对照RNA或干涉RNA后,对照组MWT下降,干涉RNA组痛域亦下降,但仍高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外周神经损伤后,大鼠背根神经节内CD147及其mRNA表达均上调;CD147过表达可诱发神经病理性疼痛,干涉CD147 RNA表达,抑制神经病理性疼痛.     

隐神经部分结扎大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察隐神经部分结扎（saphenous partial ligation,SPL）大鼠背根神经节P2X3受体表达的改变。方法麻醉下。制备大鼠SPL模型;测定SPL大鼠机械异常性疼痛和热痛敏的变化;应用免疫组化技术观察SPL大鼠损伤相应节段（L3、L4）的背根神经节P2X3受体表达的变化。结果SPL大鼠可产生热痛敏和机械异常性疼痛;SPL术后第7、14d,损伤同侧的L3、L4节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加。结论SPL是一种适合于病理性神经痛机制研究的模型,SPL可导致损伤同侧相应节段的背根节神经元P2X,受体表达增加。     

坐骨神经压迫性损伤大鼠背根神经节磷酸化p38MAPK表达的变化

目的:观察背根神经节(DRG)磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p -p38MAPK)在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)后表达的变化,探讨慢性神经痛的发生机制。方法:2 4只雄性SD大鼠随机分成空白对照组(Naive组)、假手术组(Sham组)、坐骨神经结扎后7d组和1 4d组(CCI7d和CCI1 4d组) ,分别在各自的时间点灌注取材L4- 5背根神经节,用免疫组织化学方法观察磷酸化p38MAPK表达的变化。结果:坐骨神经结扎组背根神经节磷酸化的p38MAPK免疫阳性神经元数和染色深度均明显增加,与假手术组或空白对照组相比,差异具有显著性(P <0 .0 1 )。结论:坐骨神经损伤后背根神经节p38MAPK的激活与神经性疼痛的病理过程密切相关。     

辣椒素通过钙信号抑制感觉神经元的电压门控性钙离子通道

目的 研究辣椒素对大鼠背根神经节神经元的电压门控性钙离子通道的抑制效应及其信号机制.方法 在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,应用全细胞膜片钳技术记录电压激活性钙离子通道电流以及辣椒素诱导的电流,应用钙离子成像技术检测Ca2+浓度的变化.结果 辣椒素能够抑制大鼠DRG神经元的电压激活性钙离子通道电流.细胞外钾离子浓度显著升高引起细胞去极化并打开膜上电压门控性钙离子通道引起胞外Ca2+内流,辣椒素只在引起胞内Ca2+浓度显著升高的情况下才能抑制高钾诱导的电压门控性Ca2+内流.用咖啡因耗竭细胞内Ryanodine敏感性钙库以后,辣椒素引发的胞内钙浓度升高的效应被显著抑制,说明辣椒素可诱导胞内Ryanodine敏感性钙库释放Ca2+.结论 在辣椒素敏感性的大鼠DRG神经元中,辣椒索通过胞内钙信号抑制电压门控性钙离子通道.Ca2+信号部分来源于Ryanodine敏感性钙库.     

脊神经结扎慢性痛大鼠背根神经节细胞超极化激活电流(Ih)的变化

目的:研究超极化激活电流( hyperpolarization-activated current, Ih )在慢性神经源性痛中的作用.方法:以单侧L5和L6脊神经结扎制备神经源性痛大鼠模型,运用全细胞电压钳技术记录和分析背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)神经元Ih的表达和激活特征.结果:脊神经结扎后,相应节段小直径DRG神经元表达Ih的细胞比率升高,但大、中直径神经元Ih没有改变,另外大、中、小直径神经元Ih的活性增强.结论:神经损伤导致DRG神经元Ih的表达和电流活性发生改变,提示此种电流参与了神经源性痛"外周敏化"的发生.     

