慢性应激及氟西汀治疗后大鼠海马细胞支架的改变

目的 探讨慢性不可预见性应激及氟西汀治疗后大鼠细胞支架微管系统的动态性变化及其可能机制.方法 将24只大鼠按随机数字表法分为对照组(空白对照+生理盐水)、慢性不可预见性温和应激(CUMS)组(CUMS+生理盐水)和氟西汀组(CUMS+氟西汀),每组8只.对大鼠进行连续21 d CUMS后,氟西汀组给予氟西汀(10 mg/kg)治疗21 d,对照组和CUMS组给予生理盐水.实验结束后进行行为学观察,并使用免疫印迹法(western blot)检测大鼠海马乙酰化微管蛋白(Acet-Tub),酪氨酸化微管蛋白(Tyr-Tub),微管结合蛋白2(MAP-2)及磷酸化微管结合蛋白2(phospho-MAP-2).结果 (1)CUMS组糖水偏好[(55.13±11.80)%],总行程[(2736.59±511.20)cm],运动平均速度[(5.69±1.08)cm/s]及直立次数[(2.50±2.00)次]均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);氟西汀组上述指标与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)CUMS组与对照组相比,Acet-Tub表达升高[(171.84±10.34)%],Tyr-Tub[(62.06±9.24)%]和phospho-MAP-2[(68.81±8.93)%]的表达降低,差异有统计学意义(P均＜0.01),MAP-2的表达与对照组比较无统计学意义(P＞0.05);经氟西汀治疗后,Acet-Tub的表达降低为[(96.18±8.92)%],Tyr-Tub和phospho-MAP-2的表达分别升高为[(95.06±8.00)%]、[(100.60±7.30)%],与对照组比较均无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性应激后微管动态性减低,神经可塑性受损,氟西汀可以逆转海马的这些损伤,上述过程可能与微管相关蛋白磷酸化水平的变化有关.     

电针及氟西汀对抑郁大鼠行为学及海马神经元凋亡的影响

目的 探究电针及氟西汀对慢性应激抑郁大鼠行为学及海马神经元凋亡的影响.方法 65只Sprague-Dawley雄性大鼠,按随机数字表随机分为空白组、空白电针组、模型组、电针组、氟西汀组,每组13只.慢性应激后进行行为学评价;采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测海马神经元凋亡率;采用免疫组织化学方法检测海马bcl-2蛋白表达.结果 模型组大鼠旷场试验水平穿越格数[(1.6±1.3)格]、竖立次数[(0.4 ±0.2)次]、体质量增加量[(34±18)g]均明显低于空白组[分别为(51.1 ±22.3)格、(13.2±4.6)次、(128 ±21)g],P均＜0.05;海马神经元细胞凋亡率[(67±10)%]高于空白组[(53±13)%],P＜0.05;海马组织bcl-2蛋白阳性细胞计数[(28±10)个/mm<'2>]低于空白组[(78±22)个/mm<'2>],P＜0.05.电针组[分别为(39.3 ±14.3)格,(9.6 ±4.1)次,(81±43)g]、氟西汀组[分别为(37.2±15.1)格,(9.3±4.6)次,(80 ±35)g]上述指标均明显高于模型组(P＜0.05);海马神经元细胞凋亡率[电针组(30±9)%,氟西汀组(51±13)%]均低于模型组(P＜0.05);海马组织bcl-2蛋白阳性细胞计数[电针组(56±18)个/mm<'2>,氟西汀组(62±24)个/mm<'2>]均高于模型组(P＜0.05),而电针组与氟西汀组间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 电针和氟西汀可改善抑郁大鼠行为学症状,这种改善与海马细胞凋亡机制有一定相关性.     

