部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层BDNF及其mRNA表达的变化

采用免疫组织化学和原位杂交技术探讨了部分去背根猫术后 3 d和 10 d的备用背根节和脊髓 II板层内 BDNF及其m RNA的表达变化。结果表明 ,正常组 ,BDNF主要分布于背根节的部分中、小神经元及脊髓背角浅层神经元内 ,II板层内还有大量的 BDNF阳性神经膨体。背根节同时也为 BDNF m RNA阳性 ,唯背角阴性。部分去背根后 10 d组 ,备用背根节 BDNF及其 m RNA阳性中、小神经元百分数较正常及 3 d者明显增加 (P<0 .0 5 )。而 L3,L5II板层 BDNF阳性神经膨体密度在术后两组均明显下降 (P<0 .0 5 ) ,唯 BDNF的含量在 3 d组者减少 (P<0 .0 5 ) ,10 d组者恢复 (P>0 .0 5 )。术后 II板层未见 BDNF m RNA的杂交信号。结果提示 :去背根术后 3 d组脊髓 II板层阳性膨体数的下降及 BDNF含量减少 ,可能是因背根切断导致输入脊髓 II板层的 BDNF中断所致 ;而 10 d时 II板层 BDNF合成得以恢复 ,可能来源于备用背根节中、小神经元的 BDNF增多所致 ,BDNF在脊髓可塑性中可能发挥作用     

部分背根切断对备用背根节NT-3表达的影响

目的　探讨部分去背根后备用背根节 (L6 )各类细胞NT 3及其mRNA的含量变化。　方法　对成年雄性猫行单侧部分背根切断术 (切除一侧L1 ～L5,L7～S2 DRG ,保留L6 为备用根 )。取正常组一侧和术后 3d及 7d组手术侧的L6 DRG制作 2 0 μm厚冰冻切片 ,分别用NT 3抗体及NT 3cRNA探针行免疫组织化学及原位杂交染色。观察NT 3及其mRNA在DRG各类细胞的分布 ,测定NT 3及其mRNA在神经元和卫星细胞的光密度值 ,所得数据用q检验进行统计分析。　结果　部分去背根后 ,各时相备用背根节大神经元内NT 3的光密度值较正常者进行性减少 ,(P <0 0 5 ) ,而NT 3mRNA的光密度值术后 3d减少 ,7d回升至近正常者水平。比较之 ,小神经元和卫星细胞NT 3及其mRNA的光密度值进行性增多 (P <0 0 5 )。　结论　部分背根切断对备用背根节各类细胞NT 3表达的影响不同 ,其功能意义可能与NT 3参与脊髓Ⅱ板层可塑性有关     

NGF及NGF mRNA在去部分背根猫脊髓和背根节表达的变化

用成年猫单侧备用根模型 (切断一侧 L1～ 5 、L7～ S2 节段脊髓背根 ,保留 L6 背根 ) ,用免疫组织化学和原位杂交技术 ,对脊髓背角 板层、背核和 L6 背根节中神经生长因子的表达进行了动态观察。结果证明 ,部分背根去传入后 :(1)脊髓各节段双侧背角 板层的神经生长因子和神经生长因子 m RNA阳性神经元的数量及体积显著增高、增大 ;(2 )手术侧背核神经生长因子和神经生长因子 m RNA阳性神经元的增高强于非手术侧 ,但术后两时间组的手术侧之间无差异 ;(3 )备用根背根节新出现了神经生长因子 m RNA阳性神经元 ,且神经生长因子阳性神经元数量明显高于正常组 ,且随术后时间增加而递增。以上结果表明 :部分背根去传入猫脊髓背角 板层及背核内神经生长因子水平提高 ,尤其备用根背根节神经元神经生长因子的增加 ,为备用背根传入纤维侧支生芽和突触重建提供了良好的条件 ,有助于解释脊髓初级传入纤维损伤溃变后代偿性机能恢复的机制     

