人胰岛素样生长因子ⅡP3启动子调控融合基因质粒构建的研究

目的构建人胰岛素样生长因子Ⅱ基因(IGF-Ⅱ)P3启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因穿梭质粒,观察其在肝癌细胞株HepG2及宫颈癌细胞株HeLa细胞中的表达及其作用。方法应用基因重组技术,构建IGF-ⅡP3启动子驱动EGFP与HSV-tk融合表达穿梭质粒载体,脂质体转染技术将其转入HepG2及HeLa中,48h后荧光显微镜下观察荧光表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSV-tk和EGFP的mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝实验检测转染融合蛋白载体后给予不同浓度的更昔洛韦对HepG2及HeLa细胞毒作用。结果酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功;转染此穿梭质粒的细胞中仅有HepG2细胞检测到绿色荧光;RT-PCR检测到HSV-tk和EGFP的mRNA仅在HepG2细胞中表达;更昔洛韦(GCV)对转染了携此质粒载体的HepG2细胞有选择性细胞毒作用,1、10、和100μg/ml3个浓度GCV作用72h后(实验均重复3次),对转染细胞的抑制率分别为19.8%±1.3%、36.2%±2.0%和48.7%±1.9%,与细胞病毒转染HepG2组(24.1%±1.9%、45.1%±1.7%、69.4%±3.6%)和此质粒转染HeLa细胞组(25.1%±1.6%、49.3%±1.1%、72.2%±2.9%)相比,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论成功构建IGF-ⅡP3启动子驱动携带HSV-HSV-tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体,转染后对人肝癌细胞系HepG2有选择性杀伤作用,为进一步靶向性肝癌腺病毒基因治疗奠定基础。     

肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4甲基化分析及意义

目的探讨人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因启动子P4的甲基化状态与肝细胞癌的关系。方法提取手术切除的原发性肝癌及相应癌旁肝组织各12例、慢性乙型肝炎肝穿刺活检组织10例、正常肝组织7例以及三株肝癌细胞系(BEL7402,SMMC7721,HepG2)的基因组DNA,分析肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4序列,检测各组织、细胞的IGF-Ⅱ启动子P4的甲基化状态。结果肝癌组织IGF-Ⅱ启动子P4序列与MEDLINE提供的正常序列(NT-009308)一致;肝癌、癌旁、慢性乙型肝炎以及正常肝组织IGF-Ⅱ基因启动子P4甲基化率的差别有统计学意义(χ2=26.207,P=0.000)。结论本组原发性肝癌组织IGF-Ⅱ基因启动子P4无序列缺失、突变;IGF-Ⅱ基因胚胎型启动子P4的去甲基化与肝癌发生相关。     

人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P4启动子甲基化变化及其意义

人胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）是肝细胞产生的一种多功能调节因子，其基因含4个不同的启动子（P1～P4）。在胎肝和新生儿肝，IGFⅡmRNA表达量最高，其中P3活性最大，其次分别为P4及P2，P1失活；在成人肝脏，IGF-ⅡmRNA水平显著下调，约为新生儿峰值的1／10，其中P1活性最大，P2～P4活性明显降低或失活。     

人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P3,P4启动子表达及其与p53基因突变的关系

目的 探讨人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P3,P4启动子表达及其与p53基因突变的关系.方法 应用半定量RT-PCR、PCR、直接测序分别检测7例正常成人肝组织、23例乙型肝炎病毒阳性肝癌组织IGF-Ⅱ基因P3,P4启动子特异的转录子表达及p53基因突变状况.结果 ①绝大多数肝癌组织P3和P4 mRNA表达量显著上调,平均值均明显高于正常成人肝组织(P＜0.01);②肝癌组织p53基因的突变率为30.4%(7/23).③23例肝癌组织中,具有p53基因突变的标本P3,P4 mRNA表达水平分别明显高于无p53基因突变的肝癌组织(P＜0.05).结论 ①IGF-Ⅱ基因P3和P4再激活是大多数乙型肝炎病毒阳性肝癌的重要特征;②肝癌组织P3,P4 mRNA显著上调与p53基因突变密切相关,后者可能是P3,P4再激活的转录调控机制之一.     

