基于AA-I代谢中oatp2b1动态表达探讨脾虚证湿浊转运的机制

目的:通过观察脾虚大鼠马兜铃酸(Aristolochic acid-I,AA-I)的代谢与肺、肝、脾、胃、肾、小肠、大肠7种组织中有机阴离子转运肽oatp2b1基因及蛋白表达的关系探讨中医湿浊转运的内涵。方法:48只SD大鼠随机分为空白组、脾虚组、空白+AA-I组、脾虚+AA-I组。脾虚组及空白组分别做AAI药代动力学检测,并分别取肺、肝、脾、胃、肾、小肠、大肠组织;空白+AA-I组及脾虚+AA-I组予AA-I灌胃后5、60分钟两个时间点取上述组织,采用RT-PCR、Western blot及免疫组化的方法检测各组织中oatp2b1的基因及蛋白表达情况。结果:空白组与脾虚组AA-I血药浓度出现明显差异(P0.05)。oatp2b1 mRNA表达:脾虚组中脾组织表达量较空白组降低(P0.05);空白+AA-I组5分钟时与空白组比较各组织表达无差异,60分钟小肠组织表达量较空白组降低(P0.05);脾虚+AA-I组5分钟时胃、肝组织表达量较脾虚组降低(P0.05),60分钟时肾、大肠组织表达量较脾虚组升高(P0.05)。oatp2b1蛋白表达变化趋势同基因表达改变基本一致;oatp2b1蛋白分布:肝组织中肝血窦周边的肝细胞及巨噬细胞的细胞膜染色阳性,胃组织中消化腺的胞质染色阳性,肾组织中肾小管包膜及胞浆染色阳性,小肠组织消化腺中胞质及包膜染色阳性,大肠组织胞膜染色阳性。结论:AA-I代谢与肝、胃、肾、小肠、大肠组织oatp2b1表达相关,提示湿浊代谢以脾为枢纽,肝、胃、肾、大肠、小肠共同参与并发挥相应协调作用。     

从脾虚大鼠AA-I的排泄与脏腑oatp2a1、oatp2b1的表达探讨脾肾关系

目的通过观察脾虚大鼠马兜铃酸(aristolochic acid,AA)代谢与肾、大肠、小肠组织中有机阴离子转运肽(organic anion transporting polypeptide,oatp)2a1、oatp2b1mRNA及蛋白表达的关系,探讨中医学脾肾之间的相互关系。方法 46只SD大鼠随机分为空白组(12只)、脾虚组(22只)、AA-I组(6只)、脾虚AA-I组(6只)。脾虚组及脾虚AA-I组采用利血平5 mg/(kg·d)皮下注射连续16天造模。空白组及脾虚组选取6只大鼠行颈动脉插管,并予AA-I灌胃后5、15、30、45、60 min颈动脉取血行AA-I药代动力学检测;脾虚组选10只大鼠行肾、大肠、小肠AA-I组织浓度测定;脾虚组及空白组各取6只分别予生理盐水灌胃,AA-I组、脾虚AA-I组予AA-I灌胃后60 min时间点取肾、大肠、小肠3种组织,采用RT-PCR及Western blot方法检测各组织中oatp2a1、oatp2b1m RNA及蛋白表达。结果与空白组比较,脾虚组大鼠灌胃后15、30、45、60 min时体内AA-I血浆浓度值明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。脾虚组60 min时AA-I血浆浓度下降,肾及大肠组织浓度升高,小肠中组织浓度明显下降。空白组与脾虚组中上述3种组织oatp2a1、oatp2b1mRNA表达无差异;与空白组比较,AAI组小肠oatp2a1、oatp2b1mRNA表达降低,大肠oatp2a1mRNA表达降低(P0.05,P0.01);与脾虚组比较,脾虚AA-I组肾组织中oatp2a1、oatp2b1mRNA表达升高(P0.05),大肠组织oatp2b1m RNA表达升高(P0.05)。结论脾虚脾失运化状态下,AA-I代谢差异可能与肾、大肠、小肠组织oatp2a1、oatp2b1表达改变相关,并提示肾、大肠在脾虚状态下物质代谢中发挥重要协调作用,验证了中医脾肾相关理论。     

