重组人骨形态发生蛋白2壳聚糖纳米微球的制备及体外细胞毒性*☆

背景：通过各种微球负载骨生长因子使骨形态发生蛋白达到缓释效果逐渐成为研究热点,但关于载药壳聚糖纳米微球的生物相容性特别是细胞毒性的报道较少。 目的：对重组人骨形态发生蛋白2壳聚糖纳米微球进行细胞毒性检测,评估应用壳聚糖纳米微球作为重组人骨形态发生蛋白2缓释载体的生物安全性。 方法：通过离子交联法制备空白壳聚糖纳米微球,应用透视电镜观察微球的形态,激光粒径分析其粒径分布;通过重组人骨形态发生蛋白2壳聚糖纳米微球体外细胞毒性试验评估微球的生物安全性。 结果与结论：离子交联法制备的壳聚糖微球,球形规整,分散均匀,微球平均粒径为230 nm,分布较集中。载药及空白微球的反应分级为0或1级,均为合格。提示,离子交联法制备可成功制备出负载重组人骨形态发生蛋2的纳米微球,且微球细胞毒性检测合格,为进一步的骨组织工程研究提供理论实验基础。     

小檗碱磁性药物微球的制备及控制释放

背景：国内外对磁性药物微球的研究进展十分迅速,实践和理论研究均有不少报道。过去的工作多以葡聚糖、壳聚糖、聚酯等为包裹层,明胶包裹磁性材料和药物的相关报道相对较少,而用明胶包裹的小檗碱药物微球尚未见报道。 目的：制备小檗碱明胶磁性复合药物微球,用动态透析法,光电显微镜等考察药物的释放、负载和交联行为。 设计、时间及地点：微球的制备及性质表征。实验于2004-02/2006-05在贵州大学和贵州益康制药有限公司完成。 材料：主要材料为明胶、小檗碱、戊二醛、液体石蜡和铁盐。 方法：利用明胶的生物相容性及经戊二醛处理可使其固化的特性,以Fe3O4作为磁性内核,液体石蜡为有机分散介质,通过反相悬液冷冻凝聚法制备出磁性小檗碱明胶核壳微球。 主要观察指标：药物微球的结构和外观形貌,以及药物微球载药率、包裹率及体外释放情况。 结果：磁性药物微球的颗粒直径在20 μm以下,通过扫描电镜可以看出,Fe3O4粒子和小檗碱已经被明胶复合成堆积状的球体,达到微米级。将药物包裹前后的紫外吸收和红外相结合分析说明所制备的明胶磁性混合药物微球能保持原药的结构和药学性质。小檗碱微球载药率为7.2%,Fe3O4的含量为20.8%,微球包裹率为 62.6%。微球的缓释性能良好,7 h内释放的药物占总含药量的83.5%。 结论：用反相悬液冷冻凝聚法制备的小檗碱磁性明胶药物微球,制备方法简便,微球的粒径小,形状规则,缓释效果良好。 关键词：明胶;小檗碱;磁性微球;控制释放 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2009.47.018     

载荷角质细胞生长因子聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米缓释微球在组织工程皮肤构建中的应用

背景：聚乳酸-羟基乙酸共聚物具有良好的生物相容性和可降解性性。 目的：制备载荷角质细胞生长因子聚乳酸-羟基乙酸共聚物控释载药系统用于组织工程皮肤。 方法：采用乳化-溶剂挥发法、冷冻干燥法制备载有角质细胞生长因子的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球,并构建组织工程皮肤。扫描电镜、倒置显微镜、纳米粒度分析仪、紫外分光及ELISA法对微球评价其特性。 结果与结论：纳米微球载药量为(14.05±0.56)%,包封率为(59.86±2.38)%,角质细胞生长因子活性保留率(78.26±5.63)%,体外释放30 d的累积释药率达75%以上,微球形态规则圆润。微球形态规整,在脱细胞真皮表面分布均匀,与其联接良好。毛囊干细胞群在荷载聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微囊脱细胞真皮上生长活跃,细胞形态良好,并呈克隆团生长。说明实验用组织工程材料制备工艺合理,材料相容性好,可用于构建新型组织工程皮肤。     

