应用PCR,病毒分离及核酸杂交技术诊断疱疹病毒性脑炎的研究

应用聚合酶链反应，核酸分子杂交和病毒分离技术检测了７例临床诊断为病毒性脑炎患者及１０例其他神经疾病对照组患者的脑脊液中单纯疱疹病毒ＤＮＡ。结果ＰＣＲ检出５例脑炎患者ＣＳＦ中ＨＳＶＤＮＡ阳性，其中ＨＳＶ１型２例，ＨＳＶ２型３例，而核酸杂交方法仅检出２例，其中ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２各１例，与病毒分离结果一致。     

巢式聚合酶链反应检测脑脊液中单纯疱疹病毒的DNA

应用巢式（ｎｅｓｔｅｄ）聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测患者脑脊液中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＤＮＡ，２５份经鞘内ＩｇＧ抗体确诊的“单纯疱疹病毒性脑炎（ＨＳＥ）”患者的ＣＳＦ标本中２３份ＰＣＲ阳性；１０５份ＩｇＧ阴性的“散发性脑炎”患者ＣＳＦ中１５份ＰＣＲ阳性，其中７份阳性标本为发病１周内所取，２份取于发病当日。提示ＰＣＲ更适于ＨＳＥ的早期诊断。     

突发性耳聋患者血清中人类巨细胞病毒和单纯疱疹病毒的检测

采用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对３０例突发性耳聋（突聋）患者血清中人类巨细胞病毒 （ＨＣＭＶ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）进行了检测。结果显示：７例（２３％）ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性，４例 ＨＣＭＶ抗体（ＩｇＡ或 ＩｇＭ）升高或 ＩｇＭ升高，２例 ＨＣＭＶ和 ＨＳＶ ＤＮＡ均阳性，相应抗体水平高于 正常，治疗后１月复查部分病例转阴。提示：用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对突聋患者病毒感染情况的检 测，对于探讨突聋的发病机制和治疗有重要意义。     

PCR—谱酶法检测小儿肝炎综合征人疱疹解毒DNA的研究

为探讨婴儿肝炎综合征（ＮＨＳ）与疱疹病毒（ＨＳＶ）感染的关系。在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对引物，能对ＨＳＶ－Ｉ、ＨＳＶ－Ⅱ、ＥＢＶ和ＣＭＶ四种疱疹病毒ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶ＢａｍＨⅠ或ＳｍａⅠ酶切分析扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述四种病毒的ＰＣＲ－酶谱法。灵敏度可测到１ｆｇＤＮＡ，且该引物仅对四种疱疹病毒扩增。用建立的ＰＣＲ－酶谱法检测３０例     

突发性耳聋患者血清中人类巨细胞病毒和单纯疱疹病毒的检测

采用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对３０例突发性耳聋（突聋）患者血清中人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）进行了检测，结果显示：７例（２３％）ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，４例ＨＣＭＶ抗体（ＩｇＡ或ＩｇＭ）升高或ＩｇＭ升高，２例ＨＣＭＶ和ＨＳＶＤＮＡ均阳性，相应抗体水平高于正常，治疗后１月复查部分病例转阴，提示：用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对突聋患者病毒感染情况的检测，对于探讨突聋的发病机制和治疗有重要意     

PCR-酶谱法检测小儿肝炎综合征人疱疹病毒DNA的研究

为探讨婴儿肝炎综合征（ＮＨＳ）与疱疹病毒（ＨＳＶ）感染的关系。在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对引物，能对ＨＳＶ—Ⅰ、ＨＳＶ—Ⅱ、ＥＢＶ和ＣＭＶ四种疱疹病毒ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶ＢａｍＨⅠ或ＳｍａⅠ酶切分析扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述四种病毒的ＰＣＲ—酶谱法。灵敏度可测到１ｆｇＤＮＡ，且该引物仅对四种疱疹病毒扩增。用建立的ＰＣＲ—酶谱法检测３０例ＮＨＳ的患儿尿中ＣＭＶ、ＨＳＶ—Ⅰ、ＨＳＶ—Ⅱ、ＥＢＶ阳性率分别为６６．６７％、３０％、３．３３％、６．６７％。１２例同日龄肺炎治愈新生儿ＣＭＶ阳性检出率为１６．７％，与ＮＨＳ的ＣＭＶ感染率差异显著，Ｐ＜０．０５。而ＨＳＶ—Ⅰ、ＨＳＶ—Ⅱ、ＥＢＶ的感染率在ＮＨＳ与正常儿无明显差异。提示：ＮＨＳ与ＣＭＶ感染有关，与ＨＳＶ—Ⅰ、ＨＳＶ—Ⅱ、ＥＢＶ感染关系不大     

