人体外与体内成熟卵母细胞发育潜能及妊娠结局的观察

目的观察体外成熟(IVM)与体内成熟人卵母细胞的发育潜能和妊娠结局。方法69例多囊卵巢或多囊卵巢综合征不育患者,分别行IVM治疗49个周期(IVM组)和体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗29个周期(IVF组)。结果IVM组卵母细胞成熟率为65.4%。IVM组和IVF组受精率和卵裂率分别为62.1%和77.2%,60.2%和91.2%,两组受精率无显著性差异(P>0·05),IVM组较IVF组卵裂率降低非常显著(P<0.01)。IVM组和IVF组临床妊娠率和种植率分别为26.5%和12.6%,41.4%和22.9%,IVM组临床妊娠率和种植率较低,但两组无显著性差异(P>0.05)。IVM组和IVF组卵母细胞受精后D2≥4细胞和D3≥6细胞胚胎数占受精卵数(2PN)的比例分别为24.5%和19.4%,67.0%和66.4%,IVM组较IVF组胚胎发育速度慢,两者有非常显著性差异(P<0.01)。IVM组D3优质胚胎形成率(23.7%)较IVF组(58.2%)为低,亦有非常显著性差异(P<0.01)。结论人卵母细胞IVM将成为一种选择性的辅助生殖技术。人卵IVM较体内成熟卵母细胞受精后2PN至卵裂期发育阻滞发生率高,胚胎发育速度慢和优质胚胎形成率低。     

人成熟卵母细胞玻璃化冷冻复苏后行ICSI-ET的妊娠结局

目的回顾性分析卵母细胞玻璃化冷冻复苏后行卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(ICSI-ET)的妊娠结局,为卵母细胞玻璃化冷冻的临床应用提供参考。方法收集2013年5月至2015年1月于我中心行辅助生殖助孕治疗、女方取卵当日无精子可用的6对夫妇为研究对象,收集6例女性的成熟卵母细胞进行玻璃化冷冻,复苏后行ICSI-ET,观察6例患者的卵母细胞复苏率、受精率、卵裂率、临床妊娠率等。结果 6例女性患者的6个取卵周期共获得成熟MⅡ卵母细胞94枚,均行玻璃化冷冻。择期复苏64枚,存活62枚,复苏率为96.8%。行ICSI授精后观察到正常受精卵43枚,卵裂40枚,获得可利用胚胎28枚,优质胚胎19枚,可利用胚胎率和优质胚胎率分别为70.0%和47.5%。鲜胚移植获得临床妊娠3例,孕囊5个;冻融胚胎移植1例,孕囊1个,均足月分娩,新生儿状况及Apgar评分良好。结论玻璃化冷冻卵母细胞技术可以在有适应证的患者中应用,并可获得较好的临床妊娠结局。但仍需更大样本量的临床研究予以验证。     

卵母细胞的成熟抑制与发育潜力

体外成熟的卵母细胞发育潜力下降与其胞质及核成熟的不同步有关 ,因此 ,抑制卵母细胞核成熟的物质引起了人们的关注。本文综述了各种卵母细胞成熟抑制剂的作用机制及应用 ,重点讨论选择性的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)抑制剂丁内酯I(BL Ⅰ )对卵母细胞的超微结构和发育潜力的影响。BL Ⅰ能可逆性抑制卵母细胞减数分裂恢复 ,有望改善卵母细胞发育至囊胚的能力。     