氟西汀对大鼠星形胶质细胞分泌的胶质源性神经营养因子的影响

目的 探讨氟西汀对大鼠星形胶质细胞分泌的胶质源性神经营养因子(GDNF)的影响.方法 以氟西汀干预体外培养的大鼠海马星形胶质细胞,通过四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度氟西汀对细胞活力的影响;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养液GDNF浓度及Real-time PCR法检测GDNFmRNA的表达.结果 (1)氟西汀浓度超过35 μmol/L浓度时,可降低细胞活性,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);(2)10 μmol/L氟西汀干预星形胶质细胞不同时间后,48 h组细胞培养液GDNF浓度[(68±13)fg/L]高于0 h组[(32±11)fg/L]、6 h组[(34±12)fg/L]、12 h组[(41±17)fg/L]、24 h组[(45±13)fg/L],差异均有统计学意义(P均<0.01);(3)不同浓度氟西汀作用星形胶质细胞48 h后,10 μmol/L浓度组的细胞培养液GDNF浓度[(64±17)fg/L]高于0 μmol/L[(39±15)fg/L]和1 μmoVL浓度组[(39±18)fg/L],差异均有统计学意义(P均<0.05);(4)氟西汀作用星形胶质细胞48 h后,撤离氟西汀24 h后星形胶质细胞仍明显分泌GDNF,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);(5)不同浓度氟西汀作用星形胶质细胞24 h后,10 μmol/L和20 μmol/L浓度组细胞GDNFmRNA表达量[分别为(0.008 1±0.001 1)和(0.006 3±0.000 3)]高于0 μmol/L、1 μmol/L及5 μmol/L浓度组[分别为(0.003 1±0.000 7)、(0.003 9±0.000 3)和(0.004 1±0.000 2)],差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 氟西汀可能通过促进星形胶质细胞GDNF的分泌来发挥其神经保护作用.     

雌二醇与氟西汀对大鼠体质量及在强迫游泳实验中行为的影响

目的观察雌二醇与氟西汀对去卵巢大鼠体质量及在强迫游泳实验（FST）中行为的影响。方法将42只雌性SD大鼠随机分为去卵巢组（OVX）与假手术组（Sham）,根据药物干预不同,OVX组分为油剂对照组（oil）、雌二醇组（E2）、氟西汀组（FLX）和雌二醇＋氟西汀组（E2＋FLX）,假手术组分为生理盐水组（NS）和氟西汀组（FLX）,每组7只。去卵巢手术与假手术后饲养3周,从第4周开始慢性给药14d,第15d进行15min FST并摄像,行为学分析。隔天称量、记录大鼠体质量。结果（1）在绝经模型建立期,OVX组体质量增长[（54．3±15．1）g]显著高于Sham组[（30．8±11．0）g]（t=5．16,P〈0．01）。（2）在药物干预期,OVX4-FLX组体质量减轻显著高于OVX4-FLX＋E2组（H=25．96,P〈0．001）。（3）E2、FLX、E24-FLX可显著增加大鼠在15minFST中游泳行为（F5-34=62．80,P〈0．001）,减少不动行为（F5.34=14．47,P〈0．001）。（4）OVX4-Oil组不动行为在15rainFST前中后三个5min内逐阶段显著增加（F2．18=30．90,P〈0．001）。结论在FST中,E2有类似FLX-样的抗抑郁样作用,E2可减弱去卵巢大鼠体质量波动的程度。     

度洛西汀和氟西汀对抑郁模型大鼠 S100B、ERK1/2－NF－κB 表达的影响

目的：比较度洛西汀和氟西汀对抑郁模型大鼠海马 S100B、ERK1/2－NF－κB 表达的影响.方法慢性轻度不可预知应激刺激法制备54只抑郁症模型大鼠,随机分为非干预组(B 组)、度洛西汀干预组(C 组)、氟西汀干预组(D 组),各18只.另外选取18只大鼠为对照组(A 组).各组灌胃[A组和 B 组(生理盐水),C 组(度洛西汀)、D 组(氟西汀)]28 d 后,应用糖水偏爱试验和旷场试验检测大鼠行为学改变.Western blot 检测各组海马 S100B、ERK1/2和 NF－κB 的表达.结果灌胃28 d 后 B 组糖水消耗率(43±15)％显著较 A、C、D 组低[(63±11)％,(67±6)％,(61±10)％](P ＜0．05). C 和 D组大鼠干预28 d 后旷场试验水平评分、垂直运动评分与潜伏期分别为(70．66±11．53)分和(67．54±10.08)分,(20．32±8．85)分和(21．34±7．46)分,(1．0±0．4)s 和(1．1±0．3)s,与 A 组(71．19±12．08)分,(20．42±8．76)分,(1．01±0．3)s 比较,差异均无统计学意义(P ＞0．05);C、D 组与 B 组比较,水平运动评分和垂直运动评分升高,潜伏期降低.A、C、D 组大鼠海马 S100B、ERK1/2、NF－κB 表达显著高于 B组(P ＜0．05),C 和 D 组差异无统计学意义.结论度洛西汀和氟西汀均能够改善抑郁模型大鼠的行为能力及上调海马 S100B、p－ERK1/2－NFκB 表达水平,但度洛西汀和氟西汀对相关因子表达的影响无差异.     