替莫唑胺-PLGA纳米缓释微球的制备及体外药效研究

目的制备理想的可用于控制胶质瘤细胞生长进而可抑制胶质瘤的替莫唑胺-PLGA纳米缓释微球。方法用超声乳化-溶剂挥发法制备替莫唑胺-PLGA纳米缓释微球。选择测试了四种不同分子量的缓释微球的表面形态特征,并测量微球直径。检测载药量和包封率,分析制作参数、形态特征以及绘制释放曲线。结果替莫唑胺-PLGA缓释微球是一种结构稳定、大小均匀的缓释微球。分子量越大,微球直径越大。高分辨光镜及电镜观察,微球表面光滑,无裂隙,微球无明显聚集,微球大小均匀。不同分子量的TMZ-PLGA缓释微球最大载药量为10.2%,包封率都在90%以上。二氯甲烷残留量为5.70‰,达到了颅内安全应用的要求。从释放曲线可以看出,缓释系统中替莫唑胺可以持续释放2周以上,符合间质内化疗所要求的周期。结论 PLGA非常适合作为制备缓释微球的缓释载体。所制备的替莫唑胺-PLGA缓释微球符合生物力学规律,替莫唑胺虽有突释效应,但药物缓释时间可控。不同分子量及不同载药量的缓释微球均能长时间持续释放替莫唑胺。     

Fe3O4空心磁纳米微球制备工艺条件的影响因素

背景：空心微球材料具有很好的生物相容性，在生物医学和化学等许多领域得到广泛的应用。 目的：分析Fe3O4空心磁性纳米微球制备流程中反应温度、反应时间、洗涤次数、超声时间工艺条件对粒径的影响。 方法：以聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯-嵌段共聚物F127为原料，用共沉淀法制备空心超顺磁性纳米微球。运用正交试验的数学方法设计一个4×3的正交实验模型，从反应温度、反应时间、洗涤次数、超声时间4个方面考察不同制备条件对空心磁性纳米微球粒径大小的影响。 结果与结论：得到的最佳实验制备条件：在75 ℃下，充分反应6 h，用甲醇/去离子水反复洗涤3次之后，用功率为30%的超声处理20 min。样品通过0.22 µm滤嘴过滤后，用粒径分布仪、X射线衍射和透射电子显微镜对产物进行表征观察，证实用最优的实验条件制备的空心Fe3O4磁性纳米微球粒径为37.5 nm，外壳厚度10 nm左右，颗粒大小均匀，分布较好。 关键词：工艺条件；Fe3O4；正交实验；空心纳米微球；Pluronic F-127 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.014     

载BDNF基因PEG-PLGA纳米微球的制备及其转染外源性神经干细胞的研究

目的构建转染后能表达神经修复功能蛋白的载脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因的聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸纳米微球[poly (ethylene glycol)-poly (lactin-coglycolic acid)-BDNF-nanoparticles,PEG-PLGA-BDNF-NPs];探讨其转染外源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)后对细胞生物学功能的影响。方法采用W/O/W复乳溶剂挥发法制备装载BDNF基因质粒的PEGPLGA纳米微球转染复合体。用扫描电镜和透射电镜表征纳米微球的形貌,粒度电位分析仪测量纳米微球的粒径及Zeta电位。测定纳米微球对BDNF基因质粒的包封率和载药量;检测PEG-PLGA纳米微球转染复合体的体外缓释质粒的情况。倒置显微镜观察纳米微球转染复合体对NSCs形态的影响;并用CCK-8法检测其对NSCs增殖的影响。荧光倒置显微镜观察NSCs胞吞纳米微球转染复合体后的分泌作用; Western-blot及RTPCR检测其BDNF的分泌能力。结果 (1)制备了包载BDNF基因的PEG-PLGA纳米微球,微球的粒径约为200 nm,粒径均一;包封率及载药量均较高,具有一定的缓释效果。(2)分离培养出了具有不断增殖能力,表达神经巢蛋白的NSCs;并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞。(3)载BDNF基因的PEG-PLGA纳米微球高效转染NSCs,且转染不会引起显著细胞毒性; Western-blot及RT-PCR检测显示其大量表达BDNF。结论采用W/O/W复乳溶剂挥发法制备得到安全高效的PEG-PLGA-BDNF纳米微球。并首次构建了装载PEGPLGA-BDNF-NPs,能表达具有神经修复功能的BDNF的外源性NSCs系。     