肝癌组织IGF-Ⅱ启动子甲基化状态及病理学特征分析

目的:分析人肝细胞癌(HCC)组织中胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因启动子甲基化状态及其临床病理学特征。方法:以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)分析人HCC癌灶、癌旁及正常肝脏组织IGF-Ⅱ基因P3甲基化状态及其病理学特征。结果:人癌灶、癌旁以及正常肝组织P3甲基化率分别为0%、47.5%和100%,各组之间的甲基化状态差异均有统计学意义。癌旁组织P3甲基化率在低分化组显著低于高中分化组(P=0.000);HBsAg阳性组显著低于HBsAg阴性组(P=0.040),但与性别、年龄、肿瘤大小及AFP之间差异未见显著统计学意义。结论:IGF-Ⅱ基因启动子甲基化程度降低在HCC形成过程中起重要作用。     

胰岛素样生长因子Ⅱ与肝细胞癌

人胰岛素样生长因子Ⅱ（insulin-like growth factor Ⅱ,IGF-Ⅱ）是20世纪70年代末被发现并成功分离的一种多肽,一级结构显示它与人胰岛素原（proinsulin）有高度同源性,它与IGF-Ⅰ,胰岛素样生长因子Ⅰ受体（IGF-ⅠR）,胰岛素样生长因子Ⅱ受体（IGF-ⅡR）及至少6种IGF结合蛋白（IGFBPs）一起,形成完整的IGFs轴。近年的研究发现,IGF-Ⅱ与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发生密切相关。     

胰岛素样生长因子Ⅱ在肝癌病因方面的研究进展

1　胰岛素样生长因子Ⅱ (IGF Ⅱ )的生物学特性IGF Ⅱ是单链多肽生长因子 ,与胰岛素前体结构极为相似 ,也含有 3个二硫键 ,有 67个氨基酸组成 ,相对分子量 70 5× 10 3 。人类IGF Ⅱ基因位于染色体HP15区 ,长 30kb ,含有 9个外显子 ,4个启动子 ,可转录成 3～ 4种IGF ⅡmRNA。其结构可分为两类 :在胚胎发育期出现的为胚胎型IGF ⅡmR NA ,是在启动子P2 、P3 、P4 作用下形成的 (以后二者为主 ) ,这种IGF ⅡmRNA在出生后消失 ,代之以由P1启动子作用形成的成年型IGF ⅡmRNA。上述各种IGF ⅡmRNA虽长短不同 ,但差别只在非翻译…     

胰岛素样生长因子Ⅱ基因与肝癌发病的关系

胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒⅡ,ＩＧＦⅡ）是一种由６７个氨基酸残基组成的多肽,在结构和功能上与胰岛素及ＩＧＦⅠ相似,可促进细胞的增殖和生长,在人体的分化和发育过程中起重要作用。ＩＧＦⅡ基因的异常表达与多种肿...     

肝癌患者血清胰岛素样生长因子Ⅱ水平及临床意义

胰岛素样生长因子Ⅱ (Insulin -likegrowthfactorIGF -Ⅱ )是肝细胞产生的自分泌和 /或旁分泌生长因子 ,在体内、体外能促进细胞生长、肥大、分裂及增殖。近年来生长因子在肝癌发生、发展中的作用越来越受到重视 ,肝癌中存在IGF -Ⅱ的异常表达 ,肝癌患者血液和组织中的IGF -Ⅱ水平亦相应发生变化。有关血清IGF -Ⅱ水平与肝癌的关系以及血清IGF -Ⅱ水平对甲胎蛋白 (AFP)阴性肝癌的诊断价值尚乏报道。本实验通过观察原发性肝癌患者血清IGF -Ⅱ含量及其与AFP的关系 ,初步探讨IGF -Ⅱ在肝癌发生和发展过程中的作用。1　资料与方法1.…     

IGF-Ⅱ基因启动子低甲基化状态与肝细胞癌变关系的研究

目的:动态观察肝细胞癌变过程中胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)表达及其DNA启动子2(P2)甲基化状态.方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲雄性SD大鼠诱发肝细胞癌,分别观察肝细胞形态学(HE染色)改变、肝及血IGF-Ⅱ动态变化;应用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)扩增分析启动子的甲基化状态.结果:肝细胞在诱癌后从颗粒样变性、不典型增生到高分化肝细胞癌形成过程中,肝和血中IGF-Ⅱ表达呈梯度增加,差异有统计学意义(F=132,P<001).正常鼠、肝细胞变性鼠、癌前病变鼠和肝细胞癌变鼠肝IGF-Ⅱ基因P2低甲基化率分别为0%、27.8%、88.9%和100%,肝细胞癌变过程中肝IGF-Ⅱ基因P2逐步去甲基化,各组间差异有学意义(χ2=28.414,P<0.001),且与肝或外周血IGF-Ⅱ的异常表达呈明显正相关.结论:IGF-Ⅱ基因启动子逐步低甲基化改变与肝细胞的恶性转化关系密切.     