高脂及劳倦伤脾大鼠有机阴离子转运肽oatp2b1 mRNA及蛋白表达研究

目的观察脾虚状态下大鼠有机阴离子转运肽oatp2b1基因和蛋白表达,探讨oatp2b1在湿浊转运中的作用。方法24只大鼠随机分为正常组、高脂组、劳倦组,每组8只。造模成功后,每只大鼠取肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织各1块。劳倦组单号日期采用特制束缚筒,每次3 h,双号日期令大鼠在冷水（10±1） ℃中游泳7 min,连续12周。模型组、正常组常规标准大鼠颗粒饲料喂养12周,高脂组大鼠以高脂饲料喂养12周,均自由饮食饮水。采用RT-PCR、Western Blot法检测肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织oatp2b1 mRNA、蛋白表达。结果高脂组肾、肝oatp2b1 mRNA含量高于正常组及劳倦组（P<0.01, P<0.05）;正常组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>脾>大肠>小肠>肾>胃;劳倦组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>大肠>脾>肾>胃>小肠;高脂组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>脾>小肠>肾>大肠>胃。肺组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为劳倦组>正常组>高脂组（P>0.05）。脾组织oatp2b1蛋白表达由高至低为高脂组>正常组>劳倦组（P>0.05）;肾组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为正常组>劳倦组>高脂组（P>0.05）;肝组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为正常组>高脂组>劳倦组（P>0.05）;其中胃、大肠、小肠中oatp2b1蛋白表达量极低。正常组oatp2b1蛋白表达由高至低为肺>脾>肝,肾>胃、大肠、小肠;劳倦组oatp2b1蛋白表达由高至低为：肺>脾>肾>肝>胃、大肠、小肠;高脂组oatp2b1蛋白表达由高至低为：脾>肺>肾>肝>胃,大肠,小肠,差异无统计学意义（P>0.05）。结论肝、肾等脏器在脾失健运状态下的湿浊转运中可能发挥重要作用,oatp2b1是机体参与湿浊运化的物质基础之一。脾主运化湿浊的功能,可能不仅包括胃肠道的功能在内,而且也可能包括一部分肝脏及肾脏的功能。     

有机阴离子转运肽oatp2b1在痰湿证大鼠组织中表达及意义

目的:通过观察痰湿状态下大鼠有机阴离子转运肽oatp2b1基因和蛋白表达来探讨oatp2b1在痰湿转运中的作用。方法:24只大鼠随机分为2组,正常组、模型组各12只。模型组采用高脂饮食造模3个月,每只大鼠取脾、肝、肾组织各1块。采用实时荧光定量PCR、Western Blot方法及免疫组化法检测组织中oatp2b1的基因表达、蛋白表达情况。结果:模型组肝、肾组织中oatp2b1 mRNA表达量高于正常组(P<0.01,P<0.05);而模型组脾组织中oatp2b1 mRNA表达量低于正常组(P<0.01)。两组oatp2b1蛋白在脾、肝、肾组织有不同程度表达,但差异无统计学意义。模型组中脾脏的巨噬细胞、肝脏的枯否氏细胞及肾小管上皮细胞均有oatp2b1蛋白分布,较正常组表达增强。结论:痰湿伤脾,脾失运化状态下,肝、肾在痰湿转运中发挥重要作用,oatp2b1可能是机体参与痰湿运化的物质基础之一。     