部分背根切断后备用DRG卫星细胞NGF、BDNF和NT-3的表达变化

为探讨部分去背根猫备用背根节 ( L6 )卫星细胞 NGF、BDNF和 NT-3的表达变化 ,将成年雄猫 2 0只分为正常对照组和术后 3 d、术后 7d及术后 10 d三个实验组。实验组行单侧部分背根切断术 (切除一侧 L1 ～ L5,L7～S2 DRG,保留 L6 背根为备用根 )。取正常组一侧和术后 3 d、7d及 10 d实验组手术侧的 L6 DRG制作 2 0μm厚冰冻切片 ,行免疫组化反应 ;观察 NGF、BDNF和 NT-3在 DRG卫星细胞的分布 ,计数各组 L6 DRG的 NGF、BDNF和 NT-3的阳性卫星细胞数量。结果发现 ,部分去背根术后7d和 10 d组 L6 DRG的 NGF、BDNF和 NT-3的阳性卫星细胞数量较术后 3 d组和正常组者明显增高 ( P<0 .0 1)。表明 ,单侧部分背根切断导致备用 DRG卫星细胞的 NGF、BDNF和 NT-3的表达上调 ,这一变化可能与脊髓可塑性有关。     

部分背根切断改变备用背根节神经元和卫星细胞脑源性神经营养因子的基因表达

目的　探讨部分去背根后备用背根节 (L6 )各类细胞脑源性神经营养因子 (BDNF)及其mRNA的量变情况。　方法　对成年雄性猫行单侧部分背根切断术 (切除一侧L1 ～L5、L7～S2 DRG ,保留L6 为备用根 )。取正常组一侧和术后 3d及 7d组手术侧的L6 DRG并分别行免疫组织化学及原位杂交染色。观察BDNF及其mRNA在DRG各类细胞的分布 ,测定BDNF及其mRNA在神经元和卫星细胞的光密度值。　结果　部分去背根后 3d ,中小神经元内BDNF及其mRNA的光密度值较正常者明显减少 (P <0 0 5 ) ,而 7d时又恢复近正常水平 (P >0 0 5 )。BDNF及其mRNA在大神经元的光密度值术后 3d无明显变化 ,而 7d时较正常者明显减少 (P <0 0 5 )。比较之 ,卫星细胞BDNF及其mRNA的光密度值术后 7d时明显升高 (P <0 0 5 ) ,术后 3d与正常者比未见明显变化。　结论　部分背根切断导致备用DRG各类细胞BDNF的表达水平发生不同程度的改变。提示备用DRG内BDNF的变化与脊髓Ⅱ板层可塑性有关。     

针刺对去部分背根猫脊髓和背根节NGF及NGF mRNA的影响

用免疫组织化学和地高辛标记 c RNA探针原位分子杂交技术 ,观察了针刺对成年备用背根猫 (切断一侧 L1～ 5 、L7～ S2节段脊髓背根 ,保留 L6 背根 )脊髓 板层、背核和背根节内神经生长因子和神经生长因子 m RNA的影响。结果证明 ,针刺促进了备用根背根节的神经生长因子基因的表达 ,使备用背根节内神经生长因子、神经生长因子 m RNA阳性神经元数量明显增多 ,并且针刺时间越长促进作用也越强 ;而对脊髓 板层与背核则无明显影响。本实验结果提示 ,针刺对备用根猫脊髓侧支生芽具有促进作用 ,这种作用主要体现在通过增加背根节神经生长因子基因的表达和神经生长因子的合成来实现的     

挤压伤后脊髓神经元NT-3和NT-4的表达变化

为了研究脊髓挤压伤后 ,脊髓神经元 NT-3和 NT-4的早期变化 ,本研究采用免疫组织化学 ABC法和阳性神经元计数 ,结果在大鼠脊髓证明了 NT-3免疫阳性反应产物主要在胞核着色 ,NT-4则胞浆及胞核均着色。腹角的 NT-3阳性神经元数在脊髓挤压伤后 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组明显增高 ( P<0 .0 1) ;背角的 NT-3阳性神经元仅 2 1d组较正常组有显著增加 ( P<0 .0 1)。腹角的 NT-4阳性神经元数在损伤后 2 4h组、7d组和 2 1d组均较正常组有显著增加 ( P<0 .0 5 ) ,且随时间的延长呈增加趋势 ( P<0 .0 5 ) ;背角的 NT-4阳性神经元数 7d组和 2 1d组较正常组和 2 4h组显著增加 ( P<0 .0 1) ,随时间延长仍有增加趋势 ( P<0 .0 1)。结论 :在脊髓挤压伤后的早期腹、背角 NT-3和 NT-4阳性神经元数均有增多 ,提示内源性 NT-3和 NT-4增加可能与脊髓损伤的早期修复有关     