纳米纤维介导的紫杉醇/阿霉素序贯联合治疗SHg-44胶质瘤

摘要 背景：纳米纤维技术可同时担载多种药物，避开血脑屏障限制实现脑胶质瘤的序贯联合化疗。 目的：用乳液电纺法制备同时担载紫杉醇和阿霉素的聚乙二醇-聚乳酸共聚物纳米纤维并实现两种药物的序贯释放，探讨纳米纤维介导的紫杉醇和阿霉素序贯联合治疗SHg-44胶质瘤的效果及机制。 方法:实验分为4组，1640培养液对照组，1%阿霉素组，1%紫杉醇组，5%(阿霉素+紫杉醇)组。采用高效液相色谱法测定紫杉醇和阿霉素的体外释放情况。四甲基偶氮唑盐法检测纳米纤维介导的紫杉醇和阿霉素序贯治疗对SHg-44胶质瘤细胞的增殖抑制率；流式细胞仪检测法检测紫杉醇和阿霉素序贯治疗对SHg-44胶质瘤细胞的凋亡诱导作用。 结果与结论：纳米纤维介导的紫杉醇和阿霉素序贯治疗对SHg-44胶质瘤细胞具有明显的生长抑制及促凋亡作用,且作用效果好于单独药物应用。提示聚乙二醇-聚乳酸纳米纤维作为一种药物载体能提高紫杉醇和阿霉素对SHg-44胶质瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。 关键词：胶质瘤；紫杉醇；阿霉素；序贯化疗；细胞凋亡 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.12.022     

甲基-β-环糊精干扰脂质微区影响脑胶质瘤细胞系C6侵袭和迁移的体外研究

目的观察甲基-β-环糊精(MβCD)破坏脂质微区结构对经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞侵袭和迁移能力的影响。方法采用MβCD(5mmol/L)破坏经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞膜脂质微区,通过Transwell细胞侵袭和迁移实验检测细胞侵袭性和迁移能力;Western blotting检测细胞膜脂质微区结构蛋白Caveolin-1和膜受体表皮生长因子受体表达水平的变化。结果干扰组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞Caveolin-1和表皮生长因子受体表达水平明显低于对照组(P=0.000,0.001)。对照组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞穿过聚碳酸酯微膜数目为(54.00±9.59)个/视野,干扰组为(23.94±5.56)个/视野,两组比较差异有统计学意义(P=0.000)。对照组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞迁移至空白端的细胞数目为(134.00±9.68)个/视野,干扰组为(88.00±6.22)个/视野,两组比较差异有统计学意义(P=0.000)。结论甲基-β-环糊精破坏脂质微区结构后可降低经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞的侵袭性和迁移能力,其机制可能与降低Caveolin-1和表皮生长因子受体等多种膜蛋白和受体表达水平有关。     

壳聚糖微球/纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸复合支架制备及其蛋白缓释效果：与单纯纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸支架、壳聚糖微球的比较

背景：骨组织工程骨构建中如何使生长因子持续高效发挥作用是影响成骨速度和质量的关键,现多以各种材料的微球或支架作为缓释载体,但缓释作用有待提高。 目的：实验拟制备壳聚糖微球,然后复合到纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸支架上,形成双重缓释作用,并测量对牛血清白蛋白的释放效果。 方法：以牛血清白蛋白为模型药物,采用乳化交联法制备壳聚糖微球。将微球与纳米羟基磷灰石、聚乳酸-羟基乙酸按一定比例混合,以冰粒子为致孔剂,采用冷冻干燥法制备壳聚糖微球/纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸复合支架。利用扫描电镜、激光粒度分析仪、压泵仪和力学性能测试仪检测复合支架的形态性能,考察药物在缓释支架上的体外释放规律。 结果与结论：所制备的壳聚糖微球形态良好,呈规则圆球形,粒径集中分布在20~40 μm,微球药物包封率为86.5%,载药量为0.8%,随牛血清白蛋白初始用量的增加,载药量可升高至2.6%,但包封率下降至74.1%。壳聚糖微球能均匀分布在聚乳酸-羟基乙酸支架上,形成壳聚糖微球/纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸复合支架,孔径为100~400 μm,孔隙率> 80%,压缩强度为1.1~2.3 MPa,10周降解率为26.5%。单纯纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸支架其牛血清白蛋白在36 h累积释放量达85%以上,壳聚糖微球其牛血清白蛋白10 d累积释放量为33.6%,复合支架其牛血清白蛋白40 d累积释放量为81.5%。结果证实包埋壳聚糖微球的纳米羟基磷灰石/聚乳酸-羟基乙酸支架其压缩强度和降解速率合适,对蛋白类药物具有良好的缓释作用,有望作为组织工程的支架材料和生长因子的缓释载体。 关键词：聚乳酸-羟基乙酸;支架;壳聚糖;缓释载体;骨修复材料,组织工程;生物材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.03.017     