慢性刺激大鼠海马微管相关蛋白-2的表达及氟西汀联合丰富环境的作用北大核心CSCD

目的 探讨慢性不可预见性刺激（chronic unpredictable stress,CUS）大鼠海马微管相关蛋白-2（microtubule associated protein-2,MAP-2）表达水平的变化,氟西汀联合丰富环境对CUS大鼠的作用.方法 将30只成年雄性Sprague-Dawle（SD）大鼠采用随机数字表法分为CUS组、正常组、CUS＋氟西汀组、CUS＋丰富环境组、CUS＋氟西汀＋丰富环境组,每组6只.CUS组均孤养并接受6周CUS,正常组标准环境每笼3只群养6周,剩余3组接受6周CUS并于第3周末至第6周末分别氟西汀、丰富环境、氟西汀＋丰富环境干预,CUS前后及干预后以糖水消耗实验、体重测量、旷场实验对大鼠行为进行评估,以免疫组织化学法测定各组大鼠海马MAP-2表达水平.结果 （1）CUS前各组大鼠行为评估组间两两比较,糖水消耗、体重、水平运动距离、直立次数、粪便粒数差异均无统计学意义.（2）CUS后CUS组、CUS＋氟西汀组、CUS＋丰富环境组、CUS＋氟西汀＋丰富环境组较正常组糖水消耗少、体重增加少、水平运动距离小（均P＜0.05）.（3）干预后正常组、CUS＋氟西汀组、CUS＋丰富环境组、CUS＋氟西汀＋丰富环境组较CUS组糖水消耗多、体重增加多、水平运动距离大（均P＜0.05）;正常组[（84±3）g,（6 687±664） cm]较CUS＋氟西汀组[（75±4）g,（5 859±624） cm]、CUS＋丰富环境组[（77±8）g,（5 876±784） cm]体重增加多（P=0.005、0.029）、水平运动距离大（P=0.028、0.031）;CUS＋氟西汀＋丰富环境组[（6 657±430） cm]较CUS＋氟西汀组、CUS＋丰富环境组水平运动距离大（P=0.033、0.037）.（4）免疫组织化学显示,正常组（0.408±0.014、0.405±0.011、0.406±0.012）、CUS＋氟西汀组（0.403±0.011、0.403±0.011、0.403±0.012）、CUS＋丰富环境组（0.406±0.015、0.399±0.013、0.406±0.017）、CUS＋氟西汀＋丰富环境组（0.407±0.015、0.401±0.010、0.407±0.013）MAP-2在海马CA1、CA3和齿状回区表达水平较CUS组（0.379±0.020、0.390±0.014、0.394±0.013）增加（均P＜0.05）.结论 氟西汀、丰富环境、氟西汀联合丰富环境均可能逆转CUS大鼠抑郁样行为,氟西汀联合丰富环境效果可能优于单独使用氟西汀或丰富环境;CUS大鼠海马CA1、CA3、齿状回区MAP-2表达水平可能降低,且可能被上述3种方法逆转.     