高脂及劳倦伤脾大鼠有机阴离子转运肽oatp2blmRNA及蛋白表达研究

目的观察脾虚状态下大鼠有机阴离子转运肽oatp2bl基因和蛋白表达,探讨oatp2bl在湿浊转运中的作用。方法24只大鼠随机分为正常组、高脂组、劳倦组,每组8只。造模成功后,每只大鼠取肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织各1块。劳倦组单号日期采用特制束缚筒,每次3h,双号日期令大鼠在冷水（10±1）℃中游泳7min,连续12周。模型组、正常组常规标准大鼠颗粒饲料喂养12周,高脂组大鼠以高脂饲料喂养12周,均自由饮食饮水。采用RT．PCR、WesternBlot法检测肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织oatp2b1mRNA、蛋白表达。结果高脂组肾、肝oatp2blmRNA含量高于正常组及劳倦组（P〈0．01,P〈0．05）;正常组oatp2blmRNA表达量由高至低为肝〉肺〉脾〉大肠〉小肠〉肾〉胃;劳倦组oatp2blmR-NA表达量由高至低为肝〉肺〉大肠〉脾〉肾〉胃〉小肠;高脂组oatp2blmRNA表达量由高至低为肝〉肺〉脾〉小肠〉肾〉大肠〉胃。肺组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为劳倦组〉正常组〉高脂组（P〉0．05）。脾组织oatp2bl蛋白表达由高至低为高脂组〉正常组〉劳倦组（P〉0．05）;肾组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为正常组〉劳倦组〉高脂组（P〉0．05）;肝组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为正常组〉高脂组〉劳倦组（P〉0．05）;其中胃、大肠、小肠中oatp2bl蛋白表达量极低。正常组oatp2bl蛋白表达由高至低为肺〉脾〉肝,肾〉胃、大肠、小肠;劳倦组oatp2bl蛋白表达由高至低为：肺〉脾〉肾〉肝〉胃、大肠、小肠;高脂组oatp2b1蛋白表达由高至低为：脾〉肺〉肾〉肝〉胃,大肠,小肠,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肝、肾等脏器在脾失健运状态下的湿浊转运中可能发挥重要作用,oatp2bl是机体参与湿浊运化的物质基础之一。脾主运化湿浊的功能,可能不仅包括胃肠道的功能在内,而且也可能包括一部分肝脏及肾脏的功能。     

脾虚大鼠有机阴离子转运肽Oatp2a1基因表达及意义探讨

目的:通过观察脾虚状下大鼠oatp2a1基因表达来探讨Oatp2a1在湿浊转运中的作用。方法:32只大鼠随机分为4组,分别为正常组(6只)、正常+AA大鼠模型组(6只)、脾虚大鼠模型组(10只)、脾虚+AA大鼠模型组(10只)。采用皮下注射利血平的方法造脾虚大鼠模型,造模成功后给予相应组别大鼠马兜铃酸灌胃3天,最后采用实时荧光定量PCR方法检测各组大鼠肺、肝、肾、胃、小肠、大肠等组织中Oatp2a1的基因表达情况。结果:Oatp2a1在上述6种脏器中都有不同程度的表达。肝组织中,脾虚组大鼠模型Oatp2a1的表达量较正常组明显升高(P=0.035,P<0.05);小肠组织中,脾虚组大鼠模型中Oatp2a1的表达较正常组明显下降(P=0.004,P<0.01)。在给予马兜铃酸刺激下,小肠组织中,正常+AA组大鼠模型Oatp2a1的表达较正常组明显下降(P=0.032,P<0.05)。结论:Oatp2a1可能是机体参与湿浊运化的物质基础之一,在脾虚状态下大鼠小肠、肝组织中Oatp2a1的表达变化提示小肠、肝等脏器在脾虚状态下的湿浊转运中可能发挥重要作用,脾主运化湿浊的功能,可能不仅包括胃肠道的功能在内,而且也可能包括一部分肝脏的功能,值得进一步研究。     

