糖基化终产物增加人外周血单核细胞对单核 细胞趋化蛋白-1的表达

动脉粥样硬化 (Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ,ＡＳ)是严重危害人类健康的疾病 ,糖尿病患者并发ＡＳ的可能性是正常人的 3～ 4倍。高血糖状态下蛋白质发生的非酶糖基化可使其最终形成不可逆的糖基化终产物 (Ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ,ＡＧＥｓ)。ＡＧＥｓ可与单核细胞等多种细胞上受体结合 ,加速动脉粥样斑块的形成。单核细胞粘附于内皮并透入内皮下形成泡沫细胞是ＡＳ的早期事件。这一过程与单核细胞趋化蛋白- 1 (Ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ - 1 ,ＭＣＰ -…     

糖基化终产物对培养的人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的: 探讨糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA及蛋白表达的影响。方法: 将培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)用不同浓度(100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的AGEs孵育24 h及同一浓度(400 mg/L)AGEs孵育0 h、12 h、 24 h及36 h。采用原位杂交方法及Western blot检测巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA及蛋白的表达水平。结果: BSA组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α呈弱表达;100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L AGEs孵育24 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA 表达的平均积分吸光度值分别为18.76±3.17、26.58±1.61及34.23±2.25(BSA组为13.83±1.24,P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12 h、24 h 及36 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的平均积分吸光度值分别为22.67±1.46、34.23±2.25及42.28±3.14(0 h组为12.56±1.24,P<0.05)。100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L AGEs孵育24 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达量分别为BSA组的1.34倍、1.87倍及2.46倍(P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12 h、24 h 及36 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达量分别为0 h组的1.82倍、2.71倍及3.34倍(P<0.05)。结论: 糖基化终产物以时间及剂量依赖的方式促进内皮细胞巨噬细胞炎性蛋-1α mRNA及蛋白的表达。     

金雀异黄素抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的： 研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导人脐静脉内皮细胞(hUVECs)凋亡的影响及可能机制。方法： 培养并鉴定人脐静脉内皮细胞；用不同浓度金雀异黄素（0.1 μmol、1 μmol、10 μmol、50 μmol）和终浓度为10 μg/L的MCP-1作用24 h；先用MTT比色法观察细胞存活率、流式细胞技术检测细胞DNA含量及细胞周期，观察其对hUVECs生长的影响，流式细胞技术及Western印迹法检测凋亡相关蛋白Fas、 Bcl-2、Bax的表达，探讨金雀异黄素对MCP-1诱导hUVECs凋亡干预的可能机制。结果： 金雀异黄素抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡，抑制效应随剂量增加而增强(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。MTT值明显增高；凋亡细胞明显少于对照组（10 μg/L MCP-1）， Bcl-2表达明显高于对照组，Fas、Bax表达明显低于对照组。结论： 金雀异黄素能抑制单核细胞趋化蛋白-1诱导的人脐静脉内皮细胞的凋亡，抑制作用有量效相关性，抑制机制可能与下调Fas、Bax蛋白及上调Bcl-2蛋白的表达有关。     

睾酮双向影响脐静脉内皮细胞分泌单核细胞趋化蛋白1

雄激素与动脉硬化(arteriosc lerosis,AS)的关系日益受到关注,单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant prote in-1,MCP-1)是促进AS的重要炎症介质。本研究以人脐静脉内皮细胞(hum an umb ilical ve in endothelial cell,HUVEC)为对象,观察不同浓度睾酮对MCP-1蛋白表达的影     

糖基化终产物增高人脐静脉内皮细胞内二酰基甘油水平

目的研究糖基化终产物（ＡＧＥＰ）对人脐静脉内皮细胞二酰基甘油（Ｄｉａ）水平的影响和维生素Ｅ、氨基胍对ＡＧＥＰ升高内皮细胞Ｄｉａ水平的干预作用。方法采用放射酶标记、簿层层析、放射自显影技术测定细胞中Ｄｉａ含量。结果ＡＧＥＰ－ＢＳＡ孵育的内皮细胞Ｄｉａ水平出现双时相性变化,并随ＡＧＥＰ－ＢＳＡ浓度、糖基化程度和修饰ＡＧＥＰ－ＢＳＡ的糖浓度增加,Ｄｉａ水平亦明显增高、维生素Ｅ和氨基胍可明显减弱ＡＧＥＰ－ＢＳＡ升高Ｄｉａ水平的效应。结论ＡＧＥＰ－ＢＳＡ能升高人脐静脉内皮细胞中Ｄｉａ含量,维生素Ｅ和氨基肌明显降低ＡＧＥＰ升高的细胞内Ｄｉａ水平。     

