青霉素酰化酶提取工艺的改进

青霉素酰化霉是由巨大芽孢杆菌经二级发酵,在生产过程中分泌到细胞体外的一种胞外酶。在工业生产中,我们对发酵液中酶的吸附和洗脱工艺进行改进,收到了明显的效果。     

青霉素酰化酶研究进展

青霉素酰化酶除了在医药工业上用于大规模生产β－内酰胺类抗生素中间体和半合成β－内酰胺类抗生素之外,还有其它的一些潜在应用;对青霉素酰化酶的研究一直吸引着各国科研人员的兴趣,近年来,用一些经典的和现代的技术手段,对青霉素酰化酶产生菌进行改良,通过理化诱变,使酶活力提高;通过定点突和化学修饰,将酶活性中心的丝氨酸变成半胱氨酸或含硒原子的半胱氨酸,使酶的合成活力相对于水解活力大幅提高,通过基因工程技术提高酶的表达水平,促进分泌或改进生产菌的缺陷,出现了介孔分子筛,二甘醇二甲基酯丙烯酸酯接枝尼龙共聚物等新的;固定化材料及酶膜反应器,多室固定化酶反应器,有望用于工业化生产。ββ     

青霉素酰化酶电极

用海藻酸钠-氯化钙包埋法制备青霉素酰化酶电极,电极涂液中海藻酸钠浓度为1％,酶量大于15U/100mg较好。经聚乙烯亚胺处理的电极的抗磷酸盐性能良好,测试在pH 7.05缓冲液中进行,加样搅拌平衡后,取停止搅拌5min后的pH读数,△pH-青霉素G浓度的线性范围为0～1.88mg/ml。温度和pH对pH响应值均有影响。     

NIPAB法测定青霉素G酰化酶酶活力的分析和改进

原NIPAB(2-硝基-5-苯乙酰胺基苯甲酸)法以乙醇为终止剂,采用该法测定发酵制得的青霉素G酰化酶酶活力时,常遇到终止反应不完全、杂质等非酶反应因素显著影响测定结果的问题,因此必须对发酵样品进行预处理。本研究基于反应产物吸光度变化速率,改进为动态方法测定酶活力,不需预处理和终止剂,提高了精确度并简化了操作。     

吸附法纯化青霉素酰化酶

目的纯化发酵液中的青霉素酰化酶。方法采用吸附纯化法。结果按 1 2 % (W /V)的比例将皂土加到含青霉素酰化酶的发酵上清液中 ,可将 98%的酶吸附 ,而同时吸附的杂蛋白质仅占发酵上清液总蛋白质的 14 5 %左右。吸附过程受pH影响较大 ,在 pH 6 5～ 7 5时 ,吸附效果最佳。使用不同种类的缓冲液洗涤酶 -皂土复合物 ,发现缓冲液的种类对酶的洗涤影响不大。使用含5 0 %以上的PEG和 8 0 %的NaCl的磷酸缓冲液可以将酶全部洗脱。结论此法可在常温下操作 ,酶活力收率较高 ,具有潜在的工业应用价值     

固定化青霉素酰化酶反应器研究进展

介绍固定化青霉素酰化酶反应器的研究现状，将这类反应器分为搅拌釜反应器、柱式填充床反应器、中空纤维膜反应器以及电渗析耦合反应器，从工程角度分析了各类反应器的优缺点，并展望其今后的发展趋势。     

用CHITOSAN固定化青霉素酰化酶

本文报道以Chitosan为载体制备固定化青霉素酰化酶的研究结果。1.4％ Chitosan醋酸溶液先用12.5％戊二醛交联,洗涤,研磨,得颗粒。再用1.5％pH5.5和1.5％pH8.5多聚磷酸处理,得机械强度良好的载体。此载体先后经0.5％戊二醛和对甲苯磺酰氯双活化后,再与青霉素酰化酶偶联。所得固定化酶的活力达20.8u/g。固定化青霉素酰化酶的反应最适温度略高于游离酶,最适pH略低于游离酶;其Km值基本接近游离酶。固定化酶经反复使用,活力基本不变。     

胞外青霉素酰化酶的研究

为了提供高比活力的并具有适当动力学参数的固定化酶用于青霉素的裂解,本文研究了Bacillus megaterium B-BM 39,Arthrobacter Vistcosus 13497及Arthro-bacter simplex ATCC 15799三个菌株胞外青霉素酰化酶的发酵、提取和酶学性质,并与目前国内使用的E.coli胞由青酶素酰化酶作了某些比较。为今后国内酶法生产6—APA工艺提供了一些参考依据。     

青霉素G酰化酶的亚基重组

青霉素G酰化酶在半合成β-内酰胺类抗生素工业中催化关键反应。将来源于Esherichia coli的α亚基分别与Kluyvera citrophila,Providencia rettgeri,Alcaligenes faecalis的β亚基重组得到三种杂合酶,杂合酶表达量随野生型PGA同源性的减小而降低,E.coli和A.faecalis氨基酸序列的相同性低至41%,其杂合酶仍然具有水解3-苯乙酰胺-6-硝基苯甲酸的活力。     

青霉素酰化酶的分离和纯化

采用渗透法冲击法提取大肠杆菌E.coli108青霉素酰化酶，得到了高比活的粗酶液，收率为93．3％，经硫酸铵分级沉淀、DEAE－Cellulose－52离子交换柱层析不得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条单带的酶，酶液比活为28．09u/mg，提纯了5．32倍，纯酶总收率为36．5％。     