低频电针对SNL大鼠早期神经痛DRG p-TRPV1、CGRP的抑制作用

[目的]探讨低频电针干预早期神经痛对背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）辣椒素受体（Transient receptor potential vanilloid type 1,TRPV1）磷酸化与痛敏相关神经肽降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）与P物质（substance P,SP）的抑制作用。[方法]SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组与电针组,每组8只。模型组采用脊神经结扎（spinal nerve ligation,SNL）的方法制作大鼠神经痛模型。电针组采用2 Hz电针治疗,选取患侧＂足三里＂、＂昆仑＂穴,连续3d。检测D1、D3大鼠术侧后足缩腿阈（Paw withdrawal threshold,PWT）,D3 L5 DRG p-TRPV1、CGRP、SP水平。[结果]SNL模型大鼠早期即出现自发性疼痛,PWT显著下降（P〈0.001）,L5 DRG p-TRPV1水平升高（P〈0.001）,CGRP水平升高（P〈0.05）,SP水平下降（P〈0.05）。SNL假手术组大鼠PWT没有显著变化。2 Hz电针能提高SNL模型大鼠的PWT（P〈0.001）,降低L5 DRG p-TRPV1水平（P〈0.05）与CGRP水平（P〈0.01）,对SP水平没有显著影响。[结论]早期神经痛与DRG p-TRPV1、CGRP水平升高有关。低频电针能下调DRG p-TRPV1与CGRP水平,改善早期神经痛。     

Lead Can Inhibit NMDA^—,K^＋—,QA／KA—Induced Increases in Intracellular Free Ca^2＋ in Cultured at Hippocampal Neurons

Objective To examine the effects of Pb2+ on N-methyl-D-aspartate (NMDA)-, K+- and quisqualate(QA)/kainite(KA)-induced increases in intracellular free calcium concentration ([Ca2+]i) in cultured fetal rat hippocampal neurons in order to explain the cognitive and learning deficits produced by this heavy metal. Methods Laser scanning confocal microscopy was used. Results The results clearly demonstrated that adding Pb2+ before or after NMDA/glycine stimulation selectively inhibited the stimulated increases in [Ca2+]i in a concentration-dependent manner. In contrast, Pb2+ treatment did not markedly affect increases in [Ca2+]i induced by an admixture of QA and KA. The minimal inhibitory effect of Pb2+ occurred at 1 μ mol/L, and more than seventy percent abolition of the NMDA-stimulated increase in [Ca2+]iwas observed at 100 μmol/L Pb2+. Evaluation of pb2+-induced increase in [Ca2+]i response to elevating extracellular concentrations of NMDA, glycine or calcium revealed that Pb2+ was a noncompetitive antagonist of both NMDA and glycine, and a competitive antagonist of Ca2+ at NMDA receptor channels. In addition, Pb2+ inhibited depolarization-evoked increases in [Ca2+]i mediated by K+ stimulation (30 μmol/L), indicating that Pb2+ also depressed the voltage-dependent calcium channels. Also, the results showed that Pb2+ appeared to be able to elevate the resting levels of [Ca2+]i in cultured neurons, implying a reason for pb2+-enhanced spontaneous release of several neurotransmitters reported in several previous studies. Conclusion Lead can inhibit NMDA-, K+-, QA/KA-inducod increases in intracellular [Ca2+]i in cultured hippocampal neurons.     

大电导钾通道对脊髓神经元细胞内游离钙和兴奋性的影响

目的 探讨大电导钾通道(large conductance calcium-activited potassium channel,BK)对脊髓神经元细胞内游离钙 (intracellular free calcium, [Ca2 ]i) 和兴奋性的调节作用.方法 体外培养大鼠脊髓神经元细胞,应用膜片钳技术,观察生理状态下和持续电流去极化条件下BK通道特异性阻断剂Iberiotoxin对神经元[Ca2 ]i和动作电位频率的影响,并采用显微荧光测钙法观察Iberiotoxin对高钾条件下[Ca2 ]i的影响.结果 生理状态下,Iberiotoxin灌流(100 nmol/L)对神经元细胞自发动作电位的频率、[Ca2 ]i无显著影响.持续电刺激去极化后,Iberiotoxin灌流使动作电位频率增加,[Ca2 ]i显著升高.高钾溶液(20 mmol/L KCl)引起神经元[Ca2 ]i升高, 而Iberiotoxin灌流(100 nmol/L) 则使[Ca2 ]i进一步显著升高.结论 生理条件下,BK通道不参与脊髓神经元[Ca2 ]i和兴奋性的调节;但在受持续去极化刺激或在高钾条件下,BK对神经元[Ca2 ]i和兴奋性具有显著的调节作用.     