胰岛素样生长因子Ⅱ及其受体在肝组织中的表达意义

目的：研究胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF－Ⅱ）及其受体（IGFR）在不同肝组织中的表达及与肝癌病理学分级及乙肝病毒感染的关系。方法：采用免疫组织化学方法，检测10正常肝标本，28例肝血管瘤标本、13例肝硬化标本和42例原发性肝癌中的IGF－Ⅱ及IGFR的表达水平，分析其阳性率及与乙型肝炎病毒（HBV）感染和Edmondson分级的关系。结论：正常肝、肝硬化、肝血管瘤和肝癌中IGF－Ⅱ阳性率分别为10％，76．9％，46．4％，76．2％，IGFR阳性率分别为20％，92．3％，64．2％，61．9％，与正常肝组织相比，各阳性率有显著性差异（P＜0．05），对于肝癌而言，IGF－Ⅱ及IGFR的表达在HBV阳性与阴性之间有显著差异（P＜0．05）；在Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ与Ⅲ-Ⅳ之间有显著差异（P＜0．05）。结论：IGF－Ⅱ和IGFR的表达可能参与了肝硬化及肝脏肿瘤的发生。在肝癌中，其表达与HBV感染及肝癌Edmondson分级亦有一定关系。     

肝癌及癌旁肝组织胰岛素样生长因子Ⅰ型受体表达的检测

目的检测胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（IGF-ⅠR）在肝细胞癌（HCC）、癌旁及正常肝组织中的表达,探讨HCC的发生机制。方法免疫组织化学染色SP法枪测31例HCC IGF-ⅠR表达。结果正常肝组织胞膜、胞质均显淡黄色,分布均匀。在HCC中,IGF-ⅠR呈异常高表达90．3％（28／31）,以膜及胞质混合型表达为主,其表达与肿瘤的大小、病理分级无显著性差异（P〉0．05）,在AFP、HBsAg、HCV抗原阴、阳性组问无显著性差异（P〉0．05）。肝内多发结节或单发结节合并门脉癌栓的HCC,IGF-ⅠR高表达与单结节HCC组间有显著性差异（P〈0．05）。HCC癌与癌旁组织均显著高于正常肝组织。结论IGF-ⅠR高表达可能与HCC的侵袭性行为有关。     

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达及生物活性分析

采用RT PCR方法 ,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子 1 (IGF 1 )cDNA ,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3 .1 ( +)真核表达载体上 ,成功构建了 pcDNA/I重组表达载体。应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)。MTT法检测结果表明 :重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生。将重组质粒通过脂质体介导 ,体外转染至人肾细胞 2 93细胞系进行表达 ,经G41 8筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆 ,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性。此结果为研究IGF 1对血管内皮细胞作用的分子机制 ,以及利用IGF 1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础。     

外周血胰岛素样生长因子Ⅱ-mRNA对肝癌的诊断价值

目的探讨外周血胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-II）-mRNA在肝癌诊断和判断预后中的价值。方法从癌组织和外周血中制备总RNA,经随机引物和逆转录酶作用合成IGF-ⅡcDNA,再分别以RT-PCR扩增IGF-ⅡcDNA片段,分析其在肝病诊断与鉴别中的临床价值。结果肝癌组织和外周血中扩增出的IGF-Ⅱ基因片段大小为170bp,并与原设计相一致。肝癌、癌灶周围和远癌组织中,IGF-Ⅱ基因检出率分别为100%、53.3%和0。肝癌患者外周血IGF-II基因片段阳性率34.2%,在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中分别为14.3%、19.4%和45.5%,在伴有肝外转移肝癌中全数阳性,在AFP〈50ng/ml的17例中阳性6例（35.3%）;肝硬化、慢性肝炎、急性肝炎和肝外肿瘤组中未见IGF-Ⅱ基因片段阳性。IGF-Ⅱ基因标志与肝癌大小间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论外周血IGF-Ⅱ基因分析有助于肝癌的诊断、转移判别及术后复发的监测。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体基因对肝细胞癌生物学行为的影响