用PCR检测人淋巴组织中弓形虫

将淋巴结病理组织提取ＤＮＡ后，用Ｔｇ－ＤＮＡＰＣＲ药盒体外扩增弓形虫ＤＮＡ。结果显示，１２０例淋巴结病理标本中，７例可检出２１０ｂｐ的扩增产物，其中３例ＨＤ（３／３２），２例ＮＨＬ（２／４１），２例ＣＬ（２／４７）。取ＰＣＲ扩增产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ杂交试验（ＰＣＲ－ＳＢＨ），发现除原有７例阳性外，ＣＬ患者中另１例阳性；总检出率为６．６７％（８／１２０）。ＨＤ，ＮＨＬ及ＣＬ的阳性率分别为９．３８％，４．８８％和６．３８％。     

七株急性散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

比较我国流行性和散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）的部分核苷酸和氨基酸序列及其与戊型肝炎流行的关系。方法应用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从急性散发性戊型肝炎病人血清中扩增ＨＥＶ开放读码框架２（ＯＲＦ２）ｃＤＮＡ，并用ＳｅｑｕｅｎａｓｅＶｅｒｓｉｏｎ２．０ＤＮＡ序列分析试剂盒，经双脱氧核苷酸ＤＮＡ链末端终止直接测序法测定ＲＴ－ｎＰＣＲ扩增产物的核苷酸序列。结果从深圳、长春、杭州、西安、北京５个城市４１份急性散发性戊型肝炎病人血清中获得２８株ＨＥＶＯＲＦ２ｃＤＮＡ，对其中７株进行了核苷酸序列分析，表明它们与ＨＥＶ墨西哥株（Ｍ）的同源性为７８．９％～８０．２％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）流行株（Ｅｐ）的同源性为９３．１％～９５．１％；与ＨＥＶ缅甸（Ｂ）散发株（Ｓｐ）的同源性为９２．３％～９４．２％；与ＨＥＶ中国新疆流行株ＣＨ１．１同源性为９６．５％～９８．９％；７株散发性ＨＥＶ间核苷酸序列的同源性为９５．７％～１００％。结论该７株散发性ＨＥＶ与ＨＥＶ（Ｂ）和ＨＥＶＣＨ１．１核苷酸序列的同源性较高，均属同一亚型。     

用PCR技术研究疱疹病毒与新生儿黄疸的相关性

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３９例新生儿黄疸患儿。结果１３例外周血淋巴细胞检出疱疹病毒ＤＮＡ，总检出率３３３％，其中巨细胞病毒（ＣＭＶ）１１例，Ⅱ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅡ）２例，检出率分别为２８２％（１１／３９）和５１％（２／３９），未检出Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅠ）和ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ。提示新生儿黄疸与疱疹病毒感染有关     

通用引物检测宫颈脱落细胞中病毒的临床应用

目的：探讨通用引物检测多种病毒的ＰＣＲ方法。方法：应用聚合酶链反应－酶谱法（ＰＣＲ－ＥＣ０和疱疹病毒通用引物,检测宫颈脱落细胞中单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ⅰ）、单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－Ⅱ）、爱泼期坦－巴尔病毒（ＥＢＶ０和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）。结果：健康人（２０例）和宫颈糜烂患者（３４例）。ＨＣＭＶ阳性检出率分别为１０．０％和４１．２％,两者差异显著;ＨＳＶ－１分别为５．０％和１４．７％;ＨＳ     

石蜡分隔的热启动PCR技术扩增血清HBV-DNA

将聚合酶链反应（ＰＣＲ）成份分两组。先加一组含ｄＮＴＰｓ、引物和ＭｇＣｌ２，并加１粒组织切片用石蜡凝固为盖层。再加另一组反应液含待扩增模板、ＴａｑＤＮＡ聚合酶和ＫＣｌ，以与第一组反应液分隔。ＰＣＲ循环时高温可使中隔蜡层融化，两组反应液相混，蜡油上浮作为防蒸发屏障。由此避免室温混合加样和预置导致引物聚体形成和错导非特异扩增，提高ＰＣＲ特异性和灵敏性。作者应用这一技术检测５３例单项抗ＨＢｃ阳性血清，检出ＨＢＶＤＮＡ１３例，检测６９例ＨＢｓＡｇ阳性和抗ＨＢｅ阳性血清，检出ＨＢＶＤＮＡ６１例。而同样样本用标准ＰＣＲ检测，ＨＢＶＤＮＡ阳性分别为１０例和５２例。两种方法对ＨＢｓＡｇ和抗ＨＢｃ双阳性血清的ＨＢＶＤＮＡ检出率差别有显著意义（Ｐ＜０．０５）。     

病毒与人类基因组同源性实探

探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用ＥＢ病毒（ＥＢＶ），肠道病毒（ＥＶｓ）、单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性引的，以６份健康成人外周血ＤＮＡ为模板，分别进行酶链式反应（ＰＣＲ）。初步结果表明，有５份ＤＮＡ样品可通过ＥＢＶ、ＨＣＶ特异性引物扩增，ＥＢＶ引物扩增后的片段大小在１５４－２３４ｂｐ之间；ＨＣＶ引物扩增的片段大小约２００ｂｐ和１２０ｂｐ。提示病毒某些基因可能存在     