电针与氟西汀治疗抑郁症疗效的对照研究

目的　对比电针与氟西汀治疗抑郁症的疗效。方法　将 95例抑郁症患者随机分为电针组 ( 31例 )、氟西汀组 ( 32例 )及安慰剂组 ( 32例 )。电针组采用智能电针仪治疗 ,用抗抑郁波型 ,以毫针针刺百会、印堂穴 ,强度 2～ 3V ,4 5min/次 ,1次 /d ,每周 5次 ,同时服安慰剂 ;氟西汀组予氟西汀胶囊 2 0mg/d ,并接受模拟电针 ;安慰剂组用安慰剂并接受模拟电针 ;疗程 6周。于治疗前及治疗中每 2周评定 1次汉密尔顿抑郁量表 (HAMD)、Asberg抗抑郁药副作用量表、抑郁自评量表 (SDS)、临床总体印象量表 (CGI)。结果　治疗第 6周末 ,电针组的HAMD总分 [( 10 19± 5 88)分 ]低于安慰剂组[( 13 88± 8 2 9)分 ;P <0 0 5 ],SDS评分 [( 5 3 0 2± 9 6 7)分 ]亦低于安慰剂组 [( 6 0 0 0± 12 89)分 ;P <0 0 5 ];安慰剂组CGI中的病情严重程度 [( 3 16± 1 32 )分 ]重于电针组 [( 2 4 2± 1 0 3)分 ]和氟西汀组[( 2 5 6± 1 13)分 ;P <0 0 5 ],总体进步分 [( 2 84± 1 2 7)分 ]低于电针组 [( 2 10± 0 94 )分 ;P <0 0 1]和氟西汀组 [( 2 2 5± 1 0 8)分 ;P <0 0 5 ];电针组与氟西汀组各项评分的差异均无显著性。三组Asberg量表评分差异无显著性。结论　电针与氟西汀治疗重性抑郁症的疗效基本相同     

氟西汀和阿米替林对大鼠强迫游泳试验的行为表现及脑内信号分子ERK1/2磷酸化水平的影响

目的 观察氟西汀和阿米替林对大鼠强迫游泳试验中各种行为表现及脑内信号分子细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)磷酸化水平的影响. 方法 30只雄性SD大鼠先预游15 min.间隔23h后,按随机数字表法分成3组:氟西汀组、阿米替林组和对照组,每组各10只.氟两汀、阿米替林按20 mg/kg腹腔注射给药,对照组腹腔注射等体积的蒸馏水,1h后进行5 min的游泳测试,录像并记录出现不动行为的潜伏期和不动、游泳及攀抓行为的时间.游泳完毕后将大鼠灌流处死.对脑组织进行磷酸化ERK1/2(pERK1/2)免疫组织化学染色.观察pERK1/2阳性神经元在部分脑区的分布. 结果 (1)阿米替林组不动行为潜伏期明显长于对照组,攀抓行为时间明显长于对照组和氟西汀组,不动行为时间明显少于对照组;氟西汀组游泳行为时间明显长于对照组和阿米替林组;以上差异均有统计学意义(P<0.05).(2)氟西汀组前额皮质、扣带回及边缘前皮质脑区中pERK1/2阳性神经元数目较对照组和阿米替林组明显减少:阿米替林组腹外侧隔核中pERK1/2阳性神经元数目较对照组明显减少;两给药组下丘脑室旁核中pERK1/2阳性神经元数目较对照组均明显减少,其中阿米替林组减少幅度更大:以上差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 阿米替林和氟西汀能对大鼠强迫游泳试验的行为表现产生不同影响,二者可能都有降低负性心理应激反应的作用.脑内ERK1/2信号通路可能参与其中.     

盐酸氟西汀联合利培酮治疗难治性抑郁症的效果及对患者睡眠质量的影响

目的探讨盐酸氟西汀联合利培酮治疗难治性抑郁症临床效果及对患者睡眠质量的影响,为难治性抑郁症的治疗提供参考。方法选取2015年1月-2016年10月就诊于新疆维吾尔自治区人民医院符合《国际疾病分类(第10版)》(ICD-10)诊断标准的92例难治性抑郁症患者,采用随机数字表法分为盐酸氟西汀组(对照组)和盐酸氟西汀联合利培酮组(观察组)各46例,疗程8周。于治疗前和治疗8周后,采用汉密尔顿抑郁量表17项版(HAMD-17)评定疗效,采用匹兹堡睡眠指数量表(PSQI)评定睡眠质量,采用自制不良反应记录表记录药物治疗过程中不良反应发生情况。结果治疗8周后,观察组总有效率高于对照组(93.5%vs.78.3%,χ~2=4.39,P0.05),观察组HAMD-17评分低于对照组[(13.2±2.8)分vs.(16.3±3.4)分,t=4.77,P0.01],PSQI评分较对照组低[(10.2±1.2)分vs.(12.1±1.4)分,t=6.99,P0.01]。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(6.5%vs.13.0%,χ~2=0.49,P=0.48)。结论单用盐酸氟西汀与盐酸氟西汀联合利培酮均可改善难治性抑郁症患者的临床症状及睡眠质量,但联合用药较单用盐酸氟西汀效果更好,二者安全性相当。     