高浓度的糖刺激人肾小球内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的 :探讨高浓度的糖对培养的人肾小球内皮细胞 (HUGEC)表达单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)的影响 ,以及HUGEC的条件培养基对单核细胞 (MC)的趋化作用及抗MCP 1抗体对MC迁移的影响。方法 :采用原位杂交技术和细胞ELISA法 ,观察MCP 1的表达 ;用改良的Boyden小室微孔滤膜法 ,测定高浓度的糖刺激HUGEC后的条件培养基 ,对MC的趋化作用 ,以及抗MCP 1抗体对MC迁移的影响。结果 :(1)在低浓度的糖(含 5 .5mmol/LD 葡萄糖 )条件下培养的HUGECMCP 1mRNA呈弱表达。高浓度的糖 (含 2 5mmol/LD 葡萄糖 )刺激后 ,8h即出现MCP 1表达增强 ,于 16h达高峰。(2 )高浓度的糖刺激HUGEC后的条件培养基 ,对MC具有明显的趋化作用 ;抗MCP 1抗体可抑制其作用。结论 :在高浓度的糖诱导下 ,人HUGECMCP 1的表达增强 ,其条件培养基对MC具有趋化作用 ,从而可能招引单核细胞迁入内皮下间隙。     

人单核细胞趋化蛋白-1的研究进展

人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)为一由76个氨基酸组成的单肽链,它既具有特异的单核细胞趋化活性,也具有激活单核细胞的活性,在机体防御、炎症恢复和抗肿瘤等方面起着重要作用。本文就MCP-1近几年来的研究进展作一综述。     

糖基化终产物对人单核细胞源树突状细胞糖基化终产物受体表达的研究

目的：探讨糖基化终产物 (AGEs）)对人单核细胞源树突状细胞（MDCs）糖基化终产物受体（RAGE） 表达的影响。 方法： 用免疫磁珠分离人外周血CD14+单核细胞，经含rhGM-CSF（100 μg/L）和rhIL-4（50 μg/L）的RPMI-1640培养，使其分化为MDCs，采用RT-PCR和Western blotting法，观察糖基化-白蛋白（AGE-BSA）对MDCs RAGE mRNA和蛋白表达的影响，同时检测培养液上清中IFN-γ和IL-12的浓度。 结果： AGE-BSA诱导DCs RAGE mRNA和蛋白的表达（P＜0.05），高于空白对照组，并且明显促进了DCs IFN-γ和IL-12的分泌（P＜0.05）。BSA干预组与空白对照组相比差异无显著（P＞0.05）。 结论： AGEs能够上调DCs RAGE的表达，并且促进了DCs IFN-γ和IL-12的分泌，这可能是糖尿病通过DCs促进动脉粥样硬化发生的重要机制之一。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮量及其合酶 …

目的和方法：利用体外培养的人脐静脉内皮细胞，观察糖基化终产物对该细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其对一氧化氮合酶ＮＯＳ活性的影响。结果：发现糖基化终产物组一氧化氮含量明显降低而一氧化氮合酶活性却明显增高，并随浓度，作用时间而发生相应变化。结论：糖基化终产物对内皮细胞产生一氧化氮的影响并不是通过降低ＮＯ合酶活性而起作用。     

终末糖基化产物对培养的人脐静脉内皮细胞粘附分子表达的影响

目的：探讨终末糖基化产物在糖尿病动脉粥样硬化（AS）形成中的作用机理。 方法： 分离正常人脐静脉内皮细胞（HUVECs），将终末糖基化终产物（AGE）修饰的人血清白蛋白（AGE-HSA）、人血清白蛋白（HSA）与HUVECs在体外共同培养，并用荧光单克隆抗体染色，流式细胞仪定量检测细胞间粘附分子-1（ICAM-1）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）的表达。 结果： 正常人HUVEC表达ICAM-1和VCAM-1。AGE-HSA能以时间和剂量依赖的方式上调ICAM-1、VCAM-1的表达（P<0.05），而HSA对HUVECs上述粘附分子的表达均无影响。 结论： AGE能上调HUVECs粘附分子的表达，从而促进AS时单核/巨噬细胞的浸润。     