固相青霉素酰化酶稳定性考察

眯了增加固相酶的稳定性,延长固相酶的使用寿命,增加固相酶裂解钾盐的批数,我们对固相酶的稳定 做了多方面考察,了解到固相酶适应的最佳环境,如裂解罐及管线无菌,裂解的ＰＨ温度,酶的清洗消毒方式以及生产暂停时酶的处理方法和酶的更换方法等。     

青霉素酰化酶和β-内酰胺酶

青霉素酰化酶一、引言微生物酶已常用于改造抗生素。抗生素的微生物生物转化能由广泛的降解反应至很局限的特异性反应。某些反应可形成有用的化合物,以此应用于半合成抗生素或新抗生素的工业生产。青霉素生物转化至6-氨基青霉烷酸(6-APA)和侧链酸,是最重要反应之一。水解青霉素产生6-APA 的微生物酶,称为青霉素酰化酶(Penicillin acylase,以下简称 PAase),又称青霉素酰胺酶(Penici-llin amidase)、青霉素酰胺水解酶(Penici-llin amidohydrolase),广泛存在于细菌、放线菌、酵母菌和真菌中。     

青霉素酰化酶:固定化及其应用

青霉素酰化酶广泛应用于β-内酰胺类抗生素中间体和半合成β-内酰胺类抗生素的合成。虽然游离酶具有极高的催化活性,但其对温度、pH值、溶剂极性等的耐受范围极窄,极易失活,而且在有机溶剂中发生的失活是不可逆的。为了提高其各方面稳定性,不断有新的固定化方法提出。本文综述了青霉素酰化酶的固定化方法及其应用。     

高产青霉素酰化酶细菌突变株

作者从土壤中分得的650株细菌中,筛选出棒状杆菌、芽胞杆菌、小球菌和埃希氏大肠杆菌等4株产酶菌株,均为胞内酶。其中614号株酶活力最高,初步鉴定为埃希氏大肠杆菌。除芽胞杆菌外,其他三株菌均可加苯乙酸使酶活力提高,614号酶活最高。     

青霉素V酰化酶在生产6—APA中的潜力

目前发酵生产的青霉素G(Pen G)和青霉素V(Pen V)多半是用作生产β-内酰胺中间体6-氨基青霉烷酸(6-APA)和7-氨基脱乙酰氧头孢烷酸(7-ADCA)的原料.有效、稳定的固定化青霉素酰化酶的开发,为合成具有不同抗菌性能的6-APA和7-ADCA衍生物创造了有利条件.现6-APA年产量约7500t,为此需消耗10~30t固定化青霉素酰化酶.     

青霉素酰化酶基因的克隆与表达

青霉素酰化酶可永解青霉素为6-APA和相应的侧链,6-APA是半合成青霉素的关键中间物,目前工业生产中已用酶法取代化学法制备6-APA,用青霉素G酰化酶或青霉素V酰化酶水解相应的青霉素.青霉素酰化酶可由各种细菌和霉菌产生,其生理功能还不清楚.这些酸的底物专一性都取决于青霉素分子的侧链.青霉素G酰化酶除了作用于青霉素G之外,还可水解各种苯乙酰衍生物.用7-ACA代替6-APA作为底物,对青霉素G酰化酶活力无明显影响.大肠杆菌和雷氏变形杆菌的青霉素G酰化酶都由α、β两个亚基组成,亚基重组试验表明α亚基决定酶的底物专一性,而活性中     

酶竞争性抑制剂对固定化青霉素酰化酶的影响

利用酶竞争性抑制剂与酶活性中心具有特异性亲和作用，将青霉素酰化酶和一定浓度苯乙酸混合，投入表面修饰环氧基团的磁性微球进行酶固定化。结果表明，在碱性缓冲液系统中，磁性微球带负电荷；加入苯乙酸后，固定化酶活力比对照组提高了13．6％。溶液酶Km为1．188×10^-5mol／L，固定化酶Km＇为5．879×10^-4mol／L，苯乙酸竞争性Ki为2.685×10^-4mol／L。     

固定化青霉素G酰化酶的初步研究

本文研究固定化青霉素G酰化酶的不同制备方法,比较了各种固定化青霉素G酰化酶的载体。实验表明:聚丙烯腈纤维和无机载体制成的固定化酶具有较高的酶比活力,而且表面积大,易于装柱,抗污染能力大,又能裂解高浓度青霉素 G 溶液生成6-APA。     

青霉素酰化酶的固定化与应用新进展

青霉素酰化酶被广泛应用于半合成抗生素及中间体的制备、手性药物的拆分和多肽合成等方面。高效固定青霉素酰化酶能提高酶对温度、pH值、溶剂极性等方面的适用性和反复使用的稳定性，将成为拓宽青霉素酰化酶在工业中应用的必然选择和关键。本文主要介绍了青霉素酰化酶固定化技术的进展，讨论了不同固定化技术的特点和固定化酶在非水相体系中的催化作用，并展望了固定化青霉素酰化酶的发展前景。     

青霉素酰化酶制备6-APA的研究进展

6-氨基青霉烷酸（6-APA）是重要的抗生索药物中间体之一．目前均采用青霉素酰化酶酶促裂解青霉素获得。本文介绍近年来青霉索酰化酶催化青霉素水解的研究进展，青霉素酰化酶的性质及其催化机理，青霉素酰化酶的固定化方法．青霉素酰化酶反应器的设计，反应介质工程的研究进展。