树突状细胞制备脑胶质瘤疫苗的体外研究

目的　通过体外实验探讨应用树突状细胞制备的肿瘤疫苗抗脑胶质瘤的作用机制。方法　培养大鼠树突状细胞,冻融法制备胶质瘤抗原,以肿瘤抗原致敏树突状细胞而制备胶质瘤疫苗。将实验动物分为4组,分别将胶质瘤疫苗、树突状细胞、生理盐水注入正常大鼠体内,到达预定时间取出大鼠脾脏,MTT法检测大鼠淋巴细胞活性。结果　1次输入胶质瘤疫苗的正常大鼠的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性明显低于3次输入胶质瘤疫苗的正常大鼠;比较输入培养8d的树突状细胞和输入生理盐水的大鼠,其淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性无统计学差异。结论　应用树突状细胞制备胶质瘤疫苗可明显激活体内抗肿瘤免疫反应。     

Brazilian consensus on public policies on alcohol

This is the summary of a meeting where a group of experts, representing several health organizations and academic departments from different parts of Brazil, created a consensus about the main alcohol policies which should be implemented by different levels of the Brazilian government. The World Health Organization has been suggesting for 30 years the actions that should be implemented for the public good. Two important conclusions were reached: 1) The research establishes beyond doubt that public health measures of proven effectiveness are available to serve the public good by reducing the widespread costs and pain related to alcohol use; 2) To that end, it is appropriate to deploy responses that influence both the total amount of alcohol consumed by a population and the high-risk contexts and drinking behaviours that are so often associated with alcohol-related problems. To conceive of these intrinsically complementary approaches as contractory alternatives would be a mistake. The objectives of the consensus are: 1) To make the scientific evidences more available to the Brazilian policy makers; 2) To facilitate the evaluation of the available strategies according their effectivity, scientific support, cost and cultural adaptability; 3) To make the Brazilian health professionals familiar with the priorities of alcohol policies.     

应重视脑卒中的综合预防

脑卒中高居人口死亡原因的第 2位 ,每年新发患者 >15 0万例 ,现有幸存者 >6 0 0万例 ,其中 75 %丧失劳动力 ,4 0 %中度致残 ,是老年人致残和认知障碍的主要原因 ,年直接或间接经济损失高达数百亿元。高血压、心脏病、房颤、糖尿病、高脂血症、无症状颈动脉狭窄以及不良生活方式 ,包括吸烟、酗酒等均为脑卒中的危险因素 ,应针对危险因素予以控制 ,并长期有效坚持 ,大部分脑卒中是可以预防的。1.高血压 :我国高血压超过 1亿人口 ,是脑卒中最常见的可控危险因素。 14项随机对照研究结果表明 ,舒张压降低 5～ 6ｍｍＨｇ可以减少脑卒中发生率的 4…     

Clinical and experimental studies on the action of ethamsylate on haemostasis and on platelet functions

In a series of tests,the action of ethamsylate on haemostasis and on platelet functions was examined. After oral administration of the drug,a highly significant diminution of the bleeding time and of the blood loss from a standard wound was observed. This effect was demonstrated in healthy individuals and in patients suffering from platelet dysfunctions,and there was a distinct dose relation. There was also an increase of platelet adhesion,of PF 3 availability and of PF 4 release. The action of prostacyclin on the epinephrine induced platelet aggregation could be inhibited by ethamsylate. This offers a possible explanation for some of the effects on hemostasis. In addition,an action of ethamsylate on the platelet membrane was assumed since an in vitro increase of functions of the platelet membrane like PF 3 availability would not be explainable by a possible inhibition of prostacyclin.