针刺对脑源性神经营养因子在脊髓Ⅱ板层可塑性中表达的影响

采用免疫组化和原位杂交技术 ,探讨了针刺促进脊髓 板层可塑性过程中脑源性神经营养因子及其 m RNA表达的变化。结果显示 :针刺侧备用背根节的脑源性神经营养因子及其 m RNA阳性中 (4 2～ 5 7μm)、小 (<42 μm)型神经元的百分数有所增加 (P<0 .0 5 ) ;脊髓 板层的脑源性神经营养因子的阳性神经膨体密度明显增多 (P<0 .0 1)而阳性神经元百分数无变化 (P>0 .0 5 ) ;针刺后脊髓 板层未见脑源性神经营养因子 m RNA的杂交信号。提示针刺促进脊髓 板层可塑性可能与背根节中、小神经元表达脑源性神经营养因子的增多有关     

针刺对备用背根节神经元CNTF和PDGF表达的影响

目的探讨部分去背根后针刺对备用背根节神经元睫状神经营养因子(CNTF)及血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法制备猫双侧备用背根模型(切除双侧L1～L5、L7～S2背根节,保留L6背根节为备用背根节)。针刺位于右侧备用根支配区的两组穴位。针刺7d及14d后取备用背根节用CNTF抗血清(1∶500)及PDGF抗血清(1∶200)行免疫组织化学ABC法染色。分别记数各组阳性总、大及中小神经元的数量。结果正常组左右L6背根节的细胞数无差异,CNTF、PDGF阳性神经元数在7d、14d时与正常组比较无差异。针刺侧CNTF阳性总、大及中小神经元数在针刺7d时均显著多于非针刺侧(P<0.05),而针刺14d时,只有阳性大神经元数多于非针刺侧(P<0.05)。PDGF阳性总及大神经元数针刺7d时多于非针刺侧(P<0.05),针刺14d时,阳性总及中小神经元多于非针刺侧(P<0.05)。结论针刺可促进去背根后备用背根节CNTF、PDGF的表达,这种促进作用显效的时间因不同因子和不同种类的背根节神经元而异。     

针刺对备用背根节神经元表皮生长因子表达的影响

成年哺乳动物的脊髓具有可塑性,且针刺可促进脊髓可塑性,但其机制尚不清楚。有实验表明针刺可促进NGF、NT-3在部分去背根动物背根节的表达,表明了针刺可能通过改变背根节部分神经营养因子的表达进而在脊髓可塑性中发挥作用。表皮生长因子(EGF)与神经     

内源性GDNF、NT-4对针刺猫脊髓备用根背根节神经元的作用

为了解部分背根切除和针刺及内源性GDNF和NT-4对体外培养备用背根节(DRG)的作用,本研究对5只成年猫进行双侧备用根手术(切除双侧L1~L5和L7~S2DRG,其中L6DRG作为备用背根)。术后当日开始针刺一侧L6脊神经后肢分布区的两组穴位,即足三里和悬钟、伏兔和三阴交,每天一次,每次30min,连续针刺7d后无菌条件下取出双侧L6DRG进行体外培养,24h后全量换液,并将针刺侧的一部分培养孔的培养液分别用含有200ng/ml抗GDNF和NT-4抗体培养液替换,分别作为抗GDNF和NT-4抗体封闭组。7d后终止培养,于显微镜下用显微测微尺测量神经突起的长度;并用抗NSE抗体行免疫细胞化学ABC法染色进行神经元鉴定。结果显示:(1)免疫细胞化学染色可见体外培养的细胞95%以上为NSE阳性细胞,且为典型的体外培养的DRG神经元;(2)体外培养备用根组和抗GDNF抗体组神经突起的平均长度比针刺组的短(P<0.05);(3)而针刺组神经突起的平均长度与抗NT-4抗体组间无差异(P>0.05);两抗体组平均突起长度比备用根组的突起长(P<0.05)。本研究结果提示,针刺可促进体外培养DRG神经元突起的生长,进而可能与脊髓可塑性密切相关;内源性GDNF有促进DRG神经元突起生长的作用;而内源性NT-4在DRG神经元突起生长中发挥的作用却不明显。     