高脂及劳倦伤脾大鼠有机阴离子转运肽oatp4a1 mRNA及蛋白表达

目的 观察有机阴离子转运肽oatp4a1在脾虚模型大鼠各组织中的表达。探讨其在水液湿浊转运中的作用机制。方法 选取6只SPF级大鼠制备劳倦伤脾模型,另选取12只大鼠随机分为空白对照组(空白组)、高脂饮食组(高脂组),每组6只。劳倦伤脾模型组(劳倦组)单号日期采用特制束缚筒,每次3 h,双号日期令大鼠在冷水［(10±1)℃］中游泳7 min,连续2周。劳倦组、空白组常规标准大鼠颗粒饲料喂养12周,高脂组大鼠以高脂饲料喂养12周,均自由饮食饮水。采用RT-PCR和Western blot法检测肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织oatp4a1 mRNA、蛋白表达。结果 劳倦组大鼠扎堆懒动,烂便,毛色粗糙, 饮食饮水量减少,体重下降(P<0.05),与临床脾虚证表现基本相符, 提示劳倦伤脾动物模型造模全部成功。高脂组大鼠第9周之后开始出现食欲不振,精神萎靡,嗜卧懒动,毛发疏松粗糙,晦暗无光泽等脾虚症状,形成痰湿证大鼠。与空白组比较,高脂组第9周平均体重升高(P<0.05)。oatp4a1 mRNA在肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠7种脏器中都有表达;各组各组织oatp4a1 mRNA表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);高脂组大鼠肺、肾oatp4a1 mRNA表达量均高于肝(P<0.05)。结论 oatp4a1可能是高脂伤脾大鼠机体参与湿浊转运的物质基础之一,其中肺、肾、大肠在湿浊转运中可能起着重要作用。     

补中益气汤治疗脾虚证作用机制研究

目的研究补中益气汤对脾气虚证、脾气下陷证肝组织细胞凋亡和相关因子p53、bcl-2表达的影响,探讨补中益气汤治疗脾虚证的作用机制。方法依据中医病因学理论,采用连续造模的方法复制脾气虚证和脾气下陷证病理模型。HE染色观察肝组织病理形态的变化,TUNEL法检测肝组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测p53、bcl-2基因的表达情况。结果补中益气汤通过上调bcl-2基因和下调p53基因的表达抑制细胞凋亡,使脾气虚肝组织病理变化恢复正常;补中益气汤通过上调p53基因、下调bcl-2基因的表达诱导细胞凋亡,使脾气下陷证肝组织病理变化基本恢复正常。结论补中益气汤可改善脾气虚证和脾气下陷证肝组织的病理变化,其机制可能与其通过抑制或诱导细胞凋亡、清除损伤细胞有关;补中益气汤具有双向调节细胞凋亡的作用。     

逍遥散对肝郁脾虚证模型大鼠海马TPH2与IDO1的调节作用

目的:观察肝郁脾虚证模型大鼠海马色氨酸羟化酶2(TPH2)与吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)表达的变化并探讨逍遥散的调节作用。方法:雄性SD大鼠随机分成4组,分别是正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组,每组6只。采用慢性束缚应激的方法制备大鼠肝郁脾虚证模型,造模持续21 d。通过荧光定量PCR与Western-blot方法检测各组大鼠海马TPH2与IDO1的表达情况。结果:模型组大鼠海马TPH2 mRNA的表达水平低于其余3组大鼠(P0.05),逍遥散与氟西汀对TPH2 mRNA的表达有一定的上调作用;模型组大鼠海马IDO1 mRNA的表达显著增加(P0.01),逍遥散与氟西汀对IDO1 mRNA表达的下调作用明显(P0.01),且逍遥散对IDO1 mRNA的下调作用更明显。模型组、逍遥散组、氟西汀组大鼠海马TPH2的蛋白的表达低于正常组(P0.01),逍遥散组TPH2蛋白表达高于模型组(P0.05);模型组大鼠海马IDO1的蛋白表达显著高于其余3组(P0.01)。结论:肝郁脾虚证模型大鼠海马TPH2的表达减少,IDO1的表达增多,逍遥散可能通过调节海马TPH2与IDO1的表达水平进而影响5-HT的含量,起到治疗作用。     