西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1和CA3区神经细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2及Bcl相关蛋白表达与凋亡的影响

目的 探讨西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1、CA3神经细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl相关蛋白(Bax)表达和凋亡的影响.方法 40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、应激组(生理盐水灌胃)、处理1～3组[分别以不同剂量(1 mg·kg-1·d-1、4 nag·kg-1·d-1、8 mg·kg-1·d-1)氢溴酸西酞普兰灌胃],每组8只.采用强迫游泳制造慢性应激模型,用大鼠悬尾实验、力竭实验进行行为学观察,免疫组织化学检测Bel-2、Bax表达水平.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡.尼康图像分析软件测量分析Bcl-2、Bax阳性表达、凋亡阳性细胞数量及积分吸光度值.结果 应激组静止不动时间[(279±53)s]长于对照组[(182±35)s]及处理1～3组[(200±71)s,(159±59)s,(165±54)s];挣扎次数[(20±3)次]少于对照组[(24±3)次]及处理1～3组[(37±16)次,(32±10)次,(24±4)次];力竭时间[(38.3±5.1)min]长于对照组[(22.9±1.8)min]、短于处理1～3组[(54.4±2.9)min,(69.3±17.6)min,(46.4±4.0)min];差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).与对照组比较,应激组CA1、CA3神经细胞Bcl-2表达变弱、Bax表达增强、凋亡细胞增多,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).与应激组比较,处理1～3组Bcl-2表达增强、Bax表达变弱、凋亡细胞减少,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).处理组1～3组的部分Bcl-2/Bax表达、凋亡阳性细胞数量与对照组的差异有统计学意义(P<0.05),但IA值的差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 慢性应激可影响大鼠海马CAI、CA3神经细胞Bcl-2、Bax表达水平,促进细胞凋亡;西酞普兰可影响慢性应激大鼠海马CAI、CA3神经细胞Bcl-2、Bax表达水平,拈抗细胞凋亡.     

吗啡戒断后焦虑症状大鼠伏核和杏仁核突触结构可塑性

目的 探讨吗啡依赖戒断焦虑行为与大鼠伏核、杏仁核突触形态结构可塑性变化之间的相关性.方法 采用剂量递增法建立大鼠吗啡依赖模型,应用高架十字迷宫检测焦虑行为,应用透射电镜技术结合图像分析系统比较对照组、模型组和治疗组(每组均6只)大鼠伏核、杏仁核突触体视学、界面结构参数的数据.结果 (1)行为学:模型组开放臂的次数和时间均少于对照组和治疗组(P＜0.01或P＜0.05).(2)突触体视学:伏核模型组数密度(Nv)[(1.012±0.036)个/μm3]较对照组[(0.701±0.138)个/μm3]和治疗组[(0.751±0.245)个/μm3]增加(P＜0.01),面密度(Sv)和突触连接带平均面积(S)3组间比较差异无统计学意义;杏仁核模型组Nv[(0.427±0.178)个/μm3]较对照组[(0.247±0.117)个/μm3]和治疗组[(0.246±0.116)个/μm3]增加(P＜0.01或P＜0.05),模型组Sv[(0.047±0.018)μm2/μm3]较对照组[(0.030±0.012)μm2/μm3]和治疗组[(0.030±0.015)μm2/μm3]增加(P＜0.01),模型组S[(0.124±0.066)μm2]较对照组[(0.157±0.119)μm2]和治疗组[(0.159±0.114)μm2]减小(P＜0.05).(3)突触界面结构:伏核和杏仁核各自突触的突触后致密物厚度、突触活性区长度、突触间隙宽度和突触界面曲率在模型组、对照组和治疗组间比较差异均无统计学意义.结论 吗啡依赖戒断所产生的焦虑与伏核和杏仁核突触形态结构可塑性的改变有一定相关性.