目的　研究胰岛素样生长因子Ⅰ型受体 (insulin likegrowthfactorⅠreceptor,IGF ⅠR)对肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)生物学行为的影响。方法　应用免疫组化SP法检测肝细胞癌、癌旁和正常肝组织IGF ⅠR的表达。构建IGF ⅠR正、反义基因真核表达载体 ,经脂质体介导转入SMMC 772 1肝癌细胞株 ,观测IGF ⅠR正、反义基因对肝癌细胞生物学行为的影响。结果　 (1)在肝癌组织中IGF ⅠR呈过度表达 (90 .3% ) ,以膜、胞浆混合型表达为主 ,显著高于正常肝组织。肝癌多发结节组高于单发结节组 (P <0 .0 5 )。 (2 )IGF ⅠR反义基因能明显下调内源性IGF ⅠR的表达 ,与 772 1细胞、正义细胞有显著性差异 (P <0 .0 1)。 (3)电镜下反义细胞内可见微腺腔、灶性坏死、髓鞘样结构。 (4 )反义细胞G0 /G1期明显增加 (6 3.9% ) ,S期减少 (19.3% ) ,细胞凋亡增加 (5 .89% ) ,与 772 1细胞、正义细胞有显著性差异 (P <0 .0 1)。 (5 )反义细胞不能在软琼脂中生长。结论　 (1)IGF ⅠR高表达与肝癌的发生及侵袭性行为有密切关系。 (2 )IGF ⅠR反义基因下调 772 1细胞内源性IGF ⅠR的表达 ,对肝癌细胞的增殖有明显抑制作用     

人原发性肝癌胰岛素样生长因子2基因的印迹状态

目的研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insulin like growth factor Ⅱ,IGF2)基因印迹状态,为进一步研究肝癌发生机理提供线索。方法用限制性片段长度多态性检测IGF2基因杂合状态,用逆转录-酶联聚合反应半定量检测IGF2基因在肝癌及癌旁组织中的表达,分析IGF2印迹状态、表达量与人原发性肝癌的关系。结果55．6％(10／18)的肝癌组织存在IGF2基因印迹的重新获得,与之相对的远癌组织有60％(6／10)也发生了IGF2基因印迹的重新获得。50％(9／18)的癌组织IGF2基因过度表达,但表达量与基因印迹的改变没有显著相关性。结论IGF2基因印迹的重新获得可能参与了肝癌的发生。     

小鼠胰岛素样生长因子-1基因体外克隆及表达的研究

目的 探讨小鼠胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因提取、鉴定及重组质粒转染COS-7细胞表达.方法 通过RT-PCR获取小鼠骨骼肌IGF-1的cDNA,将该基因亚克隆入重组质粒p1 (pcDNA3.1-Nestin-EGFP)中,构建重组质粒p2 (pcDNA3.1-Nestin-EGFP- IGF-1),脂质体转染COS-7细胞,ELISA检测细胞培养基中IGF-1蛋白量.结果 克隆IGF-1基因cDNA与GenBank中该基因序列一致,重组质粒转染COS-7细胞培养基中均含有IGF-1蛋白.结论 IGF-1基因成功构建到重组质粒p2中,且能在COS-7细胞中过表达.     

食管鳞癌组织中胰岛素样生长因子-Ⅱ蛋白的表达

目的:检测食管鳞癌组织中胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)蛋白的表达.方法:应用免疫组织化学S-P法,检测54例食管鳞癌组织,22例癌旁不典型增生组织及54例正常食管黏膜组织中IGF-Ⅱ蛋白的表达,并分析IGF-Ⅱ表达与食管鳞癌浸润、转移的关系.结果:食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织中IGF-Ⅱ蛋白的阳性表达率分别为85.19%、63.64%和22.22%,任意2者间差异有统计学意义(P＜0.01).IGF-Ⅱ蛋白的阳性表达与食管鳞癌的浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05).结论:IGF-Ⅱ蛋白在食管鳞癌组织中高表达与食管鳞癌的发生发展、浸润转移有关.