巢式PCR检测先天性心脏病心脏石蜡标本中B19病毒的感染

目的：探讨微小病毒Ｂ１９与先天性心脏病（ＣＨＤ）的相关性及可能致畸机理。方法：采用病例对照研究，病例组为２９例ＣＨＤ尸解心脏组织，对照组为３０例同期非先天性畸形尸解心脏组织，应用巢式ＰＣＲ扩增Ｂ１９－ＤＮＡ，单纯疱疹病毒（ＨＳＶ），兔弓形虫（ＴＯＸ），巨细胞病毒（ＣＭＶ），结果：２９例ＣＨＤＢ１９－ＤＮＡ５例阳性，全瓿对照组为均阴性（Ｐ＝０．０２３７），ＨＳＶ，ＴＯＸ两组中均阴性，ＣＭＶ在两组中均     

用双重PCR快速诊断新生儿巨细胞病毒感染

用双重ＰＣＲ法检测新生患儿及随访新生儿期诊断为巨细胞包涵体病患儿的尿及血标本中巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＤＮＡ。两对引物序列取自ＨＣＭＶＩＥＡ基因区，第一对引物扩增片段为７２１ｂｐ，第二对引物扩增片段为１６７ｂｐ。新生患儿２３份尿标本，１７例检出阳性；１８份白细胞提取物，１２份阳性。随访患儿７例，４例在尿或血中检出ＣＭＶＤＮＡ。ＰＣＲ结果与病毒分离比较，两法的符合率为９５．６％，ＰＣＲ获得结果仅需１～２天。尿标本用于ＰＣＲ较血标本检出率高，预处理简便     

复发性口疮患者HSV—1的检测及其抗病毒治疗观察

目的：为了研究单纯疱疹病毒Ⅰ型与复发性口疮的关系：方法：采用ＰＣＲ技术检测复发性口疮患者（ＲＯＵ）损害区和健康对照者口腔粘膜脱落细胞的ＨＳＶ－１ＤＮＡ，然后对ＨＳＶ－１ＤＮＡ阳性和阴性患者用无环鸟苷作抗病毒治疗，并观察半年。结果：ＲＯＵ患者ＨＳＶ－１ＤＮＡ的检出率为２６．７％，对照组为６．７％，两者之间有高度显著性差异。ＨＳＶ－１ＤＮＡ阳性者与阴性者抗病毒治疗有效率分别是９３．７５％和１３．６３％     

器官移植术后受者人巨细胞病毒的PCR检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对３０例器官移植受者血，尿标本进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ检测。结果显示，１６例ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率５３．３％，提示ＰＣＲ是一种敏感特异，简便快速，能早期诊断ＨＣＭＶ感染的方法，适用于监视器官移植病人术后ＨＣＭＶ感染。     

器官移植术后受者人巨细胞病毒的PCR检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对３０例器官移植受者血、尿标本进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ检测。结果显示，１６例ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率５３．３％。提示ＰＣＲ是一种敏感特异、简便快速、能早期诊断ＨＣＭＶ感染的方法，适用于监视器官移植病人术后ＨＣＭＶ感染。     

乙型病毒性肝炎的基因诊断

对１２０例乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ用ＰＣＲ技术进行检测，结果表明，ＰＣＲ法的敏感性阳性检出率７５．８％，明显高于ＥＬＩＳＡ法（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＣＡｂ）的阳性率分别为６１％、３８％和６２％）；ＰＣＲ检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢＡｂ一血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率分别为２６％、５２％和２４％，ＰＣＲ检测三者均为阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率为１００％慢性迁延肝炎、慢性活动性肝炎     

病毒与人类基因组同源性初探

探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用ＥＢ病毒（ＥＢＶ），肠道病毒（ＥＶｓ）、单纯疱疹病毒－１型（ＨＳＶ－１），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性引物，以６份健康成人外周血ＤＮＡ为模板，分别进行聚合酶链式反应（ＰＣＲ）。初步结果表明：有５份ＤＮＡ样品可通过ＥＢＶ、ＨＣＶ特异性引物扩增。ＥＢＶ引物扩增后的片段大小在１５４～２３４ｂｐ之间；ＨＣＶ引物扩增后的片段大小约２００ｂｐ和１２０ｂｐ。提示病毒某些基因可能存在人类基因组中或两者具有很高的同源性。     

聚合酶链反应检测重型肝炎患者血清HBVDNA

采用ＰＣＲ法检测４８例重型肝炎患者血清中ＢＨＶＤＮＡ存在情况，并与斑点杂交检测进行比较，结果表明：ＰＣＲ检测３９例阳性，检出率为８１．３％（３９／４８）．ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）组ＰＣＲ检测均阳性（８／８），ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（－）组阳性率为８８．０％（２２／２５），抗体阳性组检出率为７２．７％（８／１１），检测灵敏度为１．０ｆｇ；斑点杂交检测１５例阳性，阳性率３０．２％（１５／４８），各组斑点杂交阳性率均低于ＰＣＲ法．提示：（１）大多数重型肝炎患者血清中存在低滴度的病毒颗粒，对重肝发病有一定作用；（２）大部分ＨＢｅＡｇ阴性，抗体阳性的重型肝炎患者血清仍有传染性，应考虑抗病毒治疗．