腺苷促进人脐静脉内皮细胞bFGF的表达

目的：探讨腺苷对人脐静脉内皮细胞合成和分泌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白及bFGF mRNA的影响。 方法： 免疫组化法检测bFGF蛋白质表达；逆转录-聚合酶链反应测定bFGF mRNA。 结果： 对照组（腺苷0 mol/L）bFGF染色阳性细胞少，染色程度轻；10-4mol/L、10-6 mol/L腺苷组作用48 h后阳性细胞多，染色深，平均吸光度值与对照组比较有显著差异(P<0.05)，10-8mol/L、10-10mol/L腺苷组与对照组比较无显著差异(P>0.05)；RT-PCR分析显示10-4mol/L、10-6mol/L腺苷组bFGF mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)；10-8mol/L腺苷组与对照组bFGF mRNA表达无显著差异(P>0.05)。 结论： 腺苷可能部分通过促进内皮细胞合成和表达bFGF而实现其促进内皮细胞生长和血管新生的作用。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮量及其合酶的影响

目的和方法：利用体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察糖基化终产物对该细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其对一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的影响。结果：发现糖基化终产物组一氧化氮含量明显降低而一氧化氮合酶活性却明显增高,并随浓度、作用时间而发生相应变化。结论：糖基化终产物对内皮细胞产生一氧化氮的影响并不是通过降低ＮＯ合酶活性而起作用。     

培养的人脐静脉内皮细胞产生单核细胞趋化因子的研究

The blood monocytes have been well known as one of the origins of foam cells in atherosclerotic plaque, but the mechanism controlling the migration of monocytes into the subendothelial space is still unclear. The chemotactic activity of the conditioned medium from cultured human umbilical vein endothelial cells for human blood monocytes was investigated by micropore filter assay; meanwhile, heat stability and enzyme digestion assays were undertaken. The results showed that the conditioned medium from the cultured endothelial cells was significantly chemotactic rather than chemokinetic for monocytes. The conditioned medium from the cultured endothelial cells still retained the chemotactic activity for monocytes although it was heated at 80C and 100C for 15 min respectively, whereas after digestion with protease, the chemotactic activity vanished. From the above-mentioned facts, it is reasonable to believe that cultured human umbilical vein endothelial cells can secrete a chemotactic factor for monocytes, which is a kind of peptide.     

内毒素脂多糖诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α

目的了解内毒素脂多糖是否诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)。方法使培养的HUVEC暴露于不同浓度的脂多糖,用地高辛标记的MIP-1αcDNA探针与HUVEC的总。RNA进行斑点杂交,并与HUVEC进行原位杂交,同时用HUVEC的总RNA与MIP-1α引物的混合物进行逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR),以检测HUVEC的MIP-1αmRNA的表达;再者,将培养的HUVEC用MIP-1α单克隆抗体进行细胞酶联免疫吸附试验(ELISA),以检测其MIP-1α蛋白表达。结果斑点杂交显示,暴露于浓度为1μg／,ml和10μg／,ml脂多糖时HUVEcmRNA在硝酸纤维素膜上斑点的积分吸光度(A)值分别为1．490和3．310,分别为对照组(0．775)的1．97倍和4．38倍。原位杂交显示,当HUVEC暴露于浓度为1μg／,ml脂多糖后,其MIP-1α mRNA表达与对照组相比有明显增加,方差分析表明,差异有非常显著性(F=142．83,P＜0．01)。但当其暴露于10μg／ml脂多糖后,其MIP-1α mRNA表达则较低。RT-PCR显示,暴露于浓度为1、5和10μg／ml脂多糖时HUVEC的MIP-1α mRNA表达分别为对照组的1．65倍、2．86倍和1．26倍。细胞ELISA显示,各组HUVEC暴露于脂多糖后,其MIP-1α蛋白表达均明显增加,尤以5μg／ml脂多糖组最为显著。方差分析表明,差异有显著性(F=15．36,P＜0．05)。结论内毒素脂多糖可诱导培养的HUVEC表达高水平的MIP-1αmRNA和蛋白,从而在动脉内膜的单核／巨噬细胞的募集起重要作用。     

液体切应力对内皮细胞粘附分子及单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 :观察流体切应力对内皮细胞粘附分子ＩＣＡＭ 1、ＶＣＡＭ 1及单核细胞趋化蛋白质 (ＭＣＰ 1)表达的影响以及在动脉粥样硬化发病中的意义。方法 :以人静脉内皮细胞(ＨＵＶＥＣ) ,作观测对象 ,采用平行板流动腔产生一定大小的切应力 ,采用免疫组化ＡＢＣ法观测经 0 .72Ｐａ作用不同时间 (30ｍｉｎ、5ｈ)后 ,粘附分子表达的变化 ,采用ＥＬＩＳＡ方法测定灌流液中ＭＣＰ 1蛋白浓度 ,反映内皮细胞表达ＭＣＰ 1的变化。结果 :粘附分子测定的结果如下 :切应力作用 30ｍｉｎ后 ,ＩＣＡＭ 1的阳性表达率 (% )为 5 6 .3± 10 .2 ,作用 5ｈ后为 5…     