人卵母细胞体外成熟后受精所形成胚胎筛选模式的建立

目的利用时差成像系统(TLI)结合胚胎形态学评估建立一种对人卵母细胞体外成熟(IVM)后受精所形成胚胎的筛选模式,以期为临床实践中选择高发育潜能的IVM胚胎提供参考。方法收集2016年2月至2019年5月于本中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗患者的402枚未成熟卵母细胞进行IVM培养,卵母细胞成熟后行卵胞浆内单精子注射(ICSI)授精。受精后胚胎在TLI系统中观察培养,观察IVM胚胎各种卵裂模式与其形成囊胚潜能的关系,并收集胚胎发育的动力学参数,分析原核消失时间(tPNF),发育至2细胞时间(t2)、3细胞时间(t3)、4细胞时间(t4)、5细胞时间(t5),2细胞发育至3细胞所需时间(cc2)、3细胞发育至4细胞所需时间(s2)这些参数在第3天(D3)IVM胚胎未形成囊胚组(A组,111枚)和形成囊胚组(B组,51枚)之间的差异。结果 402枚未成熟卵母细胞进行IVM培养,共有315枚(78.4%)成熟;315枚IVM成熟卵母细胞进行ICSI,正常受精219枚,其中非二倍性卵裂的发生率最高(24.2%),其次为正常卵裂(21.9%)。IVM胚胎中正常卵裂胚胎的囊胚形成能力...     

比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果

目的探讨不同冷冻载体对水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存效果的影响。方法以体外成熟培养18 h的水牛卵母细胞为实验材料,分别以0.25 ml冻精塑料细管(A)、自制拣卵针尖端部分制成的极细玻璃微管(D)和两种制作核移植工具针的玻璃细管(B、C)为冷冻载体卵母细胞,解冻后统计成熟率及早期胚胎发育率等冷冻保存效果指标。结果A组卵母细胞冷冻保存效果最差(成熟率:A vs B、C、D为43.9%vs 51.7%、51.9%、55.9%,2~4细胞率:A vs B、C、D为34.1%vs 40.0%、40.7%、41.2%),D组卵母细胞冷冻效果最好,但解冻时卵母细胞的回收率显著低于其他组(D vs A、B、C为69.2%vs 87.0%、94.1%、91.9%)。B、C两组在解冻后的成熟率及早期发育率上显著高于A组,低于D组,但差异不明显,且其解冻后卵母细胞回收率显著高于D组(P<0.05)。结论综合回收率和解冻后早期胚胎发育率,B、C两种玻璃细管是一种水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体。     

剩余冷冻复苏胚胎行囊胚培养后再次冷冻并复苏移植后获双胎妊娠1例报告

在体外受精一胚胎移植(IVF-ET)周期中,冷冻复苏胚胎移植后,剩余复苏胚胎往往丢弃.本中心自2009年起对这些剩余复苏胚胎行囊胚培养及囊胚冷冻,于2010年解冻并移植前次保存的囊胚成功获得临床双胎妊娠1例,报告如下.     

未成熟卵母细胞体外成熟后体外授精-胚胎移植成功分娩1例

1991年始 ,国外有报道从人类卵巢中取到未成熟卵在体外成熟培养 (ｉｎｖｉｔｒｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ,ＩＶＭ )后经体外授精 胚胎移植 (ｉｎｖｉｔｒｏｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｅｍｂｒｙｏｔｒａｎｓｆｅｒ,ＩＶＦ ＥＴ)可以获得妊娠[1～ 4] 。国内尚未见成功报道     

玻璃化冷冻对卵母细胞、胚胎和子代的影响及其相关表观遗传学的研究进展

玻璃化冷冻技术目前已逐步取代程序化冷冻技术并广泛运用于体外受精-胚胎移植助孕过程。虽然卵母细胞及胚胎经玻璃化冷冻后有较好的临床结局,但玻璃化冷冻过程中使用的高浓度冷冻保护剂、体外冷冻复苏等操作是否对卵母细胞、胚胎以及其子代的安全性造成不良影响仍然备受关注。分子层面研究结果表明,虽然玻璃化冷冻不改变哺乳动物DNA序列,但可导致基因表观遗传修饰水平的变化进而影响其靶基因表达水平。本文从哺乳动物卵母细胞和胚胎经玻璃化冷冻后对胚胎、妊娠结局和子代的影响以及对相关表观遗传修饰水平的改变进行综述,探索玻璃化冷冻对卵母细胞和胚胎影响的分子机制,为进一步提高卵母细胞和胚胎的冷冻保存技术提供理论依据。     