P物质在成年猫脊髓和背根节的分布

目的 观察P物质在成年猫脊髓和背根节的表达情况。方法 成年健康雄猫5只，取L5脊髓节和随机取一侧L6背根节制作厚20μm冰冻切片，用免疫组织化学ABC法染色，观察SP在正常脊髓和背根节的分布。结果 在脊髓，SP阳性膨体主要见于后角Ⅰ、Ⅱ板层，后角Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ板层及侧角的一些神经元呈弱阳性反应，前角运动神经元胞体和突起呈阳性反应，胞核不着色。在背根节，SP的免疫阳性物主要分布于小细胞的胞浆内，胞核不着色。结论 SP在成年猫脊髓和背根节有表达。     

NGF,BDNF,NT-3和GDNF在背根节不同神经元的配布的免疫组织化学证据

为了探讨神经生长因子、脑源性神经生长因子 ,神经营养素 -3,胶原细胞源性神经生长因子在成年猫背根节神经元不同大小细胞的分布。取 L6背根节制成 2 0μm厚冰冻切片 ,用上述四种因子抗血清进行免疫组化反应。计数每一种因子阳性大、中、小型 (小于 42μm者为小型神经元 ;42～ 5 7μm者为中型神经元 ;大于 5 7μm者为大型神经元 )神经元的百分数。结果证明 ,此四种因子在背根节大、中、小神经元的阳性百分数分别为 :1.2± 0 .7,2 .1± 0 .9,3.3± 1.1;1.7± 0 .4,11.2± 1.2 ,30 .0± 1.5 ;2 6 .7± 2 .2 ,6 .2± 1.2 ,13.2± 2 .9;2 7.4± 3.3,8.1± 1.7,2 0 .1± 2 .4。表明 :在成年猫 L6背根节仅存在少数神经生长因子阳性细胞 ,而脑源性神经生长因子则主要配布于中、小神经元 ,神经营养素 -3和胶质细胞源性生长因子的免疫阳性细胞主要是大神经元 ,但也包括一些中小神经元。提示此四种因子在成年猫背根节的生理功能可能与神经元的不同大小有关。     

部分背根切断对备用DRG神经元和胶质细胞NGF表达上调的影响

本研究目的在于探讨部分背根切断后备用背根节(DRG)中各类细胞NGF及其mRNA的量变状况。将成年雄猫10只分为正常组、单侧部分背根切断后7天组等2组,每组5只。实验组切除一侧L1～L5,L7～S2 DRG,保留L6 DRG为备用根。取正常组一侧和术后7天组手术侧的L6 DRG制成20μm厚冰冻纵切片,分别用NGF抗体及其cRNA探针进行免疫组织化学及原位杂交反应。观察NGF及其mRNA在DRG各类细胞的分布,测定NGF及其mRNA的光密度值以反映其相对含量。结果表明,在正常组,L6DRG中仅存在少量的NGF及其mRNA阳性神经元,此外,一些胶质细胞也呈阳性反应。在手术组,各类神经元及胶质细胞内NGF及其mRNA的光密度值较正常者显著升高(P<0.05)。结论:部分背根切断导致备用DRG神经元和非神经元表达NGF增多,提示NGF可能有利于促进备用背根生芽。     

GDNFR-〆在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中分布的免疫组织化学研究

目的　观察胶质细胞源性神经营养因子受体 - α(GDNFR- α)在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中的分布 ,探讨 GDNF对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用。　方法　原代培养脊髓和背根节神经元 ,5 d后行抗 GDNFR- α多克隆抗体免疫组织化学 SP法染色。　结果　 GDNF免疫反应存在于体外培养的脊髓神经元、背根节神经元以及胶质细胞中。　结论　 GDNF可能对脊髓神经元、背根节神经元和胶质细胞的生理功能具有一定的调节作用     