Abstract：

Objective The possible correlations between morphological contracture and plastic variability of synaptic structure in nucleus accumbens and amygdala neurons were surveyed in anxious symptom rats suffered from morphine withdrawal. Methods The escalating doses of morphine and the elevated plus-maze were applied to validate anxiety-like behavior in rats. The electron microscope was applied to detect the parameters involving the synaptic stereology and structural plasticity of synaptic interface structure of the nucleus accumbens and amygdala neurons in the control group, the morphine-withdrawal group and the cured group ( n = 6 ), associated with the stereological ways. Results ( 1 ) Compared with the control group and the cured group, reductions of frequency and time of open-arm were observed in the morphine-withdrawal group ( P ＜ 0. 01 or P ＜ 0. 05 ). ( 2 ) Higher numerical density ( Nv ) [( 1. 012 ±0. 036 )/μm3] of synapses of nucleus accumbens was detected in the anxious rats ( P ＜ 0. 01 ) than in the controls [( 0. 701 ±0. 138 )/μm3] and the cured rats [( 0. 751 ±0. 254 )/μm3] . No significant difference between the surface density ( Sv ) and the mean profile area ( S ) of synapse of the nucleus accumbens was discovered. Compared with the control group [( 0. 247 ± 0. 117 )/μm3] and the cured one [( 0. 246 ±0. 116 )/μm3] , higher values of Nv [( 0. 427 ±0. 178 )/μm3] in amygdala were detected in anxious rats ( P＜0.01 or P＜0.05 ). Similarly, higher score of Sv [( 0.047 ±0.018 )μm2/μm3] in amygdala was observed in the anxious rats ( P ＜ 0. 01 ) than those of the control group [( 0. 030 ±0. 012 )μm2/μm3] and cured group [( 0. 030 ±0. 015 )μm2/μm3] . However, anxious rats [( 0. 124 ±0. 066 )μm2] appear to be lower S of synapse in amygdale ( P ＜ 0. 05 ) than those of the control group [( 0. 157 ±0. 119 )μm2] and the cured group [( 0. 159 ±0. 114 )μm2] . ( 3 )No significant difference among postsynaptic density, length of synaptic thickening, widths in synaptic interface structure on junctions and curvature of synaptic cleft region was detected in the nucleus accumbens and amygdala neurons. Conclusion In the present study, the results suggest that anxious rats suffered from morphine withdrawal could possibly be related to the plastic variability of synaptic morphological structure in nucleus accumbens and amygdale.     

孕期酒精暴露对子代大鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基表达的影响

目的 研究孕期酒精暴露对子代大鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的影响.方法 按照随机数字表法,将雌性SD大鼠随机分为正常对照组、饮酒对照组和孕期酒精暴露组,每组各8只;饮酒法建立大鼠孕期酒精暴露模型,子代成年后,采用Y-型迷宫测试子鼠学习记忆成绩;采用聚合酶链反应分析子鼠海马组织NR2B mRNA的表达;采用免疫荧光法检测子鼠海马区NR2B蛋白表达.结果 (1)各组子鼠成年后学习记忆成绩的差异有统计学意义(F=4.566,P＜0.05),孕期酒精暴露组子鼠学习记忆成绩[(43.00±15.33)次]比正常对照组[ (25.13±12.35)次]和饮酒对照组[(26.12±11.95)次]明显下降(P均＜0.05);(2)各组子鼠成年后海马组织中NR2B mRNA表达差异有统计学意义(F=29.795,P＜0.01),孕期酒精暴露组子鼠海马区NR2B mRNA表达(0.97±0.14)较正常对照组(0.52±0.10)和饮酒对照组(0.62±0.12)明显上升(P均＜0.01);孕期酒精暴露组子鼠海马区NR2B蛋白表达明显增加.结论 孕期酒精暴露对子代大鼠的神经损伤可能与NMDA受体亚基NR2B蛋白表达的上调有关.     