肝郁脾虚证大鼠中枢BDNF的表达及疏肝健脾法的干预研究

目的:观察肝郁脾虚型大鼠海马及杏仁核中BDNF mRNA及蛋白表达变化,以及GluR1/2水平的变化,探讨其在肝郁脾虚型大鼠模型发病中的作用机制。方法:将45只Wistar大鼠随机分为3组:空白组、模型组和逍遥散组,每组15只,采用夹尾激怒+饮食失节法建立肝郁脾虚型大鼠模型,免疫组化S-P法和RT-PCR法检测各组大鼠海马及杏仁核中BDNF基因和蛋白表达,并采用ELISA法检测GluR1/2水平的变化。结果:模型组大鼠海马及杏仁核中BDNF mRNA和蛋白的表达与空白组比较均降低,经过逍遥散治疗后的BDNF表达量则有所升高(P<0.01,P<0.05);模型组GluR1升高GluR2降低,治疗后GluR1降低GluR2升高(P<0.05),差异均有显著性意义。结论:肝郁脾虚证的发生与BDNF的表达受抑密切相关,上调BDNF的表达有望成为肝郁脾虚证的治疗新方向。     

基于非靶标代谢组学技术探讨慢性肾脏病3~4期湿浊证患者的特征

目的:基于非靶标代谢组学技术诊断慢性肾脏病(CKD)3-4期湿浊证患者尿液及血清的差异性标志物。方法:选取2019年6月1日至2019年12月31日上海中医药大学附属龙华医院肾病科收治的CKD 3~4期湿浊证患者60例作为观察组,健康体检者10例作为对照组,运用非靶标代谢组学方法进行观察研究。结果:代谢PCA得分值的空间分布表明观察组和对照组尿液、血清代谢产物,差异有统计学意义(P<0.05)。尿液正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA）置换检验结果提示:R2Y=0.67＞0,Q2Y=0.43＞0。17个差异代谢物排序后,经标准品鉴定出5个差异性生物标志物分别为:熊果苷、水杨苷、4氧代脯氨酸、胍基乙酸及肌酸,并且明确其变化方向和主要参与的代谢途径(糖酵解及精氨酸和脯氨酸代谢)。血清OPLS-DA置换检验结果提示:R2Y=0.70＞0,Q2Y=0.50＞0。16个差异代谢物排序后,经标准品鉴定差异性生物标志物分别为:丙酮酸、琥珀酸半醛、富马酸、柠檬酸、苹果酸和α珀酮戊二酸,并且明确其变化方向和代谢途径(三羧酸循环及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢)。结论:代谢组学方法能较好地提升CKD 3～4期湿浊证的诊断精确度,是CKD 3~4期湿浊证的良好诊断手段。     

脾虚内环境对诱导型肝癌小鼠胃组织中oatp2a1、oatp2b1、oatp4a1、oatp1b2表达的影响

目的:通过研究脾虚内环境下肝癌小鼠胃组织中有机阴离子转运家族(oatp2a1、oatp2b1、oatp4a1、oatp1b2)mRNA和蛋白的表达情况,探讨脾虚因素对肝癌的影响及其机制。方法:45只小鼠随机分成正常对照组、肝癌组和脾虚肝癌组,建立脾虚药物诱导肝癌小鼠模型,采用RT-qPCR和Western Blot的方法检测小鼠胃组织中oatp2a1、oatp4a1、oatp2b1、oatp1b2和肝癌组织中AFP的表达。结果:各组造模后小鼠胃组织Oatp家族的表达发生了变化,与肝癌组小鼠比较,脾虚肝癌组小鼠胃组织中的Oatp家族mRNA和蛋白表达明显降低(P0.05)。脾虚肝癌组小鼠癌组织的AFP表达较肝癌组小鼠癌组织明显升高(P0.05)。结论:脾虚因素能促进小鼠肝癌的发生和发展,其机制可能与脾虚内环境下胃组织中Oatp家族的异常表达有关,进一步提示脾虚湿浊转运障碍影响了肝癌的发生发展。     