糖尿病和冠心病患者血清糖基化终产物与单核细胞趋化蛋白—1浓度的相关变化

目的观察糖尿病和冠心病患者血清中糖基化终产物(AGEs)与单核细胞趋化蛋白 -1(MCP -1)之间的变化。方法对照组23例,男14例 ,女9例。为健康查体者 ,体格检查和心电图未发现器质性心脏病证据 ,空腹和餐后2h血糖均在正常范围 ,无胸痛、胸闷、冠心病和糖尿病病史。糖尿病组32例 ,男13例 ,女19例。有多饮、多尿、多食等症状 ,血糖浓度升高 ,符合2型糖尿病诊断标准。无胸痛、胸闷和冠心病病史 ,查体未见心脏异常体征 ,心电图无心肌缺血的表现。其中部分病例冠脉造影阴性。冠心病组26例 ,男17例 ,女9例。多有胸痛、胸闷等症状和心电图心肌缺血的表现 ,都经过冠脉造影显示严重冠脉狭窄 ,空腹和餐后2h血糖均正常。糖尿病合并冠心病组8例 ,男6例 ,女2例。有明确糖尿病史 ,空腹血糖大于7.0mmol·L-1,同时伴心肌缺血的临床症状或心电图表现 ,冠脉造影证实有严重冠脉狭窄。以上各组年龄范围为40～65岁。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测糖尿病、冠心病及糖尿病合并冠心病患者血清中AGEs与MCP -1的水平。结果糖尿病人血清中MCP -1和AGEs的浓度分别为(735.50±55.75)pg·ml -1和(12.43±0.52)U·ml -1,较对照组 (417.80±27.34)pg·ml -1和(8.82±0.36)U·ml-1)明显升高 (P<0.001) ,糖尿病合并冠心病患者血清中MCP -1和AGEs     

MAPK通路在晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞骨架结构改变中的作用

目的：探讨晚期糖基化终产物通过MAPK信号转导通路引起人脐静脉内皮细胞骨架结构改变的作用机制。方法：用胰酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞，以不同浓度的晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白（AGE-HSA）与之作用不同时间，并选用不同的试剂以及主导激活或抑制的腺病毒突变体以阻断或激活MAPK通路，与对照组进行比较，采用免疫荧光染色法显示细胞骨架肌动蛋白F-actin的结构改变。结果：AGE-HSA以剂量和时间依赖的方式引起内皮细胞骨架蛋白F-actin结构的改变，未经修饰的HSA无此作用;p38通路的特异性抑制剂SB203580和ERK通路的特异性抑制剂PD98059均可抑制AGEs对细胞骨架的作用，而JNK通路抑制剂SP600125则无此作用；MKK6b、 MEK1结构活性型突变体的重组腺病毒可明显诱导细胞骨架改变，MKK7活性型则无此作用;且MKK6b、 MEK1无活性型突变体可明显抑制AGEs对细胞骨架的作用；p38α亚型的无活性突变体可阻断MKK6b结构活性型突变体诱导的细胞骨架改变。结论：AGE修饰蛋白通过MAPK家族中的p38和ERK信号转导通路引起内皮细胞骨架肌动蛋白F-actin的重组和再分布。     

单核细胞趋化蛋白-1在CNS疾病中的表达

中枢神经系统(CNS)并非免疫豁免区是最近几年来神经免疫学研究的进展之一,在用细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱发的炎症反应中,CNS脑实质内的小胶质细胞、脑室周围、脉络膜、室管膜细胞均可检测到受体TLR2、TLR4(Toll—like recep—     

体外培养人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮合酶

为了证实人脐静脉内皮细胞是否具有合成一氧化氮的能力，用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学法和原位杂交对体外的人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮合酶进行了观察。结果显示，体外培养人脐静脉内皮细胞的ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学的阳性百分率为６２％，诱生型一氧化氮合酶的原位杂交的阳性百分率为７４％。阳性反应产物分布在核周及细胞突起中。本研究首次证明体外培养的人脐静脉内皮细胞能表达诱生型一氧化合酶，即人脐静脉内皮细胞在体