GDNFR-α在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中分布的免疫组织化学研究

目的观察胶质细胞源性神经营养因子受体-α(GDNFR-α)在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中的分布,探讨GDNF对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用. 方法原代培养脊髓和背根节神经元,5d后行抗GDNFR-α多克隆抗体免疫组织化学SP法染色. 结果 GDNF免疫反应存在于体外培养的脊髓神经元、背根节神经元以及胶质细胞中. 结论 GDNF可能对脊髓神经元、背根节神经元和胶质细胞的生理功能具有一定的调节作用.     

部分背根切断及针刺对备用背根节神经元血小板源性生长因子表达的影响

目的:探讨部分去背根及部分去背根后针刺对备用背根节神经元血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法:制备猫双侧备用背根节模型,并针刺位于右侧备用根支配区的两组穴位,针刺7d及14d后分别取针刺、非针刺侧备用背根节,行免疫组织化学ABC法显色。分别计数各组阳性神经元总数以及大、中小阳性神经元的数量。结果:PDGF在备用背根节的大、中小神经元均有表达。部分背根切断后,针刺侧、非针刺侧PDGF阳性神经元总数及中小阳性神经元数在7d时较正常显著减少,针刺后7d时,PDGF阳性总数及大神经元数针刺多于非针刺侧,针刺14d时,阳性总数及中小神经元数多于非针刺侧。结论:部分背根切断及针刺可影响PDGF在备用背根节的表达,这种作用显效的时间因不同时相、不同类型的背根节神经元而异。     

成年猕猴背根神经节nNOS免疫阳性神经元的分布

目的:观察正常成年猕猴背根神经节神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元的分布。方法:ABC免疫细胞化学方法显示nNOS免疫阳性神经元,并用体视方法进行定量分析。结果:猕猴颈、胸、腰各段背根神经节nNOS免疫阳性神经元的分布相似,数量较多,阳性神经元的大小不等,多呈圆形或椭圆形;胞浆着色较深,胞核位于细胞中央,不着色,细胞被神经纤维束分隔成群。nNOS免疫阳性神经元以中型神经元为主,其次为小型神经元,其胞浆呈强阳性染色,细胞直径<50μm,大型神经元较少。颈、胸、腰各段背根神经节nNOS免疫阳性神经元的密度以及阳性细胞与总细胞数的比值均无明显差异。结论:猕猴背根神经节nNOS主要表达在中、小型神经元,提示NO可能主要参与痛觉等浅感觉的传导和调制。     

GDNFR-α在成年大鼠脊髓和背根节的分布的免疫组织化学研究

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用 ,本实验采用抗胶质细胞源性神经营养因子受体 -α多克隆抗体免疫组织化学方法 ,观察了胶质细胞源性神经营养因子受体 -α在成年大鼠腰段脊髓和背根节的分布。结果发现 :胶质细胞源性神经营养因子受体 -α免疫反应出现于成年大鼠腰段脊髓神经元和背根节神经元中。提示 :胶质细胞源性神经营养因子受体 -α可能对脊髓运动神经元、背根节神经元具有一定的调节作用     

成年弥猴背根神经节nNOS免疫阳性神经元的分布

目的：观察正常成年称猴背根神经节神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元的分布。方法：ABC免疫细胞化学方法显示nNOS免疫阳性神经元，并用体视方法进行定量分析。结果：猕猴颈、胸、腰各段背根神经节nNOS免疫阳性神经元的分布相似，数量较多，阳性神经元的大小不等，多呈圆形或椭圆形；胞浆着色较深，胞核位于细胞中央，不着色，细胞被神经纤维束分隔成群。nNOS免疫阳性神经元以中型神经元为主，其次为小型神经元，其胞浆呈强阳性染色，细胞直径＜50μm，大型神经元较少。颈、胸、腰各段背根神经节nNOS免疫阳性神经元的密度以及阳性细胞与总细胞数的比值均无明显差异。结论：称猴背根神经节nNOS主要表达在中、小型神经元，提示NO可能主要参与痛觉等浅感觉的传导和调制。