湿浊内蕴证、脾肾两虚证慢性肾衰患者肠道菌液对黄芪水提物中毛蕊异黄酮葡萄糖苷体外代谢的影响

目的:探讨湿浊内蕴证、脾肾两虚证慢性肾衰患者肠道菌液对黄芪水提物中毛蕊异黄酮葡萄糖苷体外代谢的影响,为临床不同证型患者用药提供参考依据。方法:收集慢性肾衰湿浊内蕴证、脾肾两虚证患者及健康人粪便样本,将其制备成肠道菌液,加入黄芪水提物后在体外好氧、厌氧条件培养,采用高效液相法检测培养0、4、12、24 h时培养基中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量。结果:与健康组比较,湿浊内蕴组在好氧、厌氧条件下4 h时含量、0~4 h时段代谢速率累积代谢速率、不同时间点含量、不同时段代谢速率、不同时段累积代谢速率变化,好氧条件下12~24 h时段代谢速率,厌氧条件下24 h时含量、0~24 h时段累积代谢速率有显著差异(P<0.05);脾肾两虚组在好氧、厌氧条件下4~12 h时段代谢速率有显著差异(P<0.05)。与湿浊内蕴组比较,脾肾两虚组在好氧、厌氧条件下0~4 h时段代谢速率、不同时间点含量、不同时段代谢速率,好氧条件下4 h时含量、0~4 h时段累积代谢速率、累积代谢速率变化,厌氧条件下12、24 h时含量、4~12 h时段代谢速率、0~12 h时段、0~24 h时段累积代谢速率有显著差异(P<0.05)。结论:脾肾两虚组与湿浊内蕴组患者肠道菌群对黄芪水提物溶液毛蕊异黄酮葡萄糖苷代谢均有一定影响,但以湿浊内蕴组影响更为显著,并且两组间也存在显著差异。     

红芪多糖对实验性脾虚大鼠胃黏膜中COX-2表达的影响

目的:观察红芪多糖对实验性脾虚大鼠胃黏膜组织中COX-2表达的影响.方法:100%大黄水煎液连续42天灌胃制备脾虚证大鼠模型,造模后将大鼠随机分为6组,其中空白对照组、模型对照组正常饲养,药物组(高、中剂量组)用红芪多糖灌胃30天,对照组(高、中剂量组)以黄芪多糖灌胃30天进行干预;用免疫组化法检测大鼠胃黏膜组织中环氧...     

基于UPLC-MS的肝癌脾虚湿盛证患者血浆代谢组学研究

目的:利用代谢组学方法研究肝癌脾虚湿盛证患者的血浆代谢组分变化,筛选肝癌脾虚湿盛证的潜在生物标志物,探究其生物学机制,丰富代谢组学在中医证候研究中的应用.方法:收集16例肝癌脾虚湿盛证患者和21例健康体检者的血浆样本,超高效液相色谱-质谱(ultra performance liquid chromatography ...     

肝郁脾虚证大鼠TXB2、6-Keto-PGF1α含量的观察研究

目的:探查肝郁脾虚证大鼠血液运行的状况.方法:采用塑料夹夹尾+隔日禁食+禁食时在鼠笼上方悬挂食物的方法建立肝郁脾虚证大鼠模型,测定其血浆TXB2、6-Keto-PGF1α的含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值.结果:肝郁脾虚证大鼠模型与正常对照组相比,TXB2及TXB2/6-Keto-PGF1α比值明显升高(P<0.01),6-Keto-PGF1α则无明显变化(P>0.05).结论:肝郁脾虚证大鼠出现了TXA2和PGI2之间平衡的失调,造成血液高黏和易形成血栓,表明肝郁脾虚证大鼠存在着血流不畅或血瘀的状态.     

逍遥散对慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠MMP2、TIMP2表达的影响

目的:观察肝郁脾虚证大鼠基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶组织抑制剂2(matrix metalloproteinase tissue inhibitor 2,TIMP2)的表达变化及逍遥散对其影响.方法:75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、7 d...     