褪黑素对母婴分离新生鼠行为发育及海马糖皮质激素受体的调节

目的 探讨外源性褪黑素(MT)对母婴分离(MS)新生大鼠行为发育及海马糖皮质激素受体(GR)表达的调节作用.方法 按随机数字表法将新生同窝雄性SD大鼠随机分为母婴分离(MS)组、母婴分离+褪黑素干预(MT)组和对照组,每组12只.MT组和MS组于出生后第1～14天进行母婴分离实验;MT组于出生后第7～20天腹腔注射MT 10 mg/(kg·d),注射容积10 ml/kg,MS组和对照组分别腹腔注射相同容积的生理盐水.于出生后第28天,采用水迷宫试验测试大鼠学习记忆能力;于出生后第30天,取3组大鼠海马组织,采用二步法免疫组织化学染色检测GR阳性细胞表达,采用逆转录聚合酶链式反应法检测GR mRNA表达.结果 (1)MS组大鼠水迷宫测试学会正确上台所需的训练次数[(13.3±3.7)次],较对照组[(8.9±2.1)次]明显增加(P＜0.01),MT组大鼠学会正确上台所需的训练次数[(9.2±2.6)次],较MT组明显减少(P＜0.01),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);(2)MS组海马GR蛋白(78.56±4.05)及mRNA表达(0.65±0.28)较对照组[(136.04±5.16)、(0.95±0.34)]均明显下降,差异有统计学意义,MT组大鼠海马GR蛋白( 129.11±5.03)及mRNA (0.94±0.32)表达明显升高(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 外源性MT可能通过上调海马GR水平减轻早期母婴分离对远期行为发育的损伤.     

母爱剥夺对成年大鼠行为及多巴胺受体2基因表达的影响

目的 研究母爱剥夺对大鼠脑伏隔核多巴胺受体2(DRD2)基因表达的影响,探索DNA甲基化是否参与调控DRD2基因的表达.方法 20只新牛大鼠被随机分为母爱剥夺组(8只)和对照组(12只),母爱剥夺组大鼠于哺乳期每天接受6 h母爱剥夺;12周龄时,采用旷场试验评估大鼠的焦虑水平和探索能力,并采用逆转录聚合酶链反应检测伏隔核DRD2受体mRNA表达水平,用亚硫酸测序法检测DRD2基因启动子区DNA甲基化水平.结果 (1)母爱剥夺组爬行总格数[(24 ±8)个]和直立次数[(10.1±2.0)次]少于对照组[分别为(44±8)个,(15.8±1.8)次;t=-5.12和-2.11,P<0.01～0.05].(2)母爱剥夺组大鼠脑内伏隔核DRD2 mRNA表达(0.224±0.064)低于对照组(0.587 ±0.099;t=-7.50,P<0.05);两组DRD2基因启动子区的DNA甲基化水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 母爱剥夺大鼠成年以后在新奇环境中的焦虑水平增加,探索能力下降;母爱剥夺影响大鼠多巴胺系统DRD2基因表达,而DNA甲基化不参与调控基因表达.     

Notch1信号系统与抑郁模型大鼠海马神经重塑障碍

目的 探讨Notch1信号系统在抑郁海马神经再生障碍中的作用.方法 选择行为学评分相近的68只Sprague-Dawley大鼠,分为对照组、对照+氟西汀组、慢性不可预知温和应激(CUMS)组,CUMS+氟西汀组,每组17只.应用CUMS建立抑郁模型后进行行为学评估;采用免疫组织化学方法检测大鼠海马神经干细胞的增殖和存活;采用实时定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法测定Notchl信号通路各个因子(NICD、Hes1、Hes5、Jag1)的基因及蛋白表达水平的改变.结果 (1)干预前,各组体质量、糖水偏好、旷场试验、强迫游泳评分的差异均无统计学意义(P>0.05);干预后,与对照组比较,CUMS组糖水偏好、水平得分和垂直得分降低,漂浮不动时间增加,差异均有统计学意义(P<0.001);与CUMS组比较,CUMS+氟西汀组糖水偏好、水平得分和垂直得分增加,漂浮不动时间降低,差异均有统计学意义(P<0.01);(2)神经干细胞的增殖和存活:与CUMS组(1900.33±104.10)比较,CUMS+氟西汀组(3047.61±158.29)神经干细胞的增殖数显著上升,差异有统计学意义(P<0.01);与CUMS组(1845.33±126.88)比较,CUMS+氟西汀组(2704.21±154.31)神经干细胞的存活数显著上升,差异有统计学意义(P<0.01);(3)海马Notch1信号通路基因和蛋白的表达:CUMS+氟西汀组小鼠抗大鼠Notch1(NICD)mRNA、Hes1 mRNA、Hes5 mRNA、Jag1 mRNA基因表达与CUMS组比较显著上升,差异均有统计学意义(P<0.01);CUMS+氟西汀组NICD、Hes5、Jag1蛋白水平与CUMS组比较显著上升,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Notch1信号系统可能参与慢性应激模型大鼠海马神经再生障碍;氟西汀可能通过上调Notch1信号系统改善海马神经再生,从而缓解大鼠抑郁症状.