体外受精-胚胎移植中非优质胚胎的冷冻价值

目的 探讨体外受精-胚胎移植中非优质胚胎冷冻的临床价值. 方法 回顾性分析392例冷冻胚胎移植周期.根据冻存前胚胎质量将其分为优质组和非优质组,比较不同年龄段两组的妊娠率、种植率和流产率. 结果 ＜35岁组,优质胚胎组妊娠率、种植率显著高于非优质胚胎组(P＜0.05),两者流产率无显著差异(P＞0.05).≥35岁组,两组妊娠率、种植率、流产率无显著差异(P＞0.05). 结论 选择性非优质胚胎冷冻,有助于提高体外受精-胚胎移植的累积妊娠率,改善临床治疗结局,避免胚胎浪费.     

体外成熟的卵母细胞胞质成熟的评价指标

卵母细胞的体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)是辅助生殖技术的重要过程之一.优质的IVM的卵母细胞必须是细胞核和细胞质同步成熟,以保证成功受精、胚胎正常发育乃至健康子代的出生.目前,细胞核成熟的评价标准已得到共识,而细胞质的成熟却表现复杂,尚缺乏有效的观察评价指标.近年来研究发现,卵母细胞成熟时其超微结构、一些信号分子和细胞因子均发生某些变化,这为评价细胞质成熟提供了依据.     

卵裂球受损对冻融胚胎移植周期临床结局的影响

目的探讨卵裂球受损对冻融胚胎移植周期临床结局的影响。方法回顾分析181个冻融胚胎移植周期,了解胚胎级别与冷冻受损的关系,分析受损程度(完整存活、受损率≤20%和>20%组)和移植平均≥6、<6细胞胚胎对妊娠率和种植率的影响。结果1、2、3级胚胎存活率差异显著(P<0.05),损伤率差异非常显著(P<0.001)。完整存活胚胎、受损率≤20%及>20%胚胎组的临床妊娠率、种植率均存在显著性差异(P<0.05,P<0.01),移植≥6细胞胚胎组的临床妊娠率、种植率显著高于<6细胞胚胎组(P<0.05)。结论胚胎卵裂球受损率评价胚胎受损程度优于胚胎存活率。在冻融胚胎移植周期,胚胎质量、移植时胚胎细胞期和受损程度是影响妊娠率和种植率的胚胎学因素。     

小鼠致密化前胚胎卵裂球体外培养体系的研究

目的探索改善小鼠致密化前胚胎卵裂球体外发育能力。方法用酶消化与机械法结合分离小鼠2-、4-、8-细胞胚胎卵裂球为单个卵裂球及2/4、4/8多卵裂球胚胎,并将其装入空透明带后于兽用人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后138 h,观察透明带包裹、胚胎密度及胰岛素(Ins)、葡萄糖(Glu)添加对各卵裂球、囊胚形成率及囊胚细胞数目的影响。结果透明带包裹提高了2-细胞胚胎卵裂球来源的单腔囊胚的发育率。25/50μl胚胎密度及培养基添加Ins、Glu能显著提高2-细胞胚胎卵裂球囊胚发育率和囊胚细胞数;且对4-和8-细胞胚胎卵裂球发育具有同样的促进作用。结论采用透明带包裹、卵裂球密集培养、培养基添加Ins、Glu的方法成功建立了一种维持致密化前胚胎卵裂球体外高效发育的培养体系。其中,透明带在卵裂球发育中具维持囊胚正常形态作用,避免了多腔囊胚的形成;卵裂球密集培养和培养基添加Ins、Glu均提高囊胚形成率和(或)囊胚细胞数目。该体系有效改善了致密化前胚胎卵裂球体外发育质量。     

Retrieval of immature oocytes from unstimulated ovaries followed by in vitro maturation and vitrification: A novel strategy of fertility preservation for breast cancer patients

Background

We report a novel fertility preservation strategy that may be useful for young breast cancer patients who present with time constraints or concerns about the effect of ovarian stimulation.