慢性乙型病毒性肝炎肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中microRNAs的表达研究

目的研究慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中microRNAs(miRNAs)的表达差异,探索不同证候的特征性miRNAs,为慢乙肝辨证分型提供生物学标志物和客观化依据。方法收集慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者(各53例)及健康者(24例)的尿液标本,采用miRNAs表达谱芯片技术检测miRNAs表达谱,分析差异表达的miRNAs;采用实时定量RT-PCR(RT-qPCR)技术检测慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中部分差异表达的miRNAs相对表达量;进行miRNAs潜在靶基因的预测、GO和pathway分析。结果①miRNAs表达谱芯片检测结果显示,与肝郁脾虚证比较,慢乙肝肝胆湿热证患者有21条miRNAs呈高表达,1条miRNA呈低表达(差异倍数1.5,P0.05)。②RT-qPCR结果显示,与肝郁脾虚证比较,慢乙肝肝胆湿热证患者尿液中miR-483-3p和miR-4700-3p呈显著高表达(P0.05),miR-4745-5p呈显著低表达(P0.05);与健康者比较,慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证患者尿液中miR-483-3p呈低表达(P0.05)、miR-4745-5p呈高表达(P0.05),慢乙肝肝郁脾虚证患者尿液中miR-4700-3p呈低表达(P0.05)。③miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p的联合ROC曲线AUC为0.810 6,对于鉴别肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者具有一定的诊断价值。④生物信息学方法显示,证候差异表达miRNAs所调控的潜在靶基因,GO大都与生物学调控、代谢过程、多细胞有机体的发展、应激反应和细胞增殖等相关,pathway大都与翻译后蛋白质修饰、TGF-β信号通路、TGF-β家庭成员的信号、TGF-β受体复合物的信号传导等通路有关。结论慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证患者尿液中存在差异表达的miRNAs,miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p或许为慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证的潜在标志性分子,这些miRNAs可能分别通过调控其相应的靶基因而影响证候的发生发展。     

中医限食疗法对脾虚证代谢综合征患者心血管危险因素的影响

〔摘 要〕 目的：通过临床对照研究,评价中医限食疗法能对脾虚证代谢综合征患者心血管危险因素及脾虚证候积分的影响。方法：选取珠海市中西医结合医院 2018 年 6 月至 2019 年 6 月期间收治的 106 例脾虚证代谢综合征患者,随机分为对照组（50 例）与观察组（56 例）。对照组患者实施低热量低脂饮食计划,观察组患者实施中医限食疗法。观察治疗前后及随访 12 周体质量等基本资料、血脂及脾虚证候积分。结果：与对照组相比,观察组患者随访期患者体质量、体质量指数（BMI）、收缩压、腰围及腰臀比均显著减少,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。三酰甘油（TG）、极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL–C）水平显著降低,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;而高密度脂蛋白胆固醇（HDL–C）、载脂蛋白 B（ApoB）水平显著升高,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;治疗后及随访期脾虚症状积分均显著下降,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：中医限食疗法改善脾虚证代谢综合征患者脾虚状态,有效降低体质量、血压、心率,改善血脂水平,降低心血管危险因素。     

脾虚4号方对功能性腹泻脾虚证模型大鼠结肠组织胰高血糖素肽1受体表达的影响

目的:观察脾虚4号方对功能性腹泻脾虚证大鼠模型的作用及对大鼠结肠组织胰高血糖素肽1受体表达的影响,探讨其作用机制。方法:高乳糖加小平台站立法制备功能性腹泻脾虚证大鼠模型,观察大鼠的腹泻指数和体重变化,比色法检测血清乳酸、淀粉酶、尿D-木糖含量变化。脾虚4号方治疗功能性腹泻脾虚证模型大鼠后,分别用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测大鼠结肠组织胰高血糖素肽1受体的表达情况。结果:功能性腹泻脾虚证模型组大鼠较正常组大鼠的腹泻指数增加,体重增加减缓。模型组大鼠较正常组大鼠的血清乳酸含量升高、血清淀粉酶活力降低、尿D-木糖含量降低。模型组大鼠结肠组织的GLP-1R表达水平较正常组降低且有统计学意义(P0.01);脾虚4号方治疗组GLP-1R表达水平较模型组升高且有统计学意义(P0.01)。结论:成功复制功能性腹泻脾虚证大鼠模型。脾虚4号方对功能性腹泻脾虚证大鼠有一定的治疗作用,脾虚4号方使功能性腹泻脾虚证大鼠结肠胰高血糖素肽1受体表达升高。推断胰高血糖素肽1受体可能与脾虚4号方对功能性腹泻脾虚证的治疗有相关性。