Abstract：

Objective To investigate whether the effect of fluoxetine on hippocampal neurogenesis involves Notch1 signaling after chronic stress. Methods Sixty-eight male Sprague-Dawley rats were divided into control group, control + fluoxetine group, depression model group and depression model + fluoxetine group. Chronic unpredictable mild stress (CUMS) was used to make up depression animal model. The function of Notch1 signaling was measured by real-time PCR and western blotting. Simultaneously,hippocampal neurogenesis was monitored by assessing cell proliferation and survival. Results (1) Before starting CUMS protocol, the animals exhibited equivalent weight, sucrose preference, number of squares crossed, number of rearing, and immobility time in behavioral test. Twenty-eight days after CUMS protocol,these parameters were significantly difference in rats exposed to CUMS compared with the controls (sucrose preference, number of squares crossed, number of grooming and rearing, and immobility time, P<0. 01).Administration of fluoxetine was shown to dramatically improve the depression behavior (P<0. 01) .(2) The cell proliferation [(3047. 61 ± 158. 29) vs. (1900. 33 ± 104. 10)] and survive [(2704. 21 ±154. 31) vs. (1845.33 ± 126.88)] were increased after fluoxetine administration in rats with depression (P<0. 01). (3) Fluoxetine increased mRNA expressions of Notch1 signaling components [NICD mRNA (0. 23 ±0. 01) vs. (0. 10 ±0.01), Hes1 mRNA (0. 56 ±0.04) vs. (0. 28 ±0.02), Hes5 mRNA (0. 24 ±0.02) vs. (0.10 ±0.02), Jag1 mRNA (0.82 ±0.06) vs. (0.56 ±0.03)] in the rat hippocampus compared with the CUMS group (P<0. 01 or P<0. 001). Fluoxetine enhanced protein levels of Notch1 signaling components [NICD(1.99 ±0.07) vs. (0.53 ±0.10), Hes5(0. 64 ±0. 04) vs. (0.37 ±0.09),Jag1 (2. 34 ± 0. 13) vs. (0. 68 ± 0. 17)] in the rat hippocampus compared with the CUMS group (P <0.01). Conclusion The up-regulation of the Notch1 pathway with chronic fluoxetine administration might partly contribute to increased neurogenesis in the rat hippocampus with depression.     

2ME2对全脑缺血大鼠模型HIF-1α及凋亡相关基因的作用

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对全脑缺血大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及凋亡相关基因的作用. 方法 将成年雄性SD大鼠168只按随机数字表法分为伞脑缺血组(n=84)和全脑缺血2ME2干预组(n=841),然后按再灌注时间不同又分为6h、12h、24h、48h、72h、5d和7d7个亚组.采用改良的Pu刘lsineli 4-VO法制作全脑缺血大鼠模型.应用Nissl染色进行海马神经元计数,免疫组化及RT-PCR技术进行HIF-1α、caspase-3蛋白及RTP801 mRNA表达检测. 结果 全脑缺血2ME2干预组48h至7d亚组神经元计数分别为37.09±3.52、26.93±3.10、22.22±3.091、6.98±3.07.与全脑缺血组相应时间点亚组相比明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).全脑缺血2ME2干预组48h至7d亚组HIF-1α、caspase-3蛋白表达阳性细胞计数分别为11.47±1.98、20.27±2.07、3.12±0.89、1.07±0.83和12.39±1.67、20.65±2.01、15.6l±1-26、6.57±1.12,与全脑缺血组相应时间点亚组相比明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).全脑缺血2ME2干预组12h至5d亚组RTP801mRNA表达吸光度比值分别为0.750±0.078、1.008±0.090、0.717±0.072、0.431±0.047、0.231±0.028,与全脑缺血组相应时间点亚组相比明显减低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 在全脑缺血急性期,2ME2抑制HIF-1α及凋亡相关基因RTP801、caspase-3的表达,具有一定的神经保护作用.