Methods

The protocol involves retrieval of immature oocyte from unstimulated ovaries followed by in vitro maturation (IVM), and vitrification of oocytes or embryos.

Results

Thirty-eight patients (age 24-45 years) underwent vitrification of oocytes (n = 18) or embryos (n = 20). The mean ages were 33.1 ± 5.0 years and 34.7 ± 4.8 years, respectively. The mean days required to complete the egg collection was 13 days. The median numbers of vitrified oocytes and embryos per retrieval were 7 (range 1-22) and 4 (range 1-13), respectively.

Conclusions

The strategy of immature oocyte retrieval without ovarian stimulation followed by IVM and oocyte or embryo vitrification, which does not increase the serum estradiol level and delay cancer treatment, represents an attractive option of fertility preservation for many breast cancer patients.     

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞发育潜能及细胞骨架的影响

目的比较不同冷冻方法对不同成熟阶段小鼠卵母细胞复苏、胚胎发育及细胞骨架的影响,寻求最佳的卵母细胞冷冻方法。方法分别以SOPS玻璃化及慢速法冷冻小鼠中期(MII)和生发泡期(GV)卵母细胞。解冻复苏后,分别作体外培养成熟(IVM)、体外受精(IVF)或固定作免疫荧光标记,统计复苏率、成熟率、受精率、囊胚率及纺锤体等细胞骨架指标。结果玻璃化冷冻组MII卵和GV卵母细胞的复苏率及囊胚率均显著高于慢速冷冻组(P<0.05)。慢速冷冻组中MII卵复苏率显著低于GV卵(40.4%vs 57.1%,P<0.01)。但同一种冷冻方法保存的MII卵和GV卵的受精率及囊胚率相比,均无显著性差异(P>0.05)。两组的GV卵成熟率无显著差异。玻璃化冷冻组GV卵的纺锤体、染色体及纺锤体和染色体正常率均高于慢速冷冻组GV卵但无显著差异。结论玻璃化冷冻能有效改善冻融卵母细胞的复苏及胚胎发育;与MII卵比较,冷冻GV卵对细胞骨架损伤较小;两种冷冻方法均不影响GV卵冻融后成熟。     

体外受精失败MII期人卵母细胞的免疫荧光研究

目的探讨体外受精中MII期人卵母细胞受精失败的原因。方法收集体外受精后24～48h仍未受精的MII期卵母细胞,进行免疫荧光染色和碘化丙啶(PI)复染,在荧光显微镜下对其失败原因进行分类。结果卵母细胞内未见精子的在常规体外受精(IVF)周期有55.8%,显著多于卵胞浆内单精子注射(ICSI)周期中的9.7%(P<0.01);卵母细胞活化失败两者分别为14.9%和58.1%,有显著性差异(P<0.01);原核形成和(或)迁移缺陷的在两者分别为25.3%和32.3%(P>0.05);其他异常两者分别为3.9%和0.0%。结论IVF中MII期卵母细胞的受精失败主要是缺乏精子的穿透,ICSI周期中的主要原因是卵母细胞活化不完全。     

己酮可可碱和2—脱氧腺苷提高冷冻复温后精液质量的研究

在光学显微镜下观察和测定了己酮可可碱（ＰＦ）和２－脱氧腺苷（２－ＤＡ）在体外对冷冻复温后精液精子的活率、活力及其毛细管穿透值的影响。结果显示ＰＦ和２－ＤＡ均能提高冷冻复温后精子的活率、活力及其毛细管穿透值，其最适浓度分别为４．０ｍｍｏｌ／Ｌ和２．０ｍｍｏｌ／Ｌ，与对照组比较均有显著性差异（Ｐ〈０．０１）。两组间比较，２－ＤＡ优于ＰＦ（Ｐ〈０．０１）。提示ＰＦ与２－ＤＡ合用不具有协同作用，反而有相互     