Effect of melatonin on the spatial and temporal changes of ［Ca2+］i in single living cells of cortical neurons by laser scanning confocal microscopy

Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ (ＭＴ ,Ｎ ａｃｅｔｙｌ 5 ｍｅｔｈｏｘｙｌｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ)ｉｓａｈｏｒｍｏｎｅｓｅｃｒｅｔｅｄｍａｉｎｌｙｂｙｔｈｅｐｉｎｅａｌｇｌａｎｄ ＳｏｍｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｔｈｅｅｘｏｇｅｎｏｕｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＭＴｃｏｕｌｄｐｒｏｌｏｎｇｌｉｆｅ ,ｐｏｓｔｐｏｎｅａｇｉｎｇ ,ａｎｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆａｇｅ ｒｅｌａｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ 1　ＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｆｒｅｅＣａ2 ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ (…     

Effects of nerve growth factor on intracellular free Ca2+ in oxygen/glucose-deprived cultures from cerebral cortex of fetal rats

ＩｔｉｓｗｅｌｋｎｏｗｎｔｈａｔｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒＣａ２＋ｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｂｏｔｈｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓ．ＡｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｏｆＣａ２＋ｈｏｍｅｏｓｔａ...     

氯胺酮对糖尿病大鼠神经功能及神经病理痛的作用

目的探讨氯胺酮对糖尿病大鼠神经功能及神经病理痛的疼痛作用。方法雌性Wistar大鼠24只,体重180—220g,随机分为3组（n=8）：正常组（N组）、糖尿病神经病理性痛组（D组）、氯胺酮组（K组）。D组、K组腹腔注射链脲菌素65mg／kg制作糖尿病神经病理痛模型,大鼠自由进食饮水饲养4周。自第5周开始,K组大鼠腹腔注射10mg／kg氯胺酮,1次／d,持续4周。随后测定各组大鼠机械痛阈值（MWT）、神经传导速度（NCV）。并用砂罗铬花青法行神经髓鞘染色和缓冲亚甲蓝法进行尼氏体染色。应用ELISA法测定脊髓内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量。结果D组脊髓和DRG神经元的尼氏体体积减小,并且有尼氏体的脱失和溶解。坐骨神经的髓鞘存在不同程度的水肿,空泡样变性,结构紊乱和局灶性脱失。K组髓鞘及尼氏体病变明显减轻。与N组比较,D、K组大鼠MWT、NCV、SOD降低,MDA升高（P〈0．05）;与D组比较,K组大鼠MWT、NCV、SOD升高,MDA降低（P〈0．05）。结论氯胺酮通过抗氧化对糖尿病神经病理痛大鼠有神经保护及疼痛治疗作用。     

神经病理性痛大鼠背根神经节P2X3受体表达及电生理学特性的改变

目的 观察坐骨神经缩窄性损伤(CCI)致神经病理性痛后大鼠背根节神经元P2X3受体的表达和电生理学特性的变化.方法 应用免疫组化技术观察CCI后不同时间相应节段(L4、L5、L6)脊髓及背根神经节P2X3受体表达的变化;全细胞膜片钳技术观察CCI后不同时间L4、L5、L6节段背根节神经元ATP反应电流的变化.结果 CCI后7、14 d,损伤同侧L4、L5、L6节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加,而且染色加深,相应节段的脊髓背角浅层P2X3免疫反应性亦明显增加.CCI后7、14 d,损伤同侧相应节段背根节产生ATP快反应电流的细胞数量明显增加,电流幅度亦增强.应用非选择性P2X受体拮抗剂Suramin能明显抑制ATP反应电流.结论 坐骨神经缩窄性损伤致神经痛后同侧对应节段的背根节神经元P2X3受体表达明显增加,ATP快反应电流明显增强.     

Effects of electroacupuncture on the pain threshold and the NMDA R1 mRNA in DRG on neuropathic pain rats

To observe the effect of multiple electroacupuncture (EA) on the pain threshold and theregulation of N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor in dorsal root ganglia (DRG) of neuropathicpain rats. Rats were prepared with a unilateral chronic constriction injury (CCI) to the sciatic nerve.EA was done in acupoints "Huan Tiao" and "Yang Ling Quan" for 30 min every day and the thermalthresholds were detected after EA at 3, 5, 7, 10, 14 days after operation. On day 14 after nerve in-jury, the in situ hybridization method was used to investigate the change of NMDA R1 mRNA inL4—L5 DRG. The thermal threshold reduced significantly from day 3 after operation in CCI rats.After multiple EA treatment, the ipsilateral thermal hyperalgesia relieved gradually and the thermalthreshold had no difference with control side after day 5(P>0. 05). From Day 7 after operation, thethermal threshold at each time point were significantly different compared with CCI group respective-ly(P>0.05). Moreover the EA had accumulative effect.