体外受精-胚胎移植周期未成熟卵体外成熟培养的临床价值

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期未成熟卵体外成熟培养(IVM)的临床价值。方法对106例不孕患者IVF/ICSI-ET治疗周期中357枚未成熟卵(MⅠ期,217枚;GV期,140枚)进行24h和48h体外培养,比较不同发育阶段未成熟卵的体外成熟率、受精率、卵裂率、优质胚胎率及囊胚形成率。结果 MⅠ期卵24h和48h总成熟率均显著高于GV期卵(分别为59.91%vs.24.29%和72.35%vs.42.86%)(P0.05);体外成熟MⅡ卵平均每取卵周期可利用胚胎数只有(0.50±0.84)枚,且受精率、卵裂率和优胚率、可利用胚胎数均显著低于同一促排卵周期体内成熟MⅡ卵(P0.05)。结论 IVF-ET周期中所获未成熟卵经IVM能发育成熟,并具备一定的受精和胚胎发育潜能,但相关指标明显低于体内成熟卵,临床应用价值有限。     

卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究

目的　探讨卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡之间的关系。　方法　将卵母细胞在体外培养 28~30 h后,取其颗粒细胞,采用TUNEL法进行凋亡率的分析,并与卵子的成熟情况和卵子的评分及形成胚胎结果进行对照。　结果　经培养后,随着卵母细胞成熟度的降低,凋亡率升高;而且随着卵母细胞评分和发育潜能的降低,颗粒细胞凋亡率逐渐升高。　结论　卵子发育潜能与颗粒细胞凋亡密切相关,通过测定颗粒细胞的凋亡率可预测未成熟卵母细胞的发育潜能。     

Effect of Cytochalasin B on spindle and chromosome configuration of human in vitro matured oocytes after vitrification

Objective: To investigate the effect of Cytochalasin B(CCB) on the spindle and chromosome configuration of human in vitro matured oocytes after vitrification.Methods: Immature oocytes which were collected in intracytoplasmic sperm injection (ICSI) cycles (including stage GV and M I )after ovarian stimulation, followed in vitro matured(IVM) for 24-48 h. 170 oocytes were matured according to the extrusion of first polarbody, were randomized into five groups for vitrification. Group A:37 oocytes were treated with CCB for 20 mins before vitrification; Group B:38 oocytes with CCB for 30 mins; Group C:33 oocytes with CCB for 40 mins. Group D:36 oocytes without CCB before vitrification. Group E:26 ooctyes whitout vitrification and CCB as the controlled group. 71 in vivo matured oocytes were collected after ovarian stimulation in in vitro fertilization-embryo transfer (IVF-ET) cycles and ICSI cycles, and randomized into four groups for vitrification. Group A1:17 oocytes treated with CCB for 20 mins before vitrification; Group B1:20 oocytes with CCB for 30 mins. Group C1:17 oocytes with CCB for 40 mins. Group D1:17 oocytes without CCB before vitrification. All the oocytes were thawed after three weeks and then immunoftuorescence staining were perforned for tubu-lin and chromatin and at last visualized by confocal laser scanning microscopy.Results: There are no significant differences of survival rates among group A, B, C, D (80.39%, 64.86%, 55.36% and 78.79%, P>0.05) and group A1, B1, C1, D1 (64.7%, 50.0%, 64.7% and 70.6%, P>0.05). There are no significant differences in the frequencies of normal spindle and chromosome in group A, B, C, D (21.05%, 26.3%, 27.78% and 23.81%, P>0.05), but significantly lower than group E (61.54%, P<0.05). There were no significant differences in the frequencies of normal spindle and chromosome in group A1, B1, C1, D1 (27.3%, 30.0%,45.5% and 33.3%, P>0.05). No statistical differences were found in survival rate and frequencies of normal spindle and chromosome between in vitro matured groups treated with CCB and in vivo matured groups after vitrification (P>0.05).Conclusion: Spindle and chromosome configuration of human in vitro matured oocytes was damaged in vitrification, which can not improved by CCB pre-treatment before vitrification. Oocytes in vitro matured or in vivo matured have the same tolerance